检索结果-内蒙古大学图书馆

核农学报 2019年第9期33卷 1707-1716页

作者：马璐琳崔光芬王祥宁贾文杰段青杜文文王继华陈发棣云南省农业科学院花卉研究所/云南省花卉育种重点实验室/国家观赏园艺工程技术研究中心云南昆明650205 南京农业大学园艺学院江苏南京210095

为筛选适用于不同花色西南鸢尾花色合成途径相关基因表达分析的内参基因,本研究根据西南鸢尾及其白花变型白花西南鸢尾花蕾组织的转录组测序数据,筛选了6个常用内参基因(ɑ-TUB、β-TUB、AQP、ACT、GAPDH、UBQ),同时以百合18S做为对照... 详细信息

为筛选适用于不同花色西南鸢尾花色合成途径相关基因表达分析的内参基因,本研究根据西南鸢尾及其白花变型白花西南鸢尾花蕾组织的转录组测序数据,筛选了6个常用内参基因(ɑ-TUB、β-TUB、AQP、ACT、GAPDH、UBQ),同时以百合18S做为对照内参基因,在西南鸢尾及其白花变型白花西南鸢尾的花蕾组织中,分别通过反转录pcr(RT-pcr)初筛和RT-qpcr检测表达量,并利用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件对7个候选内参基因的稳定性进行评价。RT-pcr初筛结果显示,7个候选内参基因引物的特异性均较好,在6个样品间没有明显差异;RT-qpcr分析表明,7个候选内参基因的表达量存在一定差异,其中18S表达量最高,UBQ最低;geNorm、NormFinder和BestKeeper分析结果表明,ACT表现最稳定,最适合做为内参基因,β-TUB相对稳定性最低;以Actin为内参对西南鸢尾类黄酮/花青素和类胡萝卜素2类色素合成途径中部分相关基因的RT-qpcr分析结果与转录组测序结果相一致。本研究为鸢尾属植物花色素合成相关基因表达分析内参基因的筛选以及鸢尾属植物资源利用和花色育种研究提供了理论参考。

关键词：西南鸢尾花色变异实时定量pcr 内参基因

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食源性沙门氏菌实时定量pcr检测研究

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食品工业科技 2007年第8期28卷 233-236页

作者：刘仲敏郑鸣王永芬邹俐宏河南省科学院生物研究所河南郑州450008 郑州牧业工程高等专科学校生物工程系河南郑州450011 中南大学资源与生物工程学院湖南长沙410075

根据GenBank数据库鼠伤寒沙门氏菌的invA基因序列(AE008832)设计引物,建立沙门氏菌实时荧光定量pcr检测方法。标准曲线的相关系数为0.999,检出底限约8个细菌/反应。对40份牛奶和40份生肉进行检测,阳性率分别为2.5%和5%,与传统细菌分离... 详细信息

根据GenBank数据库鼠伤寒沙门氏菌的invA基因序列(AE008832)设计引物,建立沙门氏菌实时荧光定量pcr检测方法。标准曲线的相关系数为0.999,检出底限约8个细菌/反应。对40份牛奶和40份生肉进行检测,阳性率分别为2.5%和5%,与传统细菌分离检测结果完全相符。因此,实时定量pcr检测沙门氏菌具有快速、灵敏的优点,适宜于食品中沙门氏菌污染的调查及监测。

关键词：实时定量pcr 食源性致病菌沙门氏菌

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导流杂交基因芯片、实时定量pcr检测人乳头瘤病毒的临床价值

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中国实用妇科与产科杂志 2011年第3期27卷 205-208页

作者：任佳玢隋龙上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院上海200030 复旦大学附属妇产科医院上海200011

目的评价导流杂交基因芯片(HybriMax)、实时定量pcr(RT-qpcr)在人乳头瘤病毒(HPV)分型和定量分析以及对筛查高级别宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌的临床价值。方法选取2007年5月至2007年10月103例在复旦大学附属妇产科医院宫颈疾病诊疗中... 详细信息

目的评价导流杂交基因芯片(HybriMax)、实时定量pcr(RT-qpcr)在人乳头瘤病毒(HPV)分型和定量分析以及对筛查高级别宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌的临床价值。方法选取2007年5月至2007年10月103例在复旦大学附属妇产科医院宫颈疾病诊疗中心就诊妇女作为研究对象,取宫颈脱落细胞行杂交捕获二代(HCⅡ)、HybriMax及RT-qpcr检测HPV,同时在阴道镜引导下取宫颈活体组织行病理学检查。以HCⅡ检测结果为对照,分析并比较HybriMax及RT-qpcr检测HPV感染与HCⅡ检测结果的一致性;以病理诊断为金标准,分析HybriMax及RT-qpcr对筛查CINⅡ以上病变的灵敏度、阴性预测值。结果 HybriMax、RT-qpcr检测HPV与HCⅡ的符合率分别为86.41%、96.12%;HybriMax筛查CINⅡ以上病变的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为96.30%、50.00%、40.63%、97.44%,RT-qpcr筛查CINⅡ以上病变的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为100%、56.58%、45.00%、100%,且HybriMax、RT-qpcr分别能够将HPV分型和定量。结论导流杂交基因芯片、实时定量pcr检测HPV与HCⅡ比较有较好的一致性,对于CINⅡ以上病变有较高的灵敏度和阴性预测值,且能行HPV分型及定量,可用于宫颈病变的初步筛查。

关键词：人乳头瘤病毒导流杂交实时定量pcr

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土壤中烟草根黑腐病菌的实时定量pcr检测技术研究

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植物病理学报 2010年第2期40卷 210-213页

作者：康振辉黄俊丽重庆大学生物工程学院重庆400044

Thielaviopsis basicolais a soil-borne plant pathogen which causes root rot disease in tobacco plants. Detection and monitoring of T. basicolain soil is of great significance to control this disease. Based on the differences in internal transcribed spacer (ITS) sequences of T. basicola and other fungal pathogens,a specific primer pair Tb1/Tb2 for T. basicolawas developed. The results showed that the primer pair gave a single amplicon of 330 bp from T. basicola and revealed no undesirable cross-reaction with other seven soil-borne pathogen isolates and three tobacco rhizosphere dominant fungi isolates. With a series of 10-fold genomic DNA dilutions of T. basicola,the detection limit of 1 pg/μL in conventional pcrand100 fg/μL in real-time quantitative pcr was achieved. With DNA from the soil inoculated with different numbers of T. basicola conidia,the detection limit was 10 conidia per reaction in conventional pcr and 0.4 conidia per reaction in real-time quantitative pcr.

关键词：实时定量pcr 黑腐病菌检测技术草根土壤 pcr检测方法选择性培养基土传病害

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淋巴囊肿病毒实时定量pcr检测方法的建立和应用

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中国海洋大学学报（自然科学版） 2009年第2期39卷 253-258页

作者：孙颖杰周优岳志芹陈晓梁成珠应骏王哲汪东风吉林大学农学部畜牧兽医学院吉林长春130062 辽宁出入境检验检疫局辽宁大连116001 山东出入境检验检疫局山东青岛266002 中国海洋大学山东青岛266003

选取淋巴囊肿病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主衣壳蛋白(MCP)基因保守序列,利用Primer Express2.0软件设计引物,通过优化反应条件,建立了SYBR GreenⅠ实时定量pcr的检测方法,并进行了敏感性、特异性分析。SYBR GreenⅠ实时定量... 详细信息

选取淋巴囊肿病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主衣壳蛋白(MCP)基因保守序列,利用Primer Express2.0软件设计引物,通过优化反应条件,建立了SYBR GreenⅠ实时定量pcr的检测方法,并进行了敏感性、特异性分析。SYBR GreenⅠ实时定量pcr反应体系的最佳引物浓度为0.5μmol/L,方法的检测限为30个病毒拷贝,扩增产物的Tm值为74.5℃。该方法对淋巴囊肿病毒有特异性,不能扩增流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、虎纹蛙病毒(TFV)、蛙虹彩病毒(BIV)、新加坡石斑虹彩病毒(SGIV)、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)及真鲷虹彩病毒(RSIV)。对12份发病牙鲆鱼样品进行检测,均感染淋巴囊肿病毒;20份无临床症状的牙鲆经检测不含淋巴囊肿病毒。建立的LCDV的SYBR GreenⅠ实时定量pcr方法,具有成本低、特异、灵敏、快速等优点,可用于淋巴囊肿病毒的早期诊断。

关键词：淋巴囊肿病毒实时定量pcr SYBR Green Ⅰ 检测

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新塔花实时定量pcr内参基因的筛选和验证

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中药材 2020年第3期43卷 569-574页

作者：王兆丰马艺沔李勇何江杨伟俊新疆农业大学食品科学与药学学院新疆乌鲁木齐830052 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100193 新疆维吾尔自治区药物研究所/新疆维吾尔药重点实验室新疆乌鲁木齐830004

目的:筛选出新塔花在不同组织(根、茎、叶、花)及脱落酸(ABA)处理不同时间的叶片中表达相对稳定的内参基因。方法:从新塔花转录组数据中搜索到5个看家基因ZbIF3G1、ZbGAPDH1、ZbEF1γ、ZbUBC9、ZbTUBα,将其作为新塔花相对实时定量pcr... 详细信息

目的:筛选出新塔花在不同组织(根、茎、叶、花)及脱落酸(ABA)处理不同时间的叶片中表达相对稳定的内参基因。方法:从新塔花转录组数据中搜索到5个看家基因ZbIF3G1、ZbGAPDH1、ZbEF1γ、ZbUBC9、ZbTUBα,将其作为新塔花相对实时定量pcr候选内参基因,并设计内参引物。利用实时荧光定量pcr获得5个候选内参基因的Ct值,通过3种基于不同算法的软件(GeNorm、NormFinder和BestKeeper)对内参基因稳定性进行分析。结果:ZbGAPDH1、ZbEF1γ的表达相对更为稳定,适合作为新塔花不同组织及ABA处理的基因表达研究的内参基因,并用新塔花ZbFLS、ZbCHI基因的表达分析实验进一步验证了上述预测。结论:确定ZbGAPDH1与ZbEF1γ为适合用于新塔花定量分析的内参基因,该研究为新塔花后续相关基因表达研究奠定了基础。

关键词：新塔花内参基因实时定量pcr ABA处理组织表达

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IgH重排的实时定量pcr检测及反应参数研究

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中国实验血液学杂志 2005年第4期13卷 645-650页

作者：李惠民石岚段勇刘华张学美昆明医学院第一附属医院血液科昆明650032 昆明市延安医院昆明医学院第一附属医院检验科昆明650032

为了探讨以通用引物应用pcr技术扩增克隆性免疫球蛋白重链基因(IgH)重排的最佳实验条件及SYBRGreenⅠ实时定量pcr检测该基因的可行性,以通用引物对克隆性IgH重排进行扩增,对影响pcr扩增的退火温度、引物浓度、Taq酶用量、dNTP浓度、镁... 详细信息

为了探讨以通用引物应用pcr技术扩增克隆性免疫球蛋白重链基因(IgH)重排的最佳实验条件及SYBRGreenⅠ实时定量pcr检测该基因的可行性,以通用引物对克隆性IgH重排进行扩增,对影响pcr扩增的退火温度、引物浓度、Taq酶用量、dNTP浓度、镁离子浓度、循环次数等实验因素进行了系统研究,找出最佳反应参数,并以通用引物进行了SYBRgreenⅠ实时定量pcr对IgH重排基因的检测,测定了该法检测IgH重排基因的敏感性。结果表明:最佳退火温度为60℃,最佳引物浓度为0.8μmol/L,0.5U的Taq酶量效果满意,最适dNTP浓度为100μmol/L,最适镁离子浓度为3.0mmol/L,最佳循环次数为40次。SYBRGreenⅠ实时定量pcr可以实现对克隆性IgH重排的扩增和荧光信号的检测分析,其对IgH重排基因检测的敏感性为104/ml。结论:确定了应用pcr技术检测克隆性IgH重排的最适反应条件,实现了用通用引物对克隆性IgH重排稳定、特异的扩增,初步实现了以通用引物和应用SYBRGreenⅠ实时定量pcr对IgH重排的检测。

关键词： pcr IgH重排 SYBR Green Ⅰ 实时定量pcr

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用实时定量pcr检测慢性髓系白血病患者的bcr/abl^(P210)融合基因转录本

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临床检验杂志 2005年第2期23卷 98-100页

作者：林江钱军陈子兴薛永权费霞王法春张永宁江苏大学附属人民医院中心实验室江苏镇江212002 江苏大学附属人民医院血液科江苏镇江212002 苏州大学附属第一医院白血病研究室苏州大学附属第一医院染色体室

目的　建立实时定量pcr(RQ pcr)检测慢性髓系白血病(CML)bcr/ablP210融合基因转录本,评价其在CML诊断和微小残留病(MRD)监测中的意义。方法　设计TaqMan探针和引物,建立RQ pcr法对b3a2和ABL阳性模板进行扩增,并检测22例CML患者bcr/ablP... 详细信息

目的　建立实时定量pcr(RQ pcr)检测慢性髓系白血病(CML)bcr/ablP210融合基因转录本,评价其在CML诊断和微小残留病(MRD)监测中的意义。方法　设计TaqMan探针和引物,建立RQ pcr法对b3a2和ABL阳性模板进行扩增,并检测22例CML患者bcr/ablP210转录本含量。结果　RQ pcr法最低可检测到 10个拷贝 /μl的阳性模板,但重复性较差,而 108 ~102 拷贝 /μl的重复性良好,正常对照无扩增信号。19例初诊CML患者bcr/ablP210转录本绝对含量为 1. 42×102 ~2. 24×105拷贝 /50ng(中位数量 3. 06×104 拷贝 /50ng),ABL纠正后的相对含量为 3% ~687% (中位数 147% )。2例患者骨髓移植后bcr/ablP210转录本下降, 1例患者由慢性期进展为加速期时含量显著增高。结论　RQ pcr方法敏感、可靠,可用于CML患者的诊断和MRD随访监测。

关键词：患者 bcr/abl CML 诊断实时定量pcr 慢性髓系白血病融合基因转录 pcr) 方法设计

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五龄飞蝗不同发育时间实时定量pcr内参基因的筛选

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应用昆虫学报 2014年第3期51卷 733-740页

作者：崔淼刘晓健李涛郭亚平马恩波张建珍山西大学应用生物学研究所太原030006

【目的】筛选5龄飞蝗不同发育时间的最适内参基因,为相关研究提供基础数据。【方法】本文选取β-肌动蛋白(β-actin)、延长因子(EF-1α)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白49(RP49)、α-微管蛋白(α-Tubulin)和18S核糖体RNA(18S r... 详细信息

【目的】筛选5龄飞蝗不同发育时间的最适内参基因,为相关研究提供基础数据。【方法】本文选取β-肌动蛋白(β-actin)、延长因子(EF-1α)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白49(RP49)、α-微管蛋白(α-Tubulin)和18S核糖体RNA(18S rRNA)基因作为候选内参基因,运用实时定量pcr(qpcr)方法研究各基因在5龄飞蝗不同发育时间的相对表达量,用geNorm与Normfmder软件分析这6个基因表达稳定性。【结果】geNorm分析结果显示6个内参基因表达稳定度M值顺序为:β-actin(0.3720)>RP49(0.3750)>α-Tubulin(0.4030)>18S rRNA(0.4270)>EF-1α(0.4970)>GAPDH(0.6040)。M值越小表示基因表达稳定度越高,同时geNorm软件以标准化因子配对差异值(Pairwise variations)0.15默认为取舍值,由于V2/3=0.098<0.15,所以最适内参基因数目为2个。运用NormFinder软件也得出相似的结果。【结论】β-actin与RP49为5龄飞蝗不同发育时间的最适内参基因。

关键词：飞蝗实时定量pcr 内参基因 geNorm NormFinder

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Bt毒素诱导下小菜蛾实时定量pcr内参基因的筛选

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昆虫学报 2012年第12期55卷 1406-1412页

作者：符伟谢文张卓吴青君王少丽张友军湖南农业大学农药研究所长沙410128 湖南省植物保护研究所长沙410125 中国农业科学院蔬菜与花卉研究所北京100081

【目的】筛选出Bt毒素诱导后的小菜蛾Plutella xylostella(L.)的实时定量pcr最适内参基因。【方法】选取核糖体18S rRNA(18S rRNA)、肌动蛋白(ACTB)、延伸因子(EF1)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白L32(RPL32)、核糖体蛋白S13(R... 详细信息

【目的】筛选出Bt毒素诱导后的小菜蛾Plutella xylostella(L.)的实时定量pcr最适内参基因。【方法】选取核糖体18S rRNA(18S rRNA)、肌动蛋白(ACTB)、延伸因子(EF1)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白L32(RPL32)、核糖体蛋白S13(RPS13)、核糖体蛋白S20(RPS20)和β-微管蛋白(TUB)基因作为候选内参基因,以geNorm、Normfinder和BestKeeper软件分析这8个基因在Bt毒素诱导后的小菜蛾不同品系中肠组织中的表达稳定性。并应用筛选出来的内参基因分析小菜蛾氨肽酶2(aminopeptidase N2,APN2)基因的表达水平。【结果】geNorm软件以RPS13和EF1为最稳定内参基因,NormFinder和BestKeeper软件均以RPS13和RPL32为最稳定基因。使用3种不同内参基因分析Bt毒素诱导后的小菜蛾Bt抗性和敏感品系中ANP2表达水平时,新的内参基因EF1和传统内参基因RPL32表现了良好的稳定性,二者作为标准化因子,ANP2表达量结果基本一致,而使用18S rRNA作为内参基因,却导致部分表达量分析结果有所误差。【结论】筛选出PRS13,RPL32和EF1可以作为小菜蛾某些试验条件下的内参基因,对小菜蛾基因表达研究奠定了一定基础,也对其他昆虫内参基因的筛选具有参考价值。

关键词：小菜蛾实时定量pcr 内参基因抗药性 Bt毒素

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