检索结果-内蒙古大学图书馆

南开大学学报（自然科学版） 2010年第5期43卷 109-112页

作者：李珊珊李霞赵化冰蔡宝立南开大学微生物学系和生物活性材料教育部重点实验室天津300071 辽宁大学环境学院辽宁沈阳110036 中国人民武装警察部队医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室天津300162

Pseudomonas putida ND6是一个高效降解萘的菌株,含有101 858 bp的萘降解质粒pND6-1.用实时定量pcr方法测定了Pseudomonas putida ND6菌株中pND6-1的拷贝数为2.这是第一个测定分子大小超过100 kb的细菌大质粒拷贝数的报道.

关键词： Pseudomonas putida ND6 pND6-1 实时定量pcr 质粒拷贝数

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小鼠细胞因子实时定量pcr检测方法的建立及应用

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中国兽医学报 2009年第12期29卷 1552-1556页

作者：张亮亮侯小强高玉伟杨松涛夏咸柱张敏军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 吉林农业大学发展学院吉林长春130600 吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 中国兽医药品监察所北京100081

采用荧光SYBR GreenⅠ建立小鼠细胞因子mRNA实时定量pcr的检测方法；并利用建立的实时定量pcr的检测方法对感染H5N1禽流感病毒的BALB／c小鼠不同时间采集的肺脏组织中几种重要致炎细胞因子及趋化因子mRNA表达水平进行了检测。对H5N1禽... 详细信息

采用荧光SYBR GreenⅠ建立小鼠细胞因子mRNA实时定量pcr的检测方法；并利用建立的实时定量pcr的检测方法对感染H5N1禽流感病毒的BALB／c小鼠不同时间采集的肺脏组织中几种重要致炎细胞因子及趋化因子mRNA表达水平进行了检测。对H5N1禽流感病毒感染的BALB／c小鼠肺脏细胞因子的检测具有高度的特异性，检测的灵敏度为10^1～10^2拷贝数。H5N1禽流感病毒感染BALB／c小鼠后，小鼠肺脏中IL-1β、IL-6、TNFα、MIG、IP-10、RANTES、MIF和HMGB1细胞因子mRNA表达水平与对照组小鼠相比均有明显差异。建立的实时定量pcr能在基因转录水平敏感和特异地反应细胞因子的表达水平，该技术在基础和临床免疫研究中，具有良好的应用价值。

关键词：小鼠细胞因子实时定量pcr

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食源性单增李斯特菌的实时定量pcr检测

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食品与发酵工业 2007年第5期33卷 100-104页

作者：刘仲敏郑鸣王永芬河南省科学院生物研究所郑州牧业工程高等专科学校生物工程系河南郑州450011

根据GenBank数据库单增李斯特菌的O基因序列(AF253320)设计引物,建立单增李斯特菌实时荧光定量pcr检测方法。标准曲线的相关系数为0.996,检出底限约8个细菌/反应,而常规pcr检出底限约60个细菌/反应。比较常规pcr和实时荧光定量pcr对人... 详细信息

根据GenBank数据库单增李斯特菌的O基因序列(AF253320)设计引物,建立单增李斯特菌实时荧光定量pcr检测方法。标准曲线的相关系数为0.996,检出底限约8个细菌/反应,而常规pcr检出底限约60个细菌/反应。比较常规pcr和实时荧光定量pcr对人工污染样品检测,发现实时定量pcr也具有较高的灵敏度;对40份牛奶和40份火腿样品进行检测,阳性率分别为12.5%和10%,与传统细菌分离检测结果完全相符。因此,实时定量pcr检测单增李斯特菌具有快速、灵敏的优点,适宜于食品中单增李斯特菌污染的调查及监测。

关键词：实时定量pcr 食源性致病菌单增李斯特菌

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实时定量pcr分析MT1-MMP/TIMP-2/MMP-2在不同来源人血管内皮细胞株中的表达

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中国血液流变学杂志 2007年第1期17卷 7-10页

作者：蒋菊香马珍妮胡晓慧董宁征阮长耿江苏省血液研究所苏州大学附属第一医院

为深入研究MT1-MMP在血管生物学中的功能,该研究比较了MT1-MMP及与其功能相关MMP-2、TIMP-2在人微血管内皮细胞株HMEC-1和人大血管内皮细胞株EAhy926、ECV304中的mRNA表达差异。实时定量pcr分析显示3株细胞均表达MT1-MMP与TIMP-2,其中MT... 详细信息

为深入研究MT1-MMP在血管生物学中的功能,该研究比较了MT1-MMP及与其功能相关MMP-2、TIMP-2在人微血管内皮细胞株HMEC-1和人大血管内皮细胞株EAhy926、ECV304中的mRNA表达差异。实时定量pcr分析显示3株细胞均表达MT1-MMP与TIMP-2,其中MT1-MMP在EAhy926中表达最高,TIMP-2在3株细胞中呈现相似的表达量,在ECV304中相对表达较高,而仅在EAhy926中检测到MMP-2的高表达。MT1-MMP和MMP-2在典型的大血管内皮细胞株EAhy926中的高表达可能与该类内皮细胞独特的来源、表型特点和功能有关。

关键词： MT1-MMP 内皮细胞株实时定量pcr

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基于适配体的实时定量pcr检测血清中的人促红细胞生成素

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分析测试学报 2012年第9期31卷 1095-1099页

作者：唐吉军徐华郭磊陈佳谢剑炜军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

基于适配体的高特异识别能力和可扩增性,构建了经磁分离后实时定量pcr检测重组人促红细胞生成素-α(rHuEPO -α)的新方法;针对实际血清样品中高丰度蛋白质等的干扰,利用碱基互补配对原理设计合成了分别与适配体两端引物区结合的互补链,... 详细信息

基于适配体的高特异识别能力和可扩增性,构建了经磁分离后实时定量pcr检测重组人促红细胞生成素-α(rHuEPO -α)的新方法;针对实际血清样品中高丰度蛋白质等的干扰,利用碱基互补配对原理设计合成了分别与适配体两端引物区结合的互补链,通过凝胶迁移阻滞分析(EMSA)筛选出最佳的互补链,并将生物素化的互补链连接到链霉亲和素磁珠上,以此为探针捕获复杂基质中形成的待测复合物.研究结果表明,结合该样品前处理策略,该方法可成功地应用于正常人血清中的rHuEPO -α定量检测,检出限为25pmol/L,线性范围为50 pmol/L～ 50 nmol/L.

关键词：适配体促红细胞生成素检测策略捕获探针实时定量pcr

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正交设计在实时定量pcr检测条件优化中的应用

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中国法医学杂志 2008年第2期23卷 111-114页

作者：杜秋香孙俊红王小伟王英元山西医科大学法医学院法医病理学教研室山西太原030001

目的探索正交设计在实时定量pcr检测条件优化中的应用,找出扩增ICAM-1基因的最佳条件。方法建立大鼠皮肤损伤模型,采用正交设计实时定量pcr的各影响条件,提取损伤处皮肤组织总RNA反转录成cDNA,cDNA作为模板,通过特异性引物扩增ICAM-1基... 详细信息

目的探索正交设计在实时定量pcr检测条件优化中的应用,找出扩增ICAM-1基因的最佳条件。方法建立大鼠皮肤损伤模型,采用正交设计实时定量pcr的各影响条件,提取损伤处皮肤组织总RNA反转录成cDNA,cDNA作为模板,通过特异性引物扩增ICAM-1基因。对扩增曲线和融解曲线制定评分标准,量化不同实验条件下的扩增结果并进行统计分析。结果退火温度、模板量和引物浓度直接影响扩增效果,但三因素间无相互作用。结果经统计学分析表明退火温度61℃、模板cDNA用量0.4μg和引物终浓度150μmol/L为实时定量pcr检测ICAM-1基因的最佳条件组合。结论正交设计是一种切实可行、快速经济的实时定量pcr检测条件优化方法。

关键词：法医病理学正交设计实时定量pcr 皮肤损伤 ICAM-1

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基于表型症状和实时定量pcr鉴定不同香蕉品种对枯萎病的抗病性

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西南农业学报 2017年第9期30卷 1997-2002页

作者：徐胜涛白亭亭张磊番华彩杨佩文尹可锁曾莉李迅东郭志祥杨宝明黄玉玲李永平郑泗军云南省农业科学院农业环境资源研究所云南昆明650205 云南农业大学植物保护学院云南昆明650201 国际生物多样性中心云南昆明650205

【目的】香蕉枯萎病已成为香蕉产业可持续发展的最主要限制因素之一,通过室内建立不同香蕉品种对枯萎病快速鉴定方法,为大田香蕉抗病品种鉴定和品种改良提供依据。【方法】本研究对巴西蕉(B)、桂蕉1号(GV)和笔者自主选育的品系云蕉1号(Y... 详细信息

【目的】香蕉枯萎病已成为香蕉产业可持续发展的最主要限制因素之一,通过室内建立不同香蕉品种对枯萎病快速鉴定方法,为大田香蕉抗病品种鉴定和品种改良提供依据。【方法】本研究对巴西蕉(B)、桂蕉1号(GV)和笔者自主选育的品系云蕉1号(Y)进行枯萎病病菌4号生理小种热带型(Fusarium oxysporum *** Tropic Race 4,Foc TR4)野生型菌株(15-1)温室接种,通过叶片表型和球茎解剖2种病情指数调查并结合实时定量pcr分析,鉴定供试材料的抗感差异并筛选出对枯萎病抗性较好的香蕉材料。【结果】经过3次独立温室接种试验,结果显示云蕉1号病情指数最低,其他品种在接种后枯萎病抗性强弱的表现为Y>GV>B。检测接种后土壤中病原菌含量发现,3个品种之间未达到显著性差异,表明接种条件相对一致。不同香蕉品种在接种25 d后,云蕉1号的球茎病原菌含量较低,与巴西蕉相比达到了显著性差异(P<0.05),但是与桂蕉1号差异不显著,说明云蕉1号抗病性较好。【结论】本研究通过香蕉枯萎病的室内速鉴定方法表明,云蕉1号对枯萎有较好的耐病性,适合进一步大田筛选。

关键词：枯萎病香蕉实时定量pcr 抗病性病情指数

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茶愈伤组织实时定量pcr分析中内参基因的选取

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安徽农业大学学报 2014年第6期41卷 905-910页

作者：史成颖李正国徐乾宛晓春安徽农业大学农业部教育部茶叶生物化学和生物技术重点实验室合肥230036

为了选取合适的内参基因来分析培养基中前体物诱导及对照的茶愈伤组织中茶氨酸代谢相关基因的差异表达,利用Gen Bank上登录的茶树基因序列以及通过构建文库测序所得的基因(具有完整的阅读框)共7个持家基因设计引物。在分析这些引物的扩... 详细信息

为了选取合适的内参基因来分析培养基中前体物诱导及对照的茶愈伤组织中茶氨酸代谢相关基因的差异表达,利用Gen Bank上登录的茶树基因序列以及通过构建文库测序所得的基因(具有完整的阅读框)共7个持家基因设计引物。在分析这些引物的扩增效率和特异性后,测定了它们在茶愈伤组织生长过程中(对照和愈伤培养基中添加含氮外源物的情况下)的表达水平。利用ge Norm和Norm Finder软件分析了这些持家基因的稳定性,确定在该条件下合适的内参基因为β-actin和GAPDH。

关键词：实时定量pcr 内参基因基因表达茶树

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大肠杆菌O157∶H7实时定量pcr检测方法的建立

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畜牧与兽医 2011年第5期43卷 5-9页

作者：李军谢宇舟禤雄标陈泽祥杨威马春霞胡帅彭昊许力干谢永平潘艳广西兽医研究所广西南宁530001

根据GenBank公布的大肠杆菌O157∶H7的Flic(H7)基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列设计一对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立一个用于大肠杆菌O157∶H7快速定量检测的实时定量pcr方法。该方法的最低检测极限是103CFU/mL,敏... 详细信息

根据GenBank公布的大肠杆菌O157∶H7的Flic(H7)基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列设计一对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立一个用于大肠杆菌O157∶H7快速定量检测的实时定量pcr方法。该方法的最低检测极限是103CFU/mL,敏感性比常规pcr提高10倍。方法重复性好、特异性强,重复性检测的变异系数均小于2%;只能检测大肠杆菌O157∶H7,对非大肠杆菌O157∶H7血清型细菌、猪链球菌2型、副猪嗜血杆菌无反应。利用此方法对模拟样本进行定量检测,其结果与平板细菌计数基本一致,表明此方法可作为大肠杆菌O157∶H7快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具。

关键词：大肠杆菌0157:H7 实时定量pcr Flic(H7)基因

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结核杆菌DNA实时定量pcr检查在肾结核诊疗中的应用

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中国老年学杂志 2013年第15期33卷 3630-3631页

作者：潘春勤刘杰周学才仙桃市第一人民医院肾病科湖北仙桃433000 仙桃市第一人民医院心内科

目的探讨结核杆菌DNA pcr检查在肾结核诊疗中的应用。方法收集仙桃市第一人民医院肾结核患者肾脏活检组织,进行结核杆菌DNA实时定量pcr检测,观察该法诊断肾结核的敏感度;对肾结核患者进行正规治疗后观察其尿液结核杆菌DNA含量;对门诊疑... 详细信息

目的探讨结核杆菌DNA pcr检查在肾结核诊疗中的应用。方法收集仙桃市第一人民医院肾结核患者肾脏活检组织,进行结核杆菌DNA实时定量pcr检测,观察该法诊断肾结核的敏感度;对肾结核患者进行正规治疗后观察其尿液结核杆菌DNA含量;对门诊疑似肾结核患者行尿液结核杆菌DNA实时定量pcr检测并随访,观察患者最终诊断肾结核等临床转归情况。结果 (1)与结核杆菌尿培养结果对比,实时定量pcr检测敏感度显著增高(P<0.05);(2)经过正规抗结核治疗后,与治疗前相比,肾结核患者尿液TB DNA含量显著降低(P<0.05);(3)随访调查发现,检验半年后,与随访对照组相比,随访组经实时定量pcr检验后,患者确诊率显著增高(P<0.05);接受手术治疗率两组间无显著差异(P>0.05)。结论肾脏结核杆菌DNA实时定量pcr对于诊断肾结核具有较高敏感性,尿液结核杆菌DNA实时定量pcr有助于早期发现肾结核。

关键词：肾结核实时定量pcr

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