检索结果-内蒙古大学图书馆

SYBR Green实时定量pcr检测人原发脑胶质瘤中REV3和REV7基因的表达

中国神经精神疾病杂志 2008年第8期34卷 491-493页

作者：奚才华王慧博赵世光张舒羽卢大儒胡锦上海交通大学附属第六人民医院神经外科上海200233 复旦大学生命科学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室哈尔滨医科大学附属第一医院神经外科

目的运用实时定量pcr检测跨损伤修复基因REV3和REV7在人脑原发脑胶质瘤组织中的表达水平,探讨其和肿瘤级别之间的关系。方法采用SYBR Green实时定量聚合酶链式反应(RT-pcr)法检测跨损伤修复基因REV3和REV7的mRNA在85例原发胶质瘤(Ⅱ级2... 详细信息

目的运用实时定量pcr检测跨损伤修复基因REV3和REV7在人脑原发脑胶质瘤组织中的表达水平,探讨其和肿瘤级别之间的关系。方法采用SYBR Green实时定量聚合酶链式反应(RT-pcr)法检测跨损伤修复基因REV3和REV7的mRNA在85例原发胶质瘤(Ⅱ级20例、Ⅲ级20例和Ⅳ级45例)和14例正常脑组织中的表达水平,统计学分析表达水平和肿瘤级别之间的关系。结果与正常组织相比,REV3和REV7在各病理级别胶质瘤中均表达上调(P<0.05);并且REV3在Ⅳ级胶质瘤中的表达比在Ⅱ级和Ⅲ级中都要高(P<0.05)。秩相关分析表明:REV3的表达量与胶质瘤病理分级呈正相关性(r=0.454,P<0.001)。结论REV3和REV7在胶质瘤组织中均高表达,而且REV3表达水平和恶性程度有密切联系。

关键词： REV3 REV7 跨损伤修复脑胶质瘤实时定量pcr SYBR Green

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实时定量pcr技术在动物疫病研究中的应用

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畜牧兽医科技信息 2009年第5期25卷 12-13页

作者：国君姜景才赵微微康波黑龙江省大庆市让胡路区银浪牧场 163411 海林市三道河子镇农业综合服务中心 157135 大庆市让胡路区银浪牧场林场大庆163412 吉林大学畜牧兽医学院长春130062

实时定量pcr（real-time quantitative pcr）是在pcr技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术。实时定量pcr继承了pcr技术灵敏、快速、特异的优点，同时又克服了pcr技术中存在的假阳性率高、易污染、EB染料对实验人员的危险以... 详细信息

实时定量pcr（real-time quantitative pcr）是在pcr技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术。实时定量pcr继承了pcr技术灵敏、快速、特异的优点，同时又克服了pcr技术中存在的假阳性率高、易污染、EB染料对实验人员的危险以及不能进行准确定量等缺点。实时定量pcr实现了pcr从定性或半定量到准确定量的飞跃，目前，已经成为分子生物学和医学研究等领域的重要工具。本文就实时定量pcr技术及其在动物研究领域中的应用作一综述。

关键词：实时定量pcr 基因表达综述

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实时定量pcr分析B-ALL病人TCRζ链表达特点

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广州医学院学报 2006年第4期34卷 22-24页

作者：陈思李扬秋陈少华杨力建吴秀丽岑东芝暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

分析T细胞信号传导分子TCRζ链基因在B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)病人外周血中的表达水平。方法:采用SYBR G reenⅠ荧光定量pcr和相对定量检测15例初发B-ALL、5例完全缓解期(CR)患者和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情... 详细信息

分析T细胞信号传导分子TCRζ链基因在B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)病人外周血中的表达水平。方法:采用SYBR G reenⅠ荧光定量pcr和相对定量检测15例初发B-ALL、5例完全缓解期(CR)患者和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式(2-ΔΔC t)分别计算B-ALL初发患者、CR期患者与正常人TCRζ链表达差异倍数等。结果:根据相对定量公式分析显示:与正常人相比,B-ALL初发患者外周血TCRζ链表达存在3种情况,即不表达(20%)、表达下降(53%)和表达上升(27%)。TCRζ链表达水平在所有初发B-ALL病人均低于CR期病人。结论:本研究首先报道B-ALL病人中TCRζ链表达水平的变化特点,TCRζ链基因表达水平以降低为主,可能与T细胞免疫缺陷有一定关系。

关键词： TCRξ链实时定量pcr B细胞-急性淋巴细胞白血病

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细胞株逆转录酶活性SYBR GreenⅠ实时定量pcr检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2014年第8期27卷 1061-1065页

作者：王晨李永红付志浩张爱华饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430207 中国生物技术集团公司北京100029

目的建立生物制品生产用细胞株逆转录酶活性SYBR Green玉实时定量pcr检测方法,并进行优化及初步验证。方法以MS2噬菌体RNA模板及相应引物,建立一步检测逆转录酶扩增产物的SYBR Green玉实时荧光定量pcr方法,以梯度稀释的重组莫洛尼鼠... 详细信息

目的建立生物制品生产用细胞株逆转录酶活性SYBR Green玉实时定量pcr检测方法,并进行优化及初步验证。方法以MS2噬菌体RNA模板及相应引物,建立一步检测逆转录酶扩增产物的SYBR Green玉实时荧光定量pcr方法,以梯度稀释的重组莫洛尼鼠白血病病毒（Moloney murine leukemia virus,MMLV）逆转录酶活性参考品绘制标准曲线,进行逆转录酶活性的定量。对反应的引物和2×RT-pcr Mix进行优化,并对建立的方法进行线性关系、灵敏度、精密度和准确度验证。结果1组引物（上游：5忆-CATAGGTCAAACCTCGTAGGAATG-3忆,下游：5忆-TCCTGCTC-AACTTCCTGTCGAG-3忆）更适合本方法;Promega公司生产的2×RT-pcr Mix具有更高的反应效率。逆转录酶活性在5.40×108～5.40×104pU/μl范围内定量标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.999 7;该方法判断样品阴阳性的标准cut-off值为1.31×104pU/μl;检测CHO-1细胞株样品逆转录酶活性的试验内变异系数（CV）为0.80%,试验间CV值为16.4%;检测5株细胞样品逆转录酶活性的平均加标回收率为122.8%。结论建立了生物制品生产用细胞株逆转录酶活性SYBR Green玉实时定量pcr检测方法,该方法能够准确地定量检测细胞株的逆转录酶活性。

关键词：细胞株逆转录酶活性实时定量pcr

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中华鳖实时定量pcr内参基因的筛选与评价

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内蒙古大学学报（自然科学版） 2017年第5期48卷 531-537页

作者：刘文婷张贝贝张耀红管越强河北大学生命科学学院河北保定071002 保定水产技术推广站河北保定071051

选择合适的内参基因是采用q-pcr方法研究基因表达的前提.选取中华鳖GAPDH、EF1α、18SrRNA、Tubulin和β-actin等5个候选内参基因,通过q-pcr方法得到各基因在不同组织中的Ct值,利用4种内参筛选软件和综合评定法进行评价.geNorm和NormFin... 详细信息

选择合适的内参基因是采用q-pcr方法研究基因表达的前提.选取中华鳖GAPDH、EF1α、18SrRNA、Tubulin和β-actin等5个候选内参基因,通过q-pcr方法得到各基因在不同组织中的Ct值,利用4种内参筛选软件和综合评定法进行评价.geNorm和NormFinder软件分析均显示18SrRNA>EF1α>β-actin>GAPDH>Tubulin(稳定性由高到低).BestKeeper软件分析显示18SrRNA>GAPDH>EF1α>β-actin>***软件分析和综合评价法显示18SrRNA最佳.推荐优先使用18SrRNA或EF1α,不建议用β-actin和Tubulin.上述结果可为中华鳖和其它爬行动物的基因表达研究提供参考依据.

关键词：中华鳖实时定量pcr 内参基因表达稳定性 18SrRNA

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山羊痘病毒SYBR Green Ⅰ实时定量pcr检测方法的建立

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动物医学进展 2012年第7期33卷 32-39页

作者：姚俊杨永军彭海生陈官国段国军鲁富有李华春云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南省丽江市华坪县畜牧兽医站云南华坪674800 云南省普洱市动物疫病预防控制中心云南普洱665000

为了建立一种灵敏、特异、快速的山羊痘病毒实时定量检测方法,根据山羊痘病毒(AY077835)gp006基因序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计合成一对pcr引物。将被检测的目的 DNA片段克隆PEASY-T1质粒,制备重组质粒标准品,以期建立以质粒... 详细信息

为了建立一种灵敏、特异、快速的山羊痘病毒实时定量检测方法,根据山羊痘病毒(AY077835)gp006基因序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计合成一对pcr引物。将被检测的目的 DNA片段克隆PEASY-T1质粒,制备重组质粒标准品,以期建立以质粒拷贝数为单位的标准曲线。通过反应条件的优化及引物浓度的筛选,建立了山羊痘病毒SYBR GreenⅠ实时定量pcr(real-time pcr)检测方法,最佳引物浓度为400nmol/L。组内重复试验和组间重复试验变异系数均低于2%,最低检测限为1×101 copies/μL,上机检测时间在1h以内。用该方法对2011年流行于云南华坪、景谷及2003年流行于云南宣威、寻甸和昆明的山羊痘临床组织样品进行定量检测,结果送检组织样品抽提DNA中病毒含量分别为1.03×105、5.30×103、1.51×104、4.74×103、7.20×104 copies/μL。结果表明,所建立的real-time pcr具有灵敏、特异、快速的特点,适合于山羊痘临床组织样品的定量检测。

关键词：山羊痘病毒 SYBRGreenⅠ 实时定量pcr

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实时定量pcr检测ZAP-70 mRNA在慢性淋巴细胞白血病中的预后意义

实时定量PCR检测ZAP-70 mRNA在慢性淋巴细胞白血病中的预后意义

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中华医学会第十二次全国血液学学术会议

作者：王银花徐卫范磊朱丹霞方成邹志建刘玲吴雨洁李建勇南京医科大学第一附属医院血液科 210029

目的：通过实时定量pcr(RQ-pcr)技术检测ZAP-70的表达,探讨ZAP-70 mRNA可否成为慢性淋巴细胞白血病(CLL)的一个预后指标。方法：在2004年1月至2011年9月,共收集了102例初诊CLL患者外周血标本。提取标本总RNA,以eDNA为模板,1β-actin为内... 详细信息

目的：通过实时定量pcr(RQ-pcr)技术检测ZAP-70的表达,探讨ZAP-70 mRNA可否成为慢性淋巴细胞白血病(CLL)的一个预后指标。方法：在2004年1月至2011年9月,共收集了102例初诊CLL患者外周血标本。提取标本总RNA,以eDNA为模板,1β-actin为内参,采用SYBR Green荧光染料法,运用Stratagene Mx3000P定量pcr仪进行定量检测,并以循环阈值(Ct)比较法进行mRNA表达相对定量分析,检测CLL患者ZAP-70 mRNA的表达水平。

关键词：实时定量pcr 慢性淋巴细胞白血病预后因素外周血标本

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实时定量pcr检测新生儿全血中肺炎克雷伯菌方法的建立和应用

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生物技术通讯 2017年第5期28卷 665-670页

作者：章晟庄璐李秋平宋婕张玉佩朱丽敏赵丹华王瑞娟封志纯陆军总医院附属八一儿童医院出生缺陷防控关键技术国家工程实验室儿童器官功能衰竭北京市重点实验室北京100007

目的:建立实时定量pcr(RQ-pcr)快速检测新生儿血液标本中肺炎克雷伯菌基因组DNA的方法,并进行初步临床应用。方法:选择肺炎克雷伯菌高度保守的二鸟苷酸环化酶基因作为靶基因,设计特异性引物和TaqMan探针,建立RQ-pcr反应体系;采用含靶基... 详细信息

目的:建立实时定量pcr(RQ-pcr)快速检测新生儿血液标本中肺炎克雷伯菌基因组DNA的方法,并进行初步临床应用。方法:选择肺炎克雷伯菌高度保守的二鸟苷酸环化酶基因作为靶基因,设计特异性引物和TaqMan探针,建立RQ-pcr反应体系;采用含靶基因扩增片段的重组质粒建立标准曲线,提取血液中的基因组DNA,对500份新生儿血液标本进行RQ-pcr检测。结果:设计的引物和探针特异性高,检测限为1个拷贝数;500份新生儿血液标本中,RQ-pcr检测为阳性的有18个病例,阳性率为3.6%,明显高于血培养的阳性率2.4%(12个病例),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:RQ-pcr可用于检测新生儿血液标本中的肺炎克雷伯菌,此方法快速、灵敏、特异性强。

关键词：实时定量pcr 新生儿肺炎克雷伯菌血标本

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白肋烟和马里兰烟叶绿素酶活性测定及其基因表达的实时定量pcr分析

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中国农学通报 2011年第3期27卷 139-142页

作者：刘彩云刘洪祥杜传印中国农业科学院烟草研究所山东青岛266101 中国农业科学院研究生院北京100081 山东潍坊学院生物工程学院山东潍坊261061 山东潍坊烟草有限公司山东潍坊261061

白肋烟是普通烟草(Nicotiana tobacum.L)马里兰烟的缺绿突变类型。本研究在测定比较了白肋烟和马里兰烟叶片叶绿素酶活性的基础上,以18s rRNA为内参基因,采用实时定量pcr技术检测分析了成株期白肋烟和马里兰烟叶片中叶绿素酶基因的表达... 详细信息

白肋烟是普通烟草(Nicotiana tobacum.L)马里兰烟的缺绿突变类型。本研究在测定比较了白肋烟和马里兰烟叶片叶绿素酶活性的基础上,以18s rRNA为内参基因,采用实时定量pcr技术检测分析了成株期白肋烟和马里兰烟叶片中叶绿素酶基因的表达情况。酶活性测定结果发现白肋烟Burley21和马里兰烟Md609叶片中的叶绿素酶活性分别为525.17nmol/(g·h)和257.60nmol/(g·h),前者为后者的2.03倍。实时定量pcr检测结果表明,Burley21中叶绿素酶基因相对表达量为Md609中的3.01倍。这表明白肋型烟草叶片中叶绿素酶活性及其基因表达量的升高,可能导致了叶绿素的快速降解,从而使白肋烟叶片呈现缺绿黄化性状表现。

关键词：白肋烟马里兰烟叶绿素酶实时定量pcr

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利用实时定量pcr研究不同蛋白质饲料对嗜淀粉瘤胃杆菌生长参数的影响

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动物营养学报 2010年第2期22卷 327-334页

作者：王梦芝詹爱军高杨徐爱秋喻礼怀王洪荣扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心深圳518010

本试验主要研究不同蛋白质饲料对嗜淀粉瘤胃杆菌(Ruminobacter amylophilus)生长的影响。选用4只装有瘤胃瘘管的徐淮白山羊羯羊,分别饲喂以羽毛粉、玉米蛋白粉、豆粕和鱼粉为蛋白质补充料的4组日粮,进行4×4拉丁方设计的试验,并采... 详细信息

本试验主要研究不同蛋白质饲料对嗜淀粉瘤胃杆菌(Ruminobacter amylophilus)生长的影响。选用4只装有瘤胃瘘管的徐淮白山羊羯羊,分别饲喂以羽毛粉、玉米蛋白粉、豆粕和鱼粉为蛋白质补充料的4组日粮,进行4×4拉丁方设计的试验,并采用实时定量pcr(RT-pcr)技术对嗜淀粉瘤胃杆菌进行定量分析。结果表明,豆粕组瘤胃氨氮浓度最高,并显著高于其他3组(P<0.05);细菌总数在组间差异不显著(P>0.05);嗜淀粉瘤胃杆菌的密度及其数量在细菌总数中的比例均以豆粕组最高,且组间差异显著(P<0.05)。总之,豆粕饲料适宜于嗜淀粉瘤胃杆菌的生长,RT-pcr技术适用于瘤胃微生物的定量研究。

关键词：蛋白质饲料嗜淀粉瘤胃杆菌生长实时定量pcr

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