检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 924-928页

作者：危艳武刘长明袁婧黄立平张朝霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

根据发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计了一对特异引物,并以克隆重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量pcr方法。该方法在107～101范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.9... 详细信息

根据发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计了一对特异引物,并以克隆重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量pcr方法。该方法在107～101范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.997,扩增效率为E=0.920;对质粒标准品检测下限值为8.2拷贝/μL,检测变异系数低于2.0%。该方法与常规pcr及过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)比较,其敏感性提高103倍以上。采用该法对PCV2人工感染猪的心、肝、脾、肺、肾、腹股沟淋巴结等组织中病毒核酸载量检测结果表明,在多种脏器中均可检测到病毒,其中腹股沟淋巴结、扁桃体和脾脏中病毒含量较高(为3.4×109拷贝/g～1.7×1010拷贝/g),这表明病毒主要在免疫器官增殖,导致淋巴细胞耗损。对来自国内不同地区的28份临床发病猪病料进行病毒DNA定量检测,有半数以上病料的病毒载量达到109-10拷贝/g。实验表明,实时定量pcr可用于PCV2核酸定量检测,为该病毒体内外定量检测提供了一种技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型实时定量pcr 病毒体内分布规律

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实时定量pcr检测GDNF基因转染大鼠BMSCs后的转录水平

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解放军医学杂志 2007年第9期32卷 961-964页

作者：杨朝鲜马芳袁琼兰周玲高小青邓莉泸州泸州医学院神经生物学研究室四川646000 四川大学华西医学中心组织胚胎学与神经生物学教研室泸州泸州医学院附属医院内分泌科四川646000

目的了解外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的转录水平。方法体外分离培养大鼠BMSCs,将其随机分为GDNF基因转染组、空质粒转染组和未转染组3组;GDNF基因转染组和空质粒转染组分别用GDNF基因和... 详细信息

目的了解外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的转录水平。方法体外分离培养大鼠BMSCs,将其随机分为GDNF基因转染组、空质粒转染组和未转染组3组;GDNF基因转染组和空质粒转染组分别用GDNF基因和空质粒重组腺病毒感染BMSCs,并按感染后培养时间的不同(3、6、9和12天)又分为4个亚组。采用实时定量pcr技术检测GDNF基因在BMSCs中的转录水平。结果空质粒转染组和未转染组无GDNFmRNA的表达,GDNF基因转染组在转染后3～12天的GDNFmRNA相对表达量为0.00751±0.00067。结论腺病毒介导的基因转染技术将GDNF基因转染至骨髓间充质干细胞中,有外源性基因GDNFmRNA的表达,这为进一步研究以GDNF基因转染的BMSCs治疗中枢神经系统疾病奠定了基础。

关键词：胶质细胞源性神经营养因子大鼠骨髓间充质干细胞基因转染实时定量pcr

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实时定量pcr检测慢性粒细胞白血病患者Shh、Smo基因的表达水平

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第三军医大学学报 2014年第3期36卷 267-269页

作者：朱华民李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广州510632 广东医学院附属医院急救中心广东湛江524001 暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632

目的建立Hedgehog信号通路功能性基因Shh和功能性受体蛋白Smo基因的定量检测方法,并分析其在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中的表达水平。方法利用实时定量pcr检测20例CML患者和作为正常对照(8例)的健康人外周血... 详细信息

目的建立Hedgehog信号通路功能性基因Shh和功能性受体蛋白Smo基因的定量检测方法,并分析其在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中的表达水平。方法利用实时定量pcr检测20例CML患者和作为正常对照(8例)的健康人外周血细胞中Shh、Smo基因的表达水平,以β2微球蛋白(β2-M)基因作为内对照。结果 CML组Shh、Smo表达水平均明显高于正常对照组(P<0.05)。结论成功建立Shh、Smo基因的定量检测方法;Shh、Smo基因在CML中高表达。

关键词： Shh Smo基因慢性粒细胞白血病实时定量pcr 基因表达

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实时定量pcr技术检测前列腺癌微小转移的研究

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南开大学学报（自然科学版） 2008年第5期41卷 27-31页

作者：杨睿张立国符蓉王春雨刘树业石建党张琚南开大学分子生物学研究所生物活性材料教育部重点实验室天津300071

通过利用TaqMan定量pcr检测前列腺增生和前列腺癌患者外周血中前列腺特异抗原(PSA)和前列腺特异膜抗原(PSMA)的表达量,建立了一种通过检测患者外周血单个核细胞中前列腺特异基因表达水平检测前列腺癌微小转移的方法.实验结果表明,PSA在... 详细信息

通过利用TaqMan定量pcr检测前列腺增生和前列腺癌患者外周血中前列腺特异抗原(PSA)和前列腺特异膜抗原(PSMA)的表达量,建立了一种通过检测患者外周血单个核细胞中前列腺特异基因表达水平检测前列腺癌微小转移的方法.实验结果表明,PSA在转移癌、局限癌和增生患者组中与GAPDH的相对表达量分别为(2.63×10-3±3.4×10-4),(2.6×10-4±3.9×10-5)和(2.6×10-5±4.5×10-6),各组间有显著性差异(p<0.001);PSMA在各组间的相对表达量分别为(6.4×10-3±9.3×10-3),(5.0×10-4±8.3×10-5),(2.4×10-5±7.2×10-6),各组间亦存在着显著性差异(p<0.001).因此用定量pcr技术检测外周血中PSA和PSMA的表达水平,可区分前列腺转移癌、局限癌和增生患者,该方法可用于前列腺癌的早期诊断.

关键词：实时定量pcr PSA PSMA 前列腺癌微小转移

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实时定量pcr法分析白桦中一花发育相关基因BpHEN的时序表达

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东北林业大学学报 2006年第1期34卷 1-2,6页

作者：杨传平魏继承李同华王超姜静东北林业大学哈尔滨150040

对白桦花序进行分期取材,以CTAB法提取各期材料的总RNA,应用SMART(Switching Mechanism At5′end of RNA Transcript)策略合成cDNA。根据BpHEN序列片段设计引物,通过特异扩增、产物纯化、梯度稀释,制备出系列标准样。通过实时定量pcr分... 详细信息

对白桦花序进行分期取材,以CTAB法提取各期材料的总RNA,应用SMART(Switching Mechanism At5′end of RNA Transcript)策略合成cDNA。根据BpHEN序列片段设计引物,通过特异扩增、产物纯化、梯度稀释,制备出系列标准样。通过实时定量pcr分析BpHEN在各取材时期的表达情况表明,BpHEN在雌花序中的表达要高于雄花序,且在雌花序中有3个表达高峰,分别对应于授粉期、胚珠发育期、果实发育期。

关键词：白桦 BpHEN 表达实时定量pcr

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实时定量pcr检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及临床应用

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中华临床营养杂志 2011年第3期19卷 154-158页

作者：崔希增马恩陵康军仁郭广亮房嘉宾徐云飞中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院外科肠外肠内营养科 100730

目的建立实时定量pcr（RQ-pcr）快速检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及进行初步临床应用。方法基于烟曲霉多拷贝基因ITSl-5．8S基因设计引物和TaqMan探针，用QIAamp^DNA Blood Mini Kit提取烟曲霉基因组DNA，建立20μlRQ-pcr反... 详细信息

目的建立实时定量pcr（RQ-pcr）快速检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及进行初步临床应用。方法基于烟曲霉多拷贝基因ITSl-5．8S基因设计引物和TaqMan探针，用QIAamp^DNA Blood Mini Kit提取烟曲霉基因组DNA，建立20μlRQ-pcr反应体系，对含有不同载量烟曲霉基因组的模拟人全血标本和66份外科发热患者全血标本进行烟曲霉基因组的定量检测。结果检测限为10^-1基因组／μl上机待测液（即约78CFU／ml全血）；检测特异度和灵敏度分别为94．25％和99．04％，阳性预告值和阴性预告值分别为97．63％和97．62％；测定结果的平均相对误差为（3．67±13．19）％；批内及批间平均重复性变异系数分别为（12．38±1．53）％和（16．27±2．72）％；人血标本中烟曲霉基因组平均回收率为（107．81±25．92）％，回收率平均变异系数为（26．24±5．62）％。66份外科发热患者血标本中未检测出烟曲霉基因组。结论RQ-pcr可以快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中烟曲霉基因组的载量，且有着较好的准确度与精密度。本研究外科发热患者血中未检测到烟曲霉基因组。

关键词：实时定量pcr 烟曲霉全血外科感染

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实时定量pcr法检测淋巴瘤患者Bcl-2／IgH融合基因及其临床意义

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中国实验血液学杂志 2009年第2期17卷 368-372页

作者：张学美徐明刘华李惠民李云涛何争春昆明医学院第一附属医院血液科云南昆明650032 云南省第二人民医院血液科云南昆明650021

本研究目的是检测滤泡性淋巴瘤和弥漫大B细胞淋巴瘤患者bcl-2/IgH融合基因的表达水平,以探讨其临床意义。以SYBRGreenⅠ荧光染料实时定量pcr方法检测20例患者外周血和(或)骨髓bcl-2/IgH融合基因的表达水平,并对其中4例患者bcl-2/IgH融... 详细信息

本研究目的是检测滤泡性淋巴瘤和弥漫大B细胞淋巴瘤患者bcl-2/IgH融合基因的表达水平,以探讨其临床意义。以SYBRGreenⅠ荧光染料实时定量pcr方法检测20例患者外周血和(或)骨髓bcl-2/IgH融合基因的表达水平,并对其中4例患者bcl-2/IgH融合基因的表达水平进行动态监测。结果表明,在bcl-2/IgH融合基因阳性表达的病例中,骨髓和外周血bcl-2/IgH融合基因的相对拷贝数分别为4.23和2.73,统计学分析差异无显著性(p=0.107),而治疗前后融合基因的相对拷贝数均数分别为3.61和2.69,统计学分析差异有显著性(p=0.000),初诊及复发组的bcl-2/IgH融合基因表达水平明显高于缓解组(p=0.008),在4例患者的外周血bcl-2/IgH融合基因动态监测结果中,1例患者在临床复发前3个月bcl-2/IgH融合基因表达水平明显上升。结论:bcl-2/IgH融合基因表达水平与患者的疾病状态有一定的相关性,初诊及复发患者融合基因的表达水平高,而缓解患者融合基因的表达水平低,治疗后融合基因表达水平较治疗前明显下降,bcl/IgH融合基因表达水平的变化可能与临床疾病进程有关,检测外周血是比较可行的。

关键词： Bcl-2/IgH融合基因淋巴瘤实时定量pcr

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实时定量pcr检测外科发热患者静脉血中大肠杆菌DNA的方法

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中国临床营养杂志 2006年第2期14卷 70-76页

作者：李云玖马恩陵廉东波张立阳王秀荣何桂珍蒋朱明中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院普通外科北京100730

目的建立实时定量pcr(RQpcr)检测大肠杆菌DNA的方法,评估临床标本检测效果。方法选择大肠杆菌β右旋半乳糖苷酶基因作为检测靶基因设计引物和探针,采用HighPurepcrTemplatePreparationKit提取基因组DNA,建立20μlTaqMan探针RQpcr反应体... 详细信息

目的建立实时定量pcr(RQpcr)检测大肠杆菌DNA的方法,评估临床标本检测效果。方法选择大肠杆菌β右旋半乳糖苷酶基因作为检测靶基因设计引物和探针,采用HighPurepcrTemplatePreparationKit提取基因组DNA,建立20μlTaqMan探针RQpcr反应体系。对26份外科发热患者标本(血标本20份,腹腔引流液3份,胸水2份,胆汁1份)进行荧光RQpcr检测。结果引物和探针特异性好,标准曲线相关系数在0.991～0.999之间。在最低检测限(102拷贝/反应体系)以上,仪器对不同含量大肠杆菌样本检测的平均准确性为(112.19±7.48)%;批内及批间重复性平均变异系数(CV)分别为(16.33±4.80)%和(16.03±7.80)%。血标本中大肠杆菌DNA平均提取效率为(38.40±14.05)%,提取效率平均CV为(20.57±16.92)%。含有同等量大肠杆菌模拟标本存放在-20℃或-70℃6个月内,大肠杆菌DNA拷贝数差异无显著性(P=0.130)。外科发热患者血中大肠杆菌阳性率高达30%,最高含量约为1.24×106个/ml;另外在胆汁及腹腔引流液标本中检测出的大肠杆菌DNA含量明显高于相同患者血中含量。结论RQpcr是一种快速、灵敏、特异、重复性好、能定量起始模板拷贝数的检测大肠杆菌DNA方法,可用于定量检测全血及其他体液标本中大肠杆菌含量。

关键词：实时定量pcr 大肠杆菌 DNA 肠黏膜屏障发热血体液

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实时定量pcr快速检测外科发热患者血中白念珠菌载量的方法

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中华临床营养杂志 2009年第5期17卷 -页

作者：郭广亮马恩陵康军仁房嘉宾崔希增谢秀丽北京协和医学院北京协和医院基本外科肠外肠内营养科中国医学科学院100730 北京协和医学院北京协和医院检验科中国医学科学院100730

目的建立实时定量pcr(RQ-pcr)快速检测血中自念珠菌(Gandiad albicans)载量的方法,并对可能存在肠屏障损伤和肠道菌移位的外科发热患者标本进行检测.方法基于白念珠菌基因组单拷贝基因NAG1设计引物和探针;构建并制备质粒做标准品;用QI... 详细信息

目的建立实时定量pcr(RQ-pcr)快速检测血中自念珠菌(Gandiad albicans)载量的方法,并对可能存在肠屏障损伤和肠道菌移位的外科发热患者标本进行检测.方法基于白念珠菌基因组单拷贝基因NAG1设计引物和探针;构建并制备质粒做标准品;用QIAamp(R) DNA Blood Mini Kit试剂盒提取白念珠菌基因组DNA;建立20μl TaqMan探针RQ-pcr反应体系;对74份外科发热患者临床标本进行定量检测.结果引物和探针特异性好;标准曲线R2 值0.9918～0.9985,扩增效率0.88～1.027,检测限为100 拷贝/μl上机检测液(即约1.1×103 cfu/ml全血),仪器检测灵敏度为97.46%,特异度为100%,平均准确性为(99.64±2.08)%,批内及批间重复性的平均变异系数分别为(14.76±2.64)%和(17.85±3.53)%;血标本中白念珠菌基因组平均提取效率为(88.60±5.73)%,提取效率平均变异系数为(11.70±5.36)%;标本于-20℃存放3、6个月后和0时间点定量结果比较,差异无显著性(P=0.267);74份外科发热患者血中白念珠菌的阳性率为2.7%,最高含量约为4.42×103 cfu/ml.结论 RQ-pcr可以快速、灵敏、特异地定量检测血标本中白念珠菌,重复性好,适用于临床日常检验.少数外科发热患者周围血中存在白念珠菌.

关键词：实时定量pcr 白念珠菌全血外科感染发热

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实时定量pcr在干细胞及肿瘤研究中的应用

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临床检验杂志 2005年第1期23卷 65-66,72页

作者：严永敏郝顺祖许文荣江苏大学医学技术学院江苏镇江212001

实时定量pcr(real-time quantitative pcr)技术实现了pcr从定性到定量的飞跃,而且与常规pcr相比具有特异性更强、有效解决pcr污染问题、自动化程度高等特点,已广泛用于生物医学及临床医学等多个领域.而在干细胞研究和肿瘤诊断的研究中,... 详细信息

实时定量pcr(real-time quantitative pcr)技术实现了pcr从定性到定量的飞跃,而且与常规pcr相比具有特异性更强、有效解决pcr污染问题、自动化程度高等特点,已广泛用于生物医学及临床医学等多个领域.而在干细胞研究和肿瘤诊断的研究中,国内外文献报道较少,本文就其中方法原理、研究进展及其在干细胞和肿瘤研究方面的应用作一简要综述.……

关键词：实时定量pcr 肿瘤研究干细胞研究 pcr污染临床医学肿瘤诊断生物医学 pcr) 特异性领域

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