检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：李娅广西大学

学位级别：硕士

马立克氏病(Marek's disease,MD)是由疱疹病毒引起的一种鸡恶性T淋巴细胞增生性疾病,对养禽业危害极大。目前以疫苗免疫和生物安全为主的防制手段已经不能很好的控制MD,因此抗病育种将成为一个重要的策略。抗病育种主要采用遗传学... 详细信息

马立克氏病(Marek's disease,MD)是由疱疹病毒引起的一种鸡恶性T淋巴细胞增生性疾病,对养禽业危害极大。目前以疫苗免疫和生物安全为主的防制手段已经不能很好的控制MD,因此抗病育种将成为一个重要的策略。抗病育种主要采用遗传学方法即通过相应的MD抗性相关基因(Marek'sdisease resistance-related genes,MDRLGs)的检测来选育抗性的个体,从遗传本质上提高鸡只对MD的抗性。目前,在其他品种鸡研究的MDRLGs主要包括生长激素(growth hormone,GH)基因、主要组织相容性复合物(maiorhistocompatibility complex,MHC)的B-L和B-F基因、白细胞介素18(Interleukin-18,IL-18)基因等,据报道它们在鸡只外周血淋巴白细胞中的表达水平与抗性相关。应用敏感性极高的实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative pcr,RQ-pcr)进行基因表达水平差异的研究是一种有效而常用的技术,通过克隆这些基因,获得其重组标准品质粒并建立其相应的标准曲线将是开展这一研究工作的基础。　　本课题从抽提自霞烟鸡鸡外周血淋巴白细胞的总mRNA中应用逆转录酶—聚合酶链式反应(reverse-transcriptase polvmerase chain reaction,RT-pcr)扩增出GH基因、B-L基因和IL-18基因的cDNA,将纯化的cDNA克隆到pGM-T载体上。重组质粒通过pcr和EcoR错误!未找到引用源。酶切鉴定及测序分析,证明GH基因、B-L基因和IL-18基因已经成功重组到pGM-T载体上;将浓度梯度的GH基因、B-L基因和IL-18基因的重组标准品质粒DNA进行RQ-pcr,建立其相应的标准曲线。经分析显示各标准曲线的Ct值与其标准品浓度的对数值之间存在良好的线性关系;扩增曲线分析表明,在建立的反应体系和反应条件下,标准曲线的灵敏度都达到10拷贝/反应。结果表明,本课题成功构建了用于检测GH基因、B-L基因和IL-18基因表达水平的标准品质粒和标准曲线,为下一步应用RQ-pcr技术检测GH基因、B-L基因和IL-18基因的表达水平打下基础。　　对不同样本中特定基因的mRNA表达水平进行比较分析时,各样品的起始细胞数、RNA的提取效率以及反转录效率不同。因此,需要同时对不同样品中作为内参的管家基因(housekeeping gene)进行RQ-pcr,以此对目的基因的定量结果进行校正。3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是体内参与糖酵解的一种关键酶,其编码的基因是最为常用的内参之一。应用RT-pcr从霞烟鸡鸡外周血淋巴白细胞的总mRNA中逆转录扩增GAPDH基因转录子的cDNA,并将纯化的cDNA克隆到pGM-T载体上。重组质粒经pcr和EcoR错误!未找到引用源。酶切鉴定及测序分析,证实GAPDH基因成功重组到pGM-T载体上。将梯度浓度的GAPDH基因重组标准品质粒DNA进行RQ-pcr,建立其标准曲线。扩增曲线分析表明,在该反应体系和反应条件下,标准曲线的灵敏度都达到10拷贝/反应。经分析显示标准曲线的Ct值与标准品浓度的对数值之间存在良好的线性关系。结果表明,本课题成功构建了用于检测GAPDH基因表达水平的标准品质粒和标准曲线,为下一步对MD抗性相关基因的RQ-pcr检测提供了内参。　　本课题成功建立了用于检测不同MD抗性能力的鸡外周血淋巴白细胞中GH基因、B-L基因和IL-18基因等MDRLGs以及作为内参的GAPDH基因的mRNA表达水平的RQ-pcr方法,为霞烟鸡MD抗性相关基因的筛选工作奠定了基础。

关键词：马立克氏病霞烟鸡抗MD相关基因基因表达实时定量pcr

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实时定量pcr监测B细胞恶性肿瘤患者造血干细胞移植疗效及预后的研究

实时定量PCR监测B细胞恶性肿瘤患者造血干细胞移植疗效及预后的研...

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作者：于珍北京协和医学院(清华大学医学部)&中国医学科学院

学位级别：硕士

目的评价实时定量pcr(RQ-pcr)技术检测IgH水平对B细胞恶性肿瘤患者造血干细胞移植(HSCT)后残留肿瘤细胞监测的意义。方法采用家族一致性TaqMan探针联合等位基因特异性寡核苷酸(ASO)上游引物技术检测22例B细胞恶性肿瘤患者HSCT前后骨髓... 详细信息

目的评价实时定量pcr(RQ-pcr)技术检测IgH水平对B细胞恶性肿瘤患者造血干细胞移植(HSCT)后残留肿瘤细胞监测的意义。方法采用家族一致性TaqMan探针联合等位基因特异性寡核苷酸(ASO)上游引物技术检测22例B细胞恶性肿瘤患者HSCT前后骨髓单个核细胞的lgH水平动态变化。IgH的水平以内参基因 GAPDH进行归一化。结果 ***-pcr实验可重复灵敏度为1个拷贝。2．9例IgH单克隆重排患者HSCT后一个月，骨髓中IgH的拷贝数较初治时均有明显的降低(6．67X10(上标3）／10（上标6）GAPDH对29／10（上标6）GAPDH，n=9，ppcr检测8例干细胞采集物的肿瘤污染水平为3．68X10（上标2）(0-1720)／10（上标6）GAPDH，外周血采集物中的肿瘤污染小于骨髓[75(0-890)／10（上标6）GAPDH，n=5对1．1X10（上标3）(527-1720)／10（上标6）GAPDH，n=3，ppcr检测的8例患者无论肿瘤污染的程度如何临床均无复发。采集物中肿瘤污染的水平与初治及移植后一个月的IgH水平呈正相关， (r值分别为0．810、0．708， ppcr能够有效监测B细胞恶性肿瘤患者移植后IgH水平动态变化。移植后3个月内IgH拷贝数大于10（上标3）／10(上标6）GAPDH可能是预测患者复发的标志。干细胞采集物是否存在肿瘤污染及其污染情况可能并不会明显影响移植预后。

关键词：造血干细胞移植 B细胞恶性肿瘤实时定量pcr IgH重排

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实时定量pcr快速检测人全血中烟曲霉基因组DNA的方法学研究

实时定量PCR快速检测人全血中烟曲霉基因组DNA的方法学研究

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作者：崔希增北京协和医学院

学位级别：硕士

本研究的目的是建立应用实时定量pcr技术(real-time quantitative pcr, RQ-pcr)快速检测人全血标本中烟曲霉(Aspergillus fumigatus)基因组载量的方法及临床检测应用,以推断肠屏障损伤的后果及疗效。本研究中,选择烟曲霉基因组多拷贝基... 详细信息

本研究的目的是建立应用实时定量pcr技术(real-time quantitative pcr, RQ-pcr)快速检测人全血标本中烟曲霉(Aspergillus fumigatus)基因组载量的方法及临床检测应用,以推断肠屏障损伤的后果及疗效。本研究中,选择烟曲霉基因组多拷贝基因ITS1-5.8S作为靶基因设计特异性引物和TaqMan探针,采用QIAamp?DNA Blood Mini Kit提取烟曲霉基因组DNA,建立20μl RQ-pcr反应体系,对含有不同载量烟曲霉的模拟人全血标本和66份外科发热患者全血标本进行烟曲霉基因组的定量检测。结果显示本方法的特异性良好,检测限为10-1基因组/μl上机待测液(即约78 CFU/ml全血)；检测灵敏度和特异度分别为99.04%和94.25%,阳性预告值和阴性预告值分别为97.63%和97.62%;测定结果的平均相对误差为(3.67±13.19)%；批内及批间平均重复性变异系数(CV)分别为(12.38±1.53)%和(16.27±2.72)%；人血标本中烟曲霉基因组平均回收率为(107.81±25.92)%,回收率平均变异系数为(26.24±5.62)%。66份外科发热患者血标本中未检测出烟曲霉基因组。RQ-pcr可以快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中烟曲霉基因组的载量,且有着较好的准确度与精密度。外科发热患者血中烟曲霉基因组的存在率可能很低。

关键词：实时定量pcr 烟曲霉全血外科感染发热肠屏障

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实时定量pcr检测内质网应激相关基因方法的建立

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安徽医科大学学报 2012年第8期47卷 988-991页

作者：王夏沈玉君徐元宏沈玉先安徽医科大学药学院合肥230032 安徽医科大学基础医学院合肥230032 安徽医科大学教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室(省部共建) 合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

从人外周血白细胞中扩增目的基因片段,构建标准品质粒,应用SYBR GreenⅠ荧光染料进行实时定量pcr,检测内质网应激相关基因的拷贝数。所建立的实时定量pcr方法在起始模板量106～1013拷贝/μl范围内,荧光信号达到阈值的循环数Ct值与模板... 详细信息

从人外周血白细胞中扩增目的基因片段,构建标准品质粒,应用SYBR GreenⅠ荧光染料进行实时定量pcr,检测内质网应激相关基因的拷贝数。所建立的实时定量pcr方法在起始模板量106～1013拷贝/μl范围内,荧光信号达到阈值的循环数Ct值与模板浓度线性关系良好(R2=0.991 9),是检测内质网应激相关基因有效的手段。

关键词：实时定量pcr SYBR GreenⅠ 内质网应激

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实时定量pcr技术检测结核分枝杆菌蛋白编码基因表达水平研究

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中国病原生物学杂志 2012年第4期7卷 254-257页

作者：陈伟刘艳杨紧根刘金菊王远志袁俐湖南省娄底市中心医院检验科湖南娄底417000 新疆民族与地方高发病教育部重点实验室新疆石河子832002 湖南省娄底市妇幼保健院检验科湖南娄底417000

目的运用实时定量pcr(qRT-pcr)检测66株结核分枝杆菌蛋白编码基因(fbpB,psts1,mpt64)的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株与敏感菌株,北京基因型菌株与非北京基因型菌株的蛋白抗原在转录水平的差异。方法根据GenBank提供的序列,设计特... 详细信息

目的运用实时定量pcr(qRT-pcr)检测66株结核分枝杆菌蛋白编码基因(fbpB,psts1,mpt64)的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株与敏感菌株,北京基因型菌株与非北京基因型菌株的蛋白抗原在转录水平的差异。方法根据GenBank提供的序列,设计特异性引物,扩增目的基因片段,克隆入载体,重组质粒经纯化及梯度稀释,应用qRT-pcr检测基因的表达水平。结果北京基因型菌株psts1基因表达水平与非北京基因型菌株比较差异有统计学意义(t=3.721,P<0.01);耐药菌株mpt64基因表达水平与敏感菌株比较差异有统计学意义(t=3.951,P<0.01)。结核分枝杆菌活菌的扩增曲线呈典型的S型,结核分枝杆菌死菌和非结核分枝杆菌呈水平直线,未检测到荧光信号。结论北京基因型结核分枝杆菌psts1基因的表达量低于非北京基因型,结核分枝杆菌耐药菌株mpt64基因的表达量低于敏感株。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B结核分枝杆菌蛋白 38ku结核分枝杆菌蛋白 MPT64结核分枝杆菌蛋白实时定量pcr

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实时定量pcr监测多发性骨髓瘤患者反应停治疗和干细胞移植后微小残留病

实时定量PCR监测多发性骨髓瘤患者反应停治疗和干细胞移植后微小...

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作者：林法迎第二军医大学

学位级别：硕士

研究背景：微小残留病(minimal residual disease，MRD)是大部分多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)患者治疗后复发的主要原因。MRD的检测对于患者疗效和复发及预后的判断有重要意义，目前国际上把IgH(immunoglobulin heavy chain，IgH... 详细信息

研究背景：微小残留病(minimal residual disease，MRD)是大部分多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)患者治疗后复发的主要原因。MRD的检测对于患者疗效和复发及预后的判断有重要意义，目前国际上把IgH(immunoglobulin heavy chain，IgH)基因重排作为检测B细胞系肿瘤MRD最常用的克隆标记物。过去定量研究IgH基因重排的方法多用终点定量pcr产物和极限稀释法等，但这些检测方法是半定量的方法，检查结果往往不能准确反映MRD存在。随着分子生物学技术发展，现在常用的实时定量pcr(real-time quantitative polymerase chain reaction)方法有杂交探针法、TaqMan探针法、分子信标(molecular beacon)等方法，都可以用来分析MRD，每种方法各有优缺点。但因为IgH基因重排在MM中非常复杂，这些方法都需要合成患者特异性引物和荧光探针，大大增加了实验成本，不适合临床的大样本检测。本实验拟探讨利用SYBR Green荧光染料，使用IgH基因重排通用引物，以IgH基因重排为标志，采用实时定量pcr方法，探讨反应停治疗和大剂量化疗联合自体外周造血干细胞移植(autologous peripheral blood stem cell transplantation，APBSCT)前后MRD的变化，并以此来判断患者的疗效和患者的预后。目的：探讨应用实时定量pcr方法检测MM患者在应用反应停治疗和大剂量化疗联合APBSCT前后的IgH基因重排，探讨治疗前后患者MRD的变化及其与治疗疗效和预后的关系。方法：利用SYBR Green Ⅰ荧光染料和IgH基因重排通用引物，祭—军民大学方颀十学世俗文中文份要采用实时定量pcr方法，对26例反应停治疗和 9例大剂量化疗联合 APBSCT前后的MM患者的哈H基因重排进行定量分析。结果：IgH基因重排拷贝数，在反应停治疗完全缓解组和有效组前后分别为 3028士655．59，43．4土24．85和 7467土6if＊5，619土271．2，前后相比两者差异有显著性（P1刀5人无效组6153到2又对2， 6575到227．13，前后差异无显著性 o＞0对引，与患者骨髓浆细胞比例成正相关（r＝0．89，p＜0．05）。lgH基因重排拷贝数在APBSCT前后分别为3I08士347＊8，594土220＊7，两者差异有显著性（P＜0＊5），与患者骨髓浆细胞比例成正相关卜对．86，P功力5），并对一例复发患者进行连续检测，结果与临床表现和实验室检查相符。结论：本实验表明，利用 SYBR Green荧光染料和 IgH基因重排通用引物的实时定量pcr对哈H基因重排的定量分析，可以监测MM患者体内MRD；作为判断MM治疗疗效的一种检测方法，对患者的预后判断有指导意义。

关键词：实时定量pcr 免疫球蛋白重链微小残留病多发性骨髓瘤

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实时定量pcr动态监测急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因的研究及临床意义

实时定量PCR动态监测急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因的研...

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作者：钟少东安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:急性早幼粒细胞白血病（APL）是急性髓细胞白血病的一种类型,占成人急性髓细胞白血病的10%左右,APL最常见t（15;17）(q22;q21)的染色体位,该染色体移位检出阳性率约占98%。该异常可以累及维甲酸受体α（RARα）,使得早幼粒细胞白血... 详细信息

目的:急性早幼粒细胞白血病（APL）是急性髓细胞白血病的一种类型,占成人急性髓细胞白血病的10%左右,APL最常见t（15;17）(q22;q21)的染色体位,该染色体移位检出阳性率约占98%。该异常可以累及维甲酸受体α（RARα）,使得早幼粒细胞白血病PML基因与RARα重排,最终形成具有特征意义的PML-RARα融合基因。使用全反式维甲酸（ATRA）和三氧化二砷（ATO,As2O3）治疗APL以来,APL的完全缓解率已达到70%以上。但白血病复发一直是困扰临床缓解期以及后期的巩固、维持治疗,影响患者总体生存,而复发的根源主要是来自体内残留白血病细胞,即急性白血病微小残留病（MRD）。实时荧光定量pcr方法可以检测融合基因产物,了解肿瘤细胞在治疗中的消减情况,对监测MRD具有很大意义。本研究旨在建立用实时定量pcr检测APL治疗后PML-RARαmRNA水平的技术平台,探讨PML-RARα融合基因在监测APL缓解后及MRD中的意义,以及APL亚型与预后间的关系。方法:采用Taq Man法进行实时定量pcr动态监测患者骨髓PML-RARα融合基因的变化。对32例初治的APL患者治疗前、缓解后、巩固及维持治疗期间每3个月检测一次动态监测PML-RARα融合基因。结果:1、初发32例患者中28例（87.5%）PML-RARα融合基因阳性,长期随访的28例完全缓解（CR）患者,4例分子学复发,其中1例发生于CR1后3个月,诱导缓解治疗后达CR2 ,随后3个月再次出现分子学与血液学复发,再次诱导后达CR3;3例发生在CR1后3、4月复发,经1疗程诱导后缓解;随访结束时生存期已达24个月。2、本研究28例融合基因阳性患者中APL的L型19例,S型9例,经用ATRA或ATRA+DNR诱导治疗后,L型有18例达CR, S型有6例达CR,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。L型1例复发、1例死亡,S型3例复发、2例死亡,复发率和死亡率分的差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1、APL在CR期定期监测PML-RARα融合基因,可尽早发现分子学复发,及时治疗避免血液学复发。治疗后患者的PML-RARα融合基因转录本水平明显下降,复发时基因转录本水平又升高,其表达水平与临床疾病进展治疗关系一致,这有助于监测MRD,评价疗效和判断预后。2、本研究发现融合基因阳性的APL的L和S亚型经过相同的诱导治疗后CR有差异,但是其复发率及死亡率无明显区别。

关键词：急性早幼粒细胞白血病 PML-RARα融合基因实时定量pcr 微小残留病

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实时定量pcr检测急性早幼粒细胞白血病患者PML/RARα融合基因转录本

实时定量PCR检测急性早幼粒细胞白血病患者PML/RARα融合基因转录...

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作者：韩兰秀江苏大学

学位级别：硕士

目的建立实时定量pcr(RQ-pcr)方法检测初诊急性早幼粒细胞白血病(APL)忠者PML/RARα融合基因亚型(Long-form、Short-form和Variant-form)及其特异性异构体(bcrl/2、P4R3、P46R3、bcr3和P2R3),并探讨融合基因亚型和特异性异构体表达水平... 详细信息

目的建立实时定量pcr(RQ-pcr)方法检测初诊急性早幼粒细胞白血病(APL)忠者PML/RARα融合基因亚型(Long-form、Short-form和Variant-form)及其特异性异构体(bcrl/2、P4R3、P46R3、bcr3和P2R3),并探讨融合基因亚型和特异性异构体表达水平的临床意义。方法根据“欧洲抗癌计划”设计TaqMan探针和引物,建立RQ-pcr方法对长型(Long-form)、短型(Short-form)、变异型(Variant-form)三种类型PML/RARα阳性模板进行扩增,检测51例初诊APL患者PML/RARα转录本含量,并对检测结果进行凝胶电泳和测序;设计不同异构体的特异性引物,建立异构体特异性RQ-pcr方法对6种特异性异构体PML/RARα阳性模板进行扩增,评价异构体定量检测的特异性,并检测45例初诊APL患者中不同异构体的含量。结果51例APL初诊患者中,33例为长型PML/RARα阳性患者,3例为变异型PML/RARα阳性患者,15例为短型PML/RARα阳性患者。患者外周血白细胞计数与年龄呈负相关(R=-0.376,P=0.014),相关性主要见于长型和变异型患者(R=-0.51,P=0.005)。短型患者外周血白细胞计数明显高于长型患者(P=0.041)。而两组患者在性别、年龄、外周血血红蛋白含量、血小板计数,骨髓原始粒细胞及早幼粒细胞比例、获得血液学完全缓解时间和分子生物学完全缓解时间等方面无统计学差异。所建立的检测PML/RARα转录本各亚型的RQ-pcr方法最大敏感性均达10拷贝/μl,但其重复性较差,10-10拷贝/μl阳性模板的重复性良好。正常对照及空白对照无扩增信号。 36例长型和变异型APL初诊患者PML/RARα转录本绝对含量为3.75×10-6.20×10拷贝/50 ng(中位7.24×10拷贝/50 ng),相对含量为0.51%-676.87%(中位9.31%)。15例短型患者PML/RARα转录本绝对含量为2.26×10-2.33×10拷贝/50 ng(中位1.17×10拷贝/50 ng),相对含量为12.04%-802.68%(中位95.26%)。短型患者体内融合基因相对含量明显高于长型患者(P<0.01)。33例随访患者获得血液学完全缓解时间与分子生物学完全缓解时间与患者的年龄、外周血白细胞数及融合基因含量无相关性。 “欧洲抗癌计划”推荐的短型RQ-pcr反应体系能扩增筑巢式pcr检测为长型、变异型和短型的PML/RARα转录本,变异型反应体系能扩增筑巢式pcr检测为长型和变异型的PML/RARα转录本,长型反应体系仅能扩增筑巢式pcr检测为长型PML/RARα转录本;电泳及测序结果揭示短型RQ-pcr反应体系扩增筑巢式pcr检测为长型PML/RARα的患者标本可见3条条带(621 bp、477 bp和218 bp),扩增筑巢式pcr检测为变异型PML/RARα的患者标本也可见3条条带(567 bp、423 bp和218 bp)。长型患者和变异型患者同时含有P4R3和P46R3异构体,短型患者同时含有P2R3异构体。鉴于上述结果,我们进一步建立了检测PML/RARα转录本6种特异性异构体的RQ-pcr方法,最大敏感性均达10拷贝/μl,但其重复性较差,10-10拷贝/μl阳性模板的重复性良好。正常对照及空白对照无扩增信号。每个异构体特异性RQ-pcr均不能将其它异构体扩增出。 45例APL初诊患者中,长型和变异型患者31例,其bcr1/2的绝对定量为1.73×10-7.65×10拷贝/50 ng(中位2.14×10拷贝/50 ng),相对定量为0.86%-208.01%(中位11.61%);P4R3的绝对定量为7.3×10-1.38×10拷贝/50 ng(中位1.46x10拷贝/50 ng),相对定量为0.71%-266.19%(中位18.13%);P46R3的绝对定量为1.65×10-1.05×10拷贝/50 ng(中位1.41×10拷贝/50 ng),相对定量为0.53%-222.90%(中位8.65%)。14例短型患者bcr3的绝对定量为7.53×10-3.22×10拷贝/50 ng(中位6.07×10拷贝/50 ng),相对定量为11.91%-326.55%(中位58.03%);P2R3的绝对定量为48.87-1.39×10拷贝/50 ng(中位8.72×10拷贝/50 ng),相对定量为0.02%-57.71%(中位0.93%)。短型患者bcr3的表达量明显高于长型、变异型患者bcr1/2的表达量(P=0.001)。长型患者中,bcr1/2、P4R3及P46R3三种异构体表达量的高低无统计学差异(P=0.344),bcr1/2及

关键词：实时定量pcr PML/RARα融合基因异构体 APL

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苯酚胁迫下多刺裸腹溞实时定量pcr内参基因的筛选

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水生生物学报 2020年第1期44卷 180-186页

作者：王茜刘文秀高菲王兰山西大学生命科学学院

为研究苯酚胁迫下多刺裸腹溞(Moina macrocopa)相关基因的表达情况,筛选用于实时定量pcr分析的最佳内参基因。利用内参基因表达的cycle threshold(Ct值)非参数检验、GeNorm、NormFinder和Best-Keeper四种方法对β-actin、16S rRNA和12S ... 详细信息

为研究苯酚胁迫下多刺裸腹溞(Moina macrocopa)相关基因的表达情况,筛选用于实时定量pcr分析的最佳内参基因。利用内参基因表达的cycle threshold(Ct值)非参数检验、GeNorm、NormFinder和Best-Keeper四种方法对β-actin、16S rRNA和12S rRNA进行分析,筛选出苯酚胁迫下多刺裸腹溞表达相对稳定的内参基因。结果显示,从Ct值初步判定不同浓度苯酚胁迫后,多刺裸腹溞体内β-actin、16S rRNA和12S rRNA均可稳定表达,且稳定性顺序为:16S rRNA>12S rRNA>β-actin,从GeNorm软件分析显示内参基因的稳定性顺序为:16S rRNA=β-actin>12S rRNA,NormFinder和Bestkeeper分析显示的稳定性顺序均为:16S rRNA>β-actin>12S rRNA。基于以上四种方法对三个候选内参基因的筛选,确定了16S rRNA作为多刺裸腹溞实时定量pcr的最佳内参基因,有助于提高qRT-pcr分析的准确性,为进一步研究苯酚胁迫多刺裸腹溞后目的基因功能的表达提供了基础。

关键词：多刺裸腹溞实时定量pcr 内参基因苯酚

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板栗实时定量pcr内参基因的筛选与验证

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植物生理学报 2019年第3期55卷 378-386页

作者：陈国松李靖同刘阳曹庆芹张卿秦岭邢宇北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室北京102206 北京农学院生物科学与工程学院/农业部华北都市农业重点实验室北京102206 北京林果业生态环境功能提升协同创新中心北京102206

实时荧光定量pcr技术具有高灵敏性和高特异性,被广泛应用于基因表达分析,选取合适的内参基因是利用该技术准确分析目的基因表达变化的前提。本文以板栗的7种不同组织器官(根、茎、叶、种子、花芽、雌花和雄花)为材料,采用qRT-pcr技术分... 详细信息

实时荧光定量pcr技术具有高灵敏性和高特异性,被广泛应用于基因表达分析,选取合适的内参基因是利用该技术准确分析目的基因表达变化的前提。本文以板栗的7种不同组织器官(根、茎、叶、种子、花芽、雌花和雄花)为材料,采用qRT-pcr技术分析了板栗中6个候选内参基因(EF1α、TUA、TUB、UBQ、18S rRNA和Actin)的表达趋势,运用geNorm、NormFinder和BestKeeper 3种软件对候选内参基因的表达稳定性进行了综合分析,并利用目的基因CmSPL9对筛选出的内参基因进行验证。结果表明:Actin和EF1α在板栗不同组织器官中稳定性最佳, Actin、EF1α或Actin+EF1α可作为板栗的内参基因进行后续试验研究。

关键词：板栗内参基因实时定量pcr CmSPL9基因

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