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国际中医中药杂志 2020年第3期42卷 251-255页

作者：马晓斐严国俊潘金火陈军张倩韩星星王建春南京中医药大学药学院 210023 张家港市中医医院院部办公室江苏省企业研究生工作站苏州215600

目的利用实时细胞电子分析技术(real-time cell-based assay,RTCA)检测不同浓度复方丹参片对细胞的影响,筛选出对复方丹参片反应灵敏、稳定且有明显浓度依赖的细胞株,为复方丹参片进行细胞生物效应的质量评价提供实验依据。方法采用RTC... 详细信息

目的利用实时细胞电子分析技术(real-time cell-based assay,RTCA)检测不同浓度复方丹参片对细胞的影响,筛选出对复方丹参片反应灵敏、稳定且有明显浓度依赖的细胞株,为复方丹参片进行细胞生物效应的质量评价提供实验依据。方法采用RTCA分析复方丹参片对人脐静脉内皮细胞(Huvec)、大鼠心肌细胞(H9C2)和大鼠胸主动脉平滑肌细胞(RA-VSMC)的影响,形成时间剂量依赖性细胞反应曲线,测定细胞指数,筛选最优的细胞株。结果3种细胞对复方丹参片的效应均有明显反应,RA-VSMC的灵敏度相对较差,3种细胞的有效浓度范围也有差异,浓度梯度依赖性也各有不同。H9C2细胞对复方丹参片具有良好的敏感度,呈浓度梯度依赖,且有效浓度范围为0.3~1.8 mg/ml,可作为复方丹参片质量评价的细胞。结论RTCA技术可实时监测记录细胞生长状态,准确反映复方丹参片对不同细胞株的影响,数据客观可靠,为复方丹参片的质量评价研究提供了新的实验技术和方法。

关键词：复方丹参片实时细胞电子分析技术细胞指数细胞增殖质量评价

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基于实时细胞电子分析技术的三七质量生物评价研究

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中药材 2015年第4期38卷 766-769页

作者：孙成祥雷飞飞王建春潘金火南京中医药大学江苏南京210023 张家港市中医医院江苏张家港215600

目的:建立三七的生物质量控制与评价方法,通过测定其细胞指数值来评价不同产地三七的品质。方法:采用实时细胞电子分析技术(Real-Time Cell-based Assay,RTCA)考察三七提取物针对特定依赖性细胞株的生物细胞活性,分析样品在一定时间内... 详细信息

目的:建立三七的生物质量控制与评价方法,通过测定其细胞指数值来评价不同产地三七的品质。方法:采用实时细胞电子分析技术(Real-Time Cell-based Assay,RTCA)考察三七提取物针对特定依赖性细胞株的生物细胞活性,分析样品在一定时间内的变化趋势和作用规律,并在最佳时间点测定其细胞指数值。结果:4批不同产地三七样品中,云南楚雄三七在最佳时间点38 h的细胞指数值最高,其生物活性最强。云南文山三七在最佳时间点38 h的细胞指数值最低,其生物活性最弱。结论:建立的基于RTCA的三七生物效价检测方法可初步用于三七质量的评价。

关键词：三七质量评价实时细胞电子分析技术细胞指数值

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实时细胞电子分析技术的应用研究进展

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中国药学杂志 2014年第3期49卷 169-173页

作者：严国俊裴燕芳朱贞宏吴洁颖潘金火南京中医药大学药学院南京210023 艾森生物科学公司圣地亚哥ca92121 艾森生物(杭州)有限公司杭州高通量新药筛选中心杭州310030

目的综述实时细胞电子分析技术的研究进展,为中药研究提供参考。方法根据近年来国内外相关文献,对实时细胞电子分析技术的原理、特点及其应用进行归纳总结。结果与结论实时细胞电子分析技术是一种无标记、无侵害的实时细胞电子分析方法... 详细信息

目的综述实时细胞电子分析技术的研究进展,为中药研究提供参考。方法根据近年来国内外相关文献,对实时细胞电子分析技术的原理、特点及其应用进行归纳总结。结果与结论实时细胞电子分析技术是一种无标记、无侵害的实时细胞电子分析方法。综述了实时细胞电子分析技术的应用研究进展,为其在药学领域进一步应用发展提供参考,并对其在中药及复方领域的应用前景进行了展望。

关键词：实时细胞电子分析技术应用进展中药药学

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实时细胞电子分析技术用于水蛭、三七质量评价的初步研究

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中国医药工业杂志 2013年第9期44卷 872-877页

作者：梅馨葛少波潘金火南京中医药大学药学院江苏南京210023

采用实时细胞电子分析技术测定水蛭、三七不同样本的时间剂量依赖性细胞反应曲线(TCRPs),对不同产地样本的TCRPs进行分析,并对生物活性强弱进行排序。同时,采用中国药典2010年版中的化学检测法和凝血酶滴定法分别对水蛭、三七各样本进... 详细信息

采用实时细胞电子分析技术测定水蛭、三七不同样本的时间剂量依赖性细胞反应曲线(TCRPs),对不同产地样本的TCRPs进行分析,并对生物活性强弱进行排序。同时,采用中国药典2010年版中的化学检测法和凝血酶滴定法分别对水蛭、三七各样本进行同步分析,比较不同检测方法得出结果的相关性。可见以实时细胞电子分析技术为基础的细胞生物活性测定结果与另两法所得结果基本一致。说明本技术能反映中药生物活性,有望为中药质量标准研究提供一种新方法。

关键词：水蛭三七质量评价实时细胞电子分析技术细胞生物活性测定法

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实时细胞电子分析技术运用于中药质量评价的研究

实时细胞电子分析技术运用于中药质量评价的研究

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作者：梅馨南京中医药大学

学位级别：硕士

目前由于缺少合适的分析方法,传统中药的发展在很大程上度受到了制约,在本研究中,一种新的以细胞为基础的分析方法一实时细胞电子分析技术将会被应用于传统中药的质量评价。这种新技术是通过实时、持续监测细胞阻抗来获得独特的时间/剂... 详细信息

目前由于缺少合适的分析方法,传统中药的发展在很大程上度受到了制约,在本研究中,一种新的以细胞为基础的分析方法一实时细胞电子分析技术将会被应用于传统中药的质量评价。这种新技术是通过实时、持续监测细胞阻抗来获得独特的时间/剂量依赖性细胞反应曲线(即TCRPs曲线)。研究中我们选择传统中药红花作为方法学例子,通过研究实时细胞电子分析技术在以红花为代表的活血化瘀类中药的质量评价中的应用来探索这种新技术在传统中药分析领域的潜在应用。首先我们探索利用实时细胞电子分析技术进行中药真伪鉴定,实验中先用实时细胞电子分析技术测出不同产地的红花样本作用于特定依赖性细胞后产生的TCRPs曲线,同时利用实时细胞电子分析仪自带的相似度评价系统对这些TCRPs曲线进行相似度分析,结果显示不同产地的红花样本能够产生相似度极高的TCRPs曲线。然后,我们探索利用实时细胞电子分析技术进行中药质量优劣的评价,实验中分别采用高效液相法和基于TCRPs曲线分析的方法对红花各样本进行了评价,结果显示两种方法在评价红花各样本质量优劣时得出的结果具有一致性。为了进一步验证这种方法的合理性和普适性我们还选用同为活血化疲类中药的水蛭、三七、丹参、桃仁进行了对照研究。鉴于上述研究我们认为每种中药作用于某种特定依赖性细胞后都可能产生独特的具有专属性的TCRPs曲线,这种以分析TCRPs曲线相似性为基础的方法可以用于中药真伪的鉴别。不仅如此,我们认为以某种中药的大量样本为基础,通过对各样本的TCRPs曲线进行分析,找出各样本呈线性的最佳浓度、最佳时间点所对应的细胞指数(CI),以细胞指数(CI)评价该样本的生物活性,最后再以生物活性作为指标去评价中药样本质量的优劣,这种新的质量评价模式可以直接反映出中药在实际应用中的临床疗效。

关键词：中药实时细胞电子分析技术时间/剂量依赖性细胞反应曲线质量评价

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基于细胞生物电传感效应的复方丹参滴丸连续动态溶出与吸收同步评价研究

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中国中药杂志 2022年第22期47卷 6090-6096页

作者：马丽霞赵乙萌周悦张佳袁曦张若琰董洁陈军严国俊南京中医药大学药学院江苏南京210023

采用实时细胞电子分析技术(real-time cell-based assay, RTCA),以大鼠心肌细胞(H9c2)建立复方丹参滴丸细胞生物电传感模型,测定其体外溶出与吸收的时间剂量依赖性细胞反应曲线(time/dose depended cell response profiles, TCRPs),以... 详细信息

采用实时细胞电子分析技术(real-time cell-based assay, RTCA),以大鼠心肌细胞(H9c2)建立复方丹参滴丸细胞生物电传感模型,测定其体外溶出与吸收的时间剂量依赖性细胞反应曲线(time/dose depended cell response profiles, TCRPs),以此建立连续动态溶出与吸收动力学模型。得到复方丹参滴丸的细胞指数(CI)溶出与吸收动力学曲线和动力学模型,溶出动力学最佳模型均为Weibull,溶出曲线相似因子f2大于50,吸收曲线相关系数大于0.95。同时以小鼠药效实验得到复方丹参滴丸小鼠尾出血药效时间百分率曲线,溶出、吸收及药效曲线均具有相关性(r>0.9)。结果表明RTCA技术用于中药复方固体制剂溶出与吸收动力学研究,突破了唯成分论的局限,用于评价中药复方制剂质量及批间一致性具有创新性和可行性,为中药复方制剂质量控制提供新的思路与方法。

关键词：复方丹参滴丸体外溶出度实时细胞电子分析技术溶出动力学模型吸收动力学模型整体动物药效

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实时细胞分析技术结合模式识别评价祖师麻注射液类过敏反应

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中国中药杂志 2020年第12期45卷 2865-2871页

作者：孙岩吴晨光韩群黄胜阳北京工业大学生命科学与生物工程学院环境与病毒肿瘤学北京市重点实验室北京100124

建立一种体外类过敏反应评价方法,快速评价不同厂家15批次祖师麻注射液的类过敏反应。采用体外嗜碱性白血病细胞株RBL-2H3细胞模型,选择Compound 48/80为阳性药,利用实时细胞分析(real-time cell analysis,RTCA)系统检测药物干预后引起... 详细信息

建立一种体外类过敏反应评价方法,快速评价不同厂家15批次祖师麻注射液的类过敏反应。采用体外嗜碱性白血病细胞株RBL-2H3细胞模型,选择Compound 48/80为阳性药,利用实时细胞分析(real-time cell analysis,RTCA)系统检测药物干预后引起的细胞指数(cell index,CI)变化,并利用甲苯胺蓝染色法观察细胞形态、骨架变化验证RBL-2H3细胞的脱颗粒情况。采用聚类方法对15批祖师麻注射液作用于RBL-2H3细胞后的CI进行分析。结果表明,Compound 48/80(20μg·mL-1)使细胞形态和细胞骨架均发生明显改变,发生明显的脱颗粒现象。CI在加药30 min内快速下降,之后下降趋势变缓,提示RTCA系统可以快速敏感地评价RBL-2H3细胞脱颗粒作用。15批祖师麻注射液对RBL-2H3细胞的CI结合聚类分析(CA),提示不同厂家的祖师麻注射液对RBL-2H3细胞影响不同,S1~S8与Compound 48/80组聚为一类,提示该样品可能潜在临床类过敏反应;S9~S15与空白对照组聚为一类,提示该样品无类过敏样反应。该研究建立了一套基于RTCA系统结合模式识别的类过敏反应体外快速评价技术,可用于中药注射剂类过敏反应的体外快速评价。

关键词：祖师麻注射液类过敏反应实时细胞电子分析技术聚类分析

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基于RTCA技术的复方丹参片体外溶出与一致性评价研究

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南京中医药大学学报 2021年第5期37卷 730-736页

作者：周悦马晓斐马丽霞张佳庄欣雅余亦婷张倩董洁陈军严国俊南京中医药大学药学院江苏南京210023

目的基于实时电子分析技术(Real-time cell-based assay,RTCA),探讨以细胞生物效应评价复方丹参片体外溶出度的可行性。方法依据大鼠心肌细胞(H9C2)对复方丹参片不同时间的溶出液呈现浓度梯度依赖,利用RTCA技术监测不同时间溶出药液的... 详细信息

目的基于实时电子分析技术(Real-time cell-based assay,RTCA),探讨以细胞生物效应评价复方丹参片体外溶出度的可行性。方法依据大鼠心肌细胞(H9C2)对复方丹参片不同时间的溶出液呈现浓度梯度依赖,利用RTCA技术监测不同时间溶出药液的细胞动态变化,建立一种以细胞指数(Cell index,CI)为指标的溶出动力学模型。同时计算溶出度,与传统紫外分光光度法测定的溶出曲线进行相关性与一致性评价,利用DDSolver软件进行相关性分析。结果以紫外分光光度法所得到的溶出曲线作为参比,3个不同厂家的复方丹参片溶出曲线差异因子f1均小于15,相似因子f2均大于50。并且2种评价方法下,同一厂家复方丹参片的溶出曲线最佳拟合模型均一致。结论基于RTCA细胞生物效应评价方法可以基本反映复方丹参片体外溶出度的特征。以细胞指数为指标的溶出度评价方法有望成为中药固体制剂体外溶出度新的检测手段。

关键词：复方丹参片体外溶出度实时细胞电子分析技术紫外分光光度法溶出动力学模型

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祖师麻注射液的质量评价研究

祖师麻注射液的质量评价研究

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作者：孙岩北京工业大学

学位级别：硕士

中药注射液的质量控制是中药现代化面临的核心问题之一。质量可控是中药注射剂安全有效的基础和保障,科学合理的质量标准是药品质量保证体系的重要组成部分。本论文以单味制剂祖师麻注射液为研究对象,将现代仪器分析与化学计量学相结合... 详细信息

中药注射液的质量控制是中药现代化面临的核心问题之一。质量可控是中药注射剂安全有效的基础和保障,科学合理的质量标准是药品质量保证体系的重要组成部分。本论文以单味制剂祖师麻注射液为研究对象,将现代仪器分析与化学计量学相结合,从化学和生物学角度建立一种综合的中药注射剂质量评价方法。本论文的主要研究内容如下:1、首先建立祖师麻注射液的HPLC指纹图谱和化学模式识别模型,为评价祖师麻注射液的质量一致性提供参考。采用Agilent C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相A（0.1%甲酸水）-B（乙腈）,梯度洗脱0～10 min 95%～90%（A）;10～28 min,90%～87%（A）;28～40 min,87%～86%（A）;40～50 min,86%～70%（A）;50～55 min,70%～60%（A）;流速1.0 m L·min-1;检测波长0～30 min,300 nm;30～35 min,254 nm;35～55 min,300 nm;柱温30℃;进样体积10μL。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2012版）考察15批祖师麻注射液的相似度,结合主成分分析（principal component analysis,PCA）、聚类分析（cluster analysis,CA）以及正交偏最小二乘判别分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA）对祖师麻注射液进行整体质量评价。结果显示,祖师麻注射液的HPLC指纹图谱中15批样品相似度在0.882～0.998,通过PCA、CA、OPLS-DA分析,15批样品聚成3类,S1～S8来自同一厂家,聚为2类;S9～S14来自同一厂家聚为1类,并从12个共有峰中确定4个共有峰为祖师麻注射液质量标志物（Q-marker）,分别为5、8、7（祖师麻甲素）、1号峰。建议厂家在生产过程中对这4个标志物进行重点关注。本研究同时对其高温组样品、光照组样品、暴露组样品分别进行了化学指纹图谱检测,对四组祖师麻注射液进行聚类分析,可知暴露对样品稳定性的影响较大。建议在运输和贮藏过程中保持药品的密封性,使用前现用现配。该方法简便,重现性好,可快速评定不同厂家不同批次祖师麻注射液的稳定性和一致性,适用于对祖师麻注射液整体质量的评价。2、建立一种新的体外类过敏反应检测模型,快速评价不同厂家不同批次祖师麻注射液的临床前安全性。选择嗜碱性白血病细胞株RBL-2H3细胞作为体外检测类过敏反应的细胞模型,选择Compound 48/80作为阳性致敏药物,同时利用甲苯胺蓝染色法观察Compound 48/80作用细胞后形态、骨架的变化,验证RBL-2H3细胞的脱颗粒情况。并采用CCK-8法测定RBL-2H3细胞的合适接种密度和祖师麻注射液的细胞毒性。利用实时细胞分析（real-time cell analysis,RTCA）系统检测药物干预后引起的细胞指数（cell index,CI）值变化,得到药物对应的细胞指纹图谱。同时采用聚类方法（CA）对15批祖师麻注射液对应的细胞指纹图谱进行统计分析。本研究同时对不产生类过敏样反应的样品（S9～S15）对其进行高温、光照、暴露处理,对其分别进行细胞指纹图谱检测和聚类分析。结果显示,CCK-8法测定RBL-2H3细胞的合适接种密度为1.0×10～5/m L;CCK-8法确定祖师麻注射液合适的给药浓度为5:95（药物体积:培养基体积）;Compound 48/80（20μg/m L）使细胞形态和细胞骨架均发生明显改变,发生明显的脱颗粒现象,且在细胞指纹图谱中呈现30 min内快速下降,之后下降趋势变缓,与空白对照形成鲜明的对比,提示RTCA系统可以快速敏感的评价RBL-2H3细胞脱颗粒作用。15批祖师麻注射液的细胞指纹图谱结合聚类分析（CA）,结果发现不同厂家的祖师麻注射液对RBL-2H3细胞影响不同,S1～S8与Compound48/80组聚为一类,提示该样品可能潜在临床类过敏反应;S9～S15与空白对照组聚为一类,提示该样品无类过敏样反应。从高温组样品、光照组样品、暴露组样品的检测结果中可知暴露组对样品安全性的影响较大,产生了较明显的类过敏反应趋势,这与化学指纹图谱检测结果一致。本研究建立了一套基于RTCA系统结合模式识别的类过敏反应体外快速评价技术,可用于中药注射剂类过敏反应的体外快速评价。

关键词：祖师麻注射液质量评价高效液相指纹图谱类过敏反应实时细胞电子分析技术模式识别

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基于细胞生物电传感效应的复方丹参片溶出动力学研究

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中草药 2019年第17期50卷 4131-4137页

作者：马晓斐王建春潘金火谢辉陈军张倩韩星星严国俊南京中医药大学药学院江苏南京210023 张家港市中医医院江苏省企业研究生工作站江苏张家港215600

目的建立复方丹参片的细胞生物电传感效应模型,以此进行复方丹参片的溶出动力学研究。方法以实时细胞电子分析技术(real-time cell-based assay,RTCA)为手段,测定复方丹参片的体外溶出度,建立溶出动力学模型,并与紫外分光光度法进行比... 详细信息

目的建立复方丹参片的细胞生物电传感效应模型,以此进行复方丹参片的溶出动力学研究。方法以实时细胞电子分析技术(real-time cell-based assay,RTCA)为手段,测定复方丹参片的体外溶出度,建立溶出动力学模型,并与紫外分光光度法进行比较验证。结果 CCK-8实验和RTCA实验联合筛选出对复方丹参片有特定依赖性的细胞株,建立基于RTCA技术的复方丹参片溶出动力学模型,得到最佳拟合模型Weibull模型ln{ln[1/(1-Q)]}=1.071 4 lnt-3.736 7;建立基于紫外分光光度法的复方丹参片溶出动力学模型,得到最佳拟合模型Weibull模型ln{ln[1/(1-Q)]}=1.0804lnt-3.7234;两者的Weibull模型比较,RTCA拟合的模型效果更佳。结论 RTCA技术应用于中药复方固体制剂溶出动力学研究,具有可行性,并为中药及中药复方质量评价提供了新思路。

关键词：复方丹参片体外溶出度实时细胞电子分析技术溶出动力学模型 CCK-8实验 Weibull模型

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