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分子植物育种 2019年第3期17卷 789-795页

作者：吴晓刚陈佩珍韦蔷武星季孔庶南京林业大学南方现代林业协同创新中心林木遗传与生物技术省部共建教育部重点试验室南京210037

在木质素生物合成里,咖啡酸-O-甲基转移酶(caffeic acid-O-methyltransferase, COMT)起重要作用。本论文以马尾松幼苗作为材料,并通过PCR技术以及RACE技术从马尾松材料中克隆出Pm COMT基因的cDNA全长。该cDNA全长为1660bp,其中预测完整... 详细信息

在木质素生物合成里,咖啡酸-O-甲基转移酶(caffeic acid-O-methyltransferase, COMT)起重要作用。本论文以马尾松幼苗作为材料,并通过PCR技术以及RACE技术从马尾松材料中克隆出Pm COMT基因的cDNA全长。该cDNA全长为1660bp,其中预测完整ORF全长为1125bp,可编码374个氨基酸的蛋白。蛋白相对分子质量为41.81 kD;等电点(pI)为5.03,总平均亲水性为-0.311。通过生物信息学的方法对其进行分析表明,Pm COMT基因具有典型的甲基转移酶的保守结构域。通过实时荧光定量表达分析表明,COMT基因在马尾松的不同组织均有表达,其中在新梢中的表达量最高,树皮中表达量最低。

关键词：马尾松咖啡酸-O-甲基转移酶基因克隆实时荧光定量表达分析

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马尾松PmCOMT基因的克隆及实时定量表达分析

马尾松PmCOMT基因的克隆及实时定量表达分析

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江苏省遗传学会2017年学术研讨会

作者：吴晓刚陈佩珍韦蔷武星季孔庶南京林业大学江苏南京 210037

马尾松具有良好的纤维结构,在我国常作为制作高级纸张的纸浆材.在造纸产业中,木质素在生产过程中难以去除,产生大量废液,废液中的主要污染物就是木质素,木质素对生产出的纸张质量有很大影响.因此,了解马尾松木质素的生物合成途径有助于... 详细信息

马尾松具有良好的纤维结构,在我国常作为制作高级纸张的纸浆材.在造纸产业中,木质素在生产过程中难以去除,产生大量废液,废液中的主要污染物就是木质素,木质素对生产出的纸张质量有很大影响.因此,了解马尾松木质素的生物合成途径有助于生产更好的纸浆材,同时减少对环境的污染.在植物的木质素生物合成过程中,咖啡酸-O-甲基转移酶(caffeic acid-O-methyltransferase,COMT)主要参与其特异性合成途径.目前国内关于马尾松木质素生物合成途径中的PmCOMT 基因的克隆未见报道.本论文以南京林业大学树木园中10 年生马尾松作为材料,利用NCBI 中拟南芥COMT 基因序列与本实验室转录组数据库进行比对,筛选出PmCOMT 基因,并通过PCR 技术以及RACE 技术从马尾松材料中克隆出PmCOMT 基因的cDNA 全长.该cDNA 全长为1660bp,其中预测完整ORF 全长为1125bp,可编码374 个氨基酸的蛋白.蛋白相对分子质量为41.81kD;等电点(pI)为5.03,总平均亲水性为-0.311.通过生物信息学的方法对其进行分析,PmCOMT 基因具有典型的甲基转移酶的保守结构域,在PmCOMT 的N 端含有二聚结构,用于调节蛋白的二聚体结构.通过实时荧光定量表达分析表明,COMT 基因在马尾松不同时期的不同组织中均有表达,其中在新梢中的表达量最高,树皮中表达量最低.研究表明,PmCOMT 很有可能参与马尾松幼嫩组织的木质素生物合成.

关键词：马尾松咖啡酸-O-甲基转移酶基因克隆实时荧光定量表达分析

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马尾松PmCOMT基因的克隆及实时定量表达分析

马尾松PmCOMT基因的克隆及实时定量表达分析

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江苏省遗传学会2017年学术研讨会——“技术创新与遗传学发展”

作者：吴晓刚陈佩珍韦蔷武星季孔庶南京林业大学

马尾松具有良好的纤维结构,在我国常作为制作高级纸张的纸浆材。在造纸产业中,木质素在生产过程中难以去除,产生大量废液,废液中的主要污染物就是木质素,木质素对生产出的纸张质量有很大影响。因此,了解马尾松木质素的生物合成途径有助... 详细信息

马尾松具有良好的纤维结构,在我国常作为制作高级纸张的纸浆材。在造纸产业中,木质素在生产过程中难以去除,产生大量废液,废液中的主要污染物就是木质素,木质素对生产出的纸张质量有很大影响。因此,了解马尾松木质素的生物合成途径有助于生产更好的纸浆材,同时减少对环境的污染。在植物的木质素生物合成过程中,咖啡酸-O-甲基转移酶(caffeicacid-O-methyltransferase,COMT)主要参与其特异性合成途径。目前国内关于马尾松木质素生物合成途径中的PmCOMT基因的克隆未见报道。本论文以南京林业大学树木园中10年生马尾松作为材料,利用NCBI中拟南芥COMT基因序列与本实验室转录组数据库进行比对,筛选出PmCOMT基因,并通过PCR技术以及RACE技术从马尾松材料中克隆出PmCOMT基因的c DNA全长。该c DNA全长为1660bp,其中预测完整ORF全长为1125bp,可编码374个氨基酸的蛋白。蛋白相对分子质量为41.81kD;等电点(pI)为5.03,总平均亲水性为-0.311。通过生物信息学的方法对其进行分析,PmCOMT基因具有典型的甲基转移酶的保守结构域,在PmCOMT的N端含有二聚结构,用于调节蛋白的二聚体结构。通过实时荧光定量表达分析表明,COMT基因在马尾松不同时期的不同组织中均有表达,其中在新梢中的表达量最高,树皮中表达量最低。研究表明,PmCOMT很有可能参与马尾松幼嫩组织的木质素生物合成。

关键词：马尾松咖啡酸-O-甲基转移酶基因克隆实时荧光定量表达分析

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紫心大白菜花青素积累特性及相关基因表达分析

紫心大白菜花青素积累特性及相关基因表达分析

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作者：段岩娇西北农林科技大学

学位级别：硕士

本研究以西北农林科技大学园艺学院大白菜课题组选育的紫心大白菜及其同源普通大白菜的叶片为试验材料，利用徒手切片技术、pH差计法、实时荧光定量RT-PCR技术及液相色谱-质谱联用技术，分别观察了紫心大白菜花青素在叶片中的分布特征... 详细信息

本研究以西北农林科技大学园艺学院大白菜课题组选育的紫心大白菜及其同源普通大白菜的叶片为试验材料，利用徒手切片技术、pH差计法、实时荧光定量RT-PCR技术及液相色谱-质谱联用技术，分别观察了紫心大白菜花青素在叶片中的分布特征、测定了紫心大白菜叶片中花青素的总含量、比较了紫心大白菜与普通大白菜叶片中花青素合成途径的关键酶基因及其转录调控因子的表达特点，检测了紫心大白菜叶片中花青素提取液的成分，结果如下： 1.光学显微镜下观察叶片横切面的徒手切片，发现紫心大白菜花青素不均匀分布于叶片中，尤以表皮及临近表皮的叶肉细胞内最为丰富。 2.紫心大白菜株系11S90、11S91和11S96的叶片中花青素总含量变化趋势相同，均由内叶向外叶递减，其中最内层叶片P01中总含量最高，分别为0.69mg·g-1·FW、0.73mg·g-1·FW和0.80mg·g-1·FW，对照的叶片混合样中花青素总含量为0.01mg·g-1· FW。 3.对花青素生物合成的11个关键酶基因PAL、CHS、CHI、F3H、F3’H、F3’5’H、DFR、ANS、UFGT、GST、LDOX及6个转录调控因子MYB0、MYB1、MYB2、MYB4、MYB12、MYB111进行荧光定量RT-PCR分析，结果表明，紫心大白菜3个株系叶片的花青素积累过程中除PAL对该过程影响不大外，其余10关键酶基因均不同程度的上调表达，尤其是下游关键酶基因DFR和ANS超高量上调，推测这两个酶基因可能在决定紫心大白菜花青素的积累过程中起主要作用。此外，6个调控基因均对结构基因有一定的调节作用，但不同株系中起主要作用的调控基因各不相同。其中，11S90中的关键调节因子为MYB1和MYB4，11S91中为MYB1和MYB2，11S96中为MYB2和MYB4。 4. HPLC-MS分析表明，紫心大白菜叶片中花青素物质的组分相当复杂，其中11S90中至少有56种不同花青素类物质，P01、P05、P09、P13和P17中分别有4种、4种、10种、17种和10种特有成分，各叶片交叉含有21种共有成分；11S91中至少有74中不同花青素类物质，P01、P05、P09、P13和P17中分别有15种、12种、11种、9种和11种特有成分，各叶片交叉含有16种共有成分，推测这些物质可能为花青素合成、修饰及运输等不同途径的产物。

关键词：紫心大白菜花青素分布特征实时荧光定量表达分析 HPLC-MS分析

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