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T=题名（书名、题名），A=作者（责任者），K=主题词，P=出版物名称，PU=出版社名称，O=机构（作者单位、学位授予单位、专利申请人），L=中图分类号，C=学科分类号，U=全部字段，Y=年（出版发行年、学位年度、标准发布年）

检索规则说明：

AND代表“并且”；OR代表“或者”；NOT代表“不包含”；(注意必须大写,运算符两边需空一格)

检索范例：

范例一：(K=图书馆学 OR K=情报学) AND A=范并思 AND Y=1982-2016
范例二：P=计算机应用与软件 AND (U=C++ OR U=Basic) NOT K=Visual AND Y=2011-2016

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3 篇 学位论文

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作者

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1 篇 王建跃
1 篇 牟海霞
1 篇 张澍
1 篇 提盼盼
1 篇 陈斌
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1 篇 刘洪涛
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1 篇 施杞

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15 篇 中文

检索条件"主题词=实时荧光定量 PCR"

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排序：

实时荧光定量pcr快速检测对虾IHHNV载量方法的建立和应用

实时荧光定量PCR快速检测对虾IHHNV载量方法的建立和应用

引用

2007年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术年会

作者：王忠发王建跃卢亦愚何伟贤王学海浙江省舟山市疾病预防控制中心浙江省舟山市疾病预防控制中心浙江省疾病预防控制中心浙江省舟山市疾病预防控制中心浙江大学医学院病原生物研究所

目的：建立一种快速、定量、特异、灵敏的 pcr 方法用于对虾皮下造血组织坏死病毒(IHHNV)的早期诊断和疫情监测。方法：根据 GenBank 登录的 IHHNV 毒株序列,使用生物学软件进行序列比对,在 IHHNV 保守区序列设计特异性引物与 Taqman ... 详细信息

目的：建立一种快速、定量、特异、灵敏的 pcr 方法用于对虾皮下造血组织坏死病毒(IHHNV)的早期诊断和疫情监测。方法：根据 GenBank 登录的 IHHNV 毒株序列,使用生物学软件进行序列比对,在 IHHNV 保守区序列设计特异性引物与 Taqman 探针。对实时荧光定量 pcr 反应条件进行优化以缩短检测时间、提高特异性、灵敏度、重复性、并与普通 pcr 进行盲样测试的比对。结果：本法线性范围5×10～2～5×10～4拷贝/ml,检出限5×10～1拷贝/ml,灵敏度超过普通 pcr100 倍,特异性高于普通 pcr,重复性极好(S=0．035～0．39 CV=0．13%～1．05%),检测时间为普通 pcr 的1/5,现场盲样 IHHNV 检出阳性率高于普通 pcr26．00%。结论：本研究建立 Taqman 实时荧光定量 pcr 用于对虾 IHHNV 检测具有特异、灵敏、快速、定量、重复性好等优点。

关键词：实时荧光定量 pcr IHHNV 病毒载量

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壳寡糖诱导烟草PR-1a基因表达的实时荧光定量检测

壳寡糖诱导烟草PR-1a基因表达的实时荧光定量检测

引用

中国植物病理学会2008年学术年会

作者：商文静吴云锋赵小明杜昱光商鸿生中国科学院大连化学物理研究所

壳寡糖(chito-oligosaccharides)是一类氨基葡萄糖通过β-1,4键成苷而形成的2～10个单元的低聚糖。已有的研究表明壳寡糖具有多种生物活性,包括调解植物生理功能,激活动物免疫系统等, 包括能够抑制植物病原真菌和细菌的生长,诱导植物产... 详细信息

壳寡糖(chito-oligosaccharides)是一类氨基葡萄糖通过β-1,4键成苷而形成的2～10个单元的低聚糖。已有的研究表明壳寡糖具有多种生物活性,包括调解植物生理功能,激活动物免疫系统等, 包括能够抑制植物病原真菌和细菌的生长,诱导植物产生对病原真菌和细菌的系统诱导抗病性。前期研究结果表明壳寡糖诱导的植物系统抗病性对抑制植物病毒亦有很好的效果。本研究拟以烟草和 TMV 为互作体系,采用实时荧光定量 pcr(real-time quantitative pcr,Qpcr)方法,研究壳寡糖诱导对烟草体内 PR-1a 基因在 mRNA 水平上的表达量的影响,从而揭示壳寡糖诱导的系统获得抗病性的机制。结果表明,烟草叶片中 PR-1a 基因的表达量显著增加,在接种0h 后处理和不诱导对照叶片中 PR-1a 的起始拷贝数没有显著差异。接种72h 后不诱导对照的拷贝数为1255.367,较接种0h 后增加了128.9%,而此时壳寡糖诱导处理叶片中 PR-1a 的拷贝数达到2469.600,较接种0h 后增加了392.6 %,其增加量是同期不诱导对照的3.05倍。同时壳寡糖诱导后烟草表达了对 TMV 侵染的系统抗病性, 植株显症推迟4～7天,症状减轻,平均严重度比对照降低了82.9%。以上结果表明壳寡糖诱导了烟草 PR-1a 的强烈表达,PR-1a 的表达是壳寡糖诱导产生的系统获得抗病性(Systemic Acquired Resistance, SAR)的原因之一。因此,可以推测壳寡糖诱导了烟草 PR-1a 蛋白的产生和积累,PR-1a 的表达是壳寡糖诱导烟草 SAR 产生的生化机制之一。PR-1a 是 SAR 的标志基因,而 SAR 的另一特点就是伴随着过敏性坏死反应的氧化进发,以及防御酶系广泛而系统的变化;壳寡糖诱导烟草对 TMV 的系统抗病性在生化机制上的表达特点表明该系统诱导抗病性为 SAR 的一种类型,对壳寡糖诱导的 SAR 的其他机制我们将做进一步的研究。

关键词：壳寡糖系统获得抗病性 PR-1a 基因实时荧光定量 pcr

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Wnt2信号通路在胰腺癌转移及侵袭中的作用

Wnt2信号通路在胰腺癌转移及侵袭中的作用

引用

作者：徐勇天津医科大学

学位级别：博士

目的观察Wnt2蛋白在胰腺癌组织中的表达状况及其对胰腺癌细胞增殖迁移侵袭等生物学行为的影响;初步探讨Wnt2蛋白影响侵袭转移的途径;探讨Wnt2蛋白在胰腺癌星形细胞对胰腺癌细胞影响过程中发挥的作用。方法1.胰腺癌组织病理Wnt2蛋白免疫... 详细信息

目的观察Wnt2蛋白在胰腺癌组织中的表达状况及其对胰腺癌细胞增殖迁移侵袭等生物学行为的影响;初步探讨Wnt2蛋白影响侵袭转移的途径;探讨Wnt2蛋白在胰腺癌星形细胞对胰腺癌细胞影响过程中发挥的作用。方法1.胰腺癌组织病理Wnt2蛋白免疫组化染色,分析Wnt2蛋白在胰腺癌肿瘤组织与癌旁组织中表达的差异;并结合临床病理参数分析Wnt2与临床病理参数之间的关系;对病例资料进行随访观察,根据不同Wnt2蛋白表达状况作生存分析。2.构建Wnt2过表达质粒和干扰RNA、应用Wnt2重组蛋白,观察不同Wnt2蛋白表达水平的胰腺癌细胞株的生物学行为。3.利用荧光实时定量pcr技术和Western Blot方法检测Wnt2重组蛋白培养及干扰与过表达Wnt2后胰腺癌细胞EMT关键基因的m RNA和蛋白水平的表达;4.检测Wnt2蛋白在胰腺癌星形细胞及其上清中的表达情况,检测星形细胞培养上清对胰腺癌细胞功能的影响。结果1.通过对86例胰腺癌组织病理切片的Wnt2蛋白免疫组化染色发现,55例(63.5%)病理切片中胰腺癌细胞Wnt2蛋白表达阳性;77例(89.5%)间质细胞Wnt2表达阳性;Logistic回归分析显示:胰腺癌间质细胞Wnt2蛋白表达与生存时间及无病生存期(DFS)相关(P=0.002、P=0.007),生存分析显示免疫组化间质细胞染色评分大于10分的患者生存期与评分小于10分的患者相比有显著性差异(P=0.019)。2.生物学行为观察结果显示:与对照组相比,胰腺癌细胞株过表达组、应用Wnt2重组蛋白组胰腺癌细胞增殖速度均加快(P<0.05);而干扰组的细胞增殖速度受抑制(P<0.05);应用Wnt2重组蛋白组胰腺癌细胞迁移(P<0.05)及侵袭能力增强(P<0.05)。3.胰腺癌细胞EMT关键基因的m RNA的表达结果:RT-pcr结果显示Wnt2重组蛋白培养CFPAC-1和PANC-1细胞6小时后,Wnt2重组蛋白培养组的Vimentin基因相对表达量分别是对照组的2.06倍(P<0.05)和1.96倍(P<0.05);E-cadherin基因相对表达量分别是对照组的0.47倍(P>0.05)及0.33倍(P<0.05);PANC-1细胞干扰及过表达组Vimentin、E-Cadherin基因相对表达量与对照组之间无显著性差异。胰腺癌细胞EMT关键基因的蛋白表达水平:Western Blot结果显示CFPAC-1和PANC-1细胞经Wnt2重组蛋白培养6小时后,Vimentin蛋白表达水平增加;E-cadherin只在Wnt2重组蛋白培养的CFPAC-1细胞中表达水平降低。PANC-1细胞干扰Wnt2组,Vimentin蛋白表达水平较对照组降低,E-cadherin蛋白表达水平升高;PANC-1细胞过表达Wnt2组,E-Cadherin、Vimentin蛋白表达水平均降低。4.激活的星形细胞及其培养液中可见Wnt2蛋白,星形细胞培养液培养胰腺癌细胞增殖速度加快(P<0.05);细胞迁移(P<0.05)及侵袭能力增强(P<0.05);细胞核内β-catenin增多。结论***2蛋白在胰腺癌间质细胞表达阳性与预后相关;患者间质染色评分越高,生存期越短。***-1和CFPAC-1胰腺癌细胞株过表达Wnt2、Wnt2重组蛋白培养均能使细胞增殖能力增加;反之,降低Wnt2的表达则会抑制细胞增殖;Wnt2重组蛋白培养可增强胰腺癌细胞迁移和侵袭能力;但干扰及过表达Wnt2对细胞的迁移和侵袭能力却没有影响。***2重组蛋白引起了Vimentin蛋白和mRNA表达水平的上调,E-cadherin蛋白和m RNA表达水平的下调,显示Wnt2蛋白可诱导了细胞发生EMT,从而使细胞侵袭迁移能力增加。4.胰腺癌星形细胞及培养基中Wnt2表达阳性,胰腺癌细胞经星形细胞培养基培养后,经典的Wnt信号通路被激活,细胞的增殖及迁徙及侵袭能力增强。

关键词： Wnt2 胰腺导管腺癌 Wnt/β-catenin 通路细胞转染实时荧光定量 pcr 上皮细胞向间质细胞转变

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Akkermansia muciniphila益生元的体外筛选及体内作用效果评价

Akkermansia muciniphila益生元的体外筛选及体内作用效果评价

引用

作者：提盼盼天津科技大学

学位级别：硕士

肥胖症是由遗传、脂代谢紊乱、饮食习惯不当等因素引起的一类代谢性疾病。随着人们生活节奏的加快,肥胖症人群的数目逐年增加,已成为威胁人类健康不可忽视的隐形杀手。许多研究证实,人类肠道中的一种细菌—Akkermansiamuciniphila,其在... 详细信息

肥胖症是由遗传、脂代谢紊乱、饮食习惯不当等因素引起的一类代谢性疾病。随着人们生活节奏的加快,肥胖症人群的数目逐年增加,已成为威胁人类健康不可忽视的隐形杀手。许多研究证实,人类肠道中的一种细菌—Akkermansiamuciniphila,其在肠道内的丰度与宿主肥胖症的发生呈显著负相关。本研究通过27种益生元的体外添加实验,筛选出对Akkermansiamuciniphila生长刺激效果最好的益生元或其组合。构建肥胖小鼠模型,将所筛益生元进行小鼠灌胃实验,观测小鼠的体重、空腹血糖、血脂水平,同时用实时荧光定量pcr(RT-pcr)检测肠道中Akkermansiamuciniphila丰度的变化,探究益生元、Akkermansiamuciniphila,肥胖三者之间的关系,为运用益生元提高Akkermansia mucinipila的丰度,进而改善肥胖症提供了理论依据。以27种益生元为基础,测定Akkermansia muciniphila的菌液OD 600 nm值,绘制细菌的生长曲线,挑选出乳果糖、低聚半乳糖和酶解鸡蛋清对Akkermansia muciniphila生长刺激较好。以初筛的3种益生元为基础,进行正交试验和两因素组合试验,筛选出乳果糖0.5%和酶解鸡蛋清3%组合对Akkermansia muciniphila生长刺激效果最好。高脂饲料饲喂小鼠8周,以获得小鼠肥胖模型,在8周小鼠催肥的同时设立灌胃益生元的预防组,结果表明益生元灌胃组对小鼠体重的增长具有一定的抑制作用,同时抑制小鼠体内Akkermansiamuciniphila丰度的降低,并抑制了总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)水平的升高,降低了总甘油三酯(TG)水平。得到肥胖小鼠模型后,进行益生元灌胃试验,以观测益生元对肥胖小鼠的减重作用,结果表明,益生元能够加快肥胖小鼠体重的降低速率,同时提高了小鼠体内Akkermansia muciniphila的丰度,降低了 TC、TG、LDL的水平。说明益生元对预防和治疗肥胖以及提高肠道中Akkermansiamucciniphila的丰度具有重要的作用。干酪乳杆菌SY13在肠道中具有较强的抗氧化性,可能对厌氧菌Akkermansia muciniphila的生长具有积极作用。将SY13及其与乳果糖、低聚果糖组成的合生元进行小鼠灌胃试验,以观测合生元对小鼠肠道中Akkermansia muciniphila丰度的影响。结果表明,SY13及其合生元对提高Akkermansia muciniphila的丰度具有促进作用,尤其以SY13乳果糖组合的效果最佳。

关键词： Akkermansia muciniphila 益生元实时荧光定量 pcr

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Real-time pcr检测弓形虫方法学的建立及初步应用

Real-time PCR检测弓形虫方法学的建立及初步应用

引用

作者：王频佳重庆医科大学

学位级别：硕士

目的: 弓形虫病(Toxoplasmosis)是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,Tox)引起的一种重要的机会感染性寄生虫病。由于该疾病对人类特别是孕妇和胎儿具有严重的危害性,因此对弓形虫的检测已成为产前诊断常规项目之一。本课题研究的目的就... 详细信息

目的: 弓形虫病(Toxoplasmosis)是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,Tox)引起的一种重要的机会感染性寄生虫病。由于该疾病对人类特别是孕妇和胎儿具有严重的危害性,因此对弓形虫的检测已成为产前诊断常规项目之一。本课题研究的目的就是建立实时荧光定量 pcr 检测弓形虫的方法,并将此方法应用于临床标本的检测,以期为弓形虫的早期诊断和治疗疗效的监测提供可靠的实验室依据。方法: 1. 根据弓形虫RH株529bp重复片断段,设计并合成引物和TaqMan-MGB探针;将 pcr 扩增的特异片段克隆入 T 载体,并转化入大肠杆菌DH5α 中。 2. 重组质粒经筛选、鉴定后,作为阳性模板用于 Real-time pcr 的建立,包括 pcr 反应条件的优化,标准曲线的制备以及敏感性、特异性、重复性的方法学评价。 3. 将建立的 Real-time pcr 用于临床妇女血液标本弓形虫的检测,其结果与巢式 pcr 和 ELISA 的结果相比较。结果: 1. 确立了 Real-time pcr 最佳反应条件:MgCl2 1.5mmol/L、引物 0.5 mol/L、探针 1.0mmol/L,退火温度 60℃。 2. 应用定量阳性重组质粒制作的标准曲线其循环阈值与起始模板拷贝数的对数值之间具有良好的线形关系,相关系数大于 99%,试验内和试验间变异系数均小于 5%,无非特异性扩增,与普通 pcr 相

关键词：实时荧光定量 pcr 弓形虫检测

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异基因外周血干细胞移植后巨细胞病毒感染的早期检测及临床意义

异基因外周血干细胞移植后巨细胞病毒感染的早期检测及临床意义

引用

第11次中国实验血液学会议

作者：牟海霞马劼赖永榕邓东红罗琳杨杰广西医科大学第一附属医院血液内科广西医科大学第一附属医院血液内科广西医科大学第一附属医院血液内科广西医科大学第一附属医院血液内科广西医科大学第一附属医院血液内科广西医科大学第一附属医院血液内科

目的：确立一种快速而有效的巨细胞病毒 (CMV)早期检测方法用于异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)受者,并用以指导临床 CMV 活动性感染的早期诊断与治疗。

关键词：巨细胞病毒异基因外周血干细胞移植 pp65抗原实时荧光定量 pcr 移植物抗宿主病

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肌肉注射不同剂量鸭α-干扰素基因疫苗免疫鸭抗鸭瘟强毒人工感染的研究

肌肉注射不同剂量鸭α-干扰素基因疫苗免疫鸭抗鸭瘟强毒人工感染...

引用

第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛

作者：周雪程安春汪铭书杨梅段坤四川农业大学动物医学学院禽病防治研究中心动物疫病与人类健康四川省重点实验室

将本实验室构建的鸭α-干扰素基因疫苗（pcDNA-SDIFN-α）分别按每只50、100、200 μg 3个剂量肌肉注射免疫北京鸭,以 PBS、空载体质粒 pcDINA3.1（+）和鸭瘟弱毒疫苗为对照,免疫15 d 后分经皮下、滴鼻、口服三个途径人工感染0.5 LD鸭... 详细信息

将本实验室构建的鸭α-干扰素基因疫苗（pcDNA-SDIFN-α）分别按每只50、100、200 μg 3个剂量肌肉注射免疫北京鸭,以 PBS、空载体质粒 pcDINA3.1（+）和鸭瘟弱毒疫苗为对照,免疫15 d 后分经皮下、滴鼻、口服三个途径人工感染0.5 LD鸭瘟强毒（含病毒 DNA 拷贝数为3.524×10～4）, 统计发病死亡情况,于攻毒后2h、6h、12h、24h、3d、6d、9d、14d、22d、26d、33d 和40d 采全血,同时取死亡鸭的各组织器官,采用实时荧光定量 pcr 对鸭瘟病毒在鸭外周血中的动态变化和在各组织器官中的分布及含量进行检测。结果①三个剂量 pcDNA-SDIFN-α和鸭瘟弱毒疫苗都对鸭产生良好保护作用,免疫鸭未发生死亡;而 PBS 和空载体对照组3只鸭中有1只鸭死亡,死亡鸭心、肝、脾、肾、胰和各段肠管中均检测到鸭瘟病毒 DNA 且其含量大于 pCDNA-sDIFN-α免疫鸭外周血病毒 DNA 含量。②pcDNA-SDIFN-α肌肉注射免疫组鸭外周血鸭瘟病毒 DNA 含量比 PBS 和空载体对照组低,差异显著（P<0.05）,在24h 前都低于弱毒疫苗免疫组,差异不显著（P>0.05）,攻毒初期（2h）, 200μg免疫鸭外周血鸭瘟病毒 DNA 含量最低,1000μg次之,50μg最高。三个剂量 pcDNA-SDIFN-α肌肉注射免疫鸭全部存活,PBS 和空载体免疫组分别有13/27和10,27只死亡。病死鸭的脾脏、十二指肠、空肠、盲肠和直肠是鸭瘟病毒 DNA 含量较高的组织器官。研究表明,pcDNA-SDIFN-α肌肉注射免疫鸭后能产生一定的抗鸭瘟强毒感染的作用,并在攻毒初期表现出一定的量效关系。

关键词：鸭α-干扰素基因疫苗实时荧光定量 pcr 抗鸭瘟感染

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用mRNA差异显示方法筛选HIV-1/HCV-1合并感染者差异表达基因

用mRNA差异显示方法筛选HIV-1/HCV-1合并感染者差异表达基因

引用

第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：赵锦赵广录周克恒李江鹏王晓辉冯铁建深圳市疾病预防控制中心

目的建立 mRNA 差异显示技术平台,寻找 HIV-1/HCV-1合并感染者差异表达基因。方法分离正常人、HIV 感染者、HCV 感染者及 HIV/HCV 合并感染者外周血单核细胞,提取 RNA,定量后利用锚定引物进行逆转录合成 cDNA,然后

关键词： HIV-1/HCV-1合并感染 mRNA 差异显示实时荧光定量 pcr

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FQ-pcr检测肠炎沙门氏菌实验感染雏鸭肠道内优势菌属的动力学

FQ-PCR检测肠炎沙门氏菌实验感染雏鸭肠道内优势菌属的动力学

引用

第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛

作者：尹念春程安春汪铭书曹省艳邓树轩曹平张振华颜彬朱德康罗启慧陈孝跃四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心

[目的]为了研究肠炎沙门氏菌(SE)感染雏鸭后对肠道内优势菌属的数量影响,以及进一步的探讨肠炎沙门氏菌的致病机理提供依据。[方法]本研究运用基于16SrDNA 基因序列设计的属特异性引物和探针,对 SE 感染雏鸭后每1cm 十二指肠、空肠、回... 详细信息

[目的]为了研究肠炎沙门氏菌(SE)感染雏鸭后对肠道内优势菌属的数量影响,以及进一步的探讨肠炎沙门氏菌的致病机理提供依据。[方法]本研究运用基于16SrDNA 基因序列设计的属特异性引物和探针,对 SE 感染雏鸭后每1cm 十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠内乳酸杆菌属,双歧杆菌属, 埃希氏菌属和芽胞杆菌属进行定量检测.[结果]优势菌属在健康雏鸭肠道内相对稳定,与其他肠段相比,盲肠内具有较多的细菌数量.健康鸭与 SE 感染鸭相比,在感染后12-72h 乳酸杆菌、双歧杆菌和芽胞杆菌数量减少,埃希氏菌属的数量增加,并在感染后48h 出现增长的峰值(P<0.05);其他3个菌的数量分别在感染后36-48h 减少至最低.随着临床感染鸭的逐渐康复,乳酸杆菌、双歧杆菌和芽胞杆菌数量出现回升。[结论]本研究运用实时荧光定量 pcr 检测 SE 感染雏鸭肠道内优势菌群显示,SE 感染破坏了肠道内微生物生态系统的平衡,并且这种不平衡的微生态系统可能与肠道炎症相关。

关键词：肠炎沙门氏菌雏鸭实时荧光定量 pcr 肠道乳酸杆菌双歧杆菌埃希氏菌芽孢杆菌

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Klotho基因在骨质疏松大鼠模型中的表达

Klotho基因在骨质疏松大鼠模型中的表达

引用

2008年上海市动物学会学术会议

作者：顾怡然章蓉竺淑佳张冬丽陈逸群孙丽娟梅兵华东师范大学脑功能基因组学研究所

研究了卵巢摘除致雌性大鼠骨质疏松过程中 Klotho 基因表达的变化,探讨雌激素缺失引起骨质疏松发生的可能分子机制.摘除卵巢并喂以特殊饲料致大鼠骨质疏松后,分别测定骨质疏松组和对照组大鼠血清中的钙浓度与碱性磷酸酶含量,X 射线法检... 详细信息

研究了卵巢摘除致雌性大鼠骨质疏松过程中 Klotho 基因表达的变化,探讨雌激素缺失引起骨质疏松发生的可能分子机制.摘除卵巢并喂以特殊饲料致大鼠骨质疏松后,分别测定骨质疏松组和对照组大鼠血清中的钙浓度与碱性磷酸酶含量,X 射线法检测两组大鼠股骨密度,实时荧光定量 pcr 评估两组大鼠肾脏组织中 Klotho 基因的表达量.结果显示,与对照组相比,卵巢摘除后大鼠血钙浓度降低,碱性磷酸酶含量升高,骨密度减少,同时肾脏组织中 Klotho 基因表达显著下调.提示 Klotho 基因的下调及其对相关信号传导通路的影响可能是雌激素缺失导致骨质疏松的分子机制之一.

关键词：去势大鼠骨质疏松 Klotho 基因骨密度实时荧光定量 pcr

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