检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药科大学学报 2025年第2期56卷 176-182页

作者：许冰瑜刘妍郭心瑶严方孙桂斌中国药科大学药物分析系南京210009 哈尔滨工业大学医院药局哈尔滨150000 南京希罗斯医药有限公司南京210038

采用实时荧光定量pcr技术,建立特异性强、灵敏度高的左旋多巴中大肠埃希菌(Escherichiacoli)宿主细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证和初步应用。以大肠埃希菌中的相对保守的*** MB6菌株16S核糖体RNA基因序列作为目的基因设计多对引物... 详细信息

采用实时荧光定量pcr技术,建立特异性强、灵敏度高的左旋多巴中大肠埃希菌(Escherichiacoli)宿主细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证和初步应用。以大肠埃希菌中的相对保守的*** MB6菌株16S核糖体RNA基因序列作为目的基因设计多对引物,通过pcr进行特异性扩增获得目的片段。将目的片段重组至pLENTI-BSD-CON载体构建重组质粒命名为***-16S,以其为标准品,结合磁珠法提取纯化DNA,建立定量pcr检测方法(SYBR-Green法)。对建立的方法进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限及耐用性的方法学验证,应用于左旋多巴原料药的检测,并与试剂盒检测方法(Taqman探针法)进行比较。建立的定量pcr检测方法(SYBR-Green法)正向引物序列:5'-TTCGATGCAACGCGAAGAAC-3';反向引物序列:5'-GTGTAGCCCTGGTCGTAAGG-3'。以重组质粒作为标准品,DNA质量浓度在10fg/μL~3 ng/μL范围内线性关系良好(R^(2)≥0.98),定量限为10 fg/μL,加标溶液回收率在59.7%~80.7%范围内,RSD均小于30%。应用该法对3批左旋多巴原料药进行检测,DNA残留量均在限度以下。结果表明,建立的检测方法可用于定量检测左旋多巴等由大肠埃希菌作为宿主细胞生产的生物制品的DNA残留量,并且其灵敏度优于试剂盒检测方法。

关键词：大肠埃希菌左旋多巴构建质粒实时荧光定量pcr 外源性DNA残留帕金森病

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不同浓度褪黑素缓解狗牙根铅胁迫实时荧光定量pcr内参基因的筛选

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草业科学 2025年第1期42卷 119-128页

作者：谢程程马均李璟李西宜宾职业技术学院人文与旅游学院四川农业大学风景园林学院

实时荧光定量pcr技术常用于基因表达分析，但其结果的准确性有赖于筛选出稳定表达的内参基因从而对数据进行均一化。为筛选出铅(Pb)胁迫下不同浓度褪黑素处理狗牙根(Cynodon dactylon)根尖组织稳定表达的内参基因，本研究在前期生理试... 详细信息

实时荧光定量pcr技术常用于基因表达分析，但其结果的准确性有赖于筛选出稳定表达的内参基因从而对数据进行均一化。为筛选出铅(Pb)胁迫下不同浓度褪黑素处理狗牙根(Cynodon dactylon)根尖组织稳定表达的内参基因，本研究在前期生理试验基础上，对选用的8个候选内参基因(PP2A、TIP41、CACS、ACT、EF-1α、TUB、UPL7、GAPDH)在6个样本中的表达量进行qRT-pcr分析。结果发现，8个内参基因在不同样本中表达水平存在较大差异，且单个内参基因反应循环数(Ct值)在不同样本中变化范围有显著差异。利用ΔCt算法、NormFinder、BestKeeper和geNorm程序对内参基因稳定性进行排序，并结合线上工具RefFinder计算得出各内参基因稳定性的综合排名。结果表明，CACS+PP2A为不同浓度褪黑素处理Pb胁迫下狗牙根根尖组织最适内参基因组合。该内参基因组合将为解析褪黑素影响狗牙根Pb耐受性和吸收转运的分子机制奠定基础，进一步推动褪黑素在植物修复Pb污染土壤中的实际应用。

关键词：褪黑素铅胁迫实时荧光定量pcr 内参基因稳定性分析狗牙根

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土家族药血筒实时荧光定量pcr内参基因的筛选和验证

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中国中药杂志 2025年第3期50卷 682-692页

作者：肖倩谭琛偲曾江徐媛菽符天昊宁露云王炜湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 湖南中医药大学中医药民族医药国际联合实验室湖南长沙410208

土家族药血筒(植物学名:异形南五味子)以木质藤本茎入药,具有抗类风湿性关节炎、保肝、抗肿瘤、抗氧化的药用价值,是湖南、广东等地的常用药材。筛选合适稳定的内参基因是开展异形南五味子分子水平研究的基础。该研究选取GAPDH、TUA、Ac... 详细信息

土家族药血筒(植物学名:异形南五味子)以木质藤本茎入药,具有抗类风湿性关节炎、保肝、抗肿瘤、抗氧化的药用价值,是湖南、广东等地的常用药材。筛选合适稳定的内参基因是开展异形南五味子分子水平研究的基础。该研究选取GAPDH、TUA、Actin、UBQ、EF-1α、18S-rRNA、CYP、UBC、TUB、H2A、RPL共11个基因作为候选内参基因,通过实时荧光定量pcr检测11个候选内参基因在异形南五味子6个不同组织部位(藤茎-形成层以内、藤茎-形成层以外、果实、花、根和叶)与不同干预条件下[干旱胁迫、盐胁迫、茉莉酸甲酯(MeJA)处理]的基因表达水平,利用geNorm、NormFinder、ΔCT算法以及RefFinder软件对11个候选内参基因表达稳定性进行综合分析评价。综合以上分析结果表明,UBC与RPL基因在6个不同组织部位中较为稳定,UBC与GAPDH基因在不同干预条件下较为稳定。为了验证异形南五味子内参基因的可靠性,该研究进一步检测了异形南五味子主要成分——血筒素合成通路上的14个相关基因(KhFPS、KhIDI、KhCAS、KhSQE、KhSQS、KhSQS-2、KhHMGS、KhHMGR、KhMVD、KhMVK、KhDXR、KhDXS、KhPMVK、KhGGPS)在不同组织与不同干预条件中的表达水平。结果显示,分别以UBC与RPL或UBC与GAPDH作为内参基因,14个基因在异形南五味子不同组织部位或不同干预条件下表达趋势基本一致。综上,该研究筛选的UBC基因可作为异形南五味子不同组织部位与不同干预条件下的内参基因,为后续开展异形南五味子主要成分生物合成途径的研究奠定了基础。

关键词：异形南五味子实时荧光定量pcr 内参基因 UBC

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实时荧光定量pcr快速检测药品中大肠埃希菌

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食品与药品 2025年第2期27卷 126-131页

作者：李杰张华林鹏王家芳肖艳霞钱云开临沂市检验检测中心山东临沂276000 秦皇岛海关技术中心河北秦皇岛066004

目的建立一种药品中大肠埃希菌的实时荧光定量pcr快速检测方法。方法根据大肠埃希菌malB基因序列,设计通用引物和探针,优化扩增反应体系,进行实时荧光定量pcr扩增,当出现C_t值时,说明供试品中检出大肠埃希菌。结果大肠埃希菌基因组DN... 详细信息

目的建立一种药品中大肠埃希菌的实时荧光定量pcr快速检测方法。方法根据大肠埃希菌malB基因序列,设计通用引物和探针,优化扩增反应体系,进行实时荧光定量pcr扩增,当出现C_t值时,说明供试品中检出大肠埃希菌。结果大肠埃希菌基因组DNA检测限可达10^(-3 )ng,药品中大肠埃希菌检测限达3 cfu/g(ml),仅需24 h即可完成检测,采用该方法检测20批药品,结果与药典方法一致。结论方法检测特异性强、所需时间短、灵敏度高,可作为《中国药典》大肠埃希菌检查法的补充方法。

关键词：中国药典药品大肠埃希菌实时荧光定量pcr 检测

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实时荧光定量pcr对乙型肝炎病毒DNA定量检测效果分析

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中国科技期刊数据库医药 2025年第2期 160-163页

作者：黄驾田东县人民医院广西百色 531500

通过实时荧光定量pcr技术尝试解析其在乙型肝炎病毒DNA检测方面的效益。方法选择了800名乙型肝炎患者作为样本,分为两组:一组400名患者采用传统检测手段,而另一组400名患者则采用了实时荧光定量pcr技术进行检测分析。结果综合研究结... 详细信息

通过实时荧光定量pcr技术尝试解析其在乙型肝炎病毒DNA检测方面的效益。方法选择了800名乙型肝炎患者作为样本,分为两组:一组400名患者采用传统检测手段,而另一组400名患者则采用了实时荧光定量pcr技术进行检测分析。结果综合研究结果表明,与传统检测手段相比,运用实时荧光定量pcr技术的组别在HbeAg,HbsAg,HbeAb等血清标志物诊断准确率及阳性检出率上有显著优势(P<0.05),这更进一步印证了实时荧光定量pcr技术对乙型肝炎病毒DNA的检测具有着出色的灵敏度和特异度。结论实时荧光定量pcr技术应用于乙型肝炎病毒DNA定量检测,准确度高,能更有效地辅助临床对乙型肝炎的诊断,对于疾病防控和治疗方案的选择具有重要参考价值。

关键词：实时荧光定量pcr 乙型肝炎病毒DNA 定量检测临床诊断疾病防控

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牦牛源牛肠道病毒实时荧光定量pcr检测方法的建立及应用

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黑龙江畜牧兽医 2025年第1期 123-128页

作者：林伟山韩元马豆豆李春花童生林李秀萍雷萌桐王光华青海大学畜牧兽医科学院兽医研究所西宁810016 青海省动物疾病病原诊断与绿色防控技术研究重点实验室西宁810016 青海大学生态环境工程学院西宁810016

为了快速、准确地检测牦牛源牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV),试验根据GenBank中牦牛源BEV-NH2株3D基因序列(登录号为PP746571)设计可用于检测青海牦牛源BEV的实时荧光定量pcr特异性引物,通过构建标准质粒和绘制标准曲线建立牦牛源... 详细信息

为了快速、准确地检测牦牛源牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV),试验根据GenBank中牦牛源BEV-NH2株3D基因序列(登录号为PP746571)设计可用于检测青海牦牛源BEV的实时荧光定量pcr特异性引物,通过构建标准质粒和绘制标准曲线建立牦牛源BEV实时荧光定量pcr检测方法,对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验,并分别应用该方法及普通RT-pcr方法对青海省海北地区6个牦牛繁育基地的286份腹泻牦牛粪便样品进行检测,计算两种方法的符合率。结果表明:建立的牦牛源BEV实时荧光定量pcr检测方法扩增产物的熔解曲线单一,Tm值在85.6~85.8℃之间,无引物二聚体和非特异性扩增;质粒浓度在3×10^(2)~3×10^(8)copies/μL范围内时标准曲线的线性关系良好,Ct值在10.88~29.63之间,回归方程为y=-3.16x+38.01,R^(2)=0.9964;仅可检测到牦牛源BEV-NH2株,检测不到牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)MY01株、牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)MY20株和牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BcoV)QL21株;对牦牛源BEV的最低检测限为3×10^(2)copies/μL;当模板浓度为3×10^(2)copies/μL、3×10^(3)copies/μL和3×10^(7)copies/μL时,Ct值的变异系数分别为1.28%、1.74%和0.15%,均在1.80%以下。286份牦牛粪便样品中,采用建立的实时荧光定量pcr检测方法检出BEV阳性样品182份,阳性率为63.64%;采用普通RT-pcr方法检出BEV阳性样品114份,阳性率为39.86%;两种方法的符合率为76.22%。说明本研究建立的牦牛源BEV实时荧光定量pcr检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于牦牛腹泻临床样本的BEV检测。

关键词：牦牛牛肠道病毒 3D基因腹泻检测方法实时荧光定量pcr

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实时荧光定量pcr检测AML-M2患者骨髓中WT1基因表达水平及临床意义

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临床医学研究与实践 2025年第8期10卷 1-4页

作者：齐松青刘洋朱洁张振南王新有新疆医科大学医学科学研究所/新疆医科大学第一附属医院血液病中心/新疆维吾尔自治区血液病研究所新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院信息管理中心新疆乌鲁木齐830054

目的探讨实时荧光定量pcr(qRT-pcr)检测急性粒细胞白血病部分分化型(AML-M2)患者骨髓中的WT1基因表达水平及临床意义。方法采用qRT-pcr检测67例AML-M2患者及30名健康者骨髓样本中的WT1基因表达水平。根据AML1-ETO融合基因状态将AML-M2... 详细信息

目的探讨实时荧光定量pcr(qRT-pcr)检测急性粒细胞白血病部分分化型(AML-M2)患者骨髓中的WT1基因表达水平及临床意义。方法采用qRT-pcr检测67例AML-M2患者及30名健康者骨髓样本中的WT1基因表达水平。根据AML1-ETO融合基因状态将AML-M2患者分为AML1-ETO阳性组和阴性组,比较两组的WT1基因表达水平及AML1-ETO与WT1基因检测的诊断价值。将AML1-ETO阴性患者按WT1基因表达水平分为低表达组和高表达组,分析其与原始细胞比例、完全缓解(CR)、无事件生存时间(EFS)及总生存时间(OS)的关系。结果AML-M2患者的WT1基因中位表达水平高于健康者(P=0.000)。AML1-ETO阳性组中AML1-ETO基因检测和WT1基因检测的曲线下面积(AUC)无显著差异(P>0.05)。WT1基因低表达组和WT1基因高表达组的原始细胞比例有显著差异(P=0.000);Spearman相关性分析结果显示,WT1基因表达水平与原始细胞比例呈正相关(P=0.000);9例AML1-ETO阴性的AML-M2患者的WT1基因表达水平与原始细胞比例呈正相关(P<0.05)。WT1基因低表达组的OS短于WT1基因高表达组(P=0.031)。结论骨髓中WT1基因表达水平对AML-M2患者的诊断、治疗及预后评估具有重要临床意义。

关键词：实时荧光定量pcr WT1基因 ETO基因急性粒细胞白血病部分分化型

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花椰菜实时荧光定量pcr内参基因的筛选与评价

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分子植物育种 2025年第1期23卷 105-112页

作者：林珲裘波音张前荣李大忠温庆放福建省农业科学院作物研究所福建省蔬菜遗传育种重点实验室福建省蔬菜工程技术研究中心福州350013

为筛选适合花椰菜稳定表达的内参基因,利用实时荧光定量pcr技术,分析检测9个候选内参基因ACT1、ACT2、ACT7、TUB、EF-1α、EF-1β、GAPDH、UBQ和HIS在花椰菜不同组织、不同品种和花球不同发育时期处理下mRNA的表达稳定性。利用3个数据... 详细信息

为筛选适合花椰菜稳定表达的内参基因,利用实时荧光定量pcr技术,分析检测9个候选内参基因ACT1、ACT2、ACT7、TUB、EF-1α、EF-1β、GAPDH、UBQ和HIS在花椰菜不同组织、不同品种和花球不同发育时期处理下mRNA的表达稳定性。利用3个数据分析软件(geNorm,NormFinder和BestKeeper)综合评价9个候选内参基因的表达稳定性。结果表明,在花椰菜不同组织、不同品种和花球不同发育时期处理下,候选内参基因的表达稳定性存在差异。ACT2和EF-1α在不同组织处理下表达最为稳定;ACT7和TUB在不同品种处理下表达稳定性最好;ACT7和GAPDH在花球不同发育时期处理下被筛选为最合适的内参基因组合。结果表明,在特定条件下,获得合适的内参基因为花椰菜新基因表达分析的准确性提供了保障,并为十字花科芸薹属植物关键基因的挖掘提供了有益的参考。

关键词：花椰菜内参基因实时荧光定量pcr

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猪FoxP3、IL-10双重实时荧光定量pcr方法建立及应用

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畜牧与兽医 2025年第1期57卷 66-73页

作者：王艳萍徐倩倩孟卫芹王金良魏凤董林刘吉山谢金文山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600

旨在建立双重实时荧光定量pcr(RT-qpcr)方法,对叉头框蛋白P3(FoxP3)、白细胞介素10(IL-10)的RNA转录进行定量检测。设计并合成FoxP3、IL-10的扩增引物和荧光探针,优化引物浓度、退火温度,建立RT-qpcr方法,检测猪圆环病毒2型(PCV2)感染... 详细信息

旨在建立双重实时荧光定量pcr(RT-qpcr)方法,对叉头框蛋白P3(FoxP3)、白细胞介素10(IL-10)的RNA转录进行定量检测。设计并合成FoxP3、IL-10的扩增引物和荧光探针,优化引物浓度、退火温度,建立RT-qpcr方法,检测猪圆环病毒2型(PCV2)感染外周血调节性T淋巴细胞(Treg)和免疫器官中FoxP3和IL-10的mRNA含量;根据Western blot检测蛋白表达验证方法的可靠性。结果:建立的RT-qpcr方法呈现“S”型扩增曲线,相关系数R^(2)≥0.99;转化生长因子-β(TGF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素17(IL-17)等基因的核酸模板和阴性对照均无扩增曲线,最低检测浓度10 copies/μL,批内、批间变异系数分别为0.87%、1.84%;PCV2攻毒组外周血Treg细胞中FoxP3和IL-10的mRNA含量均出现明显升高,FoxP3的mRNA含量在攻毒第14天到达峰值,IL-10的mRNA含量在攻毒第10天到达峰值,PCV2感染后导致胸腺、淋巴结和脾脏中FoxP3和IL-10转录水平升高;Western blot检测表明,FoxP3蛋白表达量在攻毒第14天、第28天,IL-10在攻毒第10天和第14天显著高于对照组,与RT-qpcr结果一致。综上,本研究建立的猪FoxP3、IL-10双重RT-qpcr方法具有特异、敏感、检测稳定可靠的特点,对于评价猪体的免疫应答水平和机体免疫稳态具有重要意义。

关键词： FoxP3 IL-10 实时荧光定量pcr Treg活化免疫负调控

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核酸提取产物中乙醇对实时荧光定量pcr的影响

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中国生物制品学杂志 2025年第1期38卷 102-108,114页

作者：龚向莲黄玉麟林伟春杨连威胡祐邵珊张东旭厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361104 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司福建厦门361022

目的研究核酸提取产物中乙醇对实时荧光定量pcr(quantitative real-time pcr,qpcr)的影响,为更高灵敏度核酸检测提供乙醇浓度界限。方法建立重铬酸钾氧化法检测两种商品化磁珠法核酸提取试剂盒提取产物的乙醇残留,检测其是否对qpcr产生... 详细信息

目的研究核酸提取产物中乙醇对实时荧光定量pcr(quantitative real-time pcr,qpcr)的影响,为更高灵敏度核酸检测提供乙醇浓度界限。方法建立重铬酸钾氧化法检测两种商品化磁珠法核酸提取试剂盒提取产物的乙醇残留,检测其是否对qpcr产生影响,再将不同浓度乙醇溶液混合核酸模拟提取产物溶解冷冻干燥处理的qpcr试剂(以下简称冻干试剂)并进行扩增,观察其灵敏度变化,并对Ct值、荧光增益强度和扩增效率进行统计学分析。结果两种试剂盒的提取产物中残留3%~9%乙醇,对扩增均造成影响,有可能会导致灵敏度下降。对于人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV),乙醇浓度达到4.38%时,荧光增益强度差异有统计学意义(P<0.001),扩增效率出现明显差异;对于呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV),乙醇浓度达到2.63%时,荧光增益强度差异有统计学意义(P=0.004);乙醇浓度达到3.50%时,Ct值差异有统计学意义(P=0.004),扩增效率出现明显差异。结论乙醇会影响qpcr灵敏度、Ct值、荧光增益和扩增效率。为进行更高灵敏度的核酸检测,建议乙醇在提取产物中的残留不超过3.50%。

关键词：乙醇实时荧光定量pcr 冷冻干燥 pcr试剂核酸提取残留

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