检索结果-内蒙古大学图书馆

环境监测管理与技术 2013年第6期25卷 47-51页

作者：李继影吴昕贤徐恒省刘孟宇景明苏州市环境监测中心站江苏苏州215004 苏州太湖国家旅游度假区农业发展局江苏苏州215166

以铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)16S rRNA基因片段为靶序列设计一对特异性引物,采用Real-time pcr法,对铜绿微囊藻进行定性、定量检测。试验表明,仅含铜绿微囊藻DNA模板的样品有特异性扩增,扩增产物熔解曲线平稳,峰尖且窄,熔解温... 详细信息

以铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)16S rRNA基因片段为靶序列设计一对特异性引物,采用Real-time pcr法,对铜绿微囊藻进行定性、定量检测。试验表明,仅含铜绿微囊藻DNA模板的样品有特异性扩增,扩增产物熔解曲线平稳,峰尖且窄,熔解温度为(87±1)℃。以重组质粒pMD-18T-16S为标准品,检测区间为1.1×102copies/mL～1.1×108copies/mL,所得标准曲线符合制备实时定量pcr标准曲线的要求,对标准品进行测定,方法检出限为11 copies/mL。用该标准曲线对实验室培养获得的铜绿微囊藻DNA样品进行定量检测,与显微镜计数结果基本一致。

关键词：微囊藻实时荧光定量pcr法 16S rRNA 水质

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实时荧光定量pcr法检测HCV-RNA测量不确定度评价

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国际检验医学杂志 2013年第12期34卷 1575-1577页

作者：庄健海卓雪芽谢小梅何娴罗娜黄星华佛山市中医院检验科广东佛山528000

目的探讨对实时荧光定量pcr法测HCV-RNA测量不确定度评定的合理方式。方法依据Nordtest准则,利用实时荧光定量pcr法检测HCV-RNA室内质控及室间质评标本,收集2012年4～9月的HCV-RNA室内质控数据及2010～2012年室间质评结果。计算其批内... 详细信息

目的探讨对实时荧光定量pcr法测HCV-RNA测量不确定度评定的合理方式。方法依据Nordtest准则,利用实时荧光定量pcr法检测HCV-RNA室内质控及室间质评标本,收集2012年4～9月的HCV-RNA室内质控数据及2010～2012年室间质评结果。计算其批内及批间变异系数、系统偏倚变异系数,确定其相应的标准不确定度分量,进而计算出其扩展不确定度。结果同一天内12次HCV-RNA室内质控的检测批内变异系数为2.55%,2012年4～9月共155个工作日的HCV-RNA检测批间变异系数为5.80%;2010～2012年卫生部临检中心室间质评共30个检测数据的系统偏倚变异系数为5.04%,剔除8个检测为零的数据后重新计算变异系数为5.97%。批内、批间及系统偏倚的因素合成后,扩展不确定度为16.18%,剔除8个检测为零的数据后为17.16%。结论对实时荧光定量pcr法测HCV-RNA测量不确定度的评价,利用现有室内外质控数据,无须额外测试,简单易行,是医学检验实验室较为实用的一种测量不确定度评价方式,但数据的纳入应考虑方法的特殊性。

关键词：实时荧光定量pcr法 HCV-RNA 测量不确定度评定

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外泌体miRNA提取方法的建立及优化

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中国生物制品学杂志 2024年第5期37卷 598-604页

作者：张益国张美美王丽丽王小鑫马磊张婷婷陈国柱石河子大学生命科学学院新疆石河子832000 北京奥秘佳得医药科技有限公司北京100000

目的建立及优化外泌体miRNA的提取方法,并与传统方法进行比较。方法以MSC、NK、CIK细胞外泌体miRNA为研究对象,用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测gDNA去除柱对外泌体miRNA中基因组DNA的去除效果;并以浓度、纯度及基因表达水平(Ct值... 详细信息

目的建立及优化外泌体miRNA的提取方法,并与传统方法进行比较。方法以MSC、NK、CIK细胞外泌体miRNA为研究对象,用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测gDNA去除柱对外泌体miRNA中基因组DNA的去除效果;并以浓度、纯度及基因表达水平(Ct值)为评价指标,优化提取方法中的裂解液(外泌体G2裂解液及外泌体miRNA裂解液)及聚集试剂(无水乙醇及异丙醇)。采用建立的方法、Trizol法及Trizol磁珠法提取MSC、NK、CIK细胞外泌体及健康人血清外泌体miRNA,进行实时荧光定量pcr检测。结果gDNA去除柱可有效去除外泌体miRNA中的基因组DNA。外泌体miRNA裂解液提取MSC、NK、CIK细胞外泌体miRNA的浓度均显著高于外泌体G2裂解液(t=6.358,P=0.020);外泌体G2裂解液提取的miRNA样品纯度均偏低,存在杂蛋白污染,而外泌体miRNA裂解液可有效去除污染;外泌体miRNA裂解液提取CIK细胞外泌体miRNA的miR⁃Let⁃7i、miR⁃16⁃1、miR⁃150基因Ct值明显低于外泌体G2裂解液(t=30.120,P=0.008)。异丙醇提取MSC、NK、CIK细胞外泌体miRNA的浓度明显高于无水乙醇(t=8.567,P=0.010),纯度明显高于无水乙醇(t=6.214,P=0.020);两种聚集试剂提取CIK细胞外泌体miRNA的miR⁃Let⁃7i、miR⁃16⁃1、miR⁃150基因Ct值差异均无统计学意义(t=2.297,P=0.120)。与Trizol法及Trizol磁珠法比较,采用建立方法提取CIK、NK、MSC细胞及健康人血清外泌体miRNA的miR⁃Let⁃7i、miR⁃16⁃1、miR⁃Let⁃7a、miR⁃150基因表达量更丰富,总体Ct值较低;且熔解峰较突出、尖锐,表现为单一主峰。结论采用建立的方法提取的外泌体miRNA具有较高的浓度及纯度,Ct值稳定,且具有较高的灵敏度及良好的特异性。本研究为外泌体miRNA的进一步研究奠定了基础。

关键词：外泌体miRNA 裂解液聚集试剂实时荧光定量pcr法

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2018—2023年广安市外环境禽流感病毒监测结果分析

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预防医学情报杂志 2025年第5期 687-691+706页

作者：朱作芳尹柳秦小佳朱红广安市疾病预防控制中心

目的了解2018—2023年广安市活禽交易市场等外环境中禽流感病毒的污染情况和流行特征，为今后本地区人感染禽流感风险预警工作提供科学依据。方法采集2018—2023年广安市6个县（区）的涉禽场所的不同类型的外环境样本，通过实时荧光... 详细信息

目的了解2018—2023年广安市活禽交易市场等外环境中禽流感病毒的污染情况和流行特征，为今后本地区人感染禽流感风险预警工作提供科学依据。方法采集2018—2023年广安市6个县（区）的涉禽场所的不同类型的外环境样本，通过实时荧光定量聚合酶链式技术对A型通用流感病毒进行核酸检测，针对A型流感病毒核酸阳性的样本，进一步实施禽流感H5、H7、H9亚型核酸检测。用WPS 2024软件和SPSS 16.0软件整理数据和统计分析，率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。结果 2018—2023年广安市总共收集了1 054份外部环境样本，并检测出623份甲型流感病毒核酸呈阳性样本，总阳性率达到了59.11%,H9、H5亚型和混合感染的检出率分别为38.52%、6.17%和6.83%，病毒亚型中以H9占比最高（65.17%）。各个区县外环境中均存在禽流感病毒阳性样本，其中邻水县和前锋区甲通阳性率较高，分别为74.26%和70.95%。不同样本类型中，外环境中禽类饮水（71.13%）和脱毛机（70.55%）阳性率较高。结论广安市涉禽市场外环境中禽流感病毒污染较高，以H9为优势亚型，应持续强化对外环境中禽流感的监测与防控工作，加大活禽交易市场的卫生监管力度，对发现禽流感病毒变异以及预防控制禽流感具有重大意义。

关键词：外环境禽流感监测实时荧光定量pcr法

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实时荧光定量聚合酶链反应法检测沙门菌与志贺菌的结果分析

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实用医技杂志 2021年第7期28卷 897-899页

作者：曹原河南省开封市疾病预防控制中心 475000

目的分析实时荧光定量聚合酶链反应(pcr)法检测沙门菌与志贺菌的结果。方法选取2016年7月至2018年9月开封市某医院腹泻患者510例粪便标本,分别采用传统培养法与实时荧光定量pcr法对粪便标本进行检测。对比2种方法下沙门菌及志贺菌检测结... 详细信息

目的分析实时荧光定量聚合酶链反应(pcr)法检测沙门菌与志贺菌的结果。方法选取2016年7月至2018年9月开封市某医院腹泻患者510例粪便标本,分别采用传统培养法与实时荧光定量pcr法对粪便标本进行检测。对比2种方法下沙门菌及志贺菌检测结果,并分析2种检测方法的应用价值。结果实时荧光定量pcr法阳性检出率为7.8%高于传统培养法3.7%,差异有统计学意义(P<0.05);实时荧光定量pcr法检测沙门菌的敏感性、特异性分别为100%、98.8%,检测志贺菌的敏感度、特异度分别为100%、97.0%。结论实时荧光定量pcr法在检测沙门菌及志贺菌中具有较高的应用价值,敏感度及特异度均较高,检测结果客观、可靠,可为临床诊断提供参考依据,值得推广应用。

关键词：沙门菌属志贺菌属实时荧光定量pcr法传统培养法

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疑似麻疹风疹患者标本检测及不同方法应用观察

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中国科技期刊数据库医药 2024年第12期 192-195页

作者：马元元涿州市疾病预防控制中心检验科河北保定072750

分析在疑似麻疹风疹患者标本检测中应用不同检测方法的意义。方法研究对象为2021.01-2023.12收治的104例疑似麻疹风疹患者,检测标本为血清标本(酶联免疫吸附法(ELISA))、咽拭子标本(实时荧光定量pcr法(RT-pcr)),酶联免疫吸附法(ELISA)... 详细信息

分析在疑似麻疹风疹患者标本检测中应用不同检测方法的意义。方法研究对象为2021.01-2023.12收治的104例疑似麻疹风疹患者,检测标本为血清标本(酶联免疫吸附法(ELISA))、咽拭子标本(实时荧光定量pcr法(RT-pcr)),酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者的血清标本。结果在104例疑似麻疹风疹患者标本测定中,RT-pcr法阳性率高于ELISA法检测(P<0.05);在采样距出疹的0-3d、4-6d、≥7d中,ELISA法、RT-pcr法对麻疹与风疹疑似标本检测,结果不存在显著差异(P>0.05)。结论在疑似麻疹风疹患者标本检测中,与ELISA法相比,RT-pcr法的阳性率更高,临床应用价值更高。

关键词：麻疹风疹实时荧光定量pcr法酶联免疫吸附法

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CDC6和MCM6的表达与宫颈癌的相关性

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西部医学 2024年第7期36卷 1042-1046页

作者：李晓琦万重阳杨丹王艳敏陈燕华北理工大学附属医院河北唐山063000

目的探讨宫颈癌组织中细胞分裂周期蛋白6(CDC6)和微小染色体维持蛋白6(MCM6)蛋白及mRNA的表达水平与宫颈癌临床病理特征的关系。方法收集2018年10月—2020年11月就诊于华北理工大学附属医院妇科的94例患者的宫颈组织标本,其中44例经病... 详细信息

目的探讨宫颈癌组织中细胞分裂周期蛋白6(CDC6)和微小染色体维持蛋白6(MCM6)蛋白及mRNA的表达水平与宫颈癌临床病理特征的关系。方法收集2018年10月—2020年11月就诊于华北理工大学附属医院妇科的94例患者的宫颈组织标本,其中44例经病理学确诊的宫颈癌组织作为宫颈癌组,50例因子宫肌瘤行全子宫切除术患者的正常宫颈组织作为对照组。采用免疫组织化学法(IHC)检测两组宫颈组织中CDC6、MCM6蛋白的表达情况;采用实时荧光定量pcr法(qRT-pcr)检测两组宫颈组织中CDC6、MCM6 mRNA的表达量。结果宫颈癌组中CDC6、MCM6蛋白的阳性表达率明显高于对照组(P<0.01)。在宫颈癌组织中CDC6、MCM6蛋白的阳性表达率与宫颈癌患者的淋巴结转移、临床分期和HPV16/18型感染相关(P<0.05),与是否绝经、肿块大小、宫旁浸润、分化程度、组织类型无关(P>0.05)。CDC6、MCM6 mRNA在宫颈癌组中的表达量高于对照组(P<0.05);当CDC6或MCM6 mRNA的表达量增加时,发生宫颈癌的风险增加(OR:2.591,95%CI:1.126~5.962;OR:4.239,95%CI:1.780~10.095)。在MCM6蛋白阳性表达的宫颈癌组织中,CDC6蛋白的阳性表达率更高(P<0.05)。结论CDC6、MCM6蛋白和mRNA的表达与宫颈癌的发生发展有一定的关系,两者可作为宫颈癌的生物学指标。

关键词：细胞分裂周期蛋白6 微小染色体维持蛋白6 宫颈癌免疫组织化学实时荧光定量pcr法

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斯钙素2在宫颈癌组织中的表达及临床意义

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河北医学 2024年第2期30卷 255-259页

作者：邓润叨付霞霏南方医科大学珠江医院广东广州510220 广东省东莞市人民医院广东东莞523018

目的:探究斯钙素2(STC2)在宫颈癌组织中的表达情况,并评估其临床意义。方法:回顾性选取2022年1月至2023年5月东莞市人民医院宫颈癌患者(n=88)作为研究对象,应用免疫组织化学法测定患者宫颈组织中STC2表达情况,采用实时荧光定量pcr检测ST... 详细信息

目的:探究斯钙素2(STC2)在宫颈癌组织中的表达情况,并评估其临床意义。方法:回顾性选取2022年1月至2023年5月东莞市人民医院宫颈癌患者(n=88)作为研究对象,应用免疫组织化学法测定患者宫颈组织中STC2表达情况,采用实时荧光定量pcr检测STC2,比较宫颈癌组织与癌旁组织STC2 mRNA,分析STC2在不同临床特征宫颈癌中的表达情况,对其相关性进行Logistic回归分析。结果:宫颈癌组织中STC2 mRNA明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组织中STC2阳性表达在年龄、肿瘤直径、病理分型、不同浸润深度、分化程度、TNM分期中差异无统计学意义(P>0.05),STC-2表达与淋巴结转移相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,淋巴结转移是STC-2阳性的独立影响因素;STC2阳性组无进展生存期(PFS)明显低于STC2阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson分析显示STC2表达与PFS均呈负相关(r=-0.683,P<0.05),由于未达OS终点,目前无法计算以及对比OS差异,后续密切追踪跟进。结论:STC2在宫颈癌组织中表达量高,与年龄、肿瘤直径、病理分型、浸润深度、分化程度、TNM分期无关,与淋巴结转移有关,应予以高度重视。

关键词：宫颈癌斯钙素2 免疫组织化学法实时荧光定量pcr法

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骨质疏松性骨折患者血清与骨折局部血肿中免疫因子水平的测定及活性维生素D3治疗对免疫因子水平影响的临床研究

骨质疏松性骨折患者血清与骨折局部血肿中免疫因子水平的测定及活...

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作者：张明炜中国医科大学

学位级别：硕士

目的:骨质疏松性骨折后,全身及骨折断端局部免疫因子水平均产生变化,不同的免疫因子具体变化趋势尚不完全明确。本研究旨在以常见的免疫因子IL（interleukin,IL）-1β、IL-6、TNF（tumor necrosis factor,TNF）-α为研究对象,探讨骨质... 详细信息

目的:骨质疏松性骨折后,全身及骨折断端局部免疫因子水平均产生变化,不同的免疫因子具体变化趋势尚不完全明确。本研究旨在以常见的免疫因子IL（interleukin,IL）-1β、IL-6、TNF（tumor necrosis factor,TNF）-α为研究对象,探讨骨质疏松性骨折与非骨质疏松性骨折患者全身以及骨折局部的常见免疫因子水平的变化,并探讨治疗骨质疏松症的常见药物——活性维生素D3对骨质疏松性骨折患者免疫功能及骨折预后的影响。方法:本实验选取2019年1月至2020年11月于我院创伤骨科住院治疗的48例患桡骨远端骨折并进行桡骨远端切开复位内固定术的患者。术前通过双能X线吸收法获取骨密度信息,根据骨密度T值分为骨质疏松组（T<-2.5）29例和非骨质疏松组（T>-2.5）19例;并根据简单随机分组法将骨质疏松组患者分为活性维生素D3治疗组15例和对照组14例。术前采集每位患者的血清并检测其IL-1β、IL-6以及TNF-α含量,术中留取骨折断端血肿组织,并通过实时荧光定量pcr（Polymerase Chain Reaction,pcr）法测定IL-1β、IL-6以及TNF-α的m RNA相对表达量,术后应用骨折常规治疗并补充钙剂（对照组）,治疗组除骨折常规治疗之外应用钙剂+活性维生素D3治疗。术后第7日再次采集每位患者血清以检测免疫因子水平,术后定期观察影像资料及功能恢复情况,最后进行数据分析。结果:（1）经统计患者的一般资料（性别、年龄、身高、体重等）,骨质疏松组和非骨质疏松组患者无明显差异（P>0.05）,骨质疏松组内活性维生素D3治疗组和对照组患者无明显差异（P>0.05）。（2）所有患者术前血清IL-1β、IL-6、TNF-α平均含量分别为14.68±3.71（ng/ml）、64.16±10.12（μg/ml）、711.38±139.93（ng/ml）,骨折断端血肿IL-1β、IL-6、TNF-α对应m RNA平均相对表达量分别为1.0054±0.0480、1.0045±0.0652、0.9993±0.0538,以一元线性回归方程表示二者相关性为:y=-56.848+71.138x(PIL-1<0.05)、y=-79.4121+142.928x(PIL-6<0.05)、y=-1740.626+2453.61x(PTNF-α<0.05)。三种免疫因子在骨折断端血肿中的表达水平与血清中存在正相关性,差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）骨质疏松组患者术前血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量平均值分别为16.74±3.19（ng/ml）、70.26±6.27（μg/ml）、804.31±82.68（ng/ml）,非骨质疏松组分别为11.53±1.66（ng/ml）、54.85±7.41（μg/ml）、569.54±73.11（ng/ml）,骨质疏松组三者均数均高于非骨质疏松组,差异均存在统计学意义（P<0.05）;骨质疏松组骨折断端血肿IL-1β、IL-6、TNF-α的相对表达量均数分别为1.0366±0.0294、1.0452±0.0347、1.0336±0.0371,非骨质疏松组骨折断端血肿三者均数分别为0.9577±0.0267、0.9424±0.0498、0.9470±0.0252,骨质疏松组三者均数均高于非骨质疏松组,差异均存在统计学意义（P<0.05）。（4）活性维生素D3治疗组术后第7日血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量平均值分别为14.85±1.82（ng/ml）、53.72±5.75（μg/ml）、641.52±101.51（ng/ml）,对照组三者分别为16.62±2.32（ng/ml）、59.30±6.54（μg/ml）、721.85±92.38（ng/ml）,治疗组三者均低于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。（5）活性维生素D3治疗组患者术后6个月随访记录显示,治疗组腕关节功能评分平均值3.20±1.47,优于对照组5.14±1.56,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组平均骨折愈合时间9.7±0.9周,较对照组10.6±0.8周更短,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）骨折断端血肿中IL-1β、IL-6、TNF-α的相对表达量和血清中相应免疫因子的水平呈正相关关系,因此通过血清免疫因子水平可以反映骨折断端局部血肿微环境免疫功能的变化。（2）骨质疏松性骨折患者血清和骨折断端血肿中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均高于非骨质疏松性骨折患者。（3）活性维生素D3治疗后骨质疏松性骨折患者术后早期血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平明显低于对照组,术后6个月治疗组患者腕关节功能评分明显优于对照组,骨折愈合时间也较对照组更短,提示活性维生素D3可以通过影响免

关键词：骨质疏松性骨折免疫因子 IL-1β IL-6 TNF-α 活性维生素D3 骨折断端血肿实时荧光定量pcr法

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MTHFR C677T基因多态性方法学比较

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标记免疫分析与临床 2024年第6期31卷 1162-1166页

作者：刘紫薇王玉飞刘淑静姜文灿李斯文王利娟陈柯霖首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心国家药监局体外诊断试剂质量控制重点实验室北京市免疫试剂临床工程技术研究中心北京100070

目的评价比较实时荧光定量pcr法与pcr-金磁微粒层析法两种方法检测5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性的一致性、检测限、特异性。方法随机选取首都医科大学附属北京天坛医院采集的50例静脉抗凝全血,均通过磁珠法提取基因... 详细信息

目的评价比较实时荧光定量pcr法与pcr-金磁微粒层析法两种方法检测5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性的一致性、检测限、特异性。方法随机选取首都医科大学附属北京天坛医院采集的50例静脉抗凝全血,均通过磁珠法提取基因组DNA,依照最新版分子诊断检验程序性能验证指南(CNAS-GL039)要求对两种方法学的一致性、检测限、特异性进行性能评价。结果实时荧光定量pcr与pcr-金磁微粒层析具有高度的一致性,采用两种方法检测50例样本的一致性为100%;两种方法检测交叉反应中检测结果未受影响,基因型之间无交叉污染情况;检测限验证中前者的灵敏度更高,最低检测限可达0.078125ng/μL,后者的最低检测限为0.625ng/μL。结论实时荧光定量pcr法与pcr-金磁微粒层析法均具有操作简便、灵敏度高,特异性强的特点,可用于人类MTHFR基因多态性检测,同时能够对叶酸代谢作出有效的诊断,需根据临床实验室的需求,选择合理有效的检测方法。

关键词： 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶实时荧光定量pcr法 pcr-金磁微粒层析方法学比较

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