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实时荧光定量pcr法检测EG-1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义

吉林大学学报（医学版） 2012年第5期38卷 981-984,F0003页

作者：孙亚东张景斌杨乐马彦姜春浩邸军吉林省人民医院内分泌一疗区吉林长春130021

目的:通过实时荧光定量pcr法检测内皮衍生基因-1(EG-1)的基因在甲状腺癌组织中的表达,探讨EG-1与甲状腺癌发生、发展的关系。方法:选取38例甲状腺乳头状癌患者(病例组)和15例良性甲状腺疾病患者的甲状腺组织(对照组),采用实时荧光定量PC... 详细信息

目的:通过实时荧光定量pcr法检测内皮衍生基因-1(EG-1)的基因在甲状腺癌组织中的表达,探讨EG-1与甲状腺癌发生、发展的关系。方法:选取38例甲状腺乳头状癌患者(病例组)和15例良性甲状腺疾病患者的甲状腺组织(对照组),采用实时荧光定量pcr法检测甲状腺组织中EG-1基因的表达,同时应用免疫组织化学法检测EG-1的表达水平。结果:免疫组织化学结果显示,EG-1主要定位于癌细胞的细胞质,甲状腺乳头状癌组织中EG-1mRNA和蛋白表达水平明显高于良性甲状腺疾病患者(P<0.05)。EG-1mRNA表达与组织学分级有关(P<0.05),与性别、年龄无明显关联性(P>0.05)。结论:EG-1基因在甲状腺乳头状癌组织中表达明显增高,EG-1基因可能在甲状腺癌的发生、发展中起重要作用。

关键词：实时荧光定量pcr 内皮衍生基因-1 甲状腺肿瘤

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实时荧光定量pcr检测骨性关节炎病人膝关节液中miR-140的表达

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中南大学学报（医学版） 2012年第12期37卷 1210-1214页

作者：张明刘立宏肖涛郭文娟中南大学湘雅二医院创伤骨科研究室长沙410011 北京市大兴区人民医院骨科北京102600 中国人民解放军总医院老年心血管病监护室北京100853

目的:检测不同Kellgren和Lawrence X线分级骨性关节炎病人膝关节液中微小RNA-140(microRNA-140,miR-140)的表达水平,为进一步研究miR-140在骨性关节炎发生、发展中的作用提供理论依据。方法:收集骨性关节炎病人膝关节液40例[关节炎组,... 详细信息

目的:检测不同Kellgren和Lawrence X线分级骨性关节炎病人膝关节液中微小RNA-140(microRNA-140,miR-140)的表达水平,为进一步研究miR-140在骨性关节炎发生、发展中的作用提供理论依据。方法:收集骨性关节炎病人膝关节液40例[关节炎组,又依据Kellgren和LawrenceX线诊断标准分为Ⅰ级亚组(10例)、Ⅱ级亚组(10例)、Ⅲ级亚组(10例)、Ⅳ级亚组(10例)],非骨性关节炎膝关节液20例(对照组,包括半月板损伤、交叉韧带损伤、外伤)。应用实时荧光定量pcr检测骨性关节炎组及对照组膝关节液中miR-140的含量。以U6snRNA为内参,求出每个样本的Ct值。结果:miR-140在所有关节液标本中都能检测到。与对照组比较,miR-140在关节炎组中的含量下降(P<0.05)。Ⅳ级亚组miR-140的表达水平与Ⅰ级亚组、Ⅱ级亚组、Ⅲ级亚组比较,差异有统计学意义(P<0.05);骨性关节炎的严重程度与miR-140的表达水平呈负相关(r=–0.917,P<0.05)。结论:人膝关节液中存在miR-140,并且可以方便地应用实时荧光定量pcr进行检测。miR-140在关节炎组膝关节液中的表达水平下调,且与骨性关节炎的严重程度呈负相关,这可能与骨性关节炎的发生、发展有关,并可为潜在的诊断提供预警的分子靶标。

关键词：骨性关节炎膝关节液微小RNA 实时荧光定量pcr

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实时荧光定量pcr在脊髓性肌萎缩症基因检测中的临床应用

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中华医学遗传学杂志 2014年第2期31卷 180-184页

作者：江雨彭桂兰吴琦嫦周裕林福建省厦门市妇幼保健院分子诊断实验室 361003 福建省厦门市妇幼保健院儿童神经康复科 361003 福建省厦门市妇幼保健院产前诊断科 361003

目的验证实时荧光定量pcr在脊髓性肌萎缩症（spinal muscul aratrophy，SMA）基因检测中的可靠性，建立临床检验操作质量控制方法。方法对经多重连接依赖探针扩增方法分型的35例SMA患者，61例一级亲属，61位无SMA家族史健康体检者及7份... 详细信息

目的验证实时荧光定量pcr在脊髓性肌萎缩症（spinal muscul aratrophy，SMA）基因检测中的可靠性，建立临床检验操作质量控制方法。方法对经多重连接依赖探针扩增方法分型的35例SMA患者，61例一级亲属，61位无SMA家族史健康体检者及7份产前诊断样本，分别在Roche LightCycler480及Bio—RadCFX96TM两款实时荧光定量pcr仪器上完成SMN1基因第7外显子拷贝数的相对定量检测。结果所有样本SMNl拷贝数相对定量检测结果与多重连接依赖探针扩增方法一致，两个定量pcr平台均可准确区分不同SMN1拷贝数，但数据存在系统差异。结论实时荧光定量pcr法检测SMA携带者的可靠性有赖于规范的质量控制，不同检测平台及体系需预设标准样本数据库。

关键词：实时荧光定量pcr 脊髓性肌萎缩症相对定量

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实时荧光定量pcr检测转基因阿尔茨海默病小鼠脑组织中miRNAs的差异表达

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南方医科大学学报 2013年第2期33卷 262-266页

作者：田密丁宇侯德仁邓炎尧李维奉夏露中南大学湘雅三医院神经内科湖南长沙410013

目的通过实时荧光定量pcr方法检测APPswe/PS△E9双转基因小鼠和对照小鼠脑组织中miRNA-135a-5p、miRNA-135a-2-3p、miRNA-298-5p、miRNA-466b-3p和miR-669f-3p的表达。方法选取6月龄大小的APPswe/PS△E9双转基因小鼠为实验组,同月龄同种系的野生型小鼠C57为对照组,分别提取其脑组织总miRNA,应用实时荧光定量pcr方法检测两组小鼠脑组织中miRNA-135a-5p、miRNA-135a-2-3p、miRNA-298-5p、miRNA-466b-3p和miR-669f-3p的表达。结果上述5种miRNAs在实验组与对照组小鼠中的相对表达量分别为0.73±0.27、1.08±0.58,2.47±6.15、1.65±0.67,0.72±0.14、1.31±0.73,0.57±0.34、1.06±0.35,0.63±0.26、1.02±0.18。其中有统计学意义的是miRNA-135a-5p、miRNA-298-5p、miRNA-466b-3p和miR-669f-3p(P≤0.05)。结论 miRNA-135a-5p、miRNA-298-5p、miRNA-466b-3p和miR-669f-3p在APPswe/PS△E9双转基因小鼠中有差异表达,可能在阿尔茨海默病的发病过程中起着重要作用。

关键词：阿尔茨海默病转基因阿尔茨海默病小鼠 miRNA 实时荧光定量pcr

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实时荧光定量pcr法检测中药制剂中沙门菌

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中国现代应用药学 2021年第7期38卷 836-840页

作者：刘卫德张文婷易巧熊骏刘绪平江西省药品检验检测研究院国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心南昌330029

目的采用实时荧光定量pcr技术,建立一种中药制剂中沙门菌的快速检测方法。方法将中药制剂加入适量的胰酪大豆胨液体培养基中进行增菌后,取增菌液以热裂解法提取总DNA,采用实时荧光定量pcr法特异性检测沙门菌。结果建立了中药制剂中沙门... 详细信息

目的采用实时荧光定量pcr技术,建立一种中药制剂中沙门菌的快速检测方法。方法将中药制剂加入适量的胰酪大豆胨液体培养基中进行增菌后,取增菌液以热裂解法提取总DNA,采用实时荧光定量pcr法特异性检测沙门菌。结果建立了中药制剂中沙门菌的实时荧光定量pcr检测法,检测可在24 h内完成,灵敏度达每10 g(10 mL)供试品1 cfu,特异性为100%,采用该方法检测18批次样品结果与药典方法一致。结论采用实时荧光定量pcr法可明显缩短中药制剂中沙门菌检测周期,具有良好的灵敏度和特异性,可作为药典检测方法的有效补充。

关键词：中药制剂沙门氏菌实时荧光定量pcr 快速检测

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实时荧光定量pcr检测RAW264.7巨噬细胞中Th1/Th2型细胞因子转录水平方法的建立及初步应用

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第4期29卷 430-433页

作者：单雪芹韩先干张敏宋军刘海文田明星潘玲丁铲周锦萍于圣青安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 上海市动物疫病预防控制中心上海201103

目的建立小鼠RAW264.7巨噬细胞的Th1和Th2型细胞因子荧光定量pcr检测方法。方法依据GenBank中小鼠的β-actin基因序列、Th1型及Th2型细胞因子的核苷酸序列设计特异性引物,以RAW264.7巨噬细胞mRNA反转录后的cDNA为模板,通过构建质粒阳性... 详细信息

目的建立小鼠RAW264.7巨噬细胞的Th1和Th2型细胞因子荧光定量pcr检测方法。方法依据GenBank中小鼠的β-actin基因序列、Th1型及Th2型细胞因子的核苷酸序列设计特异性引物,以RAW264.7巨噬细胞mRNA反转录后的cDNA为模板,通过构建质粒阳性标准品,建立检测上述细胞因子转录水平的real-time pcr方法。结果用建立的荧光定量pcr方法,检测牛型布鲁氏菌S2308株感染RAW264.7巨噬细胞后,巨噬细胞Th1和Th2型细胞因子的转录水平。最低检测量为102拷贝/μL,线性关系很好,R2≥0.982,该方法具有良好的特异性和重复性。结论成功建立了检测巨噬细胞中Th1和Th2型细胞因子转录水平的荧光定量pcr方法。

关键词： Th1 Th2型细胞因子巨噬细胞RAW264 7 实时荧光定量pcr 布鲁氏菌

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实时荧光定量pcr检测职业砷暴露人群p53基因损伤

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四川大学学报（医学版） 2007年第4期38卷 693-696页

作者：文卫华成会荣衡正昌黄玉云董西明史忠文徐华四川大学华西公共卫生学院环境卫生学教研室成都610041 云南省疾病预防控制中心文山州疾病预防控制中心

目的探讨云南某砒霜厂工人p53基因第5和第8外显子损伤与砷的代谢转化关系;建立实时荧光定量pcr检测人群基因特异DNA损伤的方法。方法选择云南某砒霜厂一线工人37例(高暴露组)、管理和后勤人员16例(低暴露组)和当地近期无毒物接触人员25... 详细信息

目的探讨云南某砒霜厂工人p53基因第5和第8外显子损伤与砷的代谢转化关系;建立实时荧光定量pcr检测人群基因特异DNA损伤的方法。方法选择云南某砒霜厂一线工人37例(高暴露组)、管理和后勤人员16例(低暴露组)和当地近期无毒物接触人员25例(对照组)为研究对象,应用实时荧光定量pcr检测人群p53基因第5和第8外显子损伤,同时检测尿中总砷和有机砷含量,评价人群对砷的代谢转化与p53基因损伤的相关性。结果高、低暴露组男性尿有机砷浓度分别为(1.18±0.76)mg/L、(0.32±0.28)mg/L,女性分别为0.23mg/L、(0.53±0.30)mg/L;高、低暴露组男性尿总砷浓度分别为(0.48±0.37)mg/L、(0.08±0.05)mg/L,女性分别为0.11mg/L、(0.30±0.24)mg/L。男性尿总砷和有机砷高暴露组均高于低暴露组(P<0.05),对照组均低于检出值下限0.02mg/L。p53基因第5外显子实时荧光定量pcr检测的Ct相对值,男性高暴露组高于男性对照组(P<0.05),Ct相对值随尿中有机砷含量上升有升高趋势(rs=0.355,P=0.011);p53基因第8外显子Ct相对值,男性低暴露组高于对照组(P<0.05),但男性高暴露组与低暴露组、对照组比较,差异均无统计学意义,Ct相对值与尿中有机砷含量无相关性。结论职业砷暴露可能致p53基因第5和第8外显子损伤,砷的代谢转化可能在第5外显子损伤中起关键作用;实时荧光定量pcr用于检测人群基因特异DNA损伤切实可行。

关键词：实时荧光定量pcr 职业暴露尿有机砷 p53基因

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实时荧光定量pcr分析CML患者HMGA2基因的表达及其临床意义

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中国肿瘤生物治疗杂志 2010年第2期17卷 183-189页

作者：王霜刘晓力欧阳凌云许娜杜庆锋刘志欧阳昭南方医科大学南方医院血液科南方医院临床医学教育中心广东广州510515

目的:分析慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者外周血中高迁移率蛋白A2基因(high mobility group A2,HMGA2)mRNA的表达及其相关临床特征,探讨它们在CML演进中的作用及临床意义。方法:采集2006年1月至2008年2月在南方医科... 详细信息

目的:分析慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者外周血中高迁移率蛋白A2基因(high mobility group A2,HMGA2)mRNA的表达及其相关临床特征,探讨它们在CML演进中的作用及临床意义。方法:采集2006年1月至2008年2月在南方医科大学南方医院血液科就诊的24例CML和5例健康对照的骨髓和外周血标本(所有参与试验及贡献骨髓和外周血标本的患者均知情同意,并经伦理委员会批准),以荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测CML骨髓标本间期细胞BCR/ABL融合基因的表达,实时荧光定量(real-time fluorescence quntitative)pcr(RTQ-pcr)技术对HMGA2 mRNA的表达进行相对定量分析,采用秩和检验比较CML患者不同阶段HMGA2转录水平,以Spaearman方法分别对HMGA2转录水平与BCR/ABL融合基因水平、外周血液学参数进行相关性分析。结果:12例CML-CP患者BCR/ABL阳性细胞率为(58.08±39.21)%,HMGA2相对定量为2.39±1.86;12例CML-AP/BP患者BCR/ABL阳性细胞率为(87.50±16.21)%,HMGA2相对定量为91.78±14.07。CML-AP/BP患者HMGA2转录水平与CML-CP患者之间的差异有统计学意义(Z=-4.157,P<0.01),CML-AP/BP患者HMGA2转录水平与外周血原幼细胞数呈正相关关系(r=0.636,P=0.017)。结论:CML患者HMGA2转录水平在AP/BP期显著高于CP期,HMGA2有可能成为预测CML疾病演变、判断预后和指导临床治疗的可靠指标。

关键词：高迁移率蛋白A2基因(HMGA2) 慢性髓系白血病慢性期急变期加速期 BCR/ABL 实时荧光定量pcr

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实时荧光定量pcr检测肝癌细胞多药耐药相关蛋白MRP2、MRP3及MRP5 mRNA的表达

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南方医科大学学报 2008年第2期28卷 219-221,224页

作者：张磊方驰华范应方南方医科大学珠江医院普外科广东广州510282

目的研究多药耐药相关蛋白2(MRP2)基因及MRP3、MRP5基因在正常肝脏细胞系L-02、肝癌细胞系BEL及肝癌耐药细胞系BEL/ADM的表达差异,并探讨其在肝癌耐药中的意义。方法分别提取L-02、BEL及BEL/ADM细胞的总RNA,利用实时荧光定量pcr法检测M... 详细信息

目的研究多药耐药相关蛋白2(MRP2)基因及MRP3、MRP5基因在正常肝脏细胞系L-02、肝癌细胞系BEL及肝癌耐药细胞系BEL/ADM的表达差异,并探讨其在肝癌耐药中的意义。方法分别提取L-02、BEL及BEL/ADM细胞的总RNA,利用实时荧光定量pcr法检测MRP2、MRP3、MRP5基因的表达水平。结果MRP2基因在BEL/ADM细胞中的表达量明显高于在L-02、BEL细胞中的表达(P=0.000),而其在L-02、BEL两种细胞中的表达没有显著性差异(P=0.468);MRP3、MRP5基因表达量在L-02、BEL、BEL/ADM三种细胞中均有显著性差异(P=0.000)。结论MRP2可能参与了肝癌的内在性耐药,而MRP3、MRP5可能与肝癌的获得性耐药有关。

关键词：肝肿瘤多药耐药相关蛋白实时荧光定量pcr

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实时荧光定量pcr检测淋巴细胞中NKG2D、穿孔素和颗粒酶B基因的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第11期26卷 1108-1110页

作者：赵稳兴杨举伦李霞艾瑾李涛王力成都军区昆明总医院病理科云南昆明650032

目的:建立可用于测定淋巴细胞免疫功能的SYBRGreen I实时荧光定量pcr技术。方法:根据NCBI基因库中4种基因(NKG2D、穿孔素、颗粒酶B和内参照GAPDH)的序列,设计合成相应的引物,扩增上述基因。建立SYBRGreen I实时荧光定量pcr方法,检测肿... 详细信息

目的:建立可用于测定淋巴细胞免疫功能的SYBRGreen I实时荧光定量pcr技术。方法:根据NCBI基因库中4种基因(NKG2D、穿孔素、颗粒酶B和内参照GAPDH)的序列,设计合成相应的引物,扩增上述基因。建立SYBRGreen I实时荧光定量pcr方法,检测肿瘤患者外周血淋巴细胞和诱导培养的患者CIK细胞(cytokine induced killer,CIK)中NKG2D、穿孔素和颗粒酶B mRNA的含量。结果:应用设计的引物扩增NKG2D、穿孔素和颗粒酶B基因后,经琼脂糖凝胶电泳和溶解曲线分析表明具有特异性。SYBR Green I实时荧光定量pcr检测结果表明,肿瘤患者的淋巴细胞中颗粒酶B基因的表达降低,而经细胞因子和单克隆抗体诱导培养的肿瘤患者CIK细胞与其淋巴细胞相比,细胞中穿孔素和颗粒酶B基因的表达明显增加(P<0.01)。结论:该SYBRGreen I实时荧光定量pcr方法可用于检测淋巴细胞中NKG2D、穿孔素和颗粒酶B的mRNA的表达、作为研究淋巴细胞免疫功能的有力手段。

关键词：实时荧光定量pcr 细胞免疫 NKG2D 穿孔素颗粒酶B

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