检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2015年第7期31卷 612-617页

作者：曾航张玉林王麟刘鹏王玲北京大学基础医学院病原生物学系和感染病中心北京100191

目的兔戊型肝炎病毒(HEV)是近年来新发现的,根据其分子生物学特征可能成为HEV的新基因型。为提高对兔HEV的检出率,本研究设计了针对兔HEV RNA的特异性引物和TaqMan探针并对其进行考评。方法 1)从GenBank中下载14条兔HEV全长序列,分别在... 详细信息

目的兔戊型肝炎病毒(HEV)是近年来新发现的,根据其分子生物学特征可能成为HEV的新基因型。为提高对兔HEV的检出率,本研究设计了针对兔HEV RNA的特异性引物和TaqMan探针并对其进行考评。方法 1)从GenBank中下载14条兔HEV全长序列,分别在其ORF1、ORF3片段的保守区域设计一条TaqMan探针和一对上、下游特异性引物,其中ORF1片段的探针及引物为C组,ORF3片段的为B组;A组的探针及引物为Jothikumar N等所报道的通用引物;2)制备相应的质粒标准品来构建定量标准曲线,并利用上述3套引物、探针对49份兔粪便及44份兔血液样品进行检测,将B、C组检测结果与A组的检测结果进行比较。结果新建立了两套兔HEV定量pcr的TaqMan探针及引物(B、C组),其标准曲线的斜率分别为-3.455和-3.469;使用上述3套引物及探针(A、B、C组)对49份粪便标本进行荧光定量pcr检测,其HEV RNA阳性率分别为67.35%(33/49)、67.35%(33/49)、57.14%(28/49),平均HEV RNA(log copies/g)拷贝数为6.18、5.90、6.11;44份血液标本的HEV RNA阳性检出率分别为65.90%(29/44)、56.82%(25/44)、50.00%(22/44),平均HEV RNA(log copies/mL)拷贝数为3.62、3.43、3.03;结果显示以上3组探针及引物均可用于粪便和血液标本的定量检测。结论兔HEV虽然有其独特的基因结构,但使用HEV通用引物检测不影响检出率。

关键词：兔HEV TaqMan探针引物实时荧光定量pcr

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实时荧光定量pcr检测乳腺癌组织中KLK4 mRNA表达

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临床检验杂志 2007年第5期25卷 354-356页

作者：闻新棉于晶胡成进陈英剑济南市第四人民医院检验科济南250031 山东医学高等专科学校济南军区总医院实验诊断科

目的探讨KLK4基因在人乳腺癌组织中表达的临床意义。方法用实时荧光定量pcr(FQ-pcr)的方法检测39例乳腺癌组织和25例正常组织中KLK4 mRNA的表达,以及mRNA表达量与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、CerbB-2及肿瘤的转移情况进行相关性分... 详细信息

目的探讨KLK4基因在人乳腺癌组织中表达的临床意义。方法用实时荧光定量pcr(FQ-pcr)的方法检测39例乳腺癌组织和25例正常组织中KLK4 mRNA的表达,以及mRNA表达量与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、CerbB-2及肿瘤的转移情况进行相关性分析。结果正常乳腺组织和癌组织KLK4 mRNA的相对表达水平分别为0.0120±0.0044和0.0272±0.0067,两者差异显著(P<0.01);乳腺癌组织中KLK4的相对表达水平在ER(+)和ER(-)组分别为0.0269±0.0070和0.0276±0.0067;在PR(+)和PR(-)组分别为0.0270±0.0065和0.0275±0.0081;在CerbB-2(+)和CerbB-2(-)组分别为0.0270±0.0064和0.0301±0.0074;在肿瘤有、无转移组分别为0.0258±0.0061和0.0276±0.0066,各组间KLK4mRNA表达水平均无显著性差异(P>0.05)。结论在乳腺癌组织中KLK4 mRNA的表达水平显著高于正常乳腺组织,但在肿瘤是否转移,雌激素受体、孕激素受体及CerbB-2阳性和阴性组间无显著性差异。

关键词：乳腺癌 KLK4 mRNA 实时荧光定量pcr

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实时荧光定量pcr检测肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA水平

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中华内科杂志 2003年第10期42卷 722-723页

作者：王战坤邵俊斌陈智倪卫琴邵乐文陈离伟浙江大学医学院附属第一医院普内科杭州310003

在生理状态下，甲胎蛋白（AFP）基因主要由胎肝细胞表达产生，出生后该基因表达迅速受到抑制。肝细胞大量坏死或发生原发性肝癌时，AFP基因再次激活。我们采用以Taqman技术为基础的实时荧光定量pcr技术，检测各型肝癌患者外周血细胞中AF... 详细信息

在生理状态下，甲胎蛋白（AFP）基因主要由胎肝细胞表达产生，出生后该基因表达迅速受到抑制。肝细胞大量坏死或发生原发性肝癌时，AFP基因再次激活。我们采用以Taqman技术为基础的实时荧光定量pcr技术，检测各型肝癌患者外周血细胞中AFPmRNA水平，分析外周血中是否存在肝癌细胞，并判断该方法检测肝癌细胞血液转移的可行性。

关键词：实时荧光定量pcr 肝癌外周血甲胎蛋白 mRNA 肿瘤转移

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实时荧光定量pcr技术在金黄色葡萄球菌检测中的应用

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食品工业科技 2013年第9期34卷 359-363页

作者：韩齐孔保华李沛军李暮春东北农业大学食品学院黑龙江哈尔滨150030

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是主要的食源性致病菌之一。实时荧光定量pcr(Real-time pcr)技术是近年来广泛应用于食源性致病菌的快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高等特点。本文综述了Real-time pcr技术原理、分类及其在... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是主要的食源性致病菌之一。实时荧光定量pcr(Real-time pcr)技术是近年来广泛应用于食源性致病菌的快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高等特点。本文综述了Real-time pcr技术原理、分类及其在检测食品中金黄色葡萄球菌的应用,并对其应用前景进行了展望。

关键词：食品金黄色葡萄球菌实时荧光定量pcr . 检测

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实时荧光定量pcr中内参基因的选择

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微生物学通报 2010年第12期37卷 1825-1829页

作者：赵文静徐洁包秋华陈永福张和平内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室内蒙古呼和浩特010018

实时荧光定量pcr技术是分析基因表达谱的一种常用方法,在分析中选择合适的内参基因对数据进行校正是得到可信数据的关键。以Lactobacillus helveticus H9为研究对象,应用实时荧光定量pcr技术,评价了5种常用内参基因ldh、recA、rpoB、ga... 详细信息

实时荧光定量pcr技术是分析基因表达谱的一种常用方法,在分析中选择合适的内参基因对数据进行校正是得到可信数据的关键。以Lactobacillus helveticus H9为研究对象,应用实时荧光定量pcr技术,评价了5种常用内参基因ldh、recA、rpoB、gapdh和16S rRNA的表达稳定性,通过geNorm和NormFinder程序进行数据分析,结果表明5个候选内参基因在菌株不同的发酵时间点表达相对都较为稳定,结合两种分析得到其中最为稳定的基因是ldh,适合于用作后续实时荧光定量pcr试验中的内参基因。

关键词：实时荧光定量pcr 内参基因 GeNorm NormFinder

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实时荧光定量pcr在肿瘤研究中的应用

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肿瘤 2004年第2期24卷 196-197页

作者：汪洋宫琳琳邵淑娟大连医科大学辽宁省细胞分子生物学重点实验室大连116027

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,pcr)的出现使得人们对微量甚至单个细胞DNA的分析成为可能,并且显示出了前所未有的敏感性和特异性.但开始阶段pcr只局限于对DNA的定性研究,随着科技的发展,定量pcr应运而生.然而,所谓的"... 详细信息

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,pcr)的出现使得人们对微量甚至单个细胞DNA的分析成为可能,并且显示出了前所未有的敏感性和特异性.但开始阶段pcr只局限于对DNA的定性研究,随着科技的发展,定量pcr应运而生.然而,所谓的"定量pcr",其精确性与特异性也不是绝对的,直到实时荧光定量pcr(quantitative real timepcr)的出现,人们才真正在技术上实现了pcr从定性到定量的飞跃.本文试就其原理、特点、在肿瘤研究中的应用及其发展前景作一简要叙述.

关键词：实时荧光定量pcr 病原体肿瘤诊断学 DNA技术等位基因

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实时荧光定量pcr检测乙肝病毒DNA方法在绒促性素和尿促性素生产中的应用

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药物分析杂志 2011年第10期31卷 1914-1917页

作者：吴利红王灿邵泓陈钢上海市食品药品检验所上海201203

目的:验证实时荧光定量pcr(Real-time pcr)检测绒促性素(HCG)和尿促性素(HMG)生产工艺中尿液、粗品和原料药中乙肝病毒DNA(HBV DNA)的方法,并用该方法对HCG和HMG生产工艺中关键点进行控制。方法:在不同浓度的乙肝阳性血中添加HCG或HMG... 详细信息

目的:验证实时荧光定量pcr(Real-time pcr)检测绒促性素(HCG)和尿促性素(HMG)生产工艺中尿液、粗品和原料药中乙肝病毒DNA(HBV DNA)的方法,并用该方法对HCG和HMG生产工艺中关键点进行控制。方法:在不同浓度的乙肝阳性血中添加HCG或HMG的尿液、粗品和原料药,用Real-time pcr方法检测添加前后不同浓度乙肝阳性血中HBV DNA的浓度,计算出HBV DNA回收率,同时验证该方法的线性、重复性和灵敏度;用Real-time pcr方法对尿液、粗品和原料药样品进行HBV DNA检测,将检测出阳性的样品用ELISA方法检测,比较2种方法的检测结果差异。结果:Real-time pcr检测HBV DNA在104～***-1范围内线性关系良好,r2=0.9969;HCG或HMG尿液、粗品和原料药中添加不同浓度乙肝阳性血,HBV DNA回收率为94.9%～103.8%;3次重复实验相对标准偏差(RSD)均小于5%;最低检出限为500 ***-1。Real-time pcr检测出阳性的样品用ELISA方法检测乙肝表面抗原(HBsAg)均为阴性。结论:Real-time pcr可用于HCG和HMG生产工艺中尿液、粗品和原料药中HBV DNA的检测,同时也是用ELISA检测HCG和HMG中HBsAg的一种补充手段。

关键词：实时荧光定量pcr 乙肝病毒DNA 绒促性素尿促性素

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实时荧光定量pcr方法检测转基因玉米MIR604

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浙江农业学报 2017年第11期29卷 1769-1774页

作者：常丽娟宋君张富丽刘文娟唐春燕王东尹全四川省农业科学院分析测试中心四川成都610066

转基因玉米MIR604是瑞士先正达公司2005年研发的抗虫玉米,中国于2008年批准MIR604进口作为食品和饲料的加工原料。为了精确定量检测MIR604及其加工产品,在MIR604的左侧边界序列和玉米基因组之间设计引物和探针,成功建立了MIR604品系特... 详细信息

转基因玉米MIR604是瑞士先正达公司2005年研发的抗虫玉米,中国于2008年批准MIR604进口作为食品和饲料的加工原料。为了精确定量检测MIR604及其加工产品,在MIR604的左侧边界序列和玉米基因组之间设计引物和探针,成功建立了MIR604品系特异实时荧光定量pcr检测方法。采用该方法设计的引物和探针,对6种非转基因作物、MIR604及其他非目标转基因作物进行检测,除MIR604外,其余样品均未检测到MIR604分子片段的扩增信号;对已知含量为1%的MIR604标准品进行定量检测,测量值为1.07%,接近真实值1%;灵敏度实验结果显示,该方法能检测到仅5个拷贝的MIR604分子片段。该试验所建立的MIR604品系特异实时荧光定量pcr检测方法具有较高的特异性、准确度及灵敏度,可用于转基因玉米MIR604的定量检测。

关键词：转基因玉米MIR604 实时荧光定量pcr 特异性准确度灵敏度

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实时荧光定量pcr分析脐血T细胞亚群中TRECs水平

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免疫学杂志 2004年第5期20卷 407-407,409页

作者：李扬秋杨力建陈少华韩素芳周羽竝陈青山暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院生化教研室广东广州510632 暨南大学医学院流行病学教研室广东广州510632

近期研究发现成人胸腺仍存在活化T细胞合成的功能，：胸腺近期功能需要通过测定胸腺近期输出的幼稚（Nail）T细胞的数量来衡量。而能够作为Nai＊eT细胞的标志的是T细胞受体删除DNA环（T-cell receptor excision DNA circles，TRECs）［... 详细信息

近期研究发现成人胸腺仍存在活化T细胞合成的功能，：胸腺近期功能需要通过测定胸腺近期输出的幼稚（Nail）T细胞的数量来衡量。而能够作为Nai＊eT细胞的标志的是T细胞受体删除DNA环（T-cell receptor excision DNA circles，TRECs）［1］。我们的前期研究也提供了正常人外周血T细胞和胸腺细胞中TRECs含量的情况［2］，本研究进一步分析脐血中不同组分T细胞的TRECs含量特点。

关键词：实时荧光定量pcr 脐血 T细胞亚群 TRECs 胸腺细胞外周血

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实时荧光定量pcr检测猪源Mx1方法的建立及应用

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南京农业大学学报 2013年第1期36卷 92-96页

作者：张小敏周斌何丹妮庞然赵津陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据GenBank中的猪源抗病毒蛋白Mx1基因(poMx1)序列设计1对特异性引物,从Mx1基因全长片段中扩增和克隆了特异性的115 bp核苷酸片段。测序鉴定正确后将重组质粒进行定量并10倍倍比稀释作为扩增模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量pcr方法... 详细信息

根据GenBank中的猪源抗病毒蛋白Mx1基因(poMx1)序列设计1对特异性引物,从Mx1基因全长片段中扩增和克隆了特异性的115 bp核苷酸片段。测序鉴定正确后将重组质粒进行定量并10倍倍比稀释作为扩增模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量pcr方法,建立Mx1的标准曲线及回归方程。结果显示:该标准曲线的回归方程为Y=-2.986 3 lg X+38.239 3(R2=0.998 5),灵敏度为1×102μL-1;应用该方法对猪瘟兔化弱毒苗接种猪肾细胞(PK-15)后产生的poMx1 mRNA进行定量分析,发现病毒感染细胞4 h后,poMx1的表达量最高(P<0.01),然后随着时间的增加而缓慢减少。结论:建立的SYBRGreenⅠ实时荧光定量pcr方法可以检测poMx1 mRNA的表达水平。

关键词：猪源Mx1 实时荧光定量pcr 标准曲线

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