检索结果-内蒙古大学图书馆

蚕业科学 2022年第4期48卷 317-323页

作者：曾小群李跃东吴小锋浙江大学动物科学学院杭州310058 浙江省蚕蜂资源利用与创新研究重点实验室杭州310058

人表皮生长因子(hEGF)因具有促进表皮细胞增殖活性而被广泛用于烧伤、烫伤等医学领域。根据杆状病毒基因密码子偏好性优化hEGF序列,通过串联表达、融合表达以及构建携带双启动子和增强序列的载体等系列优化技术,提高重组hEGF在家蚕细胞... 详细信息

人表皮生长因子(hEGF)因具有促进表皮细胞增殖活性而被广泛用于烧伤、烫伤等医学领域。根据杆状病毒基因密码子偏好性优化hEGF序列,通过串联表达、融合表达以及构建携带双启动子和增强序列的载体等系列优化技术,提高重组hEGF在家蚕细胞中的表达水平。结果表明,通过上述一系列的优化方式可显著提高hEGF基因在BmN细胞中的转录水平,其中优化后hEGF的转录水平提高了24倍;Western blot分析表明,串联3个hEGF基因序列的蛋白质表达量最高。

关键词：家蚕杆状病毒表达系统人表皮生长因子优化表达串联表达双启动子

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鸡κ干扰素在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及其抗病毒活性检测

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生物技术进展 2020年第3期10卷 251-255页

作者：杨鑫宋浩志刘兴健李轶女张志芳中国农业科学院生物技术研究所北京100081

干扰素(interferon,IFN)是宿主先天免疫系统的重要组成部分,它是抵抗病原体的第一道防御。为了利用家蚕杆状病毒表达系统表达鸡κ干扰素,根据已报道的序列对鸡κ干扰素的基因序列进行家蚕密码子优化,并利用共转染技术成功构建了表达用... 详细信息

干扰素(interferon,IFN)是宿主先天免疫系统的重要组成部分,它是抵抗病原体的第一道防御。为了利用家蚕杆状病毒表达系统表达鸡κ干扰素,根据已报道的序列对鸡κ干扰素的基因序列进行家蚕密码子优化,并利用共转染技术成功构建了表达用重组杆状病毒。将重组杆状病毒感染家蚕,成功获得了大量鸡κ干扰素的表达产物,并通过Western blot技术对产物进行了检测鉴定。用细胞病变抑制法对干扰素κ抑制VSV-GFP感染鸡成纤维细胞(CEF)的效果进行检测,结果显示鸡干扰素κ的抗病毒效价可以达到(1.04±0.23)×107 IU·mL-1以上。高效价鸡κ干扰素的成功表达为其在抗家禽疫病等方面提供了重要的试验数据。

关键词：鸡κ干扰素家蚕杆状病毒表达系统抗病毒活性检测

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轮状病毒结构蛋白VP4在家蚕杆状病毒表达系统中的表达

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蚕业科学 2019年第2期45卷 225-230页

作者：靳洋洋陈贝妮李司浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室

轮状病毒(rotavirus,RV)是引起全球婴幼儿及幼畜非细菌性胃肠炎的主要病原体之一,VP4蛋白是轮状病毒的主要中和抗原。利用载体RD-BmBacmid与重组载体pBacPAK8-VP4共转染家蚕细胞BmN获得重组家蚕杆状病毒BmNPV-VP4,并用该病毒感染BmN细... 详细信息

轮状病毒(rotavirus,RV)是引起全球婴幼儿及幼畜非细菌性胃肠炎的主要病原体之一,VP4蛋白是轮状病毒的主要中和抗原。利用载体RD-BmBacmid与重组载体pBacPAK8-VP4共转染家蚕细胞BmN获得重组家蚕杆状病毒BmNPV-VP4,并用该病毒感染BmN细胞及家蚕5龄幼虫,从而在BmN细胞及家蚕中表达TB-Chen株轮状病毒的VP4蛋白。Western blotting检测到BmN细胞及家蚕幼虫血淋巴中均出现88 kD的特异性条带,证明VP4蛋白在BmN细胞和家蚕中获得了表达。ELISA检测结果显示,VP4蛋白在BmN细胞和家蚕幼虫血淋巴中的表达分别在感染后4 d和6 d达到最高水平,每个细胞和每mL血淋巴中的表达量分别为4.28 pg和1.61μg。研究结果为轮状病毒口服疫苗的研制奠定了基础。

关键词：轮状病毒 VP4蛋白 RD-BmBacmid载体家蚕杆状病毒表达系统

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甲型流感病毒重组抗体在家蚕杆状病毒表达系统中的表达与检测

甲型流感病毒重组抗体在家蚕杆状病毒表达系统中的表达与检测

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作者：王先翔安徽农业大学

学位级别：硕士

甲型流感病毒对人类和禽类的威胁旷日持久,严重影响着人类健康和养殖业的发展。本研究所涉及的FI6抗体来源于人的浆细胞,是前人通过单细胞培养法从志愿者的外周血浆细胞中分离出一种单克隆抗体,能够识别并结合H1-H16所有血清型亚型的病... 详细信息

甲型流感病毒对人类和禽类的威胁旷日持久,严重影响着人类健康和养殖业的发展。本研究所涉及的FI6抗体来源于人的浆细胞,是前人通过单细胞培养法从志愿者的外周血浆细胞中分离出一种单克隆抗体,能够识别并结合H1-H16所有血清型亚型的病毒。本研究将FI6的VL段和VH段通过短肽相连得到其Fv段,随后使用铰链(Hinge)与鸡IgY和人IgG的Fc段相连,得到两条抗体,分别为鸡源性抗体(FI6C)和人源性抗体(FI6H)。将氨基酸序列进行密码子优化后加入Kozak序列以期提高其翻译起始效率;添加终止密码子TAA以提高蛋白翻译终止效率;删除基因内部常用酶切位点,在两端加入BamH I、EcoR I和Xba I、PstI酶切位点以便进行基因克隆操作。利用酶切连接的方法将目的片段连接至pVL1393转移载体,随后通过转移载体与失活拯救型穿梭质粒共转染家蚕细胞将目的片段重组入杆状病毒中。随后感染五龄家蚕,收集蚕血淋巴,通过PCR鉴定,Western blot等方法鉴定其在家蚕中表达。随后进行体外实验来检测所设计的重组抗体的生物学活性,血凝抑制实验显示FI6H和FI6C具有一定的血凝抑制效果,两者均为1:160,与血凝素结合的能力相当。而在鸡成纤维细胞上进行的病毒中和实验显示FI6H对细胞的保护作用要比FI6C 好,FI6H 组 PD50 为 104+23/mL 蚕血淋巴;FI6C 组 PD50 为 10-2.79/mL蚕血淋巴。结果显示本研究成功利用家蚕-杆状病毒表达系统来表达所设计的两条重组单链甲型流感病毒中和抗体,对其进行的生物学活性检测表明其具有良好的生物学活性。为对抗甲型流感病毒的广谱抗体的规模化生产奠定了基础,同时也为广谱疫苗的研发提供了思路。

关键词：甲型流感病毒中和抗体单链抗体家蚕杆状病毒表达系统血凝抑制

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羊λ3干扰素在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及其抗病毒活性检测

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生物技术进展 2019年第5期9卷 502-508页

作者：王先翔赵泽王朋刘兴健胡小元张志芳李轶女房岭丽叶爱华安徽农业大学生命科学学院合肥230036 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

λ干扰素作为一种多效性细胞因子属于Ⅲ型干扰素,研究表明其能够对Ⅰ型和Ⅱ型干扰素逃逸的病毒起作用。为了利用家蚕杆状病毒表达系统高效表达出具有高抗病毒活性的羊λ3干扰素(OvIFN-λ3),首先将OvIFN-λ3基因优化后合成,将其克隆至转... 详细信息

λ干扰素作为一种多效性细胞因子属于Ⅲ型干扰素,研究表明其能够对Ⅰ型和Ⅱ型干扰素逃逸的病毒起作用。为了利用家蚕杆状病毒表达系统高效表达出具有高抗病毒活性的羊λ3干扰素(OvIFN-λ3),首先将OvIFN-λ3基因优化后合成,将其克隆至转移载体pVL1393中,得到重组质粒pVL1393-OvIFNλ3,再将重组质粒与失活拯救型家蚕杆状病毒穿梭载体reBmBac DNA共转染家蚕卵巢传代细胞Bm-N,得到含OvIFN-λ3基因的重组杆状病毒。随后利用重组杆状病毒感染五龄起蚕,待其发病后收集蚕血淋巴。采用微量细胞病变抑制法在羊肾细胞上进行重组表达绿色荧光蛋白的水疱型口炎病毒(recombinant vesicular stomatitis virus expressing green fluorescent protein,VSV-GFP)的攻毒实验,测定OvIFN-λ3抗病毒活性可达(6.5±0.27)×10^5 U/mL;利用空斑筛选法筛选重组病毒,感染家蚕后,测定其效价最高可达(3.1±0.42)×10^6 U/mL,表达量明显提高。家蚕杆状病毒表达系统为羊λ3干扰素产品的大量生产应用提供了新方法。

关键词：羊λ3干扰素家蚕杆状病毒表达系统抗病毒活性检测

来源：评论

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羊λ3干扰素在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及其抗病毒活性检测

羊λ3干扰素在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及其抗病毒活性检测

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中国生物工程学会第十三届学术年会暨2019年全国生物技术大会

作者：王先翔赵泽王朋刘兴健胡小元张志芳李轶女房岭丽叶爱华安徽农业大学生命科学学院中国农业科学院生物技术研究所

关键词：抗病毒活性家蚕杆状病毒表达系统干扰素

来源：评论

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一种延长家蚕杆状病毒表达系统宿主细胞存活期增加蛋白质表达量的方法

一种延长家蚕杆状病毒表达系统宿主细胞存活期增加蛋白质表达量的...

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作者：张孝林蒋安民汪建飞戚邦华贡成良范涛张钦元 233100 安徽省蚌埠市龙子湖区黄山大道(龙湖校区)

本发明属于生物技术制药领域，涉及一种延长家蚕杆状病毒表达系统宿主细胞存活期增加蛋白质表达量的方法。以家蚕细胞为宿主的家蚕杆状病毒表达系统是一个裂解性表达系统，病毒感染后宿主细胞存活期很短，严重影响蛋白质表达量。本发明... 详细信息

标准号: CN106086074B

本发明属于生物技术制药领域，涉及一种延长家蚕杆状病毒表达系统宿主细胞存活期增加蛋白质表达量的方法。以家蚕细胞为宿主的家蚕杆状病毒表达系统是一个裂解性表达系统，病毒感染后宿主细胞存活期很短，严重影响蛋白质表达量。本发明利用抗氧化剂葡萄籽原花青素处理病毒感染前的宿主细胞，使病毒感染后的宿主细胞存活期延长，蛋白质的表达水平提高，表达量增加，同时表达获得的蛋白质能够得到更加充分的修饰和加工，从而具有更好的生物活性，用该方法处理家蚕的幼虫和蚕蛹能够提高其外源蛋白质的表达水平。本发明为家蚕表达系统提高蛋白表达量提供了新的技术方法，其推广应用将在蛋白质表达产业中产生重大的研究和经济价值。

关键词：宿主细胞病毒感染存活期家蚕杆状病毒表达系统蛋白质表达水平表达量葡萄籽原花青素宿主蛋白质表达量家蚕表达系统生物技术制药蛋白表达量蛋白质表达影响蛋白质表达系统家蚕细胞抗氧化剂生物活性蚕蛹幼虫裂解性家蚕修饰加工研究

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牛λ3干扰素在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及其抗病毒活性检测

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生物技术进展 2018年第5期8卷 420-425,466页

作者：赵璐璐赵泽杨鑫刘兴健胡小元张志芳李轶女中国农业科学院生物技术研究所北京100081 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018

牛λ3干扰素(BoIFN-λ3)是一种新型干扰素,可应用于牛传染性疾病的防治。在家蚕杆状病毒表达系统中可实现BoIFN-λ3的高效表达。首先在优化合成的BoIFNλ3基因起始密码子上游引入Kozak序列,将其克隆至转移载体pVL1393,获得pVL1393-BoIFN... 详细信息

牛λ3干扰素(BoIFN-λ3)是一种新型干扰素,可应用于牛传染性疾病的防治。在家蚕杆状病毒表达系统中可实现BoIFN-λ3的高效表达。首先在优化合成的BoIFNλ3基因起始密码子上游引入Kozak序列,将其克隆至转移载体pVL1393,获得pVL1393-BoIFN-λ3重组质粒。利用本实验室构建的家蚕杆状病毒表达系统,获得整合BoIFN-λ3基因的重组家蚕杆状病毒,将重组病毒感染五龄起蚕,在蚕血淋巴中得到表达产物BoIFN-λ3。采用微量细胞病变抑制法在MDBK/VSV*GFP系统检测蚕体中表达BoIFN-λ3的效价可达(2.7±0.12)×10~5U/m L,利用空斑筛选法筛选重组病毒,测得最高表达量的重组病毒表达的BoIFN-λ3的效价可达(8.1±0.52)×10~5U/m L,表达量提高3倍。家蚕杆状病毒表达系统为优质高效的牛λ3干扰素产品的生产提供了一种新方法。

关键词：牛λ3干扰素家蚕杆状病毒表达系统抗病毒活性检测

来源：评论

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应用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕培养细胞和幼虫体内表达β-淀粉样蛋白

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蚕业科学 2016年第5期42卷 850-855页

作者：李司张海花陆玲鸿张文平浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所、浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

作为阿尔茨海默症(AD)重要神经病理学特征之一的脑内老年斑主要由β-淀粉样蛋白Aβ40和Aβ42聚集而成,Aβ42是其中的毒性成分。Aβ的特异性主动免疫对不同的转基因AD模型小鼠均有治疗作用,但临床试验中以注射方式给药容易诱发炎症反应... 详细信息

作为阿尔茨海默症(AD)重要神经病理学特征之一的脑内老年斑主要由β-淀粉样蛋白Aβ40和Aβ42聚集而成,Aβ42是其中的毒性成分。Aβ的特异性主动免疫对不同的转基因AD模型小鼠均有治疗作用,但临床试验中以注射方式给药容易诱发炎症反应。为了能够更好、更安全地采用主动的Aβ免疫疗法达到预防和治疗AD的目的,尝试用家蚕杆状病毒表达系统表达Aβ42蛋白。将Aβ42基因克隆入转移载体质粒pB acP AK8中,并使该重组质粒和家蚕杆状病毒Bm-BacP AK6线性化的DNA共转染家蚕卵巢培养细胞BmN,经筛选、纯化获得的重组病毒命名为BmN PV-Aβ42。用BmN PV-Aβ42感染BmN细胞和家蚕5龄起蚕后,利用Western blotting在BmN细胞和5龄幼虫血淋巴中均可检测到5 kD左右的特异性条带,证明重组Aβ42蛋白表达成功。ELISA检测显示,重组Aβ42肽在感染后第4天的BmN细胞和感染后第6天的5龄幼虫血淋巴中的表达量分别达到1.1 pg/个、2μg/mL。进一步提高Aβ42在家蚕杆状病毒表达系统中的表达效率,有望为研发预防和治疗阿尔茨海默症的可食性疫苗提供新型原料。

关键词：阿尔茨海默症 β-淀粉样蛋白免疫家蚕杆状病毒表达系统培养细胞幼虫血淋巴

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一种延长家蚕杆状病毒表达系统宿主细胞存活期增加蛋白质表达量的方法

一种延长家蚕杆状病毒表达系统宿主细胞存活期增加蛋白质表达量的...

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作者：张孝林蒋安民汪建飞戚邦华贡成良范涛张钦元 233100 安徽省蚌埠市龙子湖区黄山大道(龙湖校区)

标准号: CN106086074A

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