检索结果-内蒙古大学图书馆

蚕业科学 2015年第4期41卷 682-687页

作者：陈晓妍李皓洋胡小元吕言娜李轶女张志芳易咏竹江苏科技大学江苏镇江212003 中国农业科学院生物技术研究所北京100081 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018

将优化合成的猫ω型干扰素基因Fe IFN-ω2和Fe IFN-ω9克隆到杆状病毒转移载体p VL1393的多角体蛋白基因启动子下游,与orf1629基因缺损的家蚕杆状病毒Bm-Bacmid DNA共转染Bm N细胞进行同源重组,将获得的重组病毒感染家蚕5龄幼虫,利用家... 详细信息

将优化合成的猫ω型干扰素基因Fe IFN-ω2和Fe IFN-ω9克隆到杆状病毒转移载体p VL1393的多角体蛋白基因启动子下游,与orf1629基因缺损的家蚕杆状病毒Bm-Bacmid DNA共转染Bm N细胞进行同源重组,将获得的重组病毒感染家蚕5龄幼虫,利用家蚕生物反应器表达猫ω型干扰素。采用微量细胞病变抑制法在CRFK细胞/VSV*GFP系统上检测家蚕幼虫血淋巴中表达的重组猫ω型干扰素具有抗病毒活性,其中表达产物重组Fe IFN-ω2的抗病毒活性可达6.3×105U/m L,而重组Fe IFN-ω9的抗病毒活性较低。研究结果为利用家蚕生物反应器生产重组猫ω型干扰素生物制剂奠定了一定的试验基础。

关键词：猫ω型干扰素家蚕杆状病毒表达系统抗病毒活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

犬α干扰素在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及其抗病毒活性的测定

引用

生物技术通报 2015年第6期31卷 216-220页

作者：李皓洋胡小元易咏竹杨鑫张志芳李轶女中国农业科学院生物技术研究所北京100081 中国农业科学院蚕业研究所镇江212018

犬α干扰素(Ca IFNα)在犬病防治过程中应用广泛。旨在开发一种高效的Ca IFNα表达方法。首先按家蚕密码子的偏好性对Gen Bank中的一个Ca IFNα基因进行了优化与合成,将其克隆到杆状病毒转移载体p VL1393中,并与亲本病毒Bm Bacmid共转... 详细信息

犬α干扰素(Ca IFNα)在犬病防治过程中应用广泛。旨在开发一种高效的Ca IFNα表达方法。首先按家蚕密码子的偏好性对Gen Bank中的一个Ca IFNα基因进行了优化与合成,将其克隆到杆状病毒转移载体p VL1393中,并与亲本病毒Bm Bacmid共转染家蚕细胞进行细胞内重组。得到的重组病毒用于感染家蚕幼虫,收集发病幼虫的蚕血淋巴用于Ca IFNα检测。采用细胞病变抑制法在MDCK-VSV*GFP系统中测定其抗病毒活性。结果显示家蚕表达的Ca IFNα能有效抑制VSV*GFP在细胞内的复制,其抗病毒活性不低于1.78×106U/m L。

关键词：犬α干扰素家蚕杆状病毒表达系统抗病毒活性检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用家蚕杆状病毒表达系统表达葡萄白藜芦醇芪合酶基因

引用

药物生物技术 2014年第2期21卷 107-110页

作者：潘晶晶潘华晔严珍珍叶甫云张耀洲吕正兵浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室浙江杭州310018 上海科爱生物技术有限公司上海200233

通过提取葡萄幼叶总RNA,用RT-PCR的方法获得白藜芦醇芪合酶基因,并将其成功克隆到pFastBac HTA中,获得重组pFastBac HTA-STS载体,转化DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,筛选获得重组Bacmid DNA后转染家蚕BmN细胞,进一步筛选获得重组杆状病毒,... 详细信息

通过提取葡萄幼叶总RNA,用RT-PCR的方法获得白藜芦醇芪合酶基因,并将其成功克隆到pFastBac HTA中,获得重组pFastBac HTA-STS载体,转化DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,筛选获得重组Bacmid DNA后转染家蚕BmN细胞,进一步筛选获得重组杆状病毒,重组病毒接种家蚕蛹,工程蚕蛹匀浆后经初步纯化收获粗酶液,利用粗酶液对葡萄提取液进行转化,体外生物合成白藜芦醇,提取液中的白藜芦醇含量显示出明显的上升。该研究为体外生物合成白藜芦醇提供了新途径。

关键词：白藜芦醇家蚕杆状病毒表达系统体外生物合成

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人血清对氧磷酶1在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及活性检测

引用

蚕业科学 2014年第3期40卷 482-487页

作者：谭淑敏李杰王小飞舒特俊陈剑清张耀洲于威浙江理工大学生物化学研究所杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶,在水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂中发挥重要作用。利用已构建的含人血清pon1基因的原核表达载体pET-28a-pon1,在***中诱导表达人血清PON1,通过Ni-NTA亲和层析... 详细信息

对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶,在水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂中发挥重要作用。利用已构建的含人血清pon1基因的原核表达载体pET-28a-pon1,在***中诱导表达人血清PON1,通过Ni-NTA亲和层析纯化后制备兔多克隆抗体;利用Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒vBm-pon1,并感染家蚕5龄幼虫,经SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定人血清PON1在蚕体内成功表达,并获得了纯度较高的重组人血清PON1。以对氧磷为底物,对2个表达系统获得的重组人血清PON1的酶活性进行检测,结果表明在家蚕幼虫体内表达并纯化的重组人血清PON1的酶活性要明显高于在***中表达的人血清PON1蛋白。推测家蚕杆状病毒表达系统比原核表达系统多了糖基化、磷酸化等蛋白质修饰功能。进一步试验验证家蚕幼虫表达的重组人血清PON1去糖基化后其酶活性丧失,表明糖基修饰对于维持PON1的生物学功能至关重要。

关键词：家蚕杆状病毒表达系统人血清对氧磷酶1 酶活性糖基化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中的表达

引用

蚕业科学 2014年第4期40卷 672-680页

作者：盛稳稳郭庆拓陈剑清崔立旺张耀洲于威舒特俊盛清浙江理工大学生物化学研究所杭州310018 宾夕法尼亚州立大学美国宾夕法尼亚州16802 天津市国际生物医药联合研究院天津310450 天津大学天津310450 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25是间日疟原虫有性生殖期表达的表面蛋白,可以抑制疟原虫在媒介按蚊体内的有性生殖及孢子增殖,有效地阻断疟疾病原从按蚊向人体的传播。为了探索该疫苗高效、低成本生产的新途径,进行了Pvs25在家蚕杆... 详细信息

间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25是间日疟原虫有性生殖期表达的表面蛋白,可以抑制疟原虫在媒介按蚊体内的有性生殖及孢子增殖,有效地阻断疟疾病原从按蚊向人体的传播。为了探索该疫苗高效、低成本生产的新途径,进行了Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中表面展示表达的初步试验。首先将经过非功能区去除和密码子优化的间日疟原虫Pvs25基因克隆至转移载体pFastBacHTb,构建重组质粒pET32a-Pvs25并转化*** Rosetta菌株,诱导后成功表达了Pvs25蛋白,利用Ni-NTA亲和层析的方法纯化重组Pvs25蛋白,免疫BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,利用Protein A抗体纯化柱纯化后的抗体经间接ELISA法测定其效价为1∶12 800;利用Bac-to-Bac系统构建含Pvs25基因的重组杆状病毒vBmPvs25,接种BmN细胞和家蚕5龄幼虫,经SDS-PAGE与Western blotting分析表明Pvs25在BmN细胞和幼虫中均成功表达;构建vBmgp64-CMV-Pvs25表面展示重组病毒,检测到Pvs25在BmN细胞中表达并展示于细胞和杆状病毒囊膜上。研究结果为利用家蚕杆状病毒表达系统生产间日疟疾传播阻断候选疫苗奠定了一定的试验基础。

关键词：间日疟原虫 Pvs25蛋白传播阻断疫苗家蚕杆状病毒表达系统表面展示多克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基因Ⅶ型新城疫病毒F基因在家蚕杆状病毒表达系统的表达

基因Ⅶ型新城疫病毒F基因在家蚕杆状病毒表达系统的表达

引用

作者：王智权甘肃农业大学

学位级别：硕士

【目的】新城疫（Newcastle disease，ND）是分布于全球是禽类的一种严重疾病，不但对家禽养殖带来巨大威胁而且会导致经济损失。基因VII型新城疫病毒F基因在家蚕杆状病毒表达系统中成功的表达，为进一步研究NDV抗原抗体检测试剂和新城... 详细信息

【目的】新城疫（Newcastle disease，ND）是分布于全球是禽类的一种严重疾病，不但对家禽养殖带来巨大威胁而且会导致经济损失。基因VII型新城疫病毒F基因在家蚕杆状病毒表达系统中成功的表达，为进一步研究NDV抗原抗体检测试剂和新城疫基因工程疫苗奠定了基础。【方法】（1）对原始序列进行密码子优化后人工合成，是以Genbank中新城疫病毒F基因序列（登录号：HM74894）为基础的。本试验利用聚合酶链式反应技术，将对新城疫病毒F基因上651pb进行扩增，此区域为433～1083，有两个抗原位点编码217个氨基酸残基。PCR扩增的目的片段克隆到表达载体pET28a(+)上，经IPTG诱导表达，通过基质辅助激光解析电离-串联飞行时间质谱（MALDI-TOF-TOF/MS）分析，将亲和层析纯化的目的蛋白4次免疫小鼠，制备鼠源多克隆抗血清。（2）利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕5龄幼虫体内表达新城疫病毒F基因。将优化、合成的VII型新城疫病毒F基因克隆到杆状病毒转移载体pVL1393的多角体蛋白基因启动子下游，与开放阅读框1629缺损的亲本病毒Bm-Bacmid DNA共转染BmN细胞进行同源重组后，将获得重组病毒接种5龄幼虫，进行目的蛋白表达。【结果】（1）通过酶切和基因测序表明目的基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)中，重组质粒在37℃0.5mmol/L IPTG诱导表达4h后经电泳分析目的条带清晰，与预期结果一致。通过基质辅助激光解析电离-串联飞行时间质谱分析表达的蛋白与理论序列一致。将纯化蛋白免疫小鼠获得多抗血清效价可达1:3200，可用于检测真核表达产物。（2）Western-blot杂交分析证明在感病的幼蚕血淋巴中可检测到分子质量约59ku的目的蛋白条带。【结论】（1）成功获得用于检测NDV真核表达产物的多抗；（2）利用家蚕杆状病毒表达系统成功表达基因VII型新城疫病毒F基因。本研究为下一步进行动物实验以及研究NDV基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：新城疫病毒 F基因家蚕杆状病毒表达系统抗血清制备重组病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

家蚕杆状病毒表达系统及其在口蹄疫疫苗研究中的应用

引用

中国预防兽医学报 2013年第9期35卷 776-778页

作者：关洪鑫李志勇白银梅柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原学生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫（Foot and mouth disease, FMD）是由FMD病毒（FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性人兽共患传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须通报的动物传染病，我国将其列为一类动物传染病。该病传播途径多，传播... 详细信息

口蹄疫（Foot and mouth disease, FMD）是由FMD病毒（FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性人兽共患传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须通报的动物传染病，我国将其列为一类动物传染病。该病传播途径多，传播速度快。目前除了北美、澳洲等地区外，世界范围内多次暴发流行。最近几年，一些已经消灭FMD的国家又再次爆发，FMD防制形势依然严峻。在FMD防制中，加强流行病学监测和采取疫苗免疫是防制其发生的主要措施和关键环节。因此，特异性诊断抗原的制备和新型疫苗的开发就显得尤为重要。

关键词：口蹄疫疫苗家蚕杆状病毒表达系统 FMD病毒世界动物卫生组织人兽共患传染病动物传染病应用流行病学监测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人对氧磷酶1在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及活性分析

人对氧磷酶1在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及活性分析

引用

作者：谭淑敏浙江理工大学

学位级别：硕士

对氧磷酶1（paraoxonase1，PON1）是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶。它能通过催化磷酸酯键的水解，来降解有机磷酸、芳香羟基酸酯和氨基甲酸酯，从而对水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂发挥重要作用。近年来研究发现，PON1具有... 详细信息

对氧磷酶1（paraoxonase1，PON1）是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶。它能通过催化磷酸酯键的水解，来降解有机磷酸、芳香羟基酸酯和氨基甲酸酯，从而对水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂发挥重要作用。近年来研究发现，PON1具有抑制低密度脂蛋白氧化的作用，与动脉粥样硬化，慢性肝损伤、冠心病及Ⅱ型糖尿病等多种疾病的发病有密切关系。\n 在本研究中，我们首先利用实验室构建的含有pon1基因的重组表达质粒pET-28a-pon1，经IPTG诱导表达目的蛋白PON1。经过Ni-NTA亲和层析纯化后，获得纯化的目的蛋白，用于PON1蛋白兔多克隆抗体的制备，为后续的真核表达产物检测与纯化奠定基础。\n 家蚕杆状病毒表达系统为真核表达系统，具有高效、安全性高、表达产物翻译后修饰水平高、生产成本低等优势，是外源蛋白研究的理想表达系统。本研究利用该系统表达了pon1。首先，利用构建了重组转移载体pFastBac1-pon1，经定点转座重组构建了重组杆状病毒vBm-pon1。对重组病毒进行滴度测定，然后以病毒感染的家蚕BmN细胞上清接种家蚕五龄幼虫，待出现明显发病症状后收集蚕血淋巴，用于后续的目的蛋白纯化和活性测定。利用亲和层析柱从蚕血淋巴中纯化得到PON1，并与原核表达纯化的PON1进行生物学活性比对，结果表明家蚕中表达的PON1酶活性明显高于原核表达产物。为了研究糖基化修改对PON1酶活性的影响，我们利用N型糖苷酶PNGaseF对纯化的PON1进行酶切去糖基化分析，酶切后的PON1在Westernblotting上显示比去糖基化前小1～2kD，说明PON1蛋白有N型糖苷链修饰，但去糖基化后比预期的分子量还稍大，说明还可能存在O-糖基化。我们又进一步分析了糖基化修饰对目的蛋白生物学活性的影响，结果表明当将家蚕表达的PON1去糖基化后，酶活性丧失，表明糖基修饰对于维持PON1的生物学功能至关重要。上述研究工作将为今后深入了解PON1的生物学功能提供理论依据，同时也将为实现其产业化生产奠定基础。

关键词：家蚕杆状病毒表达系统对氧磷酶1 蛋白纯化活性测定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

A组轮状病毒结构蛋白VP6在家蚕杆状病毒表达系统中的表达

引用

蚕业科学 2012年第6期38卷 1024-1028页

作者：李司钟云平张海花应慧慧于威张耀洲浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所、浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

A组轮状病毒(rotavirus,RV)是婴幼儿严重病毒性腹泻的主要病原,VP6为轮状病毒的主要结构蛋白之一,天然VP6具有很强的抗原性和免疫原性。通过基因重组技术将A组轮状病毒T114中国地方株VP6基因克隆入转移载体质粒pBacPAK8中,并将重组质粒p... 详细信息

A组轮状病毒(rotavirus,RV)是婴幼儿严重病毒性腹泻的主要病原,VP6为轮状病毒的主要结构蛋白之一,天然VP6具有很强的抗原性和免疫原性。通过基因重组技术将A组轮状病毒T114中国地方株VP6基因克隆入转移载体质粒pBacPAK8中,并将重组质粒pBacPAK8-VP6与线性化家蚕杆状病毒Bm-BacPAK6DNA共转染BmN细胞,获得重组病毒BmNPV-VP6。用BmNPV-VP6感染BmN细胞和家蚕5龄幼虫,Western blotting检测表明在BmN细胞和家蚕5龄幼虫的血淋巴中均可检测到120 kD的特异性条带,提示重组VP6蛋白在家蚕中获得表达,与VP6三体形式的大小相符合。ELISA检测结果显示,重组VP6蛋白在BmN细胞和家蚕5龄幼虫血淋巴中的表达分别在感染后第4天和第6天达到最高水平。VP6在家蚕杆状病毒表达系统中的成功表达可为新型轮状病毒疫苗的研制提供新的途径。

关键词： A组轮状病毒 VP6蛋白家蚕杆状病毒表达系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用家蚕生产一种表达COVID-19抗原（RBD蛋白）的嗜呼吸道重组腺相关病毒载体

利用家蚕生产一种表达COVID-19抗原（RBD蛋白）的嗜呼吸道重组腺...

引用

作者：刘晓炫江苏大学

学位级别：硕士

新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)是一种高传染性和致死性的病毒,其刺突蛋白(Spike)在新型冠状病毒疫苗的开发中常作为关键抗原,能够引发人体产生高效的体液免疫及细胞免疫。单独以S蛋白上的... 详细信息

新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)是一种高传染性和致死性的病毒,其刺突蛋白(Spike)在新型冠状病毒疫苗的开发中常作为关键抗原,能够引发人体产生高效的体液免疫及细胞免疫。单独以S蛋白上的受体结合域(Receptor binding domain,RBD)作为免疫原也是目前常用的疫苗研发策略之一。腺相关病毒(Adeno-Associated Virus,AAV)作为一种复制缺陷型病毒,其低免疫原性、多种组织趋向性、非致病性以及对外源基因表达的稳定性等特点,为成为基因治疗的优良递送载体创造了条件。AAV在抗病毒疫苗领域的研究表明AAV诱导的免疫反应表现出比其他类型疫苗(包括重组蛋白、灭活病毒)更高效持久的效果。本课题中使用的AAV2.5Tcap是在定向进化条件下由AAV2(aa1-128)和AAV5(aa129-725)进行重组获得,其中第581位氨基酸由A突变成T。这种重组型衣壳包装的AAV对呼吸道上皮细胞表现出了更强的结合力,并且已经证实能够成功介导囊性纤维化跨膜传导,纠正人类囊性纤维化(CF)的氯离子运输缺陷。这一重组病毒载体具有成为呼吸道相关疾病基因治疗以及病毒疫苗载体的潜力。基于AAV在基因治疗和抗病毒疫苗领域广阔的应用前景,AAV产量需求激增,获得一种低成本且高产的AAV生产体系成为关键。目前存在的rAAV生产方式中,昆虫/杆状病毒表达系统是其中较为高效的生产方式之一。我们利用家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus,Bm NPV)表达系统,以家蚕生物反应器为平台生产一种嗜呼吸道的重组腺相关病毒rAAV2.5T-RBD,以探索利用rAAV生产针对新冠病毒的高特异性病毒载体疫苗的可行性。本实验中,我们首先构建并验证了重组质粒pAAV-R2.5C和pAAV-RBD,同商品化的p Helper质粒共同在哺乳动物细胞系AAV293中进行三质粒转染,并验证目的蛋白的表达。将蛋白表达盒克隆入杆状病毒表达系统的穿梭载体,构建pFastBacAAV2ITR/RBD、pFastBacAAV2.5TCap,进而筛选重组杆粒并转染家蚕Bm N细胞系获得r Bm NPV-AAV2ITR/RBD和r Bm NPV-AAV2.5TCap。通过检测重组杆状病毒共感染后标记蛋白EGFP、病毒载体蛋白Rep及Cap确定各蛋白均可以稳定表达至P4代,且在P3代达到峰值。以直接注射的方式将两种P3代的重组杆状病毒共感染5龄起蚕的家蚕幼虫,感染后72h可观察到重组病毒中的绿色荧光蛋白在幼虫体内高效表达,检测已发病幼虫的组织和器官发现血淋巴和脂肪体中蛋白表达量高。同时,利用P3代重组病毒注射感染家蚕蚕蛹,48h后即可检测到各蛋白的高效表达,证明目的蛋白在蚕蛹中的表达要早于家蚕幼虫。重组型AAV载体的纯化方法对载体的产量和质量有很大的影响。我们通过预实验对比氯化铯(CsCl)超速离心与碘克沙醇(iodixanol)密度梯度超速离心后,选择用后者进行rAAV2.5T-RBD的纯化,碘克沙醇密度梯度离心法不仅在用时上大大节省时间,分离效果也明显优于氯化铯法。经纯化后的病毒样品利用透射电子显微镜(TEM)可观察到20-25nm左右的病毒粒子,但Bm N细胞中所纯化得到的病毒粒子多为未成功包装的AAV2.5T衣壳,q PCR检测可知Bm N细胞中的完整病毒粒子量远低于家蚕和蚕蛹的纯化样品。而家蚕和蚕蛹纯化样品中虽能得到较为完整的病毒粒子,但在TEM结果中显示样品中含有较多直径为10nm左右的杂质未能成功去除,表明这一生产系统在未来仍需要对包装效率和纯化方法进行进一步优化。由于新冠疫情影响,无法获得敏感细胞系人呼吸道上皮细胞HAE-ALI。因此在转导效率的测定中我们尝试利用纯化的rAAV2.5T-RBD感染人支气管上皮细胞(16HBE),在感染后7天左右可以观察到少量的荧光表达,这一结果证实纯化的病毒粒子应具备一定转导活性,由于16HBE细胞不是rAAV2.5T-RBD的敏感细胞系,导致感染及转导效率较低。之后我们将在获得HAE-ALI细胞后尝试利用流式细胞荧光分选技术更为准确地检测其转导活性。在本课题中我们构建了一个利用家蚕杆状病毒表达系统生产rAAV2.5T-RBD载体的rAAV生产系统,并通过比较获得了更高效的rAAV纯化方法。新生产系统可以成功生产出重组病毒rAAV2.5T-RBD。这项工作表明家蚕生物反应器应用于重组AAV载体规模化生产中的巨大潜力,为病毒载体疫苗的商业化生产提供了参考。

关键词：新型冠状病毒病毒载体疫苗 rAAV2.5T-RBD 家蚕杆状病毒表达系统家蚕生物反应器

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：