检索结果-内蒙古大学图书馆

应用昆虫学报 2025年第1期 192-201页

作者：邵榆岚张永红李玲利范仕弘张一川苏振国白兴荣云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所

【目的】旨在探索紫外线照射对家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,Bm NPV）的灭活方法及效果验证。【方法】比较筛选不同功率、不同照射距离和时间的紫外线照射方法，以照射后病毒感染家蚕的存活率评估灭活... 详细信息

【目的】旨在探索紫外线照射对家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,Bm NPV）的灭活方法及效果验证。【方法】比较筛选不同功率、不同照射距离和时间的紫外线照射方法，以照射后病毒感染家蚕的存活率评估灭活效果；结合长链PCR技术对病毒结构糖蛋白P40基因的灭活效果进行分子检测，并通过扫描电镜观察灭活病毒粒子的结构形态；最后评价紫外线直接照射家蚕的安全性。【结果】生物学实验结果初步表明，病毒在60 W紫外线距离40 cm处照射60 min，感染家蚕5 d后的存活率为63.33%，显著高于病毒对照组家蚕存活率45%(P=0.014 2）。相同照射距离，15和30 W紫外线照射时间大于120 min时，存活率高于63.33%。照射距离大于100 cm时，家蚕存活率明显下降，180 min照射组与病毒对照组差异不显著（P=0.058 8）。长链PCR检测显示，5×10～6个/mL低浓度病毒在15 W紫外线距离40 cm照射60 min后，无明显条带出现，而5×10～8个/mL高浓度病毒在相同条件下照射480 min无明显条带出现，后者的病毒粒子形态与正常病毒无明显差别。紫外线直接照射家蚕的安全性实验表明，有薄膜覆盖的家蚕无明显影响，无薄膜覆盖的家蚕在距离40 cm照射10 min和距离100 cm照射30 min，体色开始出现黑化，经过眠期蜕皮后，体色恢复正常并可正常结茧。【结论】紫外线照射Bm NPV的灭活效果与紫外灯功率、照射距离和时间以及病毒浓度有关，随着照射时间增加，灭活病毒感染家蚕的存活率增加，病毒核酸破坏程度越完全。在紫外线照射距离40 cm以上，至少需要照射60 min才能有效灭活低浓度Bm NPV，且对家蚕具有安全性保障。

关键词：家蚕核型多角体病毒紫外线灭活防控

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家蚕核型多角体病毒lef-11基因RNA干扰策略的优化

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微生物学报 2016年第10期56卷 1561-1570页

作者：陈婷婷董战旗胡楠胡志刚鲁成潘敏慧西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400716 西南大学农业部家蚕功能基因组和生物学重点实验室重庆400716

【目的】家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)lef-11基因作为杆状病毒高度保守的晚期表达因子之一,对病毒晚期基因的表达极其重要。因此对lef-11基因进行有效RNA干扰将提高宿主细胞对BmNPV的抗性。【方法】本... 详细信息

【目的】家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)lef-11基因作为杆状病毒高度保守的晚期表达因子之一,对病毒晚期基因的表达极其重要。因此对lef-11基因进行有效RNA干扰将提高宿主细胞对BmNPV的抗性。【方法】本文基于经典的sh-RNA-loop骨架及家蚕内源性的miRNA骨架,构建以BmNPV lef-11基因为靶标的干扰载体pIZ-shRNA1、pIZ-shRNA2和pIZ-Ds RedamiR279;分别构建基于A4、IE1、IE1-295、IE2、IE2-339、hr3A4和hsp70启动子驱动的干扰载体,用以评价不同启动子驱动的干扰载体的抗病毒效果,并对干扰载体进行优化。【结果】首先,本文通过比较miRNA-based和shRNA-based RNAi载体对同一靶基因同一位点的干扰效率,发现pIZ-Ds Red-amiR279对BmNPV lef11基因的干扰效率超过90%,远优于shRNA-based RNAi载体的干扰效果;其次,通过对干扰载体进行优化,发现IE1启动子的效果最优,由其驱动的pIZ-Ds Red-milef11干扰载体也是本研究中的最优干扰载体,对病毒的增殖抑制效果最为明显。【结论】对目的基因的干扰效果并非启动子的活性越高、miRNA积累得越多就越好,只有综合考虑干扰片段的选择、启动子的活性以及靶基因自身的功能等多方面的因素,才能提高干扰效率,达到干扰目的。

关键词：家蚕家蚕核型多角体病毒 RNA干扰 lef-11 载体优化启动子

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家蚕核型多角体病毒水平转移基因分析

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遗传 2011年第6期33卷 636-647,665-667页

作者：段海蓉丘德彬贡成良黄茉莉苏州大学系统生物学研究中心苏州215006 苏州大学医学部苏州215123 苏州大学数学科学学院苏州215006

为了探讨杆状病毒基因组的遗传进化模式,文章利用家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和其宿主家蚕全基因组数据,进行了全基因组的同源性搜索和系统进化分析,结果显示,BmNPV的几丁质酶(Chi)基因、凋亡抑制蛋白3(IAP3)基因和尿苷二磷酸葡萄糖转移... 详细信息

为了探讨杆状病毒基因组的遗传进化模式,文章利用家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和其宿主家蚕全基因组数据,进行了全基因组的同源性搜索和系统进化分析,结果显示,BmNPV的几丁质酶(Chi)基因、凋亡抑制蛋白3(IAP3)基因和尿苷二磷酸葡萄糖转移酶(UGT)基因为水平转移基因。这3个基因都来源于其宿主昆虫。通过核苷酸组成、密码子偏好性、选择压力等基因特征分析,发现BmNPV水平转移基因与其基因组序列存在明显差异,进一步验证水平转移基因的外源性。对3个水平转移基因的功能分析发现它们有利于杆状病毒在宿主昆虫中的侵染与繁殖,并提高杆状病毒在昆虫中的生存能力。

关键词：家蚕核型多角体病毒家蚕杆状病毒水平转移基因

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家蚕核型多角体病毒gp64基因的克隆和全序列测定

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微生物学报 2000年第1期40卷 38-43页

作者：王运湘李镇龙綮新农广王珣章中山大学生物防治国家重点实验室广州510275

：ＢｍＮＰＶｇｐ６４基因在杆状病毒分子生物学和杆状病毒表达系统研究中具有重要的作用，以ＡｃＭＮＰＶｇｐ６４基因为探针，杂交显示ＢｍＮＰＶｇｐ６４基因定位于其基因组ＢａｍＨＩ酶切的４．２ｋｂ和７－４ｋｂ片段... 详细信息

：ＢｍＮＰＶｇｐ６４基因在杆状病毒分子生物学和杆状病毒表达系统研究中具有重要的作用，以ＡｃＭＮＰＶｇｐ６４基因为探针，杂交显示ＢｍＮＰＶｇｐ６４基因定位于其基因组ＢａｍＨＩ酶切的４．２ｋｂ和７－４ｋｂ片段上，克隆阳性片段，重组质粒分别命名为ｐＺＤＢＭ４２和ｐＺＤＢＭ７４。对重组质粒进一步杂交，将片断更精确定位于０－４５ｋｂ片段、０－７５ｋｂ片断上和１－１５ｋｂ片断上，将三个片断ＤＮＡ进行序列分析，结果表明：ＢｍＮＰＶ的ｇｐ６４基因的开放阅读框（ＯＲＦ）有１５３０核苷酸，编码５０９个氨基酸。序列同源性比较显示，ＢｍＮＰＶｇｐ６４基因和ＡｃＭＮＰＶｇｐ６４基因的核苷酸序列同源性达８４－３％，氨基酸序列同源性达９４－７％。ＢｍＮＰＶｇｐ６４基因Ｃ端的信号肽序列和Ｎ端的锚定序列对于ＢｍＮＰＶ表达系统的改进具有重要的意义。

关键词： gp64基因基因克隆家蚕核型多角体病毒

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家蚕核型多角体病毒可视化快速核酸检测方法

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基因组学与应用生物学 2015年第5期34卷 1007-1012页

作者：覃玥杨梦歌朱青王业富河池学院化学与生物工程学院宜州546300 武汉大学生命科学学院病毒学重点实验室武汉430072

家蚕核型多角体病在广西多批次的养蚕生产中非常普遍,严重影响蚕农的经济效益。根据家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)广西分离株的多角体蛋白基因(polh)序列设计4条用于环介导核酸等温扩增(LAMP)特异性引物,以感染Bm NPV的5龄家蚕血淋巴的多... 详细信息

家蚕核型多角体病在广西多批次的养蚕生产中非常普遍,严重影响蚕农的经济效益。根据家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)广西分离株的多角体蛋白基因(polh)序列设计4条用于环介导核酸等温扩增(LAMP)特异性引物,以感染Bm NPV的5龄家蚕血淋巴的多角体DNA为模板,通过优化LAMP反应体系,确定Mg2+、d NTPs、甜菜碱最适终浓度分别为8 mmol/L、1.4 mmol/L和0.8 mol/L,外引物和内引物浓度为0.2μmol/L和1.6μmol/L,在64℃恒温条件下反应1 h;在反应管中加钙黄绿素,通过肉眼观察颜色变化直接判定结果实现可视化检测。该检测方法的Bm NPV最低模板DNA为25 fg/μL,其敏感度为常规PCR l00倍,兼具简便、快速、灵敏等优点,可用于家蚕核型多角体病的早期诊断及流行病学调查。

关键词：家蚕核型多角体病毒可视化快速检测环介导核酸等温扩增早期诊断

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家蚕核型多角体病毒山东株p35基因的克隆及序列分析

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遗传 2003年第6期25卷 681-684页

作者：姜丽华钟万芳蔡平钟徐兴耀阎文昭华南农业大学蚕丝科学系广州510642 四川省农业科学院生物技术育种工程中心

根据家蚕核型多角体病毒T3株p35基因非编码区序列设计一对特异性引物,应用PCR技术从家蚕核型多角体病毒山东株中扩增得到一条1080bp的片段。测序结果表明,该片段含有p35基因,开放阅读框长900bp,编码299个氨基酸,分子量为34.91kDa,pI=6.... 详细信息

根据家蚕核型多角体病毒T3株p35基因非编码区序列设计一对特异性引物,应用PCR技术从家蚕核型多角体病毒山东株中扩增得到一条1080bp的片段。测序结果表明,该片段含有p35基因,开放阅读框长900bp,编码299个氨基酸,分子量为34.91kDa,pI=6.4。序列分析表明,BmNPV山东株的p35基因与T3株存在差异。

关键词：家蚕核型多角体病毒山东株 p35基因克隆序列分析

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家蚕核型多角体病毒广东分离株Bm126基因编码基序RGD的功能研究

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蚕业科学 2015年第2期41卷 286-291页

作者：郝碧芳程晨梁飞沈兴家江苏科技大学江苏镇江212018 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018

杆状病毒因专一感染昆虫而作为治理农林害虫的生物农药以及作为表达载体在生物医药产业得到广泛应用。前期研究发现家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)中国广东分离株(Bm NPV-GD)的orf126基因(Bm126)包含一个编码精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)... 详细信息

杆状病毒因专一感染昆虫而作为治理农林害虫的生物农药以及作为表达载体在生物医药产业得到广泛应用。前期研究发现家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)中国广东分离株(Bm NPV-GD)的orf126基因(Bm126)包含一个编码精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)的基序。采用点突变技术构建RGD编码基序突变的转移载体,利用Bm NPV Bac-to-Bac系统转座获得重组bacmid,通过转染Bm N细胞获得重组病毒,分析突变病毒在感染细胞后期的多角体产量变化,并在病毒感染过程中进一步应用RGD竞争性多肽Cyclo[RGDf-N(Me)V-]分析突变病毒多角体产量的变化,以此探究Bm NPV Bm126编码的RGD基序是否在病毒感染增殖中发挥作用。经t检验统计表明突变病毒感染Bm N细胞后产生的多角体数量与对照病毒没有显著性差异,Cyclo[RGDf-N(Me)V-]处理结果也显示其与对照没有显著差异,表明Bm NPV-GD Bm126基因编码的RGD基序可能不是直接参与病毒感染宿主细胞后的增殖过程,而是辅助病毒的其他因子与宿主细胞互作。

关键词：杆状病毒家蚕核型多角体病毒点突变 orf126基因 RGD基序多角体

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家蚕核型多角体病毒orf61基因缺失对病毒复制和各时期基因转录的影响

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蚕业科学 2017年第6期43卷 943-951页

作者：薛圣杰李俊余海鹏张媛媛胡冬冰全滟平于威浙江理工大学生命科学学院杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

orf61是杆状病毒晚期表达的核心基因之一。为了研究家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)orf61基因的功能,利用Red重组技术与Bac-to-Bac系统分别敲除和异位补回orf61基因,构建了orf61缺失型病毒orf61-ko-Bacmid以及补回型病毒orf61-reBacmid,然... 详细信息

orf61是杆状病毒晚期表达的核心基因之一。为了研究家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)orf61基因的功能,利用Red重组技术与Bac-to-Bac系统分别敲除和异位补回orf61基因,构建了orf61缺失型病毒orf61-ko-Bacmid以及补回型病毒orf61-reBacmid,然后分别转染家蚕培养细胞Bm N,调查orf61基因缺失对Bm NPV复制和不同时期基因转录的影响。检测orf61基因缺失型病毒转染Bm N细胞液上清中的病毒滴度为0,说明orf61基因缺失导致病毒不能形成有感染活性的芽生型病毒粒子(BV);荧光定量PCR分析orf61基因缺失会显著地降低病毒基因组的复制水平,进而导致病毒各个时期基因转录水平极显著下降(P<0.01)。此外,通过体外EMSA试验和构建双荧光素酶报告基因系统,检测ORF61蛋白对多角体蛋白基因polh启动子的调控作用,结果显示该蛋白质是polh基因转录的负调节因子。研究结果有助于深入阐释Bm NPV orf61基因在病毒基因组复制中的作用以及对极晚期表达的多角体蛋白基因polh的转录调控作用。

关键词：家蚕核型多角体病毒 orf61基因病毒复制基因转录调控多角体蛋白基因启动子

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家蚕核型多角体病毒株系的分子鉴定初探

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蚕业科学 2014年第6期40卷 1030-1035页

作者：唐芬芬邵榆岚钟健张永红黄平董占鹏廖鹏飞白兴荣云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所云南蒙自661101

来自不同地域或蚕区的家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)对家蚕的致病力存在较大差异,出现明显的株系分化现象。对Bm NPV流行株系鉴定是病害监测与防控的重要基础。以最早完成基因组测序的Bm NPV-T3株的多角体蛋白基因(polh)序列与其他6个Bm ... 详细信息

来自不同地域或蚕区的家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)对家蚕的致病力存在较大差异,出现明显的株系分化现象。对Bm NPV流行株系鉴定是病害监测与防控的重要基础。以最早完成基因组测序的Bm NPV-T3株的多角体蛋白基因(polh)序列与其他6个Bm NPV株系进行同源基因序列及氨基酸序列的BLAST比对,结果表明不同株系的Polh氨基酸序列高度同源,相似度达到99.94%;再以Bm NPV-T3株的143个开放阅读框序列为参照,对不同Bm NPV株系的基因组序列进行双序列比对,发现不同株系重复阅读框基因(bro)家族成员的组成、序列及拷贝数存在差异,且分布位置呈现多样性。初步认为,高度保守的polh基因可用于Bm NPV病毒的鉴定,而相对保守的bro家族基因可作为Bm NPV病毒株系分子鉴定的依据。

关键词：家蚕核型多角体病毒株系多角体蛋白基因杆状病毒重复阅读框基因

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家蚕核型多角体病毒分子流行病学调查及宿主特异性研究

家蚕核型多角体病毒分子流行病学调查及宿主特异性研究

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作者：梁湘广西大学

学位级别：博士

家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)是家蚕血液型脓病病原,对家蚕幼虫产生致死性的感染,该病是养蚕业常见且危害较大的一种病毒病。广西地处亚热带地区,具有明显的气候优势,过去几年中广西蚕桑业得到迅猛发展... 详细信息

家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)是家蚕血液型脓病病原,对家蚕幼虫产生致死性的感染,该病是养蚕业常见且危害较大的一种病毒病。广西地处亚热带地区,具有明显的气候优势,过去几年中广西蚕桑业得到迅猛发展,然而,由于养殖密度大,生产期较长,往往容易造成蚕病特别是病毒性传染病的流行。广西几乎每年都会出现BmNPV的流行,而且这些年来由于养殖规模不断扩大以及病原体在养蚕区不断积累,BmNPV流行显示出逐渐加剧的趋势,给广西养蚕业带来了严重的经济损失。为了广西养蚕业的可持续发展,对广西各地BmNPV流行情况进行调查,了解病毒传播特点,将有助于制定相应措施遏制BmNPV在养蚕区扩大化流行。本研究从广西各养蚕区分别收集了45个野生BmNPV分离毒株,对这些分离株的唯一两个极晚期表达基因多角体蛋白polh基因和微管相关蛋白p10基因进行克隆测序,构建系统进化树。序列分析结果显示,polh基因高度保守,而p10基因变异较大,频繁出现核苷酸点突变,表现出密码子使用多样化,并没有明显的密码子偏好。根据p10基因系统进化树分析,广西BmNPV分离株主要分为三个群clades I、Ⅱ和Ⅲ。广西BmNPV分离株的地理分布显示,clade I(?)口Ⅱ分群中的分离株来源地域较为集中而且毗邻,提示在这些区域内出现局部的流行与传播。cladeⅢ的分离株呈不规律分布于广西各地,提示有可能发生远距离的病毒传播。广西桑蚕资源丰富,蚕虫或者蚕蛹可以作为一种理想的生物反应器,利用杆状病毒表达系统在其中大量生产重组蛋白,不仅省时省力而且经济节约。狂犬病病毒糖蛋白(Rabies virus glycoprotein, RVG)是主要保护性抗原,能诱导机体产生中和性抗体。本研究使用了一个经过基因工程改良的杆状病毒表达系统,即与BmNPV基因组同源的bacmid缺失了几丁质酶和半胱氨酸酶基因,构建了携带RVG基因的重组bacmid,同时引入在哺乳动物细胞内具有转录活性的巨细胞瘤病毒启动子／增强子CMV-IE序列。将重组bacmid与脂质体混合注射家蚕幼虫血腔,进行体内转染获得重组杆状病毒。鉴定结果显示,重组RVG在蚕虫机体组织中获得大量表达,重组表达的RVG最终定位于细胞质膜,重组RVG分子量略小于在哺乳动物细胞中表达的天然RVG。但是,多个抗RVG单克隆抗体皆与之发生反应,且反应的程度与天然RVG的基本一致,提示重组RVG的结构和功能是完好的。针对BmNPV宿主特异性研究表明,无论是体内还是体外BmNPV的宿主域相当狭窄。草地夜蛾(Spodoptera frugiperda, Sf)细胞系Sf9一直被认为是BmNPV的非受纳细胞系,BmNPV不能在其中进行有效的复制增殖。本研究中,两个携带有外源报告基因的重组BmNPV,即携带狂犬病病毒RVG基因及巨细胞瘤病毒启动子CMV-IE序列的rBm-PCMV-RVG和携带绿色荧光蛋白GFP基因的rBm-GFP,被构建并表现出对Sf9细胞具有感染性。该重组BmNPV可以在Sf9细胞中复制增殖,被感染的Sf9细胞无明显细胞病变,显示一种无症状温和型的感染状态,并且在被感染的Sf9细胞上可以检测到由低pH值引发的膜融合反应。以重组rBm-GFP接种Sf9细胞,GFP荧光灶形成和子代病毒滴度增加证实了病毒可以从Sf9细胞中出芽。然而,只有在接种病毒量较大时,重组BmNPV才能在Sf9细胞中复制增殖,且增殖过程与其在受纳家蚕细胞系BmN中增殖过程不同；而当接种病毒量较小时,重组BmNPV在Sf9细胞中产生顿挫感染。另外,重组rBm-GFP在Sf9细胞中经过系列传代后显示出比传代前的原始病毒复制能力更强。根据GenBank发表的家蚕抗BmNPV病毒脂肪酶基因Bmlipase-1和丝氨酸蛋白酶基因BmSP-2序列,分别设计相应引物,以广西优良家蚕品系“两广二号”为实验材料,成功克隆了该品系家蚕两个抗病毒基因的完整开放阅读框(open reading frame, ORF),测序并与不同蚕来源的同源基因序列进行比较。实验结果显示：“两广二号”家蚕Bmlipase-1基因ORF长度是885bp,编码294个氨基酸,BmSP-2基因ORF长度是855bp,编码284个氨基酸；同源性比较表明二者与其他品系家蚕甚至野蚕和蓖麻蚕的同源序列高度保守,核苷酸和推导氨基酸序列的同源性皆在92%以上,其中Bmlipase-1更为保守,同源性达到99%以上；序列分析发现各种蚕来源的Bmlipase-1基因脂肪酶活化部位(GXSXG,X为任一氨基酸)的氨基酸序列完全一致,BmSP-2基因酶催化三联体(His95, Asp142,Ser236)位点及附近氨基酸序列也完全相同

关键词：家蚕核型多角体病毒流行生物反应器宿主特异性抗病毒基因

来源：评论

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