检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2012年第1期28卷 15-22页

作者：刘攀峰王思民刘音黎路林华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室武汉430079

在病毒侵染和复制过程中,病毒与宿主之间存在广泛的蛋白质-蛋白质相互作用。本研究建立了一个小菜蛾幼虫cDNA文库,用于筛查与小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV)蛋白相互作用的小菜蛾幼虫蛋白。pp31同源基因存... 详细信息

在病毒侵染和复制过程中,病毒与宿主之间存在广泛的蛋白质-蛋白质相互作用。本研究建立了一个小菜蛾幼虫cDNA文库,用于筛查与小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV)蛋白相互作用的小菜蛾幼虫蛋白。pp31同源基因存在于所有鳞翅目昆虫杆状病毒。其编码产物是一种磷蛋白,与病毒基因表达调控相关。本研究通过酵母双杂交实验从小菜蛾幼虫cDNA文库中筛选出两个与PlxyGV PP31相互作用的蛋白质基因。序列分析结果显示这两个基因的预期编码产物分别是小菜蛾蛋白激酶C受体(RACK)和一种甲硫氨酰氨肽酶2(MetAP2)同源蛋白。原核表达和蛋白质纯化实验结果显示,rack与6-组氨酸编码序列的融合基因的表达产物是一个38kD多肽。在GST-pulldown实验中,RACK蛋白随同GST-PP31融合蛋白一起吸附于GST亲和树脂,进一步证实了小菜蛾RACK蛋白与PlxyGV PP31发生相互作用。

关键词：小菜蛾颗粒体病毒 pp31 蛋白激酶C受体甲硫氨酰氨肽酶2 病毒-宿主相互作用蛋白

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小菜蛾颗粒体病毒晚期表达因子基因的功能分析

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病毒学报 2012年第5期28卷 560-566页

作者：樊磊胡原黎路林华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室武汉430079

小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV)基因组含有15个杆状病毒晚期表达因子(Lateexpression factor,lef)基因同源物。PlxyGV的14个lef基因(不包括ie-0)预期编码产物与苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)LEF蛋白的序列相似度为13%～53%。其中,LEF-8、LEF-9和P47在两种病毒之间的相似度较高,分别为49%、53%和46%。为了研究不同杆状病毒种间lef基因的功能相关性,验证PlxyGVlef基因的功能,本文利用AcMNPV的一个瞬时表达实验系统测试PlxyGVlef基因在Sf9细胞中激活AcMNPV晚期启动子控制的报告基因表达的能力。实验结果显示,在其它AcMNPVlef基因都存在的情况下,PlxyGVlef-2能够部分替代AcMNPVlef-2的活性。序列对比结果显示Plx-yGV LEF-2的C端末比其它GV和鳞翅目NPV的LEF-2分别多出约100aa和70aa。

关键词：小菜蛾颗粒体病毒晚期表达因子基因 lef-2

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小菜蛾颗粒体病毒Px26基因功能的初步分析

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华中师范大学学报（自然科学版） 2010年第1期44卷 115-119页

作者：张亚琴董慧孟海燕钟雪萍黎路林华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室武汉430079

用Px26和Px26-egfp融合基因瞬时表达质粒对多种昆虫传代细胞系进行转染实验,探讨Px26的功能属性.实验结果表明,Px26编码产物主要定位于被转染细胞的细胞膜上,在低pH诱导下未观察到被转染细胞膜融合现象.

关键词：小菜蛾颗粒体病毒 Px26 F蛋白瞬时表达

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小菜蛾颗粒体病毒在小菜蛾生态控制中的作用

小菜蛾颗粒体病毒在小菜蛾生态控制中的作用

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作者：吕利华华南农业大学

学位级别：博士

该文研究小菜蛾颗粒体病毒生态学特性、田间施用技术和持效作用,小菜蛾颗粒体病毒(PxGV)对小菜蛾幼虫取食和发育的影响,采用均匀设计方法和作用因子组配的生命表及有关的种群趋势指数(Ⅰ)和控制指数(IPC),评价了病毒施用浓度和次数组合... 详细信息

该文研究小菜蛾颗粒体病毒生态学特性、田间施用技术和持效作用,小菜蛾颗粒体病毒(PxGV)对小菜蛾幼虫取食和发育的影响,采用均匀设计方法和作用因子组配的生命表及有关的种群趋势指数(Ⅰ)和控制指数(IPC),评价了病毒施用浓度和次数组合对小菜蛾种群数量控制的作用,用网络模型和状态空间表达式,模拟分析小菜蛾颗粒体病毒对不同种类十字花科蔬菜上小菜蛾种群的控制作用.

关键词：小菜蛾小菜蛾颗粒体病毒传播持效期生命表控制指数种群数量控制

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小菜蛾颗粒体病毒PP31蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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生物技术通报 2013年第3期29卷 129-133页

作者：王思民张鸿杰黎路林华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室武汉430079

杆状病毒PP31是一种磷酸化的DNA结合蛋白。pp31基因存在于所有已完成测序的鳞翅目昆虫杆状病毒。用PCR方法从小菜蛾颗粒体病毒基因组扩增pp31基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经IPTG诱导,在被转化菌株中... 详细信息

杆状病毒PP31是一种磷酸化的DNA结合蛋白。pp31基因存在于所有已完成测序的鳞翅目昆虫杆状病毒。用PCR方法从小菜蛾颗粒体病毒基因组扩增pp31基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经IPTG诱导,在被转化菌株中表达产生出携带6×His标签的PP31蛋白。用ProBondTM树脂纯化的His-PP31融合蛋白大小约29 kD左右。用该融合蛋白免疫新西兰大白兔,获得PlxyGV PP31蛋白抗血清。Western blot分析显示,所获得的抗血清具有较强的特异性和高效价,可应用于PlxyGV PP31蛋白分析。

关键词：小菜蛾颗粒体病毒 PP31 原核表达多克隆抗体

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小菜蛾颗粒体病毒早期基因启动子在非受纳细胞系Sf9中的表达活性分析

小菜蛾颗粒体病毒早期基因启动子在非受纳细胞系Sf9中的表达活性...

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作者：刘畅华中师范大学

学位级别：硕士

杆状病毒在自然环境中只感染节肢动物,它具有双链、环状超螺旋结构的基因组。包含在β-杆状病毒属中的小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV),它的宿主小菜蛾是十字花科害虫之一,小菜蛾颗粒体病毒是一种应用远景... 详细信息

杆状病毒在自然环境中只感染节肢动物,它具有双链、环状超螺旋结构的基因组。包含在β-杆状病毒属中的小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV),它的宿主小菜蛾是十字花科害虫之一,小菜蛾颗粒体病毒是一种应用远景可观的生物杀虫剂。可是在β-杆状病毒感染相应细胞系后却始终无法获得高浓度的BV(budded virus),说明这些细胞系并不是p-杆状病毒最合适的受纳细胞系,这些离体培养系统还不成熟。通过本实验室已有的研究发现,在Sf9细胞中PlxyGV的晚期基因表达受阻,晚期基因表达受阻可能是其感染相应细胞系后无法实现离体培养的原因之一。而只有在早期基因表达和病毒DNA复制之后,晚期基因才能表达。本研究在已构建的小菜蛾颗粒体病毒bacmid和荧光报告系统的基础上,进一步对小菜蛾颗粒体病毒的早期基因启动子在非受纳细胞系Sf9中的表达活性进行研究。通过对其早期基因表达情况的研究,分析其制约晚期基因表达的原因,并尝试分析制约病毒离体复制的原因。(1)通过基因克隆,构建了由PlxyGV的早期或极早期启动子(pxP 17,pxPorf93,pxPorf78,pxPorf61,pxPie 1)以及与之同源的AcMNPV(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus)的早期或极早期启动子(acP29,acPorf65,acPorf90,acPorf25,acPie 1)分别控制报告基因 luciferase 的 10个报告质粒。(2)利用Bac-to-Bac系统将由PlxyGV以及AcMNPV的早期或极早期启动子控制luc基因的报告质粒分别转座到Plxy GV bacmid和vAcgp64KO上构成相应的重组报告Bacmid(vPxpxP17-luc vPxpxPor178-luc vPxpxPorf6f7luc vPxpxPorf93-luc vPxpxPiel-lucvAcaor29-luc vAcacPorf90-luc yAcacPorf25-luc yAcacPorf65-luc vAcacPiel-luc vAc pxP17-luc vAcpxPorf78-luc vAcpxPorf6l-luc vAcpxPorf93-luc vAcpxPiel-lucyPXacP29-luc yPXacPorf90-luc yPXacPorf25-luc yPXacPorf65-luc yPXacPiel-luc)。(3)通过转染Sf9细胞和荧光素酶活性的实时表达分析,发现在PlxyGV的非受纳细胞系Sf9中,所有插入到敲除了 gp64的AcMNPV基因组中的PlxyGV以及AcMNPV的早期和极早期启动子都能够被激活并驱使报告基因luc表达,luc水平随时间点的累积变化图式相似,但用vAcpx-1uc转染的细胞在各个时间点测得的luc水平相比于vAcac-luc均相对较低。然而,除极早期启动子iel控制luc的报告质粒转座到PlxyGV bacmid中,luc水平随时间点有明显变化以外,其余四个Px早期基因启动子及与之同源的Ac早期启动子控制luc的报告质粒转座到PlxyGV bacmid中,luc水平随时间点无明显变化,均与mock值相当。结果表明:PlxyGV早期基因的启动子控制的报告基因luciferase构成的报告质粒,插入到PlxyGV基因组中构成的重组报告Bacmid,不能在被转染的Sf9细胞中有效表达,而插入到敲除了gp64的AcMNPV bacmid中构成的重组报告Bacmid却能高效表达。AcMNPV bacmid中存在某种拯救PlxyGV的早期基因表达的机制。而PlxyGV iel基因的启动子插入到PlxyGV基因组能在被转染的Sf9细胞中有效表达,可能是因为要使极早期基因被激活并使之表达仅依赖宿主细胞的因子,这表明Sf9的细胞因子中存在iel基因转录所需要的某种因子。(4)将实验室之前成功构建的五个由PlxyGV的晚期和极晚期基因启动子控制luc基因的报告质粒分别转座到PlxyGV bacmid和vAcgp64KO上构成的相应重组报告Bacmid(vAcpxPe25-luc,vPxpxPe25-luc,vAcpxPvp39-luc vPxpxPvp39-luc vAcpxPgp41-luc,vPxpxPgp41-luc,vAcpxPoPorf21-luc,vPxPxorP21-luc vAcpxPorf5O-luc,vPxpxPorf50-luc)通过转染Sf9细胞和荧光素酶活性的实时表达分析,发现在PlxyGV的非受纳细胞系Sf9中,五个Px晚期基因启动子控制luc的报告质粒转座到vAcgp64KO中,再转染Sf9

关键词：小菜蛾颗粒体病毒早期基因表达 Sf9 启动子活性分析

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小菜蛾颗粒体病毒Px26基因功能的初步分析

小菜蛾颗粒体病毒Px26基因功能的初步分析

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作者：张亚琴华中师范大学

学位级别：硕士

杆状病毒是一类节肢动物特异的环状双链DNA病毒,该病毒的包膜蛋白是病毒重要的结构蛋白,这一结构蛋白对于介导病毒侵入起重要作用,同时还可能影响病毒的宿主范围。小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella Granulovirus,PlxyGV)是小菜蛾... 详细信息

杆状病毒是一类节肢动物特异的环状双链DNA病毒,该病毒的包膜蛋白是病毒重要的结构蛋白,这一结构蛋白对于介导病毒侵入起重要作用,同时还可能影响病毒的宿主范围。小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella Granulovirus,PlxyGV)是小菜蛾的主要致病病毒,农业上主要用于生物防治杀虫剂。同其他Ⅱ组NPV及黄地老虎颗粒体病毒(Agrotis segetum Granulovirus,AgseGV)类似,PlxyGV的基因组中也没有gp64的同源基因,但发现其orf26(Px26)的预期编码产物与AgseGV的F蛋白(AgseF)同源,二者具有较高序列相似度。最近有研究报道显示,AgseGV f基因能够功能性替代苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)的gp64基因,而且具有低pH诱导的膜融合功能。为了试图探讨Px26基因的功能属性及其预期编码产物在转染昆虫细胞内的定位,本文首先通过构建含有egfp(质粒pIE-egfp)、Px26(质粒pIE-Px26)和Px26-egfp(质粒pIE-Px26-egfp)融合基因的瞬时表达质粒及对照质粒pLd130-egfp对多种昆虫传代细胞系进行转染。实验结果表明:当用质粒pIE-egfp转染细胞后,发现绿色荧光都布满整个细胞,将pH由6.0降至5.0时无多核细胞形成;而用质粒pLd130-egfp转染细胞后部分细胞充满荧光,部分细胞只在其膜上有荧光分布,将培养基pH由6.0降至5.0时,被转染的细胞出现多核细胞或合胞体;用pIE-Px26-egfp质粒转染的细胞pH由6.0到5.0时,荧光有的分布于膜上,有的分布于整个细胞,但无合胞体出现。此外,对比pIE-Px26-egfp、pIE-Px26与pLd130-egfp质粒转染的细胞,进一步说明Px26预期编码产物不能促使转染细胞的细胞膜融合。然而,用上述质粒转染Bm-21E-HNU5和SL-1细胞时的现象相同,由于LD130-EGFP及Px26-EGFP这两种融合蛋白在这两种细胞系中的表达量都较低,因而,在低pH诱导下都未发现被转染细胞的细胞膜有融合的现象。此外,为了排除pH对实验造成的影响,实验时还分别用不同pH培养基作用于转染的细胞(pH 3.0或4.0;pH 7.0或7.2),发现用质粒pIE-Px26-egfp及pIE-Px26转染的细胞仍无多核细胞现象出现,而且这种不融合现象与转染细胞的类型及培养基的pH无关。其次,通过利用Lamda-Red重组系统对AcMNPV的Bacmid进行gp64基因敲除,为下一步回复敲除研究未知膜融合基因的功能打下基础。Lamda-Red重组系统最初主要被用于大肠杆菌基因组的研究。近年来随着杆状病毒穿梭载体的开发成功,使得该重组系统已成为研究杆状病毒基因功能的有力工具。本文的第二部分则是用Lamda-Red重组系统对AcMNPV的Bacmid进行gp64基因敲除,获得缺失该基因的重组Bacmid,通过转染-感染实验验证,初步构建一表达EGFP的重组病毒。为深入研究Px26基因及其它外源基因回复敲除鉴定基因功能奠定基础,该项工作正在进行之中。

关键词：杆状病毒小菜蛾颗粒体病毒膜融合蛋白 GP64 F蛋白

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小菜蛾颗粒体病毒抗凋亡基因iap的功能研究

小菜蛾颗粒体病毒抗凋亡基因iap的功能研究

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作者：王颖华中师范大学

学位级别：硕士

小菜蛾是发生在十字花科蔬菜上最具破坏性的世界性害虫之一,发生代数多,极易对化学农药产生抗性。小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus, PlxyGV)是小菜蛾的天然控制因子。其基因组全序列己于2000年发表。IAPs (inhibitor... 详细信息

小菜蛾是发生在十字花科蔬菜上最具破坏性的世界性害虫之一,发生代数多,极易对化学农药产生抗性。小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus, PlxyGV)是小菜蛾的天然控制因子。其基因组全序列己于2000年发表。 IAPs (inhibitor of apoptosis)是一类抑制细胞凋亡蛋白家族的总称。它们在结构上都含有BIR. RING结构域。杆状病毒感染常会引起宿主细胞的免疫反应,使细胞凋亡。抑制细胞凋亡可以延长细胞的存活时间,从而可以维持病毒的复制增殖和传播。根据PlxyGV基因组序列分析,PlxyGV中含有一个iap同源基因(nt80675-81520)。序列比对分析显示,PlxyGV iap基因预期编码产物与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)IAPs以及苹果小卷叶蛾颗粒体病毒(Cydia pomonella granulovirus, CpGV)IAP3序列相似度较高。功能互补性试验己证实CpGV IAP3具有抗细胞凋亡的功能,而PlxyGV IAP的功能未知。本研究采用瞬时表达的方法研究PlxyGV IAP的功能。首先,用PlxyGV iap瞬时表达质粒转染草地贪夜蛾细胞系(Spodoptera frugiperda,Sf9);再在培养液中加入放线菌酮D或接种AcMNPV p35缺失突变体(AcMNPV△P35)感染液；通过光镜观察,流式细胞仪检测和DNA梯度电泳图谱等方法检测细胞的凋亡情况。实验结果显示,在接种AcMNPV△P35的情况下,被PlxyGV iap转染的Sf9细胞的凋亡率显著低于未被PlxyGV iap转染的细胞；在用放线菌酮D处理的情况下,被PlxyGV iap转染的Sf9细胞的凋亡率与未被PlxyGV iap转染的细胞相比无显著差异。由此推断,在Sf9细胞中PlxyGV IAP可以有效地抑制由AcMNPV△P35诱导的细胞凋亡；而不能有效抑制放线菌酮D诱导的细胞凋亡。为了进一步确定PlxyGV IAP抑制细胞凋亡作用的功能域,用PCR方法对PlxyGV iap基因做渐进截短突变,将截短突变体用于对AcMNPV△P35诱导的细胞凋亡抑制实验。实验结果显示,PlxyGV IAP的BIR结构域或RING结构域的破坏,都会导致IAP抗细胞凋亡功能的丧失。

关键词：小菜蛾颗粒体病毒 iap基因抗细胞凋亡瞬时表达

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小菜蛾颗粒体病毒晚期启动子在非受纳细胞系中的表达活性分析

小菜蛾颗粒体病毒晚期启动子在非受纳细胞系中的表达活性分析

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作者：任禾林华中师范大学

学位级别：硕士

杆状病毒是一类由囊膜包被杆状核衣壳的、含单一双链环状超螺旋基因组的病毒。小菜蛾颗粒体病毒（Plutella xylo5tellagranulovirus,PlxyGV）属于杆状病毒中的β-杆状病毒属。由于缺少合适的受纳细胞系,有关PlxyGV的分子生物学研究进展... 详细信息

杆状病毒是一类由囊膜包被杆状核衣壳的、含单一双链环状超螺旋基因组的病毒。小菜蛾颗粒体病毒（Plutella xylo5tellagranulovirus,PlxyGV）属于杆状病毒中的β-杆状病毒属。由于缺少合适的受纳细胞系,有关PlxyGV的分子生物学研究进展一直较为缓慢。本文通过小菜蛾颗粒体病毒的晚期启动子在非受纳细胞系中的表达活性分析,进一步研究制约PlxyGV离体复制的原因。（1）通过基因克隆,构建由PlxyGV的晚期启动子（pxPan、pxPe18、pxPe25、pxPgp41、pxPp6.9、pxPvp39、pxPpk1、pxPgran、pxPorf21 与 pxPorf50）分别控制报告基因luciferase的10个报告质粒。通过瞬时表达实验我们发现,PlxyGV基因组不能在被转染的Sf9细胞中启动晚期与极晚期基因表达。同时我们也注意到,PlxyGV的晚期启动子报告质粒与AcMNPV共转染时均产生较高水平的荧光素酶活性。（2）通过基因克隆,构建与PlxyGV报告质粒对应的由AcMNPV的晚期启动子（acPan、acPe18、acPe25、acPgp41、acPp6.9、acPvp39、acPpk1、acPpolh、acPp10）分别控制报告基因luciferase的9个报告质粒。通过瞬时表达实验,我们发现PlxyGV晚期基因报告质粒与AcMNPV DNA共转染细胞中的荧光素酶活性与对应AcMNPV晚期基因报告质粒和AcMNPV DNA共转染细胞中的荧光素酶活性接近甚至更高。（3）利用Bac-to-Bac系统将由PlxyGV和AcMNPV晚期启动子控制的luc基因分别转座到AcMNPV bacmid bMON14272上构建相应的晚期基因报告病毒。通过转染后感染和实时表达分析,我们发现:在PlxyGV的非受纳细胞系Sf9细胞中,插入AcMNPV基因组的PlxyGV晚期启动子都能够被激活并驱动报告基因表达。其中,pxPgp41（或 pxPgp41L）与 acPgp41、pxPvp39（或 pxPvp39L）与 acPvp39、pxPe18与acPe18（或acPe18L）、pxPorf50与acPp10四组中,虽然对应启动子所含核心基元序列TAAG的数目可能相等,但它们的表达活性随时间变化的趋势差异显著。在pxPan与acPan、pxPpk1与acPpk1两组中,对应启动子在报告病毒感染细胞中的表达活性高低有明显差异,但它们随时间变化的趋势却基本相同。而acPp6.9与pxPp6.9、acPe25 与 pxPe25、acPpolh 与 pxPgran、pxPorf21 与 acPp10 四组中对应启动子在重组病毒感染的细胞中的表达活性随时间的变化基本相同。（4）通过λ-red同源重组的方法从AcMNPV基因组中分别敲除ie1、p35、lef8或vp39基因构成重组病毒vAcileIKO、vAcp35KO、vAclef8KO和vAcvp39KO。同时,利用Bac-To-Bac系统将含pF-pxPp6.9-luc与pF-pxPgran-luc的报告质粒分别转座到PlxyGV bacmid上,构成报告病毒vPxpxPp6.9-luc和vPxpxPgran-luc。通过瞬时表达实验,研究不同 AcMNPV 突变体(vAcie1KO、vAcp35KO、vAclef8KO、vAvp39KO)对报告病毒中PlxyGV的晚期基因表达的影响。结果表明:在报告病毒vPxpxPp6.9-1uc和vPxpxPgran-luc分别与vAcvp39KO共转染的Sf9细胞中均可检测到高水平的荧光素酶活性;在vPxpxPp6.9-luc和vPxpxPgran-luc分别与vAcie1KO共转染的细胞中荧光素酶活性仅略高于vPxpxPp6.9-luc和vPxpxPgran-luc单独转染细胞的荧光素酶活性。vPxpxPp6.9-luc与vAclef8KO或vAcp35KO共转染细胞中的荧光素酶活性分别是其与vAcvp39KO共转染细胞荧光素酶活性的0.98%和34.49%;而vPxpxPgran-luc与 vAclef8KO或vAcp35KO共转染细胞的荧光素酶活性分别其与vAcvp39KO共转染细胞荧光素酶活性的0.29%和28.49%。这些结果说明:在被转染Sf9细胞中,由PlxyGV晚期启动子控制的报告基因的表达主要依赖于AcMNPV编码的RNA聚合酶;PlxyGV自身的晚期表达因子可能没有有效表达。（5）为研究AcMNPV基因组对PlxyGV DNA复制的影响,用不同的PlxyGV bacmids单独或与AcMNPV的突变体共转染Sf9或Hi5细胞。从被转染细胞中提取的病毒DNA经DpnI处理后,以gp41为标的,通过PCR检测复制的Plx

关键词：小菜蛾颗粒体病毒晚期基因表达启动子活性分析

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小菜蛾颗粒体病毒瞬时表达实验系统的构建及其晚期表达因子在非受纳细胞系Sf-9中的功能分析

小菜蛾颗粒体病毒瞬时表达实验系统的构建及其晚期表达因子在非受...

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作者：樊磊华中师范大学

学位级别：硕士

杆状病毒是一类专一性感染节肢动物的病毒,因其病毒体的形态呈杆状而得名。杆状病毒基因的表达具有时序性,按照表达时相的不同可以分成早期表达和晚期表达。早期表达不依赖于病毒基因的编码产物,而晚期表达则依赖于病毒DNA的复制和病毒... 详细信息

杆状病毒是一类专一性感染节肢动物的病毒,因其病毒体的形态呈杆状而得名。杆状病毒基因的表达具有时序性,按照表达时相的不同可以分成早期表达和晚期表达。早期表达不依赖于病毒基因的编码产物,而晚期表达则依赖于病毒DNA的复制和病毒早期表达产物。杆状病毒代表种苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒iAutographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)中已经鉴定出19个晚期表达因子(late expression factor,lef)基因。小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV)属于杆状病毒科颗粒体病毒属,其宿主小菜蛾是一种主要的十字花科作物害虫。PlxyGV作为生物杀虫剂具有广阔的应用前景。受限于受纳细胞系的短缺,目前有关颗粒体病毒基因表达调控的研究工作报道不多。本文的研究工作致力于建立PlxyGV瞬时表达实验系统,在此基础上进行PlxyGV晚期表达因子基因的识别和功能分析,主要包括以下内容： (一)构建了PlxyGV瞬时表达实验系统,包括PlxyGV基因组cosmid文库、PlxyGV晚期表达因子瞬时表达质粒文库和PlxyGV晚期报告质粒。然后从文库中筛选出了覆盖PlxyGV基因组的五个重叠cosmids。根据已报道的PlxyGV基因组序列克隆了存在于PlxyGV基因组中的15个晚期表达因子基因同源基因,并构建了全部lef同源基因的瞬时表达质粒。用五种昆虫细胞系进行了PlxyGV晚期基因瞬时表达试验。 (二)在瞬时表达实验中,用PlxyGV晚期表达因子基因分别逐一替换AcMNPV中相应的晚期表达因子基因。结果表明仅PlxyGV lef-2基因可以部分替代AcMNPV lef-2的功能。 (三)借助计算机辅助软件,对目前基因组序列己知的51种杆状病毒晚期表达因子编码产物进行检索和比对,并按照lef基因编码产物的同源性对这些杆状病毒进行遗传分析,制作了分类关系的进化树,为研究杆状病毒晚期表达因子的功能与杆状病毒进化的关系提供了一定的参考。

关键词：小菜蛾颗粒体病毒晚期表达因子 Sf-9 进化树

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