检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：闫雪琪石河子大学

学位级别：硕士

粪肠球菌在自然界中分布广泛,在受到外界环境压力影响时,会进入有活力但不可培养的状态,当条件有利时再复苏,这使得它在复杂的环境中恶劣的条件下生存能力增强。但抗生素的滥用以及耐药基因在环境中的传播导致粪肠球菌的耐药逐年上升,... 详细信息

粪肠球菌在自然界中分布广泛,在受到外界环境压力影响时,会进入有活力但不可培养的状态,当条件有利时再复苏,这使得它在复杂的环境中恶劣的条件下生存能力增强。但抗生素的滥用以及耐药基因在环境中的传播导致粪肠球菌的耐药逐年上升,导致的病例在逐年增加,造成的感染难以治疗。前期本实验室分离出了致羔羊脑膜炎粪肠球菌,但它破坏脑组织结构导致炎症的机制尚不清楚。多项研究表明miRNA在炎症的发生发展以及细胞的增殖凋亡过程中发挥重要作用,但在小鼠脑微血管内皮细胞中大部分miRNA作用及分子机制尚不明确。目的:通过转录组学测序结果结合试验验证筛选出与脑膜炎相关的miR,即miR-34c-5p;筛选出miR-34c-5p的靶基因并确定二者之间的相互作用关系;探究miR-34c-5p和靶基因对小鼠脑微血管内皮细胞增殖和凋亡的作用。方法:(1)致脑膜炎粪肠球菌感染小鼠脑组织差异miRNA的筛选:使用致脑膜炎粪肠球菌感染小鼠后采集脑组织进行转录组学测序,对测序结果进行分析并通过q RT-PCR进行验证,确定后续试验所选用的miRNA,对差异miRNA的靶基因进行KEGG分析;(2)miR-34c-5p靶基因的筛选及靶向关系验证:预测miR-34c-5p与候选靶基因的结合位点,将miR-34c-5p的mimics、inhibitor以及阴性对照转染到小鼠脑微血管内皮细胞,提取RNA并反转录后qPCR检测miR-34c-5p及候选靶基因的表达量。将靶基因含有与miR-34c-5p结合位点的片段连接在psi-check 2质粒上构建了双荧光素酶野生型和突变型载体,并将这两种载体与miR-34c-5p mimic和miR-NC分别共同转染到293 T细胞中,对荧光素酶活性进行检测;(3)miR-34c-5p靶向RALY对小鼠脑微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响:将miR-34c-5p mimics、miR-34c-5p inhibitor、miR-NC和RALY-WT、psi-check 2空载体分别或共转染到小鼠脑微血管内皮细胞,使用CCK-8检测细胞增殖情况,TUNEL试剂盒测定细胞凋亡情况,通过荧光定量和Western Blot试验检测凋亡蛋白caspase 3和caspase 9表达量。结果:(1)高通量测序结果中有效读数占比95%以上,错误率低,样品间相关性极强,说明样本选择和测序结果良好。已知miRNA序列长度在21-23 nt的miRNA比例最高,12 h差异表达的miRNA有31个,24 h差异表达的miRNA有113个,60 h差异表达的miRNA有22个,3组共有的差异表达miRNA有2个。测序结果与荧光定量检测差异表达miRNA的结果有相同趋势。(2)RT-qPCR结果显示在小鼠脑微血管内皮细胞(MBMEC)中miR-34c-5p表达量升高会抑制候选靶基因的表达;双荧光素酶报告载体构建成功;双荧光素酶检测结果显示与RALYWT+miR-NC组相比,RALY-WT+miR-34c-5p mimic组相对荧光素酶活性显著降低,而突变组无显著差异,其余候选靶基因组也无显著差异;(3)CCK-8结果显示,miR-34c-5p mimic组OD值相比于阴性对照显著降低,miR-34c-5p inhibitor组则相反。miR-34c-5p mimic+RALY-WT组OD值显著低于miR-34c-5p mimic+psi-check 2组,miR-34c-5p inhibitor+RALY-WT组OD值显著高于miR-34c-5p inhibitor+psi-check 2组。TUNEL检测结果显示miR-34c-5p mimic组和miR-34c-5p mimic+psi-check 2组的TUNEL阳性细胞数量高于miR-NC组,miR-34c-5p mimic+RALY-WT组阳性细胞数高于前两组。荧光定量和Western Blot的检测结果显示miR-34c-5p和RALY表达量升高时caspase 3和caspase 9的表达量也显著升高。结论:(1)miR-34c-5p在感染了致脑膜炎粪肠球菌小鼠脑组织中差异表达;(2)miR-34c-5p能与RALY的3’UTR区靶向结合并抑制它的表达;(3)miR-34c-5p能靶向RALY促进MBMEC凋亡,抑制其增殖。

关键词：脑膜炎 miR-34c-5p 靶基因小鼠脑微血管内皮细胞凋亡

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补肾活血方对高糖高脂诱导损伤的小鼠脑微血管内皮细胞内质网应激和RAGE/LRP-1蛋白表达的影响

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中华中医药杂志 2021年第1期36卷 397-401页

作者：闫敬来张益铭赵佳奇田雅娟李钦青贺文彬山西中医药大学中医脑病学山西省重点实验室晋中030619

目的:在细胞水平探索补肾活血方对高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(BEND3细胞)损伤的改善作用,并探究补肾活血方对高糖高脂导致的内质网应激和转运Aβ相关受体蛋白的作用。方法:采用高糖高脂(25mmol/L葡萄糖,200μmol/L棕榈酸)刺激B... 详细信息

目的:在细胞水平探索补肾活血方对高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(BEND3细胞)损伤的改善作用,并探究补肾活血方对高糖高脂导致的内质网应激和转运Aβ相关受体蛋白的作用。方法:采用高糖高脂(25mmol/L葡萄糖,200μmol/L棕榈酸)刺激BEND3细胞,用CCK-8法筛选合适的补肾方(BS)、活血方(HX)、补肾活血方(BSHX)的最佳用药浓度;应用免疫蛋白印迹法检测BS、HX、BSHX最佳用药浓度对葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、活性转录因子4(ATF4)、核因子κB(NF-κB)抗体以及脑内与转运β淀粉样蛋白相关的晚期糖基化终产物受体(RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)的表达情况。结果:CCK-8检测细胞活力,最终选定补肾方100mg/L、活血方20mg/L和补肾活血方120mg/L;与正常对照组比较,高糖高脂刺激BEND3细胞后,GRP78、p-eIF2α、ATF4、NF-κB、RAGE表达显著增加(P<0.01),LRP-1表达下降(P<0.01);药物干预后,GRP78、p-eIF2α、ATF4、NF-κB、RAGE蛋白下调,BSHX组LRP-1表达显著上调(P<0.05,P<0.01);且以BSHX组最为明显。结论:补肾方、活血方、补肾活血方对高糖高脂诱导的BEND3细胞损伤均有改善作用,但以补肾活血方疗效最为突出,且对高糖高脂导致的内质网应激和转运β淀粉样蛋白受体的蛋白表达具有调节作用。

关键词：补肾活血方高糖高脂小鼠脑微血管内皮细胞内质网应激晚期糖基化终产物受体低密度脂蛋白受体相关蛋白-1

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NMN调节NAMPT和NF-κBp65通路抑制H2O2诱导小鼠脑微血管内皮细胞氧化损伤

NMN调节NAMPT和NF-κBp65通路抑制H2O2诱导小鼠脑微血管内皮细胞...

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作者：邓秀君广西医科大学

学位级别：硕士

目的:血管病变,是常见的糖尿病患者并发症之一,也是造成导致糖尿病患者和其他疾病患者死亡的主要原因之一,血管内皮细胞受损的情况可以在糖尿病早期阶段出现,其中血管氧化应激及其对炎症的反应更加明显。长期处于氧化应激状态下的内皮... 详细信息

目的:血管病变,是常见的糖尿病患者并发症之一,也是造成导致糖尿病患者和其他疾病患者死亡的主要原因之一,血管内皮细胞受损的情况可以在糖尿病早期阶段出现,其中血管氧化应激及其对炎症的反应更加明显。长期处于氧化应激状态下的内皮细胞会发生严重的内皮细胞功能障碍甚至凋亡,从而进一步发展成糖尿病血管病变。烟酰胺单核酸（NMN）是NAD+的前体,它是人体内长寿蛋白的辅因子,其功能主要体现在NAD+上。NMN是NAD+的基因后体,它也是控制人体内成年蛋白长寿功能的主辅因子,其功能主要表现在NAD+上。近年来,越来越多的研究结果表明NMN不仅在医学上可以抵御衰老,还在医学上可以利用改善能源和新陈代谢而产生抗氧化应激和炎性反应。因此,我们研究了NMN对H2O2诱导小鼠脑微血管内皮细胞（b End.3）凋亡,氧化应激和炎症途径的影响。方法:1.体外正常培养和传代小鼠脑微血管内皮细胞（b End.3）,将细胞接种至96孔板,加入不同浓度的H2O2（0、500、700、800、900μM）处理细胞12、24和48h,NMN（0、50、100、200、300、500μM）预处理细胞24h,使用CCK-8试剂检测各个浓度组的细胞增值活性,筛选出用于后续实验的H2O2和NMN浓度,并观察NMN预处理对H2O2诱导细胞增值活性的影响。 ***-8筛选出最适H2O2诱导浓度为800μM,所以我们将细胞分成对照组、H2O2组、50μM NMN+H2O2组、100μM NMN+H2O2组、200μM NMN+H2O2组、300μM NMN+H2O2组、400μM NMN+H2O2组和500μM NMN+H2O2组,用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,观察NMN对H2O2诱导细胞凋亡的影响。 3.根据CCK-8和流式细胞仪检测的结果,我们将细胞分为以下几组:正常组、H2O2组、300μM NMN+H2O2组和300μM NMN组,倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化。用Hoechest 33258试剂对四组细胞进行核荧光染色,在荧光显微镜下观察核裂解和荧光强度。 4.采用JC-1荧光染色检测正常组、H2O2组、300μM NMN+H2O2组和300μM NMN组线粒体膜电位（ΔΨm）的变化,用于评估细胞的早期凋亡。检测正常组、H2O2组、300μM NMN+H2O2组和300μM NMN细胞内的氧化应激指标,包括细胞内的ROS水平,细胞毒性水平指标LDH,线粒体凋亡蛋白酶caspase-3,抗氧化应激酶CAT和SOD酶。 5.将细胞分为正常组、H2O2组、NMN+H2O2组和NMN组,用q RT-PCR技术检测细胞炎症通路基因NF-κBp65、IL-1β、TNF-α、ICAM-1、MMP9和内皮细胞功能相关基因NAMPT、VEGF和e NOS的表达水平。明确NMN对H2O2诱导b End.3细胞凋亡的保护作用是否与NF-κBp65通路的抑制和对内皮细胞功能的恢复有关。 6.将细胞分为正常组,H2O2组,NMN+H2O2组,NMN组,运用蛋白免疫印迹技术检测各组细胞NF-κBp65、IL-1β、TNF-α、ICAM-1、MMP-9和NAMPT的蛋白表达水平。在蛋白水平上明确NMN对H2O2诱导b End.3细胞凋亡的保护作用的分子机制。结果:1.与对照组相比,800、900μM H2O2作用12h,700、800、900μM H2O2作用24h和500、700、800、900μM H2O2作用48h对b End.3细胞的生长都有明显的抑制作用（P<0.05）,其中800μM H2O2作用细胞24h的生长抑制率最接近50%,所以800μM H2O2作用24h被选为诱导细胞氧化应激的最佳条件。50μM NMN+H2O2组、100μM NMN+H2O2组、300μM NMN+H2O2组和500μM NMN+H2O2组与对照组相比,对细胞的生长具有明显的促进作用,与H2O2组相比,除了500μM NMN预处理组,NMN其他组明显提高了细胞的存活率（P<0.05）,说明50-300μM NMN的预处理能抑制H2O2诱导b End.3细胞存活率的下降。 2.流式结果显示与对照组相比,800μM H2O2处理细胞24h,细胞的凋亡率明显上升（P<0.05）,NMN（50、100、200、300、400μM）预处理细胞24h后,与H2O2组比较,细胞的凋亡率有不同程度上的下降（P<0.05）,其中以300μM NMN作用最明显。与CCK-8结果一致,H2O2组和500μM NMN预处理组比较没有统计学意义（P>0.05）,说明NMN具有一定的浓度有效区间。 *** 33258染色结果显示H2O2组的b End.3细胞核浓缩碎裂,细胞核中出现

关键词：烟酰胺单核苷酸炎症通路氧化应激烟酰胺磷酸核糖转移小鼠脑微血管内皮细胞

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非瑟酮改善高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞损伤作用与机制研究

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中国糖尿病杂志 2020年第5期28卷 362-365页

作者：张益铭王洁徐飞飞王梓林田雅娟李钦青楚世峰贺文彬山西中医药大学中医脑病学山西省重点实验室晋中030619

目的探讨非瑟酮(Fis)对高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(BEND3)损伤的改善作用及其机制。方法高糖高脂诱导BEND3损伤,建立体外糖尿病BEND3损伤模型,将细胞分为正常对照组(Con,低糖DMEM完全培养基)、25 mmol/L葡萄糖(HG)+200μmol/L... 详细信息

目的探讨非瑟酮(Fis)对高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(BEND3)损伤的改善作用及其机制。方法高糖高脂诱导BEND3损伤,建立体外糖尿病BEND3损伤模型,将细胞分为正常对照组(Con,低糖DMEM完全培养基)、25 mmol/L葡萄糖(HG)+200μmol/L棕榈酸(PA)模型组(HG+PA)、HG+PA+1μmol/L Fis组(HG+PA+1Fis)、HG+PA+5μmol/L Fis组(HG+PA+5Fis)、HG+PA+10μmol/L Fis组(HG+PA+10Fis)、HG+PA+20μmol/L Fis组(HG+PA+20Fis)。CCK-8检测BEND3细胞存活率,筛选最佳Fis浓度;乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞毒性;ELISA法检测细胞活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、VEGF、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)含量。结果与Con组比较,HG+PA组细胞存活率降低,LDH含量升高(P<0.05);与HG+PA组比较,HG+PA+20Fis组细胞存活率升高,LDH含量降低(P<0.05)。与Con组比较,HG+PA组ROS、NO、iNOS、VEGF、MMP-2、MMP-9、TIMP-1含量升高(P<0.05);与HG+PA组比较,HG+PA+20Fis组ROS、NO、iNOS、VEGF、MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达降低(P<0.05)。结论Fis可改善糖尿病BEND3损伤,可能与抑制细胞内源性ROS及相关氧化因子的产生有关。

关键词：非瑟酮糖尿病脑微血管病变小鼠脑微血管内皮细胞高糖高脂氧化应激

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血塞通上调小鼠脑微血管内皮细胞缺氧模型VEGF通路表达的作用机制

血塞通上调小鼠脑微血管内皮细胞缺氧模型VEGF通路表达的作用机制

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作者：孙行云北京中医药大学

学位级别：硕士

目的:卒中已成为一个全球性的严重问题。柳叶刀神经学杂志发表的研究显示,1990年至2016年,卒中全球年龄标准化发病率下降了 8.1%,而我国却上升了 5.4%,居世界首位。2016年全球因卒中导致死亡人数达550万,其中我国死亡人数约197万,占1/3... 详细信息

目的:卒中已成为一个全球性的严重问题。柳叶刀神经学杂志发表的研究显示,1990年至2016年,卒中全球年龄标准化发病率下降了 8.1%,而我国却上升了 5.4%,居世界首位。2016年全球因卒中导致死亡人数达550万,其中我国死亡人数约197万,占1/3以上。在存活患者中,约有3/4不同程度地丧失劳动能力,重度致残者约占40%。我国急性脑卒中患者第1年复发率达17.7%,5年累积复发率在30%以上,且复发患者死亡率是未复发患者的2.67倍。由此可见,具有高发病率、高致残率、高复发率的卒中已成为我国社会发展的沉重负担,如何预防及改善临床疗效成为研究重点。卒中分为两大类,缺血性卒中(脑梗塞/脑梗死)及出血性卒中(脑出血),其中缺血性卒中占全部卒中的70%,防治意义重大。《中国脑梗死中西医结合诊治指南2017》推荐中西医综合治疗脑梗死,可提高脑梗死患者的临床疗效。而中医方药在急性期及恢复期的治疗,均以活血通络为主,采用活血化瘀类药物已被临床广泛应用。以三七类活血化瘀药为代表的血塞通可显著增加患者脑梗死后血清中血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(VEGFR)的含量,上调其表达。VEGF及VEGFR具有强大的促血管新生及神经保护作用,在脑梗死急性期可减小梗死灶,促进缺血半暗带脑血管的新生,从而挽救更多神经功能。但其上调VEGF表达的确切机制还有待进一步研究和探讨,这正是本课题研究和力求解决的问题。已知可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)是一种具有酪氨酸激酶活性的糖蛋白,其在VEGF通路上没有信号转导功能,但可与VEGF高亲和力结合,从而抑制VEGF信号表达,发挥抗血管生成作用。本课题大胆假设VEGF信号表达的上调,与sFlt-1表达不活跃有关,实验将通过监测VEGF、VEGFR2及sFlt-1三者蛋白含量,来验证假设。方法:本课题主要内容分为两部分:循证部分和实验部分。循证部分对近10年联合血塞通对比单纯西药治疗脑梗死的临床疗效进行了 Meta分析。检索中国知网、万方数据、维普网、中国生物医学文献数据库、PubMed、Embase、the Cochrane Library、Clinical Trials共8个数据库,根据PICOS原则制定纳入标准。纳入文献的研究对象为脑梗塞患者,对照组接受阿司匹林、阿托伐他汀、依达拉奉的治疗,试验组在对照组基础上联合应用血塞通。结局指标为治疗前后NIHSS评分、基于NIHSS评分的疗效判定、血浆粘度、红细胞压积和不良事件情况。利用考科兰偏倚风险评估工具进行质量评价,采用RevMan 5.3软件进行数据处理。实验部分进行了体外实验,实验细胞选择小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3),利用物理缺氧模型模拟脑梗死后缺血缺氧状态,细胞造模后给药最佳浓度的血塞通注射液,复氧一段时间后收集细胞裂解上清液,利用Western Blot方法检测上清液中VEGF、VEGFR2、sFlt-1三种蛋白的含量。实验设置正常组、造模组及实验组,分别检测三组细胞裂解上清液中的三种蛋白,利用Image J软件进行灰度分析、IBM SPSS 21软件进行实验数据的统计分析、GraphPad Prism 8进行作图。选择两独立样本t检验的统计学方法,比较三种蛋白两两组间的差异性,对结果进行讨论后得出结论。结果:Meta分析共纳入10篇文献,结果显示:试验组与对照组的治疗后NIHSS评分差异具有统计学意义,总体效应检验结果[MD=-2.52,95%CI(-2.76,-2.27),P<0.00001]。两组在疗效判定为基本痊愈、显著进步及无变化或恶化时的差异具有统计学意义。基本痊愈[OR=1.88,95%CI(1.40,2.53),P<0.0001],显著进步[OR=1.68,95%CI(1.30,2.17),P<0.0001].进步[OR=0.84,95%CI(0.63,1.10),P=0.21],无变化和恶化[OR=0.26,95%CI(0.18,0.37,P<0.00001)]。血浆粘度改变的情况结果为[MD=-0.55,95%CI(-0.66,-0.43),P<0.00001]。红细胞压积结果为[MD=-4.34,95%CI(-4.77,-3.91),P<0.00001]。不良事件的发生情况,两组间无统计学差异[OR=0.80,95%CI(0.45,1.44,P=0.47)]。实验研究发现:1.缺氧造模 6h 后,复氧 3h、6h、12h三个时间点造模组与对应时间点的正常组相比,细胞活力均有下降(P<0.05);随着复氧时间的延长,OD值呈上升趋势,细胞损伤得到改善。2.复氧3h、6h、12h时,不同浓度的血塞通注射液均对正常细胞有一定抑制作用(P<0.05)。3.复氧3h、6h、12h时,给药不同浓度血塞通的

关键词：急性脑梗死可溶性血管内皮生长因子受体-1 VEGF通路小鼠脑微血管内皮细胞氧糖剥夺/复氧

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非瑟酮对高糖高脂诱导小鼠脑微血管内皮细胞损伤的影响及机制研究

非瑟酮对高糖高脂诱导小鼠脑微血管内皮细胞损伤的影响及机制研究

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作者：张益铭山西中医药大学

学位级别：硕士

目的研究非瑟酮对高糖高脂诱导小鼠脑微血管内皮细胞(Mouse brain microvascular endothelial cells,BEND3 cells)损伤的影响及机制。方法 1.建立高糖高脂诱导小鼠脑微血管内皮细胞模型。实验分组为:正常对照组、高糖高脂模型组(25 mmo... 详细信息

目的研究非瑟酮对高糖高脂诱导小鼠脑微血管内皮细胞(Mouse brain microvascular endothelial cells,BEND3 cells)损伤的影响及机制。方法 1.建立高糖高脂诱导小鼠脑微血管内皮细胞模型。实验分组为:正常对照组、高糖高脂模型组(25 mmol·L-1葡萄糖+200 μmol·L-1棕榈酸)、非瑟酮治疗组(非瑟酮 0.3 μg·mL-1、1.5 μg·mL-1、7.5 μg·mL-1、37.5 μg·mL-1)、(非瑟酮1.5 μg·mL-1、3 μg·mL-1、6 μg·mL-1、12 μg·mL-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)组(20 ng·mL-1)。CCK-8 法检测各组细胞存活率以筛选最佳给药剂量;LDH释放检测法评价非瑟酮细胞毒性;2.免疫蛋白印迹法检测各组细胞凋亡基因蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),BCL2-Associated X 的蛋白质(BCL2-Associated X Protein,Bax)表达情况;***法检测各组细胞氧化应激相关指标活性氧(reactive oxygen species,ROS),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2),过氧化氢酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT),诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS),基质金属蛋白酶 9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9),一氧化氮(Nitric Oxide,NO),丙二醛(malondialdehyde,MDA),基质金属蛋白酶抑制剂 1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1),谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量;4.免疫蛋白印迹法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(epoxy chloropropane Kelch sample related protein-1,Keap1)、核因子 E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)、前醌氧化还原酶-1(NADPH:quinone oxidoreductase-1,NQO1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白的表达情况。结果 ***-8法检测结果表明,与正常对照组相比,高糖高脂模型组细胞存活率明显降低至(58.82±2.619)%(P<0.001),与高糖高脂模型组相比,非瑟酮6 μg·mL-1组小鼠脑微血管内皮细胞的存活率最高,为(73.73±5.891)%(P<0.001),其中阳性对照组小鼠脑微血管内皮细胞的存活率为(76.19±2.623)%(P<0.001);LDH检测结果显示,与高糖高脂模型组相比,非瑟酮1.5 μg·mL-1、3μg·mL-1、6μg·mL-1、12μg·mL-1组小鼠脑微血管内皮细胞的LDH含量梯度降低,其中非瑟酮6 μg·mL-1组小鼠脑微血管内皮细胞的LDH含量最低,为0.36±0.24 U/L(P<0.001)。非瑟酮6μg·mL-1为最佳给药剂量。2.凋亡因子表达结果显示:与正常对照组相比,高糖高脂模型组Bcl-2/Bax比值降低至0.25±0.1(P<0.001);与高糖高脂模型组比较,非瑟酮6μg·mL-1组Bcl-2/Bax 比值显著上调至 0.59±0.23(P<0.05);3.氧化应激相关指标检测结果显示:与空白对照组相比,高糖高脂模型组氧化应激因子 ROS,MMP-2,iNOS,MMP-9,NO,TIMP-1,MDA 含量显著升高(P<0.01),SOD,GSH-Px,CAT含量均降低(P<0.01);与高糖高脂模型组相比,非瑟酮作用后RO S/NO/iNO S/MMP-2/MMP-9/TIMP-1/MDA表达趋势明显降低(P<0.01),SOD/CAT/GSH-PX 含量显著上调(P<0.01);***1/Nrf2/ARE通路蛋白表达检测结果显示:与空白组相比,高糖高脂模型组Nrf2胞浆蛋白表达减少,少量Nrf2转移到核内(P<0.01);非瑟酮作用后Nrf2胞浆蛋白表达降低,细胞内Nrf2蛋白表达发生核移位(P<0.05),NQO1、HO-1蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01);结论 1.6 μ

关键词：非瑟酮糖尿病脑微血管病变高糖高脂氧化应激小鼠脑微血管内皮细胞

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柴油废气颗粒物诱导小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的实验研究

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毒理学杂志 2019年第2期33卷 146-150页

作者：陈莹莹姜文博高淑英哈尔滨医科大学卫生毒理教研室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨柴油废气颗粒物(diesel exhaust particles,DEP)对小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响,为探讨DEP对血脑屏障的损伤作用机制提供线索。方法小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)分别用不同浓度的DEP(0、12.5、25、50和100μg/ml)处理24和48... 详细信息

目的探讨柴油废气颗粒物(diesel exhaust particles,DEP)对小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响,为探讨DEP对血脑屏障的损伤作用机制提供线索。方法小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)分别用不同浓度的DEP(0、12.5、25、50和100μg/ml)处理24和48 h;用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR(qPCR)检测Bcl-2、Bax和Caspase-3基因表达水平,Western blot法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果分别用不同浓度DEP处理bEnd.3细胞培养24和48 h后,其中0、12.5、25、50和100μg/ml剂量组的细胞活力、细胞凋亡数量各剂量组与对照组相比,细胞活力呈下降趋势,且细胞早期凋亡数量呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,12.5、25、50和100μg/ml DEP剂量组处理24和48 h后,Bcl-2 mRNA呈下降趋势,Bax、Caspase-3 mRNA呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,24和48 h 12.5、25、50和100μg/ml DEP剂量组处理24和48 h后,Bcl-2蛋白呈下降趋势,Bax、Caspase-3蛋白呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DEP可能通过诱导小鼠脑微血管内皮凋亡,从而对血脑屏障产生损伤作用。

关键词：柴油废气颗粒物小鼠脑微血管内皮细胞细胞凋亡

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活血定眩胶囊对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3基因表达谱的影响及生物信息学分析

引用

中草药 2017年第8期48卷 1617-1623页

作者：宋敏刘涛巩彦龙周灵通董万涛刘建鸿甘肃中医药大学甘肃兰州730000 甘肃中医药大学附属医院甘肃兰州730020

目的探讨活血定眩胶囊含药血清对体外培养小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3基因表达谱的影响及作用的分子机制。方法将30只大鼠随机分为对照组和活血定眩胶囊组,2组分别ig给予7.5 g/kg活血定眩胶囊和等量生理盐水,连续7 d,采集2组大鼠血清。... 详细信息

目的探讨活血定眩胶囊含药血清对体外培养小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3基因表达谱的影响及作用的分子机制。方法将30只大鼠随机分为对照组和活血定眩胶囊组,2组分别ig给予7.5 g/kg活血定眩胶囊和等量生理盐水,连续7 d,采集2组大鼠血清。将bEnd.3细胞分为对照组、模型组、10%活血定眩胶囊含药血清组,给药后,bEnd.3细胞缺氧6 h。激光显微镜下观察细胞骨架,运用Affymetrix U133 plus2.0基因组表达芯片检测活血定眩胶囊对bEnd.3细胞基因表达谱的影响,应用分子注释系统MAS3.0软件进行聚类分析。结果根据P<0.01,|Fold Change|>3筛选差异基因,对照组与模型组之间共有405个差异基因,其中表达上调的有176个,表达下调的有229个。活血定眩胶囊含药血清组与模型组之间共有368个差异基因,其中表达上调的有146个,表达下调的有222个。这些共同的差异基因生物功能包括内皮细胞迁移的正调控、含氧酸代谢过程、血管内皮生长因子的产生、核转录因子-κB(NF-κB)活性的正向调节等,参与的信号通路包括氧化应激诱导的衰老、有丝分裂前期、血小板聚集(堵塞形成)、血管内皮生长因子信号通路、白细胞介素信号通路、p53通路、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、凋亡信号通路等信号通路。结论活血定眩胶囊对缺氧所致bEnd.3细胞的损伤具有明显的对抗作用,其机制与氧化应激、抑制细胞凋亡、促进血管内皮新生、炎症及免疫反应有关,活血定眩胶囊在基因水平通过多条通路调节血管内皮细胞功能。

关键词：活血定眩胶囊小鼠脑微血管内皮细胞基因芯片抗氧化 bEnd.3细胞

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活血定眩胶囊含药血清减轻小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3缺氧损伤

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中国病理生理杂志 2017年第3期33卷 552-556页

作者：刘涛宋敏巩彦龙周灵通董万涛刘建鸿甘肃中医药大学甘肃兰州730000 甘肃中医药大学附属医院甘肃兰州730020

目的:研究活血定眩胶囊含药血清对抗缺氧所致小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3损伤的作用。方法:将30只大鼠随机分为空白对照组15只和活血定眩胶囊组15只,采集2组大鼠血清。将bEnd.3细胞分为正常组、缺氧模型组和活血定眩胶囊血清组,给药后,b... 详细信息

目的:研究活血定眩胶囊含药血清对抗缺氧所致小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3损伤的作用。方法:将30只大鼠随机分为空白对照组15只和活血定眩胶囊组15只,采集2组大鼠血清。将bEnd.3细胞分为正常组、缺氧模型组和活血定眩胶囊血清组,给药后,bEnd.3细胞缺氧6 h。显微镜下观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,按试剂盒方法检测细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)的含量。结果:活血定眩胶囊含药血清可显著对抗缺氧造成的损伤,明显改善bEnd.3细胞的形态,使缺氧所致细胞凋亡数明显减少,有效抑制缺氧诱导的bEnd.3细胞发生G_1/S期阻滞,抑制MDA生成,增强SOD活性。结论:活血定眩胶囊对缺氧所致bEnd.3细胞的损伤具有明显的对抗作用,其机制与增强细胞抗氧化能力、抑制细胞凋亡有关。

关键词：活血定眩胶囊小鼠脑微血管内皮细胞缺氧细胞凋亡

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活血定眩胶囊含药血清对小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3的影响及基因表达谱分析

活血定眩胶囊含药血清对小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3的影响及基...

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作者：刘涛甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨活血定眩胶囊含药血清对缺氧致小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3损伤和基因表达谱的影响;完善活血定眩胶囊治疗椎动脉型颈椎病的作用机理,为活血定眩胶囊的进一步临床推广应用奠定基础。方法:将bEnd.3分为空白血清正常组,缺氧模型组... 详细信息

目的:探讨活血定眩胶囊含药血清对缺氧致小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3损伤和基因表达谱的影响;完善活血定眩胶囊治疗椎动脉型颈椎病的作用机理,为活血定眩胶囊的进一步临床推广应用奠定基础。方法:将bEnd.3分为空白血清正常组,缺氧模型组,尼莫地平对照组,活血定眩胶囊低、中、高剂量含药血清组(按浓度分为5%、10%、15%),给药后,bEnd.3缺氧6 h。在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架变化;应用MTT比色法检测细胞活性;采用黄嗓吟氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用硫代巴比妥酸反应物法测定丙二醛(MDA)含量,采用硝酸根还原酶法检测一氧化氮(NO);使用酶联免疫检测bEnd.3细胞上清液中的VEGF浓度;采用流式细胞术检测bEnd.3细胞周期及早期凋亡率;釆用基因测序技术-数字基因表达谱法观察了活血定眩胶囊含药血清对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3基因表达谱的影响,筛选处理后差异表达的基因,对其差异基因表达模式进行聚类分析、功能显著性富集分析和显著性富集分析,筛选了活血定眩胶囊含药血清干预细胞的过程中差异表达的基因及它们参与的生物过程和最主要的信号转导途径。结果:1.正常组细胞骨架微丝分布规则,彼此连接,附着在细胞内特定部位,呈丝网状有序排列;模型组可见细胞外形皱缩,间隙加大,微丝断裂,排列紊乱,微丝收缩变短或移向周边,丝网状有序排列消失,少部分微丝缺失出现空隙;活血定眩胶囊血清组和对照组可见细胞间隙小,微丝连接,排列紧密,形态成长梭形。说明活血定眩胶囊含药血清能减轻在缺氧条件下bEnd.3的细胞骨架微丝紊乱。2.与正常组比较,模型组在3个时间点OD值均呈现下降趋势,与模型组相比,3个给药组及对照组的OD值呈现不同程度的升高。可以看出,在24h、48h、72h,中剂量活血定眩胶囊含药血清和对照组的作用优于低、高剂量活血定眩胶囊含药血清(P<0.01),中剂量活血定眩胶囊含药血清与尼莫地平组作用无明显差异,表明活血定眩胶囊血清能促进在缺氧条件下bEnd.3的增殖。3.与正常组相比,模型组bEnd.3细胞由于缺氧促进MDA的释放,减少细胞内NO分泌和SOD活性,表明细胞膜受到了明显损伤,通透性增加。与模型组相比,活血定眩胶囊含药血清组和尼莫地平组能显著抑制细胞上清液中MDA的增加,并显著增强NO的量和SOD活性;中剂量活血定眩胶囊含药血清组与尼莫地平组作用无明显差异,中剂量活血定眩胶囊含药血清组明显优于低、高活血定眩胶囊血清组。4.与正常组相比,模型组bEnd.3细胞分泌的VEGF水平呈现增加。与模型组相比,中剂量活血定眩胶囊含药血清组和对照组均促使缺氧bEnd.3细胞分泌VEGF;中剂量活血定眩胶囊含药血清组的改善作用均明显优于低、高剂量活血定眩胶囊血清组。5.与正常组比较,模型组G1期bEnd.3显著增加(P<0.05),S期细胞显著减少(P<0.05),表明缺氧可诱导bEnd.3细胞发生G1/S期阻滞。与模型组相比,活中剂量活血定眩胶囊含药血清组和尼莫地平组显著增加S期细胞(P<0.05),减少G1期细胞(P<0.05);低、高剂量活血定眩胶囊血清组也有效果(P<0.05),表明活血定眩胶囊含药血清能有效抑制缺氧诱导的bEnd.3发生G1/S期阻滞。6.正常组早期凋亡bEnd.3仅有6.5%;缺氧模型组则高达45.5%;低、中、高剂量活血定眩胶囊含药血清组以及尼莫地平组作用于bEnd.3 6h后,早期凋亡细胞分别为28.0%、17.5%、22.7%、16.1%,与模型组相比差异显著(P<0.01);而中剂量活血定眩胶囊含药血清组同低、高剂量活血定眩胶囊血清组比较能够明显抑制缺氧诱导的bEnd.3早期凋亡的进程。7.根据P<0.05,|Fold Change|>3筛选差异基因,空白组与模型组之间共有405个差异基因,其中表达上调的有176个,表达下调的有229个。活血定眩胶囊组与模型组之间共有368个差异基因,其中表达上调的有146个,表达下调的有222个。这些共同的差异基因生物功能包括内皮细胞迁移的正调控、含氧酸代谢过程、血管内皮生长因子的产生、NF-κB转录因子活性的正向调节等,参与的信号通路包括氧化应激诱导的衰老、有丝分裂前期、血小板聚集、血管内皮生长因子信号通路、白细胞介素信号通路、p53通路、TNF-α信号通路、PPAR信号通路、PI3K-Akt信号通路、凋亡信号通路等信号通路。结论:1.活血定眩胶囊可显著对抗缺氧造成的损伤,明显改善bEnd.3细胞的形态,使缺氧所致细胞凋亡数明显减少,促进bEnd.3细胞增殖,有效抑制缺氧诱导的bEnd.3细胞发生G1/S期阻滞,抑制MDA生成,增强SOD活性和NO、VEGF分泌。2.活血定眩胶囊对缺氧所致bEnd.3细胞的损伤具有明显的对抗作用,其机制与氧化应激、抑制细

关键词：活血定眩胶囊椎动脉型颈椎病小鼠脑微血管内皮细胞基因芯片抗氧化

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