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1 篇 学位论文

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学科分类号

1 篇 医学
- 1 篇 临床医学

主题

1 篇 血管平滑肌表型转...
1 篇 阿帕替尼
1 篇 pdgfr-β
1 篇 mapk信号通路
1 篇 小鼠颈动脉结扎血...

机构

1 篇 华中科技大学

作者

1 篇 邵文超

语言

1 篇 中文

检索条件"主题词=小鼠颈动脉结扎血管损伤"

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阿帕替尼在血管平滑肌表型转换及血管重构中作用的研究

阿帕替尼在血管平滑肌表型转换及血管重构中作用的研究

作者：邵文超华中科技大学

学位级别：硕士

目的:通过建立小鼠颈动脉结扎模型,检测阿帕替尼(Apatinib)对在体颈动脉内膜损伤所致的内膜增生的影响。检测Apatinib对体外PDGF-BB诱导的大鼠原代VSMC增殖、迁移和去分化的影响。通过体外PDGF-BB诱导大鼠原代VSMC和大鼠血管平滑肌细胞... 详细信息

目的:通过建立小鼠颈动脉结扎模型,检测阿帕替尼(Apatinib)对在体颈动脉内膜损伤所致的内膜增生的影响。检测Apatinib对体外PDGF-BB诱导的大鼠原代VSMC增殖、迁移和去分化的影响。通过体外PDGF-BB诱导大鼠原代VSMC和大鼠血管平滑肌细胞系A7r5,阐明Apatinib在血管重构中的作用机制。方法:将C57BL/6J小鼠(野生型,8周,25-30 g,雄性)随机分为3组,每组各6只;分别为:假手术+溶剂对照组、损伤+溶剂对照组及损伤+Apatinib组。于造模前一天开始向小鼠腹腔注射Apatinib(10 mg/kg)或等体积玉米油(溶剂对照),持续给药2周。2周后取小鼠颈动脉,行HE染色和马松(Masson)染色并测量血管内膜(Intimal)厚度,中膜(Media)厚度,计算内膜中膜厚度比值(Intimato-media ratio),以评估Apatinib对新生内膜的影响。选取250 g左右的雄性SD大鼠,采用酶消法分离提取大鼠原代VSMC,第3-7代用于实验,培养至细胞融合度约80%时,改用无血清的培养基饥饿24小时。给予溶剂对照或不同浓度的Apatinib(50 n M,100 n M,200 n M)预处理VSMC 4小时,再用PDGF-BB(30ng/m L)在无血清的培养基中刺激24小时。EdU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)试验检测VSMC增殖表型;Transwell小室细胞迁移试验和细胞划痕试验检测VSMC迁移表型;免疫荧光分析VSMC收缩表型;Western blot检测细胞膜表面及细胞增殖、迁移、凋亡、去分化等过程中关键基因的蛋白水平变化。大鼠VSMC细胞系A7r5饥饿24小时后,用溶剂对照或Apatinib(200 n M)预处理1小时,再给予PDGF-BB(30 mg/m L)刺激不同时间(0 min,5 min,15 min,30 min,45 min),Western blot检测细胞膜表面及细胞增殖、迁移、内膜新生过程中重要通路信号分子的磷酸化和总蛋白表达水平。结果:小鼠颈动脉结扎2周后获取小鼠颈动脉,HE染色表明,与假手术+溶剂对照组相比,损伤+溶剂对照组新生内膜明显;Masson染色示中膜弹力纤维层无明显增厚。与损伤+溶剂对照组相比,注射Apatinib 2周可减轻内膜增生。EdU试验表明,Apatinib呈剂量依赖性降低PDGF-BB诱导的增殖VSMC细胞数量;Western blot证实,Apatinib对凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase 3及Caspase 3-cleaved的表达无明显影响。Apatinib呈剂量依赖性下调PCNA,Cyclin D1的表达,上调抑癌基因P27的表达,对抑癌基因P21无明显效应。Transwell小室细胞迁移试验和细胞划痕试验表明,Apatinib呈剂量依赖性抑制PDGF-BB诱导的VSMC迁移;Western blot证实,Apatinib下调细胞迁移相关蛋白MMP2及MMP9的表达。Western blot证实,Apatinib呈剂量依赖性上调SMα-actin和SM22α的表达;免疫荧光显示,相同曝光时间下,Apatinib可以恢复PDGF-BB诱导的VSMC中SMα-actin的荧光强度;Apatinib可以恢复损伤血管壁VSMC中SMα-actin的荧光强度。Western blot结果表明,Apatinib呈剂量依赖性下调p-PDGFR-β及pPLC-γ1的表达水平,对其总蛋白水平无影响。在细胞系A7r5中,PDGF-BB刺激5分钟后p-PDGFR-β,p-PLC-γ1,p-Erk1/2和p-JNK明显上调并达峰,Apatinib在所观察时间点抑制p-PDGFR-β,p-PLC-γ1,p-Erk1/2和p-JNK的表达,对其总蛋白表达无明显影响。结论:Apatinib可以减轻小鼠颈动脉结扎损伤所致的内膜增生。Apatinib抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMC增殖和迁移。Apatinib在体外和体内均有抑制VSMC去分化的作用。PDGFR-β,PLC-γ1,ERK1/2和JNK信号分子参与了Apatinib对PDGF-BB介导的VSMC表型的调控。

关键词：阿帕替尼小鼠颈动脉结扎血管损伤 PDGFR-β 血管平滑肌表型转化 MAPK信号通路

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