检索结果-内蒙古大学图书馆

绿脓杆菌外毒素A与Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白嵌合表达质粒的构建及其免疫原性的研究

兰州大学学报（自然科学版） 2005年第5期41卷 48-51页

作者：马超黄思扬蒋琳杨福军王革辛芳兰州生物制品研究所甘肃兰州730046 兰州大学生命科学学院甘肃兰州730000

构建外毒素结构域Ia基(EPA103)与Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白(HSV-2-gD)嵌合蛋白表达载体(pET-EgD),得到嵌合表达蛋白.利用外毒素结构域Ia基因表达蛋白的佐剂效应,以pET-EgD表达嵌合蛋白免疫Balb/c小鼠.结果显示:嵌合表达蛋白(pET-EgD)免疫... 详细信息

构建外毒素结构域Ia基(EPA103)与Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白(HSV-2-gD)嵌合蛋白表达载体(pET-EgD),得到嵌合表达蛋白.利用外毒素结构域Ia基因表达蛋白的佐剂效应,以pET-EgD表达嵌合蛋白免疫Balb/c小鼠.结果显示:嵌合表达蛋白(pET-EgD)免疫小鼠,可在小鼠体内诱导产生抗HSV-2特异性抗体.嵌合表达蛋白(pET-EgD)具有较强的免疫原性,为开发研究Ⅱ型单纯疱疹核酸疫苗奠定了基础.

关键词：绿脓杆菌外毒素A 结构域Ⅰa 嵌合表达

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结核杆菌Ag85A/GM-CSF嵌合表达质粒的构建及表达

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免疫学杂志 2003年第2期19卷 146-149页

作者：谢勇恩鲍朗张会东陈玮川北医学院病理生理学教研室四川南充637007 四川大学华西基础医学院感染免疫研究室四川成都610041

目的　探索对结核病DNA疫苗进行基因修饰的新方法。方法　以结核杆菌H3 7Rv 株基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增获得结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因的成熟肽编码区 ,以经PHA诱导后的小鼠脾组织总RNA为模板 ,通过RT PCR获得小鼠粒细胞巨噬细... 详细信息

目的　探索对结核病DNA疫苗进行基因修饰的新方法。方法　以结核杆菌H3 7Rv 株基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增获得结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因的成熟肽编码区 ,以经PHA诱导后的小鼠脾组织总RNA为模板 ,通过RT PCR获得小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的cDNA ,将二者定向克隆入质粒pBK CMV中构建含嵌合目的基因的重组质粒 ,转染培养的COS7细胞后检测嵌合目的基因的表达。结果　成功构建了小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子cDNA与结核杆菌Ag85A抗原基因的真核嵌合表达质粒 ,重组质粒能在COS7细胞中进行稳定表达。结论　本研究首次将细胞因子基因与结核杆菌免疫保护性抗原基因嵌合构建嵌合DNA疫苗。

关键词：结核杆菌 Ag85A GM-CSF 嵌合表达结核病基因修饰 DNA疫苗

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禽坦布苏病毒E基因与沙门菌鞭毛保守区的嵌合表达研究

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中国家禽 2018年第10期40卷 17-20页

作者：施少华程龙飞傅光华陈红梅万春和傅秋玲刘荣昌林建生黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013 福建省禽病防治重点实验室福建福州350013

利用PCR方法从禽坦布苏病毒和肠炎沙门菌分别扩增出E基因和鞭毛基因保守片段(Flic AC和Flic DB),随后通过over-lapping PCR方法将Flic AC片段、E基因和Flic DB片段依序串联后获得Flic AC-E-Flic DB目的片段,克隆到p MD18-T载体中获得重... 详细信息

利用PCR方法从禽坦布苏病毒和肠炎沙门菌分别扩增出E基因和鞭毛基因保守片段(Flic AC和Flic DB),随后通过over-lapping PCR方法将Flic AC片段、E基因和Flic DB片段依序串联后获得Flic AC-E-Flic DB目的片段,克隆到p MD18-T载体中获得重组质粒p MD-Flic AC-E-Flic DB,经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后接入p ET-32a载体,构建原核表达重组质粒p ET-Flic AC-E-Flic DB。表达质粒转化入感受态细胞BL21(DE3)后,经IPTG诱导后表达出Flic AC-E-Flic DB嵌合蛋白,Western-blot鉴定证实与预期融合蛋白一致。

关键词：禽坦布苏病毒 E基因沙门菌鞭毛嵌合表达

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猪瘟病毒E2蛋白猪源化单克隆抗体rHQ06Sw的嵌合表达及抗病毒活性鉴定

猪瘟病毒E2蛋白猪源化单克隆抗体rHQ06Sw的嵌合表达及抗病毒活性...

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作者：陈姝承天津农学院

学位级别：硕士

猪瘟（Classical swine fever,CSF）是严重危害养猪业的一种烈性传染病,给各个国家和地区造成巨大的经济损失,是世界动物卫生组织要求的必须申报的动物烈性传染病之一。猪瘟的病原是猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）,CSFV... 详细信息

猪瘟（Classical swine fever,CSF）是严重危害养猪业的一种烈性传染病,给各个国家和地区造成巨大的经济损失,是世界动物卫生组织要求的必须申报的动物烈性传染病之一。猪瘟的病原是猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）,CSFV的结构蛋白包括囊膜糖蛋白Erns、E1、E2和衣壳蛋白C。CSFV E2蛋白是CSFV主要的保护性抗原,可以诱导机体产生中和抗体,从而抵抗CSFV的感染。现在,已有很多针对CSFV E2蛋白的单克隆抗体,在CSFV的鉴别诊断、抗原变异和抗原表位等研究中有着至关重要的作用。对抗体研究的逐渐深入,高效稳定的基因工程抗体技术已逐渐成为制备抗体的中流砥柱。通过之前的工作,通过免疫小鼠得到了一株鼠源E2单克隆抗体HQ06,HQ06可以特异性识别CSFV C株和Shimen株E2蛋白的线性表位,该单克隆抗体重链为IgG1型,轻链为к型。由于杂交瘤细胞并不能稳定长期保存,且易造成抗性的减少和消失,因此,本研究中利用基因工程技术,将HQ06抗体重链和轻链的可变区与猪源恒定区基因嵌合重组后克隆至真核表达载体,应用悬浮HEK293细胞构建稳定表达抗体的细胞系,制备一株猪瘟病毒E2蛋白猪源化单克隆抗体(rHQ0Sw)。将抗体纯化后,试验结果显示抗体已成功组装,并且可以和兔抗猪免疫球蛋白G反应,这标志着抗体猪源化的成功。之后应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）、蛋白免疫印记试验（Western blotting）、免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）和证实了rHQ06Sw与CSFV E2蛋白的反应活性。应表面等离子共振试验（SPR）验证rHQ06Sw与CSFV E2的结合力。随后,通过交叉反应试验证明了rHQ06Sw对CSFV的特异性。更重要的是对rHQ06Sw抗病毒活性的探究,证明rHQ06Sw可以中和CSFV的感染。综上所述,本研究应用悬浮HEK293细胞稳定表达了具有良好反应原性和中和活性的重组CSFV E2蛋白的猪源化单克隆抗体rHQ06Sw,为研究CSFV E2蛋白结构、功能以及开发新型的CSFV诊断和治疗制剂奠定基础。

关键词：猪瘟病毒单克隆抗体基因工程抗体嵌合表达悬浮培养

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重组蓖麻、相思子毒素A链突变体的嵌合表达和免疫效果评价

重组蓖麻、相思子毒素A链突变体的嵌合表达和免疫效果评价

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第十届中国生物毒素学术研讨会

作者：韩艳辉高姗康琳王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京 100071

虽然美国“9.11”事件发生距今已有十年之久，但是恐怖袭击的阴影依然没有散去，在世界各地时常有或大或小的恐怖袭击事件发生，关于生物恐怖战剂的研究，更是引起了人们的广泛关注.在《禁止生物武器公约》中，蓖麻毒素(RIC)和相思子毒... 详细信息

虽然美国“9.11”事件发生距今已有十年之久，但是恐怖袭击的阴影依然没有散去，在世界各地时常有或大或小的恐怖袭击事件发生，关于生物恐怖战剂的研究，更是引起了人们的广泛关注.在《禁止生物武器公约》中，蓖麻毒素(RIC)和相思子毒素(ABR)已被列为致死性的重要毒素战剂和生物恐怖剂，对有可能受到RIC和ABR威胁的人员接种疫苗进行主动免疫保护，是目前认为唯一有效的医学对策.RIC和.ABR的A链有107个同源性氨基酸，二者的三级结构也很相似，本实验就是以Vi~tta，研究小组的思路为基础，构建了ABR A链突变体mABRA，同时利用实验室前期构建好的RIC A链突变体mRICA，进而构建了mRICA和mABRA的嵌合体***／mABRA.，目的是得到保留良好的免疫原性，并且降低毒性的蛋白作为免疫原.用于制备新型的RIC和ABRA链突变体疫苗，进而研究其是否可作为制备用于动物乃至人体的疫苗的候选抗原.

关键词：重组蓖麻相思子毒素嵌合表达免疫效果

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鞭毛蛋白嵌合表达结核分枝杆菌ESAT-6的黏膜免疫特性

鞭毛蛋白嵌合表达结核分枝杆菌ESAT-6的黏膜免疫特性

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第六届全国免疫学学术大会

作者：张辉焦新安江苏省人兽共患病学重点实验室扬州大学

研究背景:结核病是人类目前面临的最大威胁之一,BCG对青少年TB的预防具有重要的作用,但对于成人肺结核的保护作用有限,迫切需要新型抗结核疫苗。目的:探讨沙门菌鞭毛系统运送结核分枝杆菌ESAT-6的免疫学特性。方法:在成功获得表达嵌合蛋白

关键词：黏膜免疫鞭毛蛋白结核分枝杆菌 ESAT-6 嵌合表达

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针对猪瘟病毒E2蛋白的嵌合猪源化单克隆抗体的表达及抗病毒活性鉴定

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生物工程学报 2017年第8期33卷 1235-1243页

作者：陈姝承孙慧敏李素刘平黄马吉飞仇华吉天津农学院动物科学与动物医学学院天津300384 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150069

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是严重危害养猪业的一种烈性传染病,常造成巨大的经济损失,是世界动物卫生组织要求必须申报的动物疫病之一。猪瘟的病原是猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV),CSFV的结构蛋白由衣壳蛋白(C)和... 详细信息

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是严重危害养猪业的一种烈性传染病,常造成巨大的经济损失,是世界动物卫生组织要求必须申报的动物疫病之一。猪瘟的病原是猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV),CSFV的结构蛋白由衣壳蛋白(C)和囊膜糖蛋白(E^(rns)、E1、E2)构成。E2蛋白是CSFV主要的保护性抗原,可以诱导机体产生中和抗体,从而抵抗CSFV的感染。此前,本团队制备了一株针对CSFV E2蛋白的鼠源单克隆抗体HQ06。文中将HQ06抗体重链和轻链可变区基因与猪源恒定区基因嵌合后克隆至真核表达载体,利用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞制备一株针对CSFV E2蛋白的嵌合猪源化单克隆抗体c HQ06。应用ELISA、Western blotting试验证实了c HQ06与CSFV E2蛋白具有良好的反应性;中和试验结果表明c HQ06可以中和CSFV。综上所述,本研究应用CHO细胞稳定表达了具有良好反应性和中和活性的针对CSFV E2蛋白的嵌合猪源化单克隆抗体c HQ06,为研究CSFV E2蛋白结构、功能以及开发新型的CSFV诊断和治疗制剂奠定基础。

关键词：猪瘟病毒单克隆抗体基因工程抗体嵌合表达悬浮培养

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针对猪瘟病毒E2蛋白的嵌合猪源化单克隆抗体的表达及抗病毒活性鉴定

针对猪瘟病毒E2蛋白的嵌合猪源化单克隆抗体的表达及抗病毒活性鉴...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会

作者：陈姝承孙慧敏李素刘平黄马吉飞仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所天津农学院动物科学与动物医学学院

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是严重危害养猪业的一种烈性传染病,常造成巨大的经济损失,是世界动物卫生组织要求必须申报的动物疫病之一。猪瘟的病原是猪瘟病毒(Classical swin e fever virus,CSFV),CSFV的结构蛋白由衣壳蛋白(C)和... 详细信息

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是严重危害养猪业的一种烈性传染病,常造成巨大的经济损失,是世界动物卫生组织要求必须申报的动物疫病之一。猪瘟的病原是猪瘟病毒(Classical swin e fever virus,CSFV),CSFV的结构蛋白由衣壳蛋白(C)和囊膜糖蛋白(Erns、E1和E2)构成。E2蛋白是CSFV主要的保护性抗原,可以诱导机体产生中和抗体,从而抵抗CSFV的感染。在此前的研究中,制备了一株针对CSFV E2蛋白的鼠源单克隆抗体HQ06。本研究中,将HQ06抗体重链和轻链可变区基因与猪源恒定区基因嵌合后克隆至真核表达载体,利用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞制备一株针对CSFV E2蛋白的嵌合猪源化单克隆抗体cHQ06。应用ELISA、Western blotting试验证实了cHQ06与CSFV E2蛋白具有良好的反应性;中和试验结果表明cHQ06可以中和CSFV的感染。综上所述,本研究应用CHO细胞稳定表达了具有良好反应性和中和活性的针对CSFV E2蛋白的嵌合猪源化单克隆抗体cHQ06,为研究CSFV E2蛋白结构、功能以及开发新型的CSFV诊断和治疗制剂奠定基础。

关键词：猪瘟病毒单克隆抗体基因工程抗体嵌合表达悬浮培养

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儿童INI1基因缺失性肿瘤研究进展

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中华儿科杂志 2024年第1期62卷 82-86页

作者：张诗晗苏雁国家儿童医学中心、首都医科大学附属北京儿童医院儿童肿瘤中心肿瘤内科、儿童血液病与肿瘤分子分型北京市重点实验室、儿童肿瘤国家临床重点专科、儿科重大疾病研究教育部重点实验室北京100045

INI1基因发生遗传畸变时可导致表达完全缺失、表达减少和嵌合表达,发生一系列具有混合表型的多样化肿瘤,其诊断及治疗均具有很大挑战性。儿童INI1基因缺失性肿瘤的预后通常较差,深入了解INI1基因缺失在儿童肿瘤中的作用对改善患儿的治... 详细信息

INI1基因发生遗传畸变时可导致表达完全缺失、表达减少和嵌合表达,发生一系列具有混合表型的多样化肿瘤,其诊断及治疗均具有很大挑战性。儿童INI1基因缺失性肿瘤的预后通常较差,深入了解INI1基因缺失在儿童肿瘤中的作用对改善患儿的治疗和预后至关重要。本文对INI1基因缺失在常见儿童肿瘤中的作用及靶向治疗的最新进展进行综述。

关键词：儿童肿瘤基因缺失靶向治疗性肿瘤嵌合表达治疗和预后研究进展

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人3型腺病毒六邻体高变区氨基酸修饰限制及其应用基础研究

人3型腺病毒六邻体高变区氨基酸修饰限制及其应用基础研究

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作者：周志超广州医科大学

学位级别：硕士

目的：　　构建人3型腺病毒六邻体高变区HVR1,HVR2,HVR5,HVR7上多组不同的氨基酸修饰嵌合重组体，探讨六邻体高变区的氨基酸修饰限制，据此应用到六邻体HVR1和HVR2同时嵌合表达乙肝病毒表面抗原preS1上两个中和抗原表位的人3型重组腺病... 详细信息

目的：　　构建人3型腺病毒六邻体高变区HVR1,HVR2,HVR5,HVR7上多组不同的氨基酸修饰嵌合重组体，探讨六邻体高变区的氨基酸修饰限制，据此应用到六邻体HVR1和HVR2同时嵌合表达乙肝病毒表面抗原preS1上两个中和抗原表位的人3型重组腺病毒，验证是否影响所展示表位的抗原特性。　　方法：　　通过对人3型腺病毒六邻体的同源建模以及与4型和7型的氨基酸序列比对分析，设计多组嵌合外源表位到六邻体高变区HVR1,HVR2,HVR5,HVR7上不同位置的重组腺病毒。以overlap PCR技术扩增出各突变六邻体，酶切后克隆至穿梭质粒pBR322-L/R，重组穿梭质粒pBR322-L/R-mHexon与骨架质粒pBRAdΔE3GFP分别酶切后在*** BJ5183中同源重组，将PCR、酶切和测序鉴定均正确的重组质粒pBRAdΔE3GFP-mHexon经AsiS I线性化后转染AD293细胞，根据能否成功拯救出病毒来判断六邻体高变区的氨基酸修饰限制。而后据此设计六邻体HVR1和HVR2同时嵌合表达乙肝病毒表面抗原preS1上两个中和抗原表位的引物，应用同样的方法构建重组腺病毒质粒pBRAdΔE3GFP-preS1，转染AD293细胞拯救病毒。同时利用原核表达载体pGEX-4T3表达GST融合蛋白 GST-preS1，将重组腺病毒 AD3E-preS1和融合蛋白 GST-preS1分别免疫6-8周龄雌性Balb/c小鼠获得多抗血清。通过ELISA，Western blot实验检测六邻体嵌合表达外源表位的抗原特性。　　结果：　　通过构建多组重组腺病毒质粒的拯救实验，仅有MH1、MH1-6、MH2、MH2-3、MH5、MH5-2、MH7、MH7-2、MH7-3和MH7-4被成功拯救，MH1-2、MH1-3、MH1-4、MH1-5和MH2-2未能成功包装出病毒颗粒，并且外源表位嵌入六邻体后不影响腺病毒的稳定性和生长繁殖特性。据此构建的六邻体HVR1和HVR2同时嵌合表达乙肝病毒表面抗原preS1上两个中和抗原表位的重组腺病毒质粒pBRAdΔE3GFP-preS1可以成功包装出病毒颗粒。嵌合到六邻体HVR1和HVR2的表位KR359和KR127亦成功展示在重组腺病毒颗粒表面，诱导产生的小鼠多抗血清能识别 GST融合表达抗原以及天然的乙肝病毒表面抗原，证明乙肝病毒表面抗原preS1表位KR359和KR127的免疫原性并无改变。　　结论：　　人3型腺病毒六邻体高变区HVR1,HVR2,HVR5,HVR7氨基酸在替换为外源表位时不能被全部删除，其中六邻体高变区的 HVR1中136IVTT139以及148TTNT151，HVR2的164KEGLQIGKDI174以及181KPIYADK187，HVR5的265DGR267以及276 PEIVLYTEN284，HVR7的422IKVKTD427以及432WEKDAN437相对较保守，在被替换后可能影响六邻体的正常折叠导致病毒拯救不成功。后续构建重组腺病毒质粒pBRAdΔE3GFP-preS1同时在六邻体HVR1和HVR2嵌合表位KR359和KR127亦能证实上述结论。并且在六邻体高变区同时嵌合多个外源中和表位时不影响表位自身的免疫原性，为将来多价抗原疫苗研究应用提供基础。

关键词： 3型腺病毒六邻体高变区氨基酸修饰 preS1抗原嵌合表达

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