检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈志国中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

研究背景:肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)作为肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)免疫抑制性的重要驱动因素,是TME中最重要的免疫细胞,占肿瘤体积的50%,对肿瘤的形成、发展起着不可忽视的作用,主要分为经典... 详细信息

研究背景: 肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)作为肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)免疫抑制性的重要驱动因素,是TME中最重要的免疫细胞,占肿瘤体积的50%,对肿瘤的形成、发展起着不可忽视的作用,主要分为经典激活的促炎性M1型TAMs和交替激活的免疫抑制性M2型TAMs,前者又称炎性巨噬细胞,有较强的抗肿瘤活性,能够直接吞噬肿瘤细胞及分泌促炎因子抑制肿瘤生长。后者又称抗炎巨噬细胞,能够分泌大量抑炎因子,诱导TME形成,促进肿瘤增殖、转移等。然而,在肿瘤微环境中TAMs绝大部分是以M2表型存在,它已成为一个有前景的肿瘤治疗靶点。所以如何精准识别肿瘤细胞的同时介导靶向可控调节TAMs向M1表型转化显得尤为重要。 DNA不仅是生命遗传密码的载体,还是可编程纳米结构的理想材料,可以根据寡聚核苷酸之间的碱基互配原则来自组装成不同尺寸和形状的二维和三维的DNA纳米结构,由此发展来的动态DNA纳米技术由于其高度的可编辑的特性被广泛用于生物成像、生物检测和药物递送等方面。正因为DNA纳米结构具有可修饰性、可控性、生物亲和性、可编辑等特性,所以为肿瘤精准识别和治疗提供了新的思路。我们基于动态DNA纳米技术,自主设计了一种肿瘤细胞驱动的邻近锚定非线性杂交链式反应(Panel-HCR)的策略,释放Cp G寡脱氧核苷酸(Cp G-ODNs),用于肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的按需调节。该策略实现了肿瘤的精准识别与治疗,是通过动态DNA纳米技术调节TME中肿瘤细胞和TAMs的群体免疫活性关系,最终实现抗肿瘤免疫疗法的首次成功尝试。我们相信,这种策略可以扩展到识别其他细胞表面生物标记物和释放其他免疫调节剂,从而为调节免疫抑制性TME和开发抗肿瘤疗法提供新的思路。研究目的: 设计一种肿瘤细胞驱动的邻近锚定非线性杂交链式反应(Panel-HCR)策略,该策略分为识别-组装模块和释放-调节模块。该策略不仅能够高特异性、高灵敏度的在单细胞、组织和活体小鼠内进行成像检测,还可以在成像的同时释放免疫佐剂Cp G-ODNs对TAMs进行按需重编程,从而发挥抗肿瘤作用。研究方法: 1.肿瘤细胞驱动的邻近锚定非线性杂交链式反应(Panel-HCR)策略—识别-组装模块 1)设计本策略所涉及的核酸序列,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)、原子力显微镜(Atomic force microscopy,AFM)、荧光检测及纳米粒度分析仪(Dynamic light scattering,DLS)对核酸序列及自组装产物进行可行性验证,同时又对自组装过程及产物进行表征。 2)采用单一变量优化了本策略的反应条件,包括反应时间、识别探针(EP和TP)和底物浓度。并采用PAGE优化识别探针相互作用区碱基数量。 3)采用激光共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)研究了识别探针与肿瘤细胞的特异性结合,同时采用流式细胞仪(Flow cytometry,FCM)和原子力显微镜(Atomic force microscopy,AFM)进一步验证。 4)采用CLSM进行了识别探针完整性研究,使用CCK-8实验评估了本策略的细胞毒性。 5)采用荧光检测验证了自组装产物随时间的变化的情况。 6)使用CLSM、免疫荧光检测、小动物活体成像仪分别对单个细胞、人组织、小鼠模型进行成像检测。 2.肿瘤细胞驱动的邻近锚定非线性杂交链式反应(Panel-HCR)的策略—释放-调节模块 1)体外抗肿瘤能力研究诱导M0型巨噬细胞(RAW264.7细胞)向M1型转化:采用倒置显微镜观察了经Panel-HCR策略诱导后的细胞形态变化。使用CLSM、蛋白质印迹法(Western blot,WB)、FCM研究了经Panel-HCR策略诱导后细胞中M1型标志物的表达情况及相应信号通路下游分子的表达情况。同时,又通过El ISA检测试剂盒研究了经Panel-HCR策略诱导后不同浓度的肿瘤细胞对于促炎因子分泌的影响。最后使用FCM探索了经Panel-HCR策略诱导后肿瘤细胞凋亡的情况。诱导M2型TAMs向M1型转化:采用倒置显微镜观察经Panel-HCR策略诱导后细胞的形态变化。使用CLSM、WB、FCM研究了经Panel-HCR策略诱导后细胞中M1型标志物的表达情况及M2型标志物的表达情况。 2)体内抗肿瘤能力研究:建立好荷瘤小鼠模型,记录下对荷瘤小鼠治疗期间的体重、肿瘤体积,治疗结束后取小鼠的血液进行生化及血常规分析和小鼠的主要器官(肝脏、脾脏、心脏、肾脏、肺脏)进行常规组织学检

关键词： MicroRNA DNA纳米结构非线性杂交链式反应 CpG-ODNs 巨噬细胞重编程

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纳米缓释型CO供体SMA/CORM2通过调控巨噬细胞重编程缓解博来霉素诱导的肺纤维化

纳米缓释型CO供体SMA/CORM2通过调控巨噬细胞重编程缓解博来霉素...

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作者：郭春玉安徽医科大学

学位级别：硕士

研究背景特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种由慢性炎症反应引起的进行性和不可逆性的间质性肺疾病。IPF预后差,诊断后中位生存期约2-4年,迄今为止治疗方法有限。目前,IPF的发病机制尚未完全阐明,但有足够证据表... 详细信息

研究背景特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种由慢性炎症反应引起的进行性和不可逆性的间质性肺疾病。IPF预后差,诊断后中位生存期约2-4年,迄今为止治疗方法有限。目前,IPF的发病机制尚未完全阐明,但有足够证据表明与免疫炎症损伤相关。一氧化碳(carbon monoxide,CO)是体内的一种重要气体信号分子,在生理和病理条件下具有细胞保护和维持机体内环境稳态的功能。此前,课题组开发了一种抗炎气体分子CO聚合物胶束给药系统,即SMA/CORM2。课题组前期研究结果发现SMA/CORM2对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠结肠炎和对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的急性肝损伤具有治疗作用。这些发现表明SMA/CORM2可治疗多种炎症性疾病,这促使课题组进一步研究SMA/CORM2在IPF中的作用。研究目的本实验通过博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的IPF模型来研究SMA/CORM2在间质性肺纤维化中的适用性以及相关的机制。研究方法(1)通过重复剂量腹腔注射BLM(0.035 U/g,2次/周,连续4周)建立肺纤维化模型,空白对照注射生理盐水。SAM/CORM2处理组在每次注射BLM前24h予以尾静脉注射不同剂量的SAM/CORM2(0.1、1.0、10mg/kg),BLM对照予以生理盐水处理。在首次注射BLM后33天对小鼠进行肺功能检测,并留取生物样本用于组织病理学检测、Western blotting、RT-PCR等检测,以研究SAM/CORM2对BLM诱导的IPF的作用、剂量反应关系和相关的机制。(2)根据实验(1)的实验结果得到SAM/CORM2的最佳剂量,即0.1mg/kg。在小鼠每次暴露BLM前24h分别予以尾静脉注射0.1mg/kg失活SAM/CORM2(i SAM/CORM2)和水解SAM,腹腔注射0.01mg/kg CORM2(相当于0.1mg/kg SAM/CORM2的CO载量)。以验证CO作为SAM/CORM2的效应分子发挥缓解BLM诱导的IPF的作用,并评价SAM/CORM2在体内的生物利用度。(3)对SAM/CORM2的安全性进行评估,包括对实验(1)中小鼠血清肝肾功能的检测;予以正常小鼠腹腔注射0.1mg/kg SAM/CORM2后检测肺组织的病理改变和相关分子的表达水平。结果(1)由肺组织形态学、病理组织学和Masson染色检查等结果可知BLM可引发严重的肺部炎症和间质纤维化,SMA/CORM2处理能显著抑制炎症与纤维化的发生发展。Western blotting和RT-PCR检测检测结果表明SMA/CORM2对IPF的抑制作用是通过调控TGF-β/Smad2/3信号通路,以及该通路的后续事件,即肺泡上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)实现的。(2)进一步的研究结果发现SAM/CORM2显著抑制BLM所诱导的CD206与Arg-1的上调,即抑制巨噬细胞重编程为抗炎表型。表明SMA/CORM2通过调控巨噬细胞重编程影响其下游事件,即TGF-β/Smad2/3信号通路,以及该通路的后续事件EMT。同时,本研究发现予以SMA/CORM2后与巨噬细胞重编程相关的低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor,HIF-1α)和下游信号分子血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)下调,提示SMA/CORM2通过HIF-1α和下游信号分子HO-1调控巨噬细胞重编程。(3)本研究通过对照处理i SAM/CORM2和SMA证实CO作为SMA/CORM2的效应分子发挥缓解IPF的作用。同时本课题将SMA/CROM2与同等CO载量的CORM2进行比较,发现SMA/CROM2具有更好的保护效果,表明基于高渗透长滞留(enhanced permeability and retention,EPR)效应的纳米药物SMA/CROM2具有更高的生物利用度。此外,课题组通过对肝肾功能的检测以及对肺组织的检测评价了SMA/CROM2的安全性,均未发现SMA/CROM2相关的不良效应。结论本研究发现SMA/CROM2可以通过控释效应分子CO调控巨噬细胞重编程达到缓解BLM诱导IPF的目的。同时经过安全性的验证未发现不良效应。因此本研究认为纳米缓释型CO供体SMA/CORM2具有治疗间质性肺纤维化的潜力。

关键词：特发性肺纤维化巨噬细胞重编程博来霉素一氧化碳缺氧诱导因子-1α

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基于“血水同病”理论探讨中药调控子宫内膜异位症炎症微环境的研究进展

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中药新药与临床药理 2024年第6期35卷 928-934页

作者：郑玮琳符之逸温丹婷刘浩曹立幸广东省第二人民医院广东广州510220 广州中医药大学第二临床医学院广东广州511400 广州中医药大学第二附属医院广东省中医院广东广州510030

子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)是一种炎症性疾病,炎症微环境是其发生发展的关键环节。中医学认为“血水同病”,即湿瘀互结是EMs的关键病机,炎症微环境是EMs湿瘀状态的体现,正气不足导致水湿内生,瘀血停滞是湿瘀互结状态形成的基础... 详细信息

子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)是一种炎症性疾病,炎症微环境是其发生发展的关键环节。中医学认为“血水同病”,即湿瘀互结是EMs的关键病机,炎症微环境是EMs湿瘀状态的体现,正气不足导致水湿内生,瘀血停滞是湿瘀互结状态形成的基础。从现代分子生物学阐释EMs的发病机制,巨噬细胞调控的炎症微环境是“湿”形成的基础,巨噬细胞参与的血管生成是“血瘀”形成的关键。探讨EMs炎症微环境与“血水同病”理论的微观联系,有助于从新的视角阐明EMs的中医病机内涵;以巨噬细胞为靶点,可为EMs的中医证治提供有益参考。

关键词：子宫内膜异位症炎症微环境巨噬细胞重编程血水同病湿瘀互结生物学内涵

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炎症消退和神经重建在小口径组织工程血管长期通畅中的作用研究

炎症消退和神经重建在小口径组织工程血管长期通畅中的作用研究

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作者：李彦朝中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：博士

心血管疾病是威胁人类健康的第一大疾病,全球每年有730万人死于缺血性心脏病,列各病之首。冠状动脉旁路移植术、血液透析或外周血管闭塞治疗等使小口径TEBV(TEBVs<6mm)的临床需求日益增大。但目前还未见小口径TEBV应用于临床产品的报... 详细信息

心血管疾病是威胁人类健康的第一大疾病,全球每年有730万人死于缺血性心脏病,列各病之首。冠状动脉旁路移植术、血液透析或外周血管闭塞治疗等使小口径TEBV(TEBVs<6mm)的临床需求日益增大。但目前还未见小口径TEBV应用于临床产品的报道,究其原因主要是因为小口径TEBV移植后容易发生5方面问题:急性血栓形成、吻合口内膜增生、动脉瘤形成、感染、动脉粥样硬化进展和钙化;因此构建保持长期通畅小口径TEBV仍是领域内难题和全球性挑战。小口径TEBV在植入体内后引发的急慢性炎症反应是引起小口径TEBV血栓和内膜增生的重要诱因,目前公认的解决办法是促进TEBV的早期内皮化。内皮祖细胞(EPCs)作为促进TEBV实现在体内皮化的靶细胞,诱导其归巢并分化为内皮细胞是小口径TEBV在体构建的策略。研究表明急性炎症反应可以促进组织再生发生和骨髓EPC的动员,而炎症的及时消退对归巢干细胞的存活又十分必要,因此及时促进炎症消退对TEBV在体内皮化和保持长期通畅可能有重要作用。有研究发现神经轴突导向因子1(netrin-1)在天然血管的内皮细胞中有表达,其可作用于UNC5B和DCC受体促进血管生成,并具有抗炎作用。本研究采用层层自组装的方式构建壳聚糖纳米颗粒包裹netrin-1修饰的小口径TEBV,通过大量体内和体外实验研究其在调控巨噬细胞(MΦ)表型转化和小口径TEBV炎症消退及内皮化中的作用和机制。本研究构建的netrin-1修饰小口径TEBV植入后及时促炎症消退并顺利完成内皮化,最终在正常大鼠体内可保持14个月的通畅。但是在植入糖尿病大鼠后,由于机体脂质代谢紊乱,动脉粥样硬化易发,TEBV发生钙化的比例却极高,直接影响移植血管的通畅和功能。小口径TEBV移植是治疗糖尿病中小血管病变的重要手段,因此,如何在高糖下防止TEBV钙化、促进远期通畅,是TEBV移植治疗糖尿病血管病变需解决的关键问题。自体环境中人体除毛细血管外几乎所有血管都受交感缩血管纤维的神经支配,我们前期研究发现TEBV神经长入与平滑肌正常重建呈正相关,但其机制尚不清楚,所以深入研究神经重建对于小口径TEBV的作用具有重要意义。因此,围绕上述科学问题,我们从四个方面深入研究炎症消退和神经重建在构建抗血栓和抗高糖钙化的可保持长期通畅的TEBV中的重要作用:一、netrin-1调控小口径TEBV炎症消退及其机制研究本实验通过层层自主装方式将netrin-1包裹于壳聚糖纳米颗粒中并交联于TEBV表面,使TEBV具有良好的力学强度和长时间稳定缓释功能分子的能力以解决炎症和血栓形成问题。在体外通过流式、免疫荧光等方式检测了netrin-1对MΦ表型转化的作用,并进一步检测其上清炎症因子来验证转化效率,体内通过免疫荧光方式检测TEBV原位MΦ的浸润以及netrin-1对于炎症消退的作用。结果发现netrin-1可作用于A2b受体激活MΦ内PPARγ信号通路从而将其重编程为强表达CD163的抗炎型。在将netrin-1修饰的TEBV移植入大鼠体内后,发现netrin-1可促进在血管植入后3-7 d时原位浸润的MΦ转化为抗炎型,之后在14 d时已流出内膜表面,从而实现小口径TEBV的早期炎症消退,为归巢入的干细胞提供良好的再生微环境。二、炎症消退对小口径TEBV内皮化意义及其机制研究本部分我们研究在炎症消退中起关键作用的MΦ对EPCs增殖,迁移和血管生成能力的影响。此基础上在大鼠体内研究了小口径TEBV炎症消退和内皮化关系并探究其作用机制。首先,通过大量对比研究实验找到了提取MΦ外泌体时间、经济成本低且获得纯度高的超高速离心结合蔗糖垫方法,之后提取了不同表型MΦ的外泌体与EPCs共培养,观察其对EPCs功能的影响。结果发现促炎型MΦ外泌体可促进EPCs迁移,但长期存在不利于其增殖,而抗炎型MΦ外泌体则可明显提升EPCs的增殖和基质胶成管能力。Netrin-1修饰的小口径TEBV在植入体内后发现,其内皮化进程与炎症消退息息相关,炎症消退组的TEBV在30 d时完成早期内皮化并保持较长时间通畅,证实了及时促进TEBV炎症消退是其实现早期内皮化的必要条件。在临床血管移植中,炎症总是血栓形成和阻塞血管移植物的重要诱因,本研究将为血管移植物在宿主中的长期存活提供新的视角,也可能为其他炎症性疾病提供有效治疗方法。三、糖尿病下神经元外泌体对血管平滑肌细胞钙化作用及其机制研究本部分研究发现神经外泌体对抑制高糖条件下血管平滑肌细胞(SMC)表型转化和氧化应激具有显著作用,进一步对神经外泌体做质谱分析,发现其中含有大量的抑制氧化应激蛋白prdx-1。电镜和BCA蛋白浓度测定发现高糖状态下神经分泌外泌体的数量锐减,免疫荧光结果显示是这是由于负责囊泡运输的Rab35激活受到抑制。本研究通过外源性递送DENND1A,发现神

关键词：小口径组织工程血管炎症消退内皮祖细胞巨噬细胞重编程糖尿病血管钙化神经元外泌体平滑肌表型转化神经重建二级响应系统

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PepO抑制三阴乳腺癌的效应及机制研究

PepO抑制三阴乳腺癌的效应及机制研究

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作者：刘必忱重庆医科大学

学位级别：博士

研究背景:乳腺癌是影响妇女的最常见癌症,其发病率和死亡率预计在未来几年将显著增加。乳腺癌亚型之一的三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer,TNBC）是雌激素受体（ER）,孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2（Her2）均阴性... 详细信息

研究背景:乳腺癌是影响妇女的最常见癌症,其发病率和死亡率预计在未来几年将显著增加。乳腺癌亚型之一的三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer,TNBC）是雌激素受体（ER）,孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2（Her2）均阴性的乳腺癌。临床特点是易侵袭、复发率高且预后不佳,患者生存期短。临床上,局部手术和全身化疗是主要的治疗方式,但化疗一旦耐药极易发生复发和转移。另外由于TNBC缺乏相应的受体,靶向治疗和内分泌治疗临床成效欠佳。故免疫治疗被认为在治疗三阴性乳腺癌策略中是有前景的治疗策略,然而目前FDA批准的免疫检查点抑制剂治疗和Car T细胞治疗,成本高,耗时长,不能满足临床的大量需求。所以寻求更为经济安全有效的治疗手段治疗肿瘤依然是目前亟待解决的问题。肺炎链球菌内肽酶O（PepO）是一种分子量为72k D的肺炎链球菌毒力蛋白,以TLR2/TLR4依赖性方式诱导强烈的先天免疫应答。课题组前期研究发现,PepO可诱导M2样巨噬细胞重编程为M1样巨噬细胞。而在乳腺癌肿瘤微环境中,巨噬细胞是重要的固有免疫细胞,可极化为抑制肿瘤的M1样巨噬细胞或促进肿瘤的M2样巨噬细胞在肿瘤微环境中发挥作用。很明显,将肿瘤微环境中的促肿瘤的M2样巨噬细胞重编程为抗肿瘤的M1样巨噬细胞,可以增强M1样巨噬细胞抗肿瘤特性。然而PepO通过何种分子机制诱导M2样巨噬细胞重编程为M1样巨噬细胞,PepO诱导M2样巨噬细胞重编程为M1样巨噬细胞是否激活其杀肿瘤特性?在体内,PepO能否诱导肿瘤相关巨噬细胞（M2样）重编程为M1样巨噬细胞同时抑制肿瘤进程,尚不清楚。目的:本研究旨在明确PepO在体内外抗肿瘤效应,阐明PepO诱导肿瘤相关巨噬细胞重编码的分子机制,以及抗肿瘤作用的机制,为PepO进一步开发成具有治疗意义的临床药物提供理论依据,为三阴性乳腺癌的免疫治疗提供新的思路。方法:在体外,采用Transwell实验将三阴性乳腺癌细胞PY8119或4T1细胞与M2样骨髓巨噬细胞或PepO诱导后的M2样巨噬细胞共培养,利用流式细胞术（Flow cytometry,FCM）计数凋亡细胞,明确PepO是否诱导M2样巨噬细胞重编程为杀肿瘤的巨噬细胞;采用转录组测序（RNA-seq）初步评价PepO对巨噬细胞抗肿瘤功能的影响。在体内,选取鼠源三阴性乳腺癌细胞系PY8119在野生（WT C57BL/6）小鼠体内建立三阴性乳腺癌原位癌模型,明确PepO在体内的抗肿瘤效应;采用免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）,免疫荧光（Immunofluorescence,IF）以及流式细胞术检测肿瘤微环境中M1和M2样巨噬细胞分布密度和比例,以及CD8+T细胞数量和活化的细胞毒性T细胞的比例;采用TUNEL和免疫荧光,评价在肿瘤组织中肿瘤细胞凋亡水平、肿瘤组织细胞增殖情况以及肿瘤组织细胞上皮间质转化进程（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）;采用转录组测序（RNA-seq）探究PepO治疗早期对肿瘤微环境的影响,以及探究PepO对M2样巨噬细胞重编程后的基因改变;在建模小鼠尾静脉注射氯磷酸盐脂质体（clodronate liposomes）耗竭体内巨噬细胞,探究在体内PepO抗肿瘤效应是否依赖于巨噬细胞。采用Nude小鼠建立三阴性乳腺癌原位癌模型,PY8119细胞与巨噬细胞混合注射到小鼠乳房垫中,评价PepO诱导后的巨噬细胞在体内的杀肿瘤能力;采用TLR2（toll-like receptor2）缺陷鼠(TLR2-/-)和TLR4（toll-like receptor 4）缺陷鼠(TLR4-/-)建立三阴性乳腺癌原位癌模型,阐明PepO诱导巨噬细胞抗肿瘤效应是否依赖于TLR2和TLR4。采用RT-q PCR,ELISA检测PepO诱导巨噬细胞重编程的表型标志物基因的表达变化和细胞因子分泌变化;采用Western blot探究PepO诱导M2样巨噬细胞重编程为M1样杀肿瘤巨噬细胞的分子机制;采用抗肿瘤药物阿霉素（Doxorubicin）与PepO联合治疗,明确PepO临床应用的潜在价值。结果:***诱导M2样巨噬细胞重编程为具有杀肿瘤效应的M1样巨噬细胞。在体外,M2样巨噬细胞经PepO诱导24小时后,其M1巨噬细胞标志物表达上调,M2样巨噬细胞标志物表达下调。此外,M2样巨噬细胞经PepO诱导后与三阴性乳腺癌细胞共培养显著地促进肿瘤细胞凋亡。转录组数据显示,PepO将M2表型的巨噬细胞极化成M1表型,同时增强了巨噬细胞杀伤、吞噬以及一氧化氮生物合成等功能。2.在体内PepO显著抑制肿瘤生长。与对照组相比,PepO治疗之后,肿瘤生长被抑制,肿瘤重量减少,组织病理学切片TUNEL染色结果

关键词：肺炎链球菌内肽酶O(PepO) 三阴性乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞巨噬细胞重编程

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APAP急性肝损伤中CO介导的M2型巨噬细胞极化在肝细胞再生中的作用

APAP急性肝损伤中CO介导的M2型巨噬细胞极化在肝细胞再生中的作用

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作者：宋丙栋安徽医科大学

学位级别：硕士

研究背景对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)是最常见引起肝损伤的药物,是引起急性肝衰竭的主要原因,但已知的治疗选择仍很有限。过量使用APAP而产生的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和随后发生的炎症反应是导致肝损伤的主要原因... 详细信息

研究背景对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)是最常见引起肝损伤的药物,是引起急性肝衰竭的主要原因,但已知的治疗选择仍很有限。过量使用APAP而产生的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和随后发生的炎症反应是导致肝损伤的主要原因。一氧化碳(Carbon monoxide,CO)是一种重要的气体分子,具有抗氧化和抗炎功能。在课题组前期我们研究纳米设计的CO供体SMA/CORM2在治疗右旋糖酐硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠结肠炎中的作用的基础上,本研究提出SMA/CORM2在APAP诱导的小鼠急性肝损伤模型中发挥着重要的作用,并以期阐明其发生的机制。研究目的探讨纳米设计的CO供体SMA/CORM2对APAP诱导急性肝损伤的保护作用及其作用机制。研究方法本实验分为动物实验和体外细胞实验两部分。其中,动物实验采用北京维通利华公司(中国北京)购买的成年健康雄性CD-1小鼠(34-36g),另一部分实验小鼠来自日本崇城大学,用于检测小鼠体内CO含量。实验动物在环境温度20-25℃、湿度50±5%、12h的明暗循环的条件下进行适应性喂养1周,自由饮水和进食。所有实验均经安徽医科大学和日本崇城大学医学伦理委员会批准,并根据安徽医科大学和日本崇城大学动物处理实验规程进行。在实验过程中,按照实验方案将小鼠随机分组,小鼠在给药前禁食12h。通过腹腔注射300 mg/kg的APAP建立肝损伤模型。在SMA/CORM2治疗组中,APAP注射1 h后通过尾静脉注射SMA/CORM2。在预定时间内处死小鼠并称量体重,建立剂量—效应(1、5、25mg/kg)和时间—效应关系(0、2、4、24、48h)。体外实验部分是将巨噬细胞RAW264.7接种在6厘米培养皿中静息过夜后,首先,加入不同浓度的CO供体SMA/CORM2(0、0.01、0.025、0.05、0.1mg/ml),在预定的时间后(0、2、4、24、48h)去除培养基收集细胞,观察CO对巨噬细胞极化的影响;其次,加入CO供体SMA/CORM2(0.1mg/ml),在培养预定时间(24h)之后,收集培养基作为条件培养基。随后,将AML12细胞接种在6厘米培养皿(1.5×10～5细胞/孔)或96孔板(5000细胞/孔)中静息过夜后,移出培养基并添加上述条件培养基,培养24h和48h后观察CO诱导的巨噬细胞极化对肝细胞增殖的影响。结果(1)本研究通过观察在APAP诱导急性肝损伤模型中HIF-1α、HO-1以及巨噬细胞极化的动态变化,发现在APAP诱导肝损伤的不同时间点HIF-1α、HO-1表达及巨噬细胞极化存在差异,HIF-1α在肝损伤早期高表达;HO-1在肝损伤严重时表达升高,起保护作用;巨噬细胞在肝损伤早期主要向M1型极化,在肝损伤后期主要向M2型极化。同时,体外实验证实CO可诱导巨噬细胞向M2型极化。(2)APAP施用后1h,通过尾静脉注射CO供体SMA/CORM2后,可明显降低小鼠血清ALT、AST、GSH和MDA等水平,有效保护APAP诱导的急性肝损伤。(3)SMA/CORM2施用后,小鼠血液以及肝脏的CO含量水平显著升高。(4)APAP施用后1h后,通过尾静脉注射CO供体SMA/CORM2后,发现M1型巨噬细胞极化被显著抑制,M2型巨噬细胞表达显著升高。(5)APAP施用后1h,通过尾静脉注射CO供体SMA/CORM2后,发现HIF-1α显著被抑制。(6)APAP施用后1h,通过尾静脉注射CO供体SMA/CORM2后,发现CO可激活Pi3k/Akt/m TOR信号通路,促进了肝细胞的增殖与再生。结论本研究发现SMA/CORM2释放的CO通过抑制HIF-1α来调控巨噬细胞重编程为M2型,从而对APAP诱导的急性肝损伤起到了保护作用。因此,我们预期SMA/CORM2可作为APAP诱发肝损伤以及其他炎症性疾病的治疗方案。

关键词：对乙酰氨基酚药物性肝损伤一氧化碳巨噬细胞重编程缺氧诱导因子-1α

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Netrin-1调控炎症消退改善干细胞微环境促工程血管内皮化

Netrin-1调控炎症消退改善干细胞微环境促工程血管内皮化

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2017中国生物材料大会

作者：李彦朝万思敏刘歌霍达蔡旺曾文朱楚洪第三军医大学人体解剖学教研室国家地方联合工程重点实验室血管植入物中心重庆市生物力学与组织工程重点实验室重庆 400038

(引言)目前，冠状动脉旁路移植术(CABG)，血液透析或外周血管闭塞治疗都需要小口径的血管植入物，对小口径组织工程血管(TEBVs＜6mm)的需求日益增大[1]。内皮祖细胞(EPC)作为促进工程血管实现在体内皮化的靶细胞，诱导其归巢并分化为内... 详细信息

(引言)目前，冠状动脉旁路移植术(CABG)，血液透析或外周血管闭塞治疗都需要小口径的血管植入物，对小口径组织工程血管(TEBVs＜6mm)的需求日益增大[1]。内皮祖细胞(EPC)作为促进工程血管实现在体内皮化的靶细胞，诱导其归巢并分化为内皮细胞是组织工程血管在体构建的策略[2-4]。但是工程血管作为异物植入体内后会引起机体天然免疫反应，出现炎症。

关键词：组织工程血管炎症消退巨噬细胞重编程内皮祖细胞外泌体

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