检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2000年第3期20卷 250-255页

作者：陈渝萍刘德培薛社普中国医学科学院基础医学研究所国家医学分子生物学重点实验室中国协和医科大学基础医学院细胞生物室北京100005

应用mRNA差异显示技术分析了药物诱导MEL细胞沿红系分化过程中基因表达的改变.以六个锚定引物和六个随机引物共36种组合进行差异显示分析,得到67个差异片段.对部分片段进行克隆测序,获20个片段的序列,其中12个新的表达序列标签.以反向... 详细信息

应用mRNA差异显示技术分析了药物诱导MEL细胞沿红系分化过程中基因表达的改变.以六个锚定引物和六个随机引物共36种组合进行差异显示分析,得到67个差异片段.对部分片段进行克隆测序,获20个片段的序列,其中12个新的表达序列标签.以反向斑点杂交检测部分差异显示带的差异性,阳性率为27/39(69%).

关键词： MEL细胞红系分化差异显示分析

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通过2次PCR扩增在中性凝胶中直接进行差异显示分析

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云南大学学报（自然科学版） 1998年第S4期20卷 485-487页

作者：谭德勇罗兰赖建华舒坤贤云南大学生物系昆明650091 昆明医学院第一附属医院产科昆明650031

将ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物再次扩增后直接进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，ＥＢ染色后在紫外灯下可直接照相观察基因表达差异．这一改进可避免使用同位素，同时也简化了操作程序，使操作极其简单方便．

关键词：中性凝胶电泳差异显示分析 2次PCR扩增

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大麦细胞质雄性不育相关基因的克隆及mRNA差异显示分析

大麦细胞质雄性不育相关基因的克隆及mRNA差异显示分析

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作者：尤金美四川农业大学

学位级别：硕士

大麦是我国栽培最早的作物之一,可用作食用、饲用和啤酒工业原料,具有较强的杂种优势。利用大麦细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility, CMS)系培育大麦杂交品种具有省工、方便、种子纯度高、成本较低等优点,正成为大麦育种的重要... 详细信息

大麦是我国栽培最早的作物之一,可用作食用、饲用和啤酒工业原料,具有较强的杂种优势。利用大麦细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility, CMS)系培育大麦杂交品种具有省工、方便、种子纯度高、成本较低等优点,正成为大麦育种的重要研究方向。高等植物的细胞质雄性不育性与线粒体DNA有密切关系,许多研究者认为CMS很可能与受质基因调控的核基因的表达有关。克隆大麦线粒体细胞质不育性相关基因,以及分析差异表达的mRNA,对于进一步研究大麦不育系mtDNA的结构及分析大麦细胞质雄性不育机理具有重要的意义。本实验中,以保持系6602B为父本,共7个不育系6602A,6605A、N-5A、N-9A、N-10A、N-11A、US-A为母本,经5年7代的连续回交转育形成的一套同核异质系为材料提取mtDNA,根据不同植物的线粒体同源基因(orf256, orf300,orf25)的保守序列设计了3对特异引物(B256, B300, B25)。通过PCR克隆测序,3对引物都得到了预期大小的序列,随后利用DNAMAN及NCBI数据库进行三个序列同源基因间核算水平和蛋白质水平的序列比对。并采用DDRT-PCR方法,以保持系和7个不育系为材料,分析、鉴定与育性相关的mRNA差异表达。主要结果如下： 1.3对特异引物在保持系和7个不育系中均得到了预期大小的特异扩增产物,经克隆测序得知线粒体orf256, orf300、orf25的基因片段为：937 bp、933 bp、622 bp。 2.特异扩增得到的线粒体基因orf256在保持系和不育系中存在碱基突变,与保持系相比,不育系orf256基因区的G318被替换为C,编码的氨基酸未发生变异。线粒体orf300及orf25基因片在保持系和不育系中没有差异。这3个线粒体基因中都存在大量的小重复序列,这与在线粒体基因组上广泛存在小重复序列特别是反向重复序列相吻合。 ***256序列与大麦属线粒体orf256基因序列同源性达99%,与ORF256(coxl)蛋白氨基酸序列的同源性达94%；线粒体基因orf300与不同作物orf300基因序列的同源性达94%,与不同作物NADH2脱氢酶亚基编码的氨基酸序列相似性为87%；orf25序列与烟草(Nicotiana tabacum)线粒体基因orf25序列同源性达87%,与烟草等线粒体DNA中ATP合成酶的氨基酸序列的相似性为100%。说明不同作物间线粒体DNA具有高度的保守性。 4.采用3种锚定引物(AAGCT<12>A, AAGCT<12>C, AAGCT<12>G)和]0种差异显示专用引物组成30种引物对,对保持系和不育系大麦绿叶mRNA的DDRT-PCR分析表明,不同引物对扩增出的条带在保持系和不育系间存在差异表达cDNA片段。 5.回收差异表达的cDNA,重扩增后在2%琼脂糖凝胶上电泳并回收进行克隆、测序,对测序的结果进行序列相似分析,结果表明该实验共找到了2个大小分别为475 bp、462 bp的差异表达cDNA片段(B1,B2),他们不在保持系中表达,在7个不育系中都得到了特异表达。 6.经BLAST序列比对分析,B1片段与玉米假定蛋白基因高度同源,氨基酸序列与玉米假定蛋白的同源性为72%；B2的氨基酸序列与葡萄属未知功能蛋白的同源性为95%。

关键词：大麦细胞质雄性不育基因克隆差异显示分析

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紫花苜蓿（Medicago sativa L.）抗镉品种金属硫蛋白基因差异显示分析

紫花苜蓿（Medicago sativa L.）抗镉品种金属硫蛋白基因差异显示...

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作者：宋瑜兰州大学

学位级别：硕士

重金属镉（Cd）作为非必需微量元素,经根系吸收并累积时对植物具有很强的毒性,植物硫代谢、抗氧化系统和Cd2+跨膜运输是植物对重金属镉响应的主要途径,包括Cd2+诱导植物硫转运蛋白、硫还原相关酶类以及半胱氨酸、谷胱甘肽和植物螯合肽... 详细信息

重金属镉（Cd）作为非必需微量元素,经根系吸收并累积时对植物具有很强的毒性,植物硫代谢、抗氧化系统和Cd2+跨膜运输是植物对重金属镉响应的主要途径,包括Cd2+诱导植物硫转运蛋白、硫还原相关酶类以及半胱氨酸、谷胱甘肽和植物螯合肽合成及其基因表达调控,进一步开展植物对Cd的响应途径及其调控机理和基因表达研究,对改良植物对Cd的耐受性以及开发Cd超累积植物具有重要意义。本研究利用水培系统对36份紫花苜蓿（Medicago sativa L.）种质材料进行抗镉性筛选试验,对获得的抗镉苜蓿品种进行CdCl2胁迫条件下的生理生化响应研究,并进一步利用mRNA差异显示分析方法克隆紫花苜蓿金属硫蛋白（metallothionein,MTs）基因MsMT2a和MsMT2b,结果如下: 1)选用0、5、10、15、20、25、50和100 mg/L的CdCl2浓度梯度进行抗镉性筛选研究,确定适宜的CdCl2筛选浓度为25 mg/L,进一步利用水培法对25 mg/LCdCl2处理和对照条件下的苜蓿幼苗进行培养,分析比较紫花苜蓿种质材料在胁迫处理和对照条件下根长、茎长、根生物量和茎生物量参数的变化发现,根相对生长量是适宜的衡量紫花苜蓿镉耐受性的参数。在此基础上综合考虑以上4个形态学指标,利用配对T检验进行显著性分析,筛选出2个镉抗性品种,即野苜蓿和陇中苜蓿。 2)对抗镉品种即野苜蓿和陇中苜蓿进行Cd胁迫处理（25 mg/L CdCl2）,研究胁迫处理和对照条件下镉离子(Cd2+)在紫花苜蓿植株体内的分布和积累情况、抗氧化系统和光合性能的变化,结果发现,在CdCl2胁迫处理8d的时候,野苜蓿和陇中苜蓿根中的Cd2+浓度分别达到1140和1122 mg kg-1,在茎中分别为94.8和89.5 mg kg-1,在叶中分别只有85.7和75.7 mg kg-1,表明抗镉苜蓿品种野苜蓿和陇中苜蓿对Cd2+的吸收累积主要发生在根部,Cd2+的向上转运能力较弱,在一定程度避免了Cd2+对叶片生理生化功能的破坏,从而表现出抗镉性。抗镉品种野苜蓿和陇中苜蓿叶片中SOD、POD和CAT酶的活性随着CdCl2胁迫处理（25 mg/L CdCl2）时间的延长表现出不同的变化趋势,在遭受胁迫的前12 h POD酶活性急剧升高,之后POD酶活性平稳下降;CAT酶活性在镉处理后12h内缓慢下降,而在12-24 h内急剧上升,之后CAT酶活性缓慢下降;镉胁迫下SOD酶活性与CAT酶有着相似的变化趋势。以上结果表明紫花苜蓿开始遭受镉胁迫时,通过刺激过氧化物酶的活性来加强植物体对镉胁迫的耐受性,随着镉胁迫时间的延长,过氧化物酶活性的降低可能是由于重金属影响蛋白质结构的完整性造成的。随着CdCl2胁迫时间的延长,野苜蓿和陇中苜蓿幼苗第五片叶的Fv/Fm值变化有相同的趋势,都随着镉胁迫时间的延长而缓慢下降,其中,CdCl2处理6、12、24和48h时的Fv/Fm值仅比对照分别减少1、3、3.5和4%,即25 mgL-1 Cd2+胁迫下两个苜蓿品种叶片的FV/FM并没有显著降低,表明Cd2+胁迫对野苜蓿和陇中苜蓿光合系统的影响较小。 3)分别选取前人报道的金属硫蛋白基因（metallothionein）AsMT2a和AsMT2b的特异性引物（5′CATAATGAAATGAAACTA 3′和5′CGGGGACAGATCATCA3′;5′AATAAACTAGCTGGAGTCTTTCTTC3′和5′ACGCGGGGACATCATCCATCTTC3′）,对抗镉品种野苜蓿和陇中苜蓿进行紫花苜蓿金属硫蛋白基因mRNA差异显示分析,在2个紫花苜蓿品种对照和处理组中共克隆得到5条特异性条带,MsMT2a基因片段（M1-M4）大小为525bp,MsMT2b基因片段（M5）大小为510bp。M1、M2、M3和M4均与大蒜（Allium sativum）编码金属硫蛋白基因的同源性达到97-98%,与豆科植物红豆（Vigna angularis）、豌豆（Pisum sativum）和白三叶（Trifolium repens）中编码金属硫蛋白基因的同源性达到68-71%,所得结果与豆科植物中编码金属硫蛋白的基因也有较高的覆盖率。M5与大蒜（Alliumsutivum）编码金属硫蛋白基因的同源性达到98%,与豆科植物豌豆（Pisumsativum）和蚕豆（Vicia faba）中编码金属硫蛋白基因的同源性达到68-85%,所得结果与豆科植物中编码金属硫蛋白的基因也有较高的覆盖率。除此之外,MsMT2a和MsMT2b基因片段还与马铃薯（Solanum tuberosum）、凤眼莲（Eichhornia crassipes）、遏兰菜（Thlaspi caerules

关键词：紫花苜蓿重金属镉金属硫蛋白差异显示分析

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cDNA3′端代表差异显示分析

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生物工程进展 1997年第3期17卷 52-55,43页

作者：潘美辉金虎林袁建刚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

根据真核ｍＲＮＡ３′端一般含Ｐｏｌｙ（Ａ）的原理，可使用共同引物将不同的ｍＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ，然后设计特殊引物进行反转录ＰＣＲ，或者将限制性酶切与反转录ＰＣＲ偶联使用，均可获得对应于ｍＲＮＡ３′端的ｃＤＮＡ３′端... 详细信息

根据真核ｍＲＮＡ３′端一般含Ｐｏｌｙ（Ａ）的原理，可使用共同引物将不同的ｍＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ，然后设计特殊引物进行反转录ＰＣＲ，或者将限制性酶切与反转录ＰＣＲ偶联使用，均可获得对应于ｍＲＮＡ３′端的ｃＤＮＡ３′端代表扩增子。比较不同条件下的ｃＤ－ＮＡ３′端代表扩增子，可以获得两种或多种细胞中ｍＲＮＡ的表达差异谱，并分离。

关键词： DNA cDNA3'端代表扩增子差异显示分析

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差异显示分析法筛选冠心病特异表达基因

差异显示分析法筛选冠心病特异表达基因

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国际心脏研究会（ISHR）中国分会第七届学术会议暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十届学术会议

作者：周钢余细勇陈纪言符永恒谭虹虹林曙光广东省心血管病研究所广东省冠心病研究重点实验室

目的:冠心病是复杂的遗传因素与环境因素相互作用的结果。已知基因的多态性和突变主要是发生在冠心病相关的基因上,至今尚未发现仅在冠心病群体中表达的冠心病特异基因;另一方面,近半数冠心病患者未发现其生活在已知的冠心病危险因素中... 详细信息

目的:冠心病是复杂的遗传因素与环境因素相互作用的结果。已知基因的多态性和突变主要是发生在冠心病相关的基因上,至今尚未发现仅在冠心病群体中表达的冠心病特异基因;另一方面,近半数冠心病患者未发现其生活在已知的冠心病危险因素中。发现和检测这些特异基因可以帮助人们更进一步认识、预防和治疗冠心病。本课题旨在应用差异显示分析方法,筛选和克隆仅在冠心病群体中表达的特异基因。方法:实验对象为经心导管造影,心电图,超声心动图,血脂检查证实的49例冠心病和24例同龄非冠心病住院病人,排除肝肾和内分泌等原发性疾病及近期感染性疾病。取肝素抗凝血10毫升后即用红细胞裂解液溶解红细胞、获取白细胞,改良一步法抽提白细胞的总RNA。应用差异显示分析方法(RDA),从经心导管造影与其它临床检查证实的冠心病和同龄非冠心病病人的高比例(1:10 000)混合的cDNA中筛选出特异表达的基因片段,经克隆刀NA测序,分析其DNA序列。

关键词：冠心病人导管造影基因片段非冠心病差异显示分析特异表达基因

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马铃薯试管块茎诱导过程中mRNA差异显示分析

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中国马铃薯 2004年第2期18卷 65-67页

作者：柳俊田振东宋波涛谢从华园艺植物生物学教育部重点实验室国家蔬菜改良华中分中心华中农业大学湖北武汉445000

试验采用DD-PCR技术,对马铃薯试管块茎诱导初期的mRNA表达进行了差异显示分析。结果表明,块茎形成过程中,除了有新的基因表达开启外,还有一些基因表达关闭,同时还伴随着许多基因的表达强度增强,表明块茎形态建成是一系列基因协同作用的... 详细信息

试验采用DD-PCR技术,对马铃薯试管块茎诱导初期的mRNA表达进行了差异显示分析。结果表明,块茎形成过程中,除了有新的基因表达开启外,还有一些基因表达关闭,同时还伴随着许多基因的表达强度增强,表明块茎形态建成是一系列基因协同作用的结果。

关键词：马铃薯块茎诱导试管苗 mRNA 差异显示分析 DD—PCR 基因协同作用

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棉花子叶中受水杨酸诱导基因的差异显示分析

棉花子叶中受水杨酸诱导基因的差异显示分析

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中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议

作者：李骥赵广荣刘进元清华大学生物科学与技术系清华大学生物科学与技术系清华大学生物科学与技术系

近年来的研究表明水杨酸是植物抗性反应中的一种重要的信号分子,在多种植物中能以低浓度地诱导抗性基因(PR基因)的表达,而棉花枯黄萎病是棉花生产中的主要病害,至今没有有效的防治措施.本研究室曾经用5mM水杨酸水溶液诱导棉花展开一片... 详细信息

近年来的研究表明水杨酸是植物抗性反应中的一种重要的信号分子,在多种植物中能以低浓度地诱导抗性基因(PR基因)的表达,而棉花枯黄萎病是棉花生产中的主要病害,至今没有有效的防治措施.本研究室曾经用5mM水杨酸水溶液诱导棉花展开一片真叶的棉花幼苗产生了对黄萎病高达49.1%的抑病效果.

关键词：差异显示分析水杨酸

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mRNA差异显示分析在粘细菌中的应用

mRNA差异显示分析在粘细菌中的应用

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山东微生物学会第六次会员代表大会暨2004年学术年会

作者：龚勋李越中山东大学生命科学院微生物技术国家重点实验室山东大学生命科学院微生物技术国家重点实验室

粘细菌是一类同源性较高,具有复杂形态发生行为,可形成多细胞的子实体结构(fruiting body)和抗逆的粘孢子(myxospore)的革蓝氏阴性细菌。粘细菌复杂的多细胞行为,尤其是多细胞子实体(fruiting bodies)形态构成,使之成为原核生物细胞分... 详细信息

粘细菌是一类同源性较高,具有复杂形态发生行为,可形成多细胞的子实体结构(fruiting body)和抗逆的粘孢子(myxospore)的革蓝氏阴性细菌。粘细菌复杂的多细胞行为,尤其是多细胞子实体(fruiting bodies)形态构成,使之成为原核生物细胞分化发育和细胞间信号传导的重要模式材料。用于粘细菌分析的遗传操作手段主要包括噬菌体转导,电转化,接合。但是粘细菌的生长比较缓慢,具有细胞生长的密度依赖性,并且大部分菌株在液体培养基中不能均匀生长,因此这些遗传操作手段的效率都不是很高,远远低于大肠杆菌。mRNA差异显示技术(Differential

关键词：粘细菌差异显示分析

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鱼类免疫功能基因的电子克隆及数字化差异显示分析

鱼类免疫功能基因的电子克隆及数字化差异显示分析

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中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会

作者：邵健忠金红建项黎新毛树坚浙江大学生命科学学院浙江大学生命科学学院浙江大学生命科学学院浙江大学生命科学学院

随着生物信息学的发展,表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)在基因组研究中的应用日益广泛。目前EST序列数据正以惊人的速度增加,这些EST足以代表大多数基因在一个机体中的总体转录活动。计算机技术的发展,使人们可以把计算机高... 详细信息

随着生物信息学的发展,表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)在基因组研究中的应用日益广泛。目前EST序列数据正以惊人的速度增加,这些EST足以代表大多数基因在一个机体中的总体转录活动。计算机技术的发展,使人们可以把计算机高度发达的信息处理能力和丰富的数据库资源有机结合起来,在此前提下,一系列

关键词：电子克隆斑马鱼差异显示分析序列相似性鱼类免疫功能基因

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