检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2001年第5期28卷 736-739页

作者：毛爱军王台宋艳茹中国科学院植物研究所北京100093

通过调整差异显示反转录pcr (DDRT pcr)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等关键试剂的用量 ,优化了适用于银染检测的DDRT pcr方法 .pcr扩增产物经 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后 ,银染能检测到多而清晰的条带 .泳道中的... 详细信息

通过调整差异显示反转录pcr (DDRT pcr)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等关键试剂的用量 ,优化了适用于银染检测的DDRT pcr方法 .pcr扩增产物经 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后 ,银染能检测到多而清晰的条带 .泳道中的条带数最少为 40个 ,最多达 80个 ,平均为 6 0个 ,条带大小分布在 10 0～ 90 0bp范围 ,灵敏度为 5pg/mm2 .此方法操作简便快速 ,灵敏度高 ,重复性好 .采用这个改良的方法 ,分析了拟南芥野生型和ast突变型基因表达的差异 .从 16 0 0 0个cDNA扩增产物条带中筛选出 2 8个差异条带 .二次pcr扩增后 ,进一步筛选出 13个差异条带 ,其中 7个是野生型特异表达的 ,6个是突变型特异表达的。

关键词：差异显示反转录pcr 银染拟南芥 ast突变型植物基因表达

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苏太猪肌内脂肪沉积相关基因SRC-1的差异显示反转录pcr鉴定

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南京农业大学学报 2009年第3期32卷 126-129页

作者：薛春阳汪秀星王晓娜刘红林徐银学程占军陈杰南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

采取90头180日龄去势苏太猪的背最长肌组织测定肌内脂肪含量,从中选取肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01)的最高和最低各6头组成RNA池,采用差异显示反转录pcr(DDRT-pcr)鉴定两组间差异表达的基因,结果共获得14条表达序列标签(expressed ... 详细信息

采取90头180日龄去势苏太猪的背最长肌组织测定肌内脂肪含量,从中选取肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01)的最高和最低各6头组成RNA池,采用差异显示反转录pcr(DDRT-pcr)鉴定两组间差异表达的基因,结果共获得14条表达序列标签(expressed sequence tags),即EST序列,通过GenBank比对发现其中3条为已知序列。为进一步验证这3个已知基因与肌内脂肪之间的关系,从90个个体中选取肌内脂肪最高和最低各15个个体进行实时定量pcr检测。结果表明,细胞核受体共激活因子1基因(SRC-1)mRNA表达水平与肌内脂肪含量存在负相关关系(r=-0.38,P<0.05)。提示:SRC-1蛋白有可能参与了肌内脂肪沉积的调节。

关键词：差异显示反转录pcr 肌内脂肪实时荧光定量pcr 细胞核受体共激活因子1基因(SRC-1) 苏太猪

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利用mRNA差异显示技术研究香菇发育相关基因

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菌物学报 2009年第2期28卷 289-294页

作者：蔡为明李南羿谢鸣高中山金群力浙江省农业科学院园艺研究所杭州310021 浙江大学农业与生物技术学院园艺系杭州310029

以香菇子实体不分化突变株和对照菌株L98411为材料,利用mRNA差异显示技术研究二者的基因表达差异,共分离到21条差异片段,其中12个分别与泛素、ATP合成酶、锌指蛋白、GTP结合蛋白、延伸因子g1线粒体前体、过氧化物酶、硫酯酶、类TrpB酶、... 详细信息

以香菇子实体不分化突变株和对照菌株L98411为材料,利用mRNA差异显示技术研究二者的基因表达差异,共分离到21条差异片段,其中12个分别与泛素、ATP合成酶、锌指蛋白、GTP结合蛋白、延伸因子g1线粒体前体、过氧化物酶、硫酯酶、类TrpB酶、2,4-二烯酰辅酶A还原酶、糖苷水解酶、热激蛋白、疏水蛋白等已知基因有较高的同源性,这表明香菇子实体分化发育是一个复杂的过程,涉及到胞内转运、转录调控、细胞分化、蛋白合成、各种代谢途径中的酶、抗逆反应等诸多途径的协同调控。

关键词：差异显示反转录pcr 突变体子实体发育基因表达

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济宁青山羊皮肤毛囊体外培养和基因表达差异研究

济宁青山羊皮肤毛囊体外培养和基因表达差异研究

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作者：张兆远山东农业大学

学位级别：硕士

济宁青山羊是具有独特毛色和花形的羔皮用山羊品种,其主要产品是猾子皮、板皮和山羊绒。羔羊生后1-3天内屠宰后得到的猾子皮具有天然的色彩和花纹,毛色品质好,光润,皮板轻巧而美观。猾子皮所制的翻毛皮衣和帽领等在国际市场上极为畅销,... 详细信息

济宁青山羊是具有独特毛色和花形的羔皮用山羊品种,其主要产品是猾子皮、板皮和山羊绒。羔羊生后1-3天内屠宰后得到的猾子皮具有天然的色彩和花纹,毛色品质好,光润,皮板轻巧而美观。猾子皮所制的翻毛皮衣和帽领等在国际市场上极为畅销,享有盛誉。本研究主要采用组织学技术和差异显示反转录pcr(DDRT-pcr)等分子细胞生物学技术,对济宁青山羊的皮肤毛囊组织结构和基因表达差异进行了研究,研究结果有助于揭示动物毛囊器官的生长发育规律;并为揭示济宁青山羊猾子皮花纹品质的分子遗传机理奠定基础。本文首先以组织学方法,研究了济宁青山羊猾子皮和成年羊皮肤毛囊的组织学结构。结果表明:猾子皮的毛囊与表皮呈45度倾斜,密度较稀。成年羊皮肤初级毛囊的毛球较大,毛囊较粗长,具有汗腺、皮脂腺、竖毛肌等附属结构,毛干有髓质;次级毛囊的毛球较小,皮脂腺不发达或缺如,毛干没有髓质。比较了揉后小猾皮和大猾皮的品质和组织学结构特点。结果表明:小猾皮干皮重平均为88.75±11.33,比大猾皮(出生30-60日龄)的皮板(重159.83±10.72)轻薄;有花面积比例为67.84±2.97,明显高于大猾皮(60.00±7.39),且优等的波浪花所占比例较高;单位皮重面积产率(14.83±1.49)亦高于大猾皮(12.98±0.61)。但是,小猾皮的抗张强度、撕裂强度、崩裂强度均不及大猾皮。大猾皮与小猾皮皮厚的差异极显著(P<0.01);大猾皮各个部位皮厚的部位差差异不显著(P>0.05);而小猾皮各个部位皮厚的部位差明显大于大猾皮,且差异显著(P<0.05)。济宁青山羊是生产猾子皮的一个专用品种,今后应加强该品种的选育和改良,增大羊的体型,提高猾皮总面积、波浪花的比例和皮板的物理机械指标,以便获得品质更好的猾子皮,进一步提高经济效益。进一步采用差异显示反转录pcr技术,研究了济宁青山羊胎儿期、小猾皮和大猾皮皮肤组织的基因表达差异,结果表明:8种引物组合在3个年龄段的青山羊皮肤组织中共扩增出482条清晰可辩的条带,其中,在三个发育阶段的皮肤组织中未发现“有或无”的差异表达条带;但发现了99条表达“强或弱”的差异表达片段,占总条带数的20.54%。若进一步对这些差异表达条带进行回收、杂交验证和克隆测序,则有望得到与毛囊生长发育相关的差异表达基因。采用三因子三水平的拉丁方正交试验设计(L9(34))方法,对比研究了无血清的Williams E培养基、无血清的DMEM培养基和添加10%FCS(胎牛血清)的DMEM培养基,及其在三种培养基中分别添加0、2ng/mL和10ng/mL三种不同浓度的血管内皮细胞生长因子(VEGF)和表皮细胞生长因子(EGF)时对成年羊毛囊体外培养的影响。将山羊的单根毛囊完整地从皮肤组织中分离出来,同时平行培养在9种培养基中,借助于倒置显微镜和目镜测微尺随时不断地观察毛囊生长的形态变化和测量毛根的长度。结果发现:山羊游离毛囊在9种培养基中均能很好地生长;但以无血清的培养基和在Williams E培养基的效果最好;分别和同时添加2%-10%的VEGF和EGF时可加快毛囊的生长;添加10%FCS和不添加细胞生长因子时毛囊也能生长,但生长速度较慢。本研究结果为揭示青山羊毛囊发育规律奠定了基础;为进一步揭示济宁青山羊花纹品质的遗传机理奠定了基础。

关键词：济宁青山羊毛囊组织切片差异显示反转录pcr 细胞培养

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差异基因的高通量筛选研究

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浙江农业科学 2009年第3期50卷 611-613页

作者：刘岩王海龙孟智启浙江省农业科学院蚕桑研究所浙江杭州310021 浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004

随着多个生物体全基因组序列的公布,研究重点更多地转移到基因功能分析上,基于生物品质改良、基因诊断及疾病治疗等考虑,分离并克隆生命体生长发育等过程的时空特异性差异表达基因也越来越受到关注。论文围绕近年来较具代表性的5种分析... 详细信息

随着多个生物体全基因组序列的公布,研究重点更多地转移到基因功能分析上,基于生物品质改良、基因诊断及疾病治疗等考虑,分离并克隆生命体生长发育等过程的时空特异性差异表达基因也越来越受到关注。论文围绕近年来较具代表性的5种分析方法,即表达序列标签、差异显示反转录pcr、抑制消减杂交、基因表达系列分析和微阵列技术,分析各方法的原理及优缺点,以期对今后开展研究时的选择起到参考作用。

关键词：差异基因表达序列标签差异显示反转录pcr 抑制消减杂交基因表达系列分析微阵列技术

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用DDRT-pcr技术分析与巨核细胞分化相关的基因

用DDRT-PCR技术分析与巨核细胞分化相关的基因

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作者：张峣北京协和医学院(清华大学医学部)&中国医学科学院

学位级别：博士

K562细胞系是一种人红白血病细胞系，它基本处于造血干细胞分化的髓样祖细胞阶段而停止继续分化，但具有双向分化潜能，在氯高铁血红素(Hemin)等试剂的诱导下可以向红系分化，而在肉豆蔻佛波酯(PMA)的诱导下则可以向巨核系分化。这些分... 详细信息

K562细胞系是一种人红白血病细胞系，它基本处于造血干细胞分化的髓样祖细胞阶段而停止继续分化，但具有双向分化潜能，在氯高铁血红素(Hemin)等试剂的诱导下可以向红系分化，而在肉豆蔻佛波酯(PMA)的诱导下则可以向巨核系分化。这些分化与不同基因的表达或抑制密切相关。 Liang和Pardee发明的差异显示反转录pcr(DDRT-pcr)技术（上标[1]）一直被视为筛选新基因的重要方法之一，但它存在假阳性率偏高和重复性较差的缺陷。为解决此问题，我们参照Martin和Pardee的改进方案（上标[3]），建立了一种使用长引物，进行二步pcr的改进DDRT-pcr方法。以氯高铁血红素(Hemin)和肉豆蔻佛波酯(PMA)分别诱导K562细胞36h使之分别向红细胞和巨核细胞分化，取诱导前后的细胞制备总RNA，用3个3'mRNA锚定引物及6个5’mRNA随机引物进行了18种组合pcr扩增，获得与K562细胞向红系分化相关的差异cDNA片段60条，其中38条分化后表达上调，22条分化后表达下调；获得与K562细胞向巨核系分化相关的差异cDNA片段120条，其中46条分化后表达上调，74条分化后表达下调。选择43条与巨核细胞分化相关的差异带(26条在PMA诱导的K562细胞中表达上调，17条PMA诱导的K562细胞中表达下调)进行pcr再扩增、纯化回收，以PUC19质粒为载体对差异EST序列进行克隆、提取重组质粒DNA并测序。然后通过基因信息分析与GenBank数据库[包括GenBank 非冗余数据库(nr)、EMBL、DDBJ、PDB、high-throughout gene screening(htgs)、dbEST、GSS]中的核苷酸序列进行同源性比较。发现20个EST与GenBank中已知蛋白的cDNA高度同源(包括调控因子或信号因子9条，线粒体或核糖体组分2条，假设蛋白3条，血小板特异表达的蛋白1条)，15个与已知EST或cDNA片段有同源性，2个为新EST。这些差异表达EST为进一步获得和确定在巨核细胞分化过程中具有重要作用的全长基因，明确基因的功能及作用机制奠定了一定基础，并对揭示造血细胞分化机制提供了线索。

关键词：差异显示反转录pcr K562细胞巨核细胞红系细胞细胞分化表达序列标签

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杜氏藻RAPD分析及耐盐分子生物学初探

杜氏藻RAPD分析及耐盐分子生物学初探

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作者：林慧馨厦门大学

学位级别：硕士

利用双向电泳技术对培养在含不同盐浓度条件下(NaCl,0.5mol/L、1.5mol/L、3.0mol/L)的巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)细胞的总蛋白进行分析,发现在NaCl3.0mol/L的盐浓度上巴氏杜氏藻出现新的特异蛋白,其pI值约为9.0,分子量约为62KD.... 详细信息

利用双向电泳技术对培养在含不同盐浓度条件下(NaCl,0.5mol/L、1.5mol/L、3.0mol/L)的巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)细胞的总蛋白进行分析,发现在NaCl3.0mol/L的盐浓度上巴氏杜氏藻出现新的特异蛋白,其pI值约为9.0,分子量约为62KD.将分别培养在上述不同浓度下的巴氏杜氏藻细胞RNA反转录成cDNA.用3条dT<,11>(A/C/G)锚定引物和12条随机引物组合进行扩增,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,用银染的方法进行染色,可显示它们之间的7条差异DNA条带.从凝胶中回收差异DNA条带并进行再扩增,将扩增产物克隆进pUCm-T载体.经限制性核酸内切酶检定和RNA斑点杂交排除假阳性后得到一个重组质粒pTE,其中含有分子量约为420bp的在高盐下特异出现的条带,它可能与该藻的调渗基因有关.实验表明,mRNA反转录差异显示pcr是一种简单、快捷、有效的分离差异表达基因的方法.利用上述420bp的cDNA将可能从巴氏杜氏藻基因组文库中分离得到它的与耐盐相关的基因(组).

关键词：杜氏藻随机扩增多态性DNA 差异显示反转录pcr

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小麦盐胁迫应答基因cDNA的克隆与序列分析

小麦盐胁迫应答基因cDNA的克隆与序列分析

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作者：龚莉桂西北大学

学位级别：硕士

本研究以西农88小麦幼苗叶片为材料，利用DD RT-pcr(Differential Display Reverse Transcription—Polymerase Chain Reaction，差异显示反转录pcr)技术对在正常条件下与盐胁迫条件下小麦叶片基因表达的差异进行分析以期找到有价值的... 详细信息

本研究以西农88小麦幼苗叶片为材料，利用DD RT-pcr(Differential Display Reverse Transcription—Polymerase Chain Reaction，差异显示反转录pcr)技术对在正常条件下与盐胁迫条件下小麦叶片基因表达的差异进行分析以期找到有价值的耐盐相关基因。从1％NaCl处理72h的小麦幼苗叶片提取纯化mRNA，经过锚定引物0ligo(dT)12GC反转录得到cDNA第一链，用10个碱基随机引物进行二次pcr扩增，经1.5％琼脂糖凝胶电泳检测到24条差异cDNA片段，包括9条诱导表达片段、2条增强片段和13条抑制表达片段。对12条差异较明显的cDNA片段进行了克隆，对其中的WSR2、WSR1、WSR3三个克隆进行了序列测定和同源性对比分析。Northern印迹分析结果显示WSR2片段存在明显的胁迫抑制表达特征，即处理材料有较弱的杂交信号，未处理材料有较强的杂交信号。GenBank/BLAST检索发现WSR2与编码木酮糖激酶(L-xylulose Kinase)的LyxK基因核甘酸序列有99％相似性。WSR2与木酮糖激酶基因的高度同源性说明WSR2可能参与了光合作用中的暗反应过程，并在暗反应过程中起抑制作用，对它的克隆和表达分析为认识植物磷酸戊糖途径和光合作用的暗反应过程提供了新的证据。WSR1与WSR3探针与盐胁迫条件下培养的小麦叶片RNA杂交时均表现出阳性杂交信号，而无盐胁迫时没有杂交信号。WSR1与人血管生成素抑制因子编码序列具有高度同源性，推测WSR1对应基因的编码产物可能作为一种RNA酶抑制因子起作用，通过保护某些RNA分子来调节翻译过程，使小麦细胞对盐胁迫做出防御性应答。小麦WSR1片段与人和动物血管生成素抑制因子编码序列的高度一致性表明它们可能是生命演化过程中出现最早的基因，反映出动植物细胞在抵抗逆境方面具有一些共同的机制。WSR3与Homo sapiens BAC clone RP11-399D2(from 4，complete sequence)的一段核甘酸序列同源性高达100％，进一步说明植物与动物基因组具有某些共同的编码序列，可能在基因表达方面具有一些共同的机制，WSR3序列可能是动植物生命演化过程中的保守序列。小麦盐胁迫应答基因cDNA片段的获得，为进一步认识理解盐胁迫应答机理提供了新证据。

关键词：小麦盐胁迫差异显示反转录pcr 总RNA Northern杂交 LyxK基因血管生成素抑制因子人类4号染色体RP11-399D2 BAC

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功能基因组学研究进展

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动物医学进展 2004年第4期25卷 32-36页

作者：庄金秋贾杏林山东省滨州畜牧兽医研究所山东省畜禽用蜂胶疫苗研究开发推广中心山东滨州256618

2 1世纪是生物时代和信息时代 ,基因组学的研究已从结构基因组学转向功能基因组学 ,对于基因功能的研究也由单一基因转向大规模、批量分析。文章对功能基因组学及相关学科的概念作了概述 ,介绍了功能基因组学的研究内容与研究方法 ,主... 详细信息

2 1世纪是生物时代和信息时代 ,基因组学的研究已从结构基因组学转向功能基因组学 ,对于基因功能的研究也由单一基因转向大规模、批量分析。文章对功能基因组学及相关学科的概念作了概述 ,介绍了功能基因组学的研究内容与研究方法 ,主要包括应用差异显示反转录 pcr、基因表达序列分析 (SAGE)、微点阵、蛋白质组学和生物信息学等研究基因组表达概况、基因组多样性和模式生物学等。

关键词：功能基因组学差异显示反转录pcr 基因表达序列分析微点阵蛋白质组学生物信息学

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肾移植术后外周血淋巴细胞P59^(fyn)和SLAM基因表达的动态观察

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心肺血管病杂志 2001年第4期20卷 238-240页

作者：李文刘俊敏刘艳霞周健薛健黄益民北京市心肺血管疾病研究所细胞免疫室 100029 北京市心肺血管疾病研究所泌尿外科 100029 中国科学院微生物研究所

目的 :寻找肾移植后初期与免疫排斥相关的差异表达基因 ,探讨肾移植后淋巴细胞活化、信号转导变化的规律与机制。方法 :对 1例心脏瓣膜成形术加肾移植术后患者外周血淋巴细胞的mRNA表达进行基因差异显示分析 ,进而对差异条带进行测序 ,... 详细信息

目的 :寻找肾移植后初期与免疫排斥相关的差异表达基因 ,探讨肾移植后淋巴细胞活化、信号转导变化的规律与机制。方法 :对 1例心脏瓣膜成形术加肾移植术后患者外周血淋巴细胞的mRNA表达进行基因差异显示分析 ,进而对差异条带进行测序 ,并同时监测肾功能临床生化指标。结果 :差异分析显示 ,在肾移植术中开放动脉后 ,即有酪氨酸蛋白激酶P5 9fyn、signalinglymphocyteactivationmolecule(SLAM)等基因的表达 ,于术后 72h～ 5天降低 ,术后 7天表达出现高峰 ;临床生化检测可见 ,术后患者血中BUN、肌酐和CsA逐渐降低 ,但在第 10天BUN、CsA出现异常升高。结论 :肾移植术后一些与T细胞活化早期信号转导相关基因的表达水平发生改变 ,其中P5 9fyn和SLAM在术后第 7天表达增强 ,较临床生化改变早 3～ 5天 ,提示有可能通过监测这些基因的表达情况 ,来早期、无创地监测肾移植术后器官损伤。

关键词：肾移植 P59^fyn SLAM 差异显示反转录pcr 免疫排斥基因表达

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