检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王霞北方民族大学

学位级别：硕士

色谱填料的发展始终是色谱技术发展的核心,无孔硅胶填料可用于生物大分子的快速分离分析,由于这类颗粒表面无孔,消除了溶质在固定相上的滞留流动,因而分离速率明显加快;但它的不足之处在于柱容量较小。全多孔硅胶微球发展最大的瓶颈在... 详细信息

色谱填料的发展始终是色谱技术发展的核心,无孔硅胶填料可用于生物大分子的快速分离分析,由于这类颗粒表面无孔,消除了溶质在固定相上的滞留流动,因而分离速率明显加快;但它的不足之处在于柱容量较小。全多孔硅胶微球发展最大的瓶颈在于粒径分布较宽,而利用筛分技术并不能得到粒径分布很窄的全多孔硅胶微球。核壳硅胶填料具有无孔实心核和较浅的孔道结构,使得颗粒内部的扩散距离缩短、传质阻力降低、分离速度加快,而且避免了小粒径填料柱压过大的问题,在超高效液相色谱中得到了广泛应用。针对目前核壳微球在制备和色谱应用方面存在的问题,本论文中发展了一种硬模板法合成了纳米核壳型硅胶微球的方法,微球粒径为160-340 nm,壳层厚度为25-83 nm。其中壳层制备步骤仅需要一步反应,利用该方法制备出的微球具有自中心向外发散的孔道结构,并将其成功应用在糖肽的富集。针对目前常用的亲水作用色谱材料在糖肽富集时出现特异性差、灵敏度低的问题,我们采用光照引发的巯基–烯点击聚合反应制备了谷胱甘肽功能化的纳米核壳硅胶微球。该亲水性纳米核壳硅胶微球对IgG胰蛋白酶解液中糖肽检测限为700 fmol,吸附量最大限度为35μg IgG。进一步将该亲水性固定相应用于富集复杂肽段混合物中的糖肽,结果表明它对糖肽类物质富集具有较高的选择性。此外,本研究着力探索制备微米级核壳硅胶微球的有效方法,以满足日益增长的生物医药大分子高效液相色谱分离分析的需求。本论文采用硬模板法将酚醛树脂和硅源包覆在以无孔硅胶为核的表面,并经过后续烧结和扩孔等步骤后得到最终的微米级核壳硅胶微球。目前实验还在制备优化过程,有望应用于生物分析和催化等领域。

关键词：核壳硅胶微球糖肽富集亲水相互作用液相色谱硬模板法巯基-烯点击化学法

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人尿液蛋白质N-糖肽富集和质谱鉴定的新方法研究

引用

质谱学报 2018年第2期39卷 149-157页

作者：黄俊杰焦丰龙王和平朱丽华秦伟捷钱小红华北理工大学基础医学院河北唐山063200 军事医学科学院放射与辐射医学研究所国家蛋白质科学中心(北京)蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心北京102206 河北省慢性疾病重点实验室河北唐山063000

蛋白质的N-糖基化修饰参与了许多重要的生理过程,是研究多种重大疾病诊断标志物的热点。与其他体液活检样本相比,尿液可以无创、大量获取,并且不受稳态调节的影响,能够在一定程度上反映整个机体的生理和病理状态。因此,人尿液蛋白质N-... 详细信息

蛋白质的N-糖基化修饰参与了许多重要的生理过程,是研究多种重大疾病诊断标志物的热点。与其他体液活检样本相比,尿液可以无创、大量获取,并且不受稳态调节的影响,能够在一定程度上反映整个机体的生理和病理状态。因此,人尿液蛋白质N-糖基化的规模化研究对疾病诊断标记物的筛选和治疗靶点的发现均具有重大意义。由于人尿液中的N-糖蛋白含量有限,修饰比例较低,在质谱分析时N-糖肽易被高丰度的非糖肽所掩盖,难以鉴定。因此,发展高效、高选择性的富集材料是实现尿蛋白N-糖基化深度覆盖的必要前提。本研究利用巯基-烯点击化学反应,使用[3-(甲基丙烯酰氨基)丙基]二甲基(3-硫代丙基)氢氧化铵内盐(SPP)制备了两性离子修饰亲水硅胶材料(SPP-SiO2)。该材料成功地应用于标准糖蛋白和健康人尿蛋白N-糖肽的富集和质谱检测,共鉴定了包含1 065个位点的633个尿液糖蛋白,比文献报道的鉴定规模提高了12.2%,证明了该亲水材料在尿液糖蛋白质组研究中的应用潜力。

关键词：巯基-烯点击化学法尿蛋白 N-糖肽富集质谱鉴定

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新型亲水富集材料的制备及正常人尿液糖基化蛋白的富集鉴定

新型亲水富集材料的制备及正常人尿液糖基化蛋白的富集鉴定

引用

作者：黄俊杰华北理工大学

学位级别：硕士

目的1蛋白质的N-糖基化修饰参与了许多重要的生物过程,是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。与其他体液活检样本相比,尿液可以无创,大量获取,并且不受稳态调节的影响,可以在一定程度上反映整个机体的生理和病理状态。因此对人尿液蛋白... 详细信息

目的1蛋白质的N-糖基化修饰参与了许多重要的生物过程,是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。与其他体液活检样本相比,尿液可以无创,大量获取,并且不受稳态调节的影响,可以在一定程度上反映整个机体的生理和病理状态。因此对人尿液蛋白质N-糖基化的规模化研究对疾病标记物的筛选和治疗靶点的发现均具有重大意义;2由于人尿液中的N-糖蛋白含量有限,修饰比例较低,在质谱分析时N-糖肽易被高丰度的非糖肽所掩盖,难于鉴定。因此,发展高效、高选择性的富集材料是实现尿蛋白N-糖基化深度覆盖的必要条件。方法1使用亲水填料富集30例健康人尿液中的蛋白酶解后的肽段,并将富集到的肽段进行液质联用质谱鉴定,把得到的质谱数据导入分析软件,获得糖肽及糖基化位点信息;2先在硅球表面接上巯基,然后利用巯基-烯点击化学方法,将带有烯基的两性离子亲水单体键合到硅球表面。结果1男女分别鉴定到946和880个糖蛋白,利用生物信息学软件GO进行分析得到男女尿蛋白信息;2使用[3-(甲基丙烯酰氨基)丙基]二甲基(3-硫代丙基)氢氧化铵内盐(SPP)制备了两性离子修饰亲水硅胶材料(SPP-Si O2),将材料应用于标准糖蛋白和健康人尿蛋白N-糖肽的富集和质谱检测,从Ig G中鉴定到36条肽段,三个批次不同的SPP-Si O2材料分别富集并质谱鉴定959个,837个和877个N-糖基化位点,选择性均超过70%,从人尿液中一共鉴定到包含1065个位点的633个尿液糖蛋白,比文献报道的要多12.2%。其中81.2%的蛋白和73.9%的位点在至少两次富集中得到鉴定。结论1成功建立了稳定、高效的人尿液糖型及糖基化蛋白质规模化定量分析策略,并初步获得大规模的健康人尿液蛋白质糖基化修饰数据集,为实现筛选潜在生物标记物打下基础;2成功合成新型两性离子亲水富集材料,并成功应用于复杂样本,明显的提高了对肽段的富集效率。

关键词：尿蛋白 N-糖肽巯基-烯点击化学法亲水材料质谱鉴定

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