检索结果-内蒙古大学图书馆

菌物学报 2020年第11期39卷 2035-2043页

作者：邓宇晨李帅虎潘炜华廖万清陶丽第二军医大学长征医院皮肤科上海200433 复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438

希木龙念珠菌Candidahaemulonii是一种与耳念珠菌亲缘关系十分相近的物种。近年来,由其引发的侵袭性真菌疾病的发病率不断升高。作为一种多重耐药真菌,希木龙念珠菌对常见抗真菌药物的耐药性甚至超过耳念珠菌。体外药敏试验证实大部分... 详细信息

希木龙念珠菌Candidahaemulonii是一种与耳念珠菌亲缘关系十分相近的物种。近年来,由其引发的侵袭性真菌疾病的发病率不断升高。作为一种多重耐药真菌,希木龙念珠菌对常见抗真菌药物的耐药性甚至超过耳念珠菌。体外药敏试验证实大部分希木龙念珠菌菌株对唑类、多烯类以及棘白菌素类等抗真菌药物耐药,尤其是对两性霉素B具有天然抗性。不仅如此,临床传统的生化方法难以对该菌准确鉴定,常用的商品化鉴定产品往往将其错误鉴定为毕赤酵母或者新型隐球菌。为了进一步加深对希木龙念珠菌的认识,本文结合国内外的流行病学数据与研究进展,从感染现状、生物学特征、耐药性进行综述,同时总结该菌目前诊断、治疗和预防措施。

关键词：希木龙念珠菌流行病学多重耐药

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耳念珠菌和希木龙念珠菌酵母—菌丝转换的调控机制研究

耳念珠菌和希木龙念珠菌酵母—菌丝转换的调控机制研究

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作者：邓宇晨中国人民解放军海军军医大学

学位级别：博士

[研究目的]真菌感染是全球范围内十分棘手的公共健康问题。近年来随着艾滋病患者、接受免疫抑制剂和化疗治疗的人数增多,真菌易感人群增大,侵袭性念珠菌患者越来越多。念珠菌是临床分离率最高的真菌病原体,其中最常见的念珠菌病原体是... 详细信息

[研究目的]真菌感染是全球范围内十分棘手的公共健康问题。近年来随着艾滋病患者、接受免疫抑制剂和化疗治疗的人数增多,真菌易感人群增大,侵袭性念珠菌患者越来越多。念珠菌是临床分离率最高的真菌病原体,其中最常见的念珠菌病原体是白念珠菌,然而由于抗真菌药物的使用以及气候改变,念珠菌感染物种谱发生明显变化,非白念珠菌造成的侵袭性感染也引起了广泛的关注,如“超级真菌”耳念珠菌(Candida auris)和其亲缘关系较近的希木龙念珠菌(Candidahaemulonii)。耳念珠菌和希木龙念珠菌与白念珠菌一样同属CTG分支。白念珠菌酵母菌丝转换被认为是其适应宿主和毒力变化的主要原因。前期研究发现耳念珠菌可以经小鼠体内进行菌丝发育,并且证明菌丝发育是耳念珠菌普遍的生物学特征;希木龙念珠菌也被发现具有形态的多样性。本研究将深入探究影响耳念珠菌和希木龙念珠菌酵母菌丝转换的环境及分子调控机制。第一部分拟探究宿主相关的环境因子(不同碳源、小鼠器官培养基、高浓度CO2和低氧环境)对耳念珠菌酵母菌丝转换的影响;第二部分拟探究第一部分中甘油诱导菌丝发育的调控机制以及生物学意义;第三部分通过遗传筛选进一步探究影响耳念珠菌酵母菌丝转换的分子机制;第四部分通过多种宿主相关环境因子对希木龙念珠菌进行诱导,探究希木龙念珠菌的菌丝发育现象以及与希木龙念珠菌酵母形态的生物学差异。[研究方法]第一部分使用低葡萄糖环境下的其他非发酵碳源、小鼠器官培养基、高浓度CO2、低氧环境对耳念珠菌的典型酵母细胞(BJCA001-Typical yeast)和菌丝细胞(BJCA001-Filament)分别进行培养,使用体视显微镜和电子显微镜对耳念珠菌的菌落和细胞形态进行观察。第二部分使用甘油培养基对耳念珠菌的典型酵母细胞进行培养,获取菌丝细胞的单克隆,通过再次涂布到甘油培养基验证甘油诱导的菌丝细胞是否可以稳定遗传;然后通过对菌丝细胞的基因组重测序与分析鉴定突变基因;构建突变基因的敲除质粒和回补质粒,通过酵母细胞的电转化获得敲除菌株和回补菌株;将耳念珠菌的典型酵母细胞、甘油诱导的菌丝细胞、基因突变菌株和回补菌株涂布到甘油培养基上,验证突变基因对耳念珠菌酵母菌丝转换的影响;使用小鼠皮肤定植模型探究突变菌株的生物意义;然后使用不同碳源培养基、ATP测定试剂、XTT测定试剂和线粒体压力试剂盒探究突变基因与有氧呼吸代谢和菌丝发育的关联;构建可能与突变基因功能相反的MCU1敲除菌株和回补菌株,涂板观察菌落和细胞形态,然后通过使用不同碳源培养基、ATP测定试剂、XTT测定试剂和线粒体压力试剂盒探究基因MCU1对耳念珠菌有氧呼吸代谢的作用,最后通过IP-MS和Co-IP实验验证基因MCU1在耳念珠菌中可能发挥的作用。第三部分首先通过使用含有PB转座子基因元件的耳念珠菌筛选获取发生菌丝发育的突变体株,接着通过对发生菌丝发育的耳念珠菌基因重测序并分析突变基因,最后使用基因功能富集分析可能参与耳念珠菌酵母菌丝转换的遗传机制;另一方面,通过分析前期耳念珠菌酵母细胞和菌丝细胞的转录组数据,结合白念珠菌中酵母菌丝转换的遗传机制,筛选出可能在耳念珠菌酵母菌丝转换中发挥调控作用的目标基因,然后构建敲除质粒或者融合片段,通过电转化获取敲除菌株,最后通过涂布观察敲除菌株与野生型耳念珠菌之间的菌落和细胞形态差异,进一步探究可能作用于耳念珠菌酵母菌丝转换的基因。第四部分使用不同的碳源培养基与温度条件对前期实验获得的希木龙念珠菌的pink细胞和white细胞进行诱导,观察希木龙念珠菌是否可以进行菌丝发育。然后使用Calcofluor White和DAPI染液对希木龙念珠菌的菌丝细胞进行染色,观察希木龙念珠菌的菌丝细胞与白念珠菌和耳念珠菌的菌丝细胞差异。通过不同温度下的生长曲线和菌丝形成、硫酸铜的抗逆性实验、SAP点板和大蜡螟幼虫感染实验探究希木龙念珠菌的酵母细胞和菌丝细胞的生物学区别,最后通过转录组测序分析探究可能参与希木龙念珠菌酵母菌丝转换的调控机制。[研究结果]第一部分对于耳念珠菌的典型酵母细胞,甘油培养基可以诱导其进行菌丝发育,其他非发酵碳源上可以发现菌落形成sector但是未见菌丝发育,小鼠器官培养和5%CO2培养条件下未见菌丝发育,低氧环境耳念珠菌酵母细胞生长减慢;对于耳念珠菌的菌丝细胞,非发酵碳源、小鼠器官培养和5%CO2培养条件促进菌丝细胞发育,低氧环境抑制菌丝细胞发育。第二部分甘油诱导的耳念珠菌菌丝型细胞可以稳定遗传,对48株耳念珠菌sector基因组重测序分析发现基因BCR1突变,然后本研究成功构建耳念珠菌的敲除和回补质粒,通过电转化获得BCR1敲除和回补菌株。涂板实验观察到BCR1敲除菌株与甘油诱导的sector细胞在甘油培养基上均进行菌丝发育。小鼠皮肤定植实验证明BCR1突变菌株对小鼠皮肤的定植能力增强

关键词：耳念珠菌希木龙念珠菌形态转换菌丝发育皮肤定植

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极早/超早产儿多重耐药希木龙念珠菌血流感染3例临床分析

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中国真菌学杂志 2023年第2期18卷 111-116,134页

作者：钟美珍郭少青李小忠朱波福建医科大学第三临床医学院厦门大学附属第一医院儿科厦门市儿科重点实验室厦门大学医学院儿童医学研究所厦门361003 厦门大学附属第一医院检验科微生物室厦门361003

目的探讨早产儿多重耐药希木龙念珠菌血流感染的临床特征、治疗及预后。方法选择2017年10月间本院新生儿重症监护病房(NICU)在住院期间发生的多重耐药希木龙念珠菌血流感染早产儿的临床资料进行回顾性分析,并复习相关文献。结果共3... 详细信息

目的探讨早产儿多重耐药希木龙念珠菌血流感染的临床特征、治疗及预后。方法选择2017年10月间本院新生儿重症监护病房(NICU)在住院期间发生的多重耐药希木龙念珠菌血流感染早产儿的临床资料进行回顾性分析,并复习相关文献。结果共3例患儿,为极早/超早产儿,出生胎龄分别为25周^(+1)、30周、30周,出生体重分别为725 g、1 000 g、1 070 g,发生感染时间为入院45 d、24 d、28 d,均行经外周静脉穿刺中心静脉置管(PICC),发生感染前使用过广谱抗细菌药物和低剂量氟康唑预防真菌感染。血液培养共检出4株和PICC导管尖端检出2株希木龙念珠菌,均对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、5-氟胞嘧啶耐药,但对米卡芬净敏感,3例用氟康唑和/或伏立康唑临床病情无改善,最终均改用米卡芬净治疗痊愈,且未见明显肝肾、血液毒副作用。结论应警惕极早/超早产儿在氟康唑预防真菌感染的过程中耐药非白念珠菌血症的发生,多重耐药希木龙念珠菌血流感染应用米卡芬净治疗安全有效。

关键词：婴儿早产希木龙念珠菌血流感染米卡芬净

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简并PCR结合RACE法克隆希木龙念珠菌CDR1基因

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中国皮肤性病学杂志 2018年第1期32卷 29-32页

作者：张浩王千周亚彬李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室北京100034

目的克隆希木龙念珠菌中药外排泵基因(CDR1),为探讨希木龙念珠菌的耐药机制奠定基础。方法首先从NCBI基因数据库中找到已知的白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和光滑念珠菌Cdr1蛋白的氨基酸保守序列,并设计简并引物,PCR扩增获得希木... 详细信息

目的克隆希木龙念珠菌中药外排泵基因(CDR1),为探讨希木龙念珠菌的耐药机制奠定基础。方法首先从NCBI基因数据库中找到已知的白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和光滑念珠菌Cdr1蛋白的氨基酸保守序列,并设计简并引物,PCR扩增获得希木龙念珠菌CDR1c DNA部分片段,接着使用RACE方法分别扩增其5'和3'端序列得到完整的CDR1编码序列(CDS)。结果简并PCR扩增得到预期2 210bp大小的片段;5'RACE和3'RACE分别得到CDR1c DNA 5'和3'端片段,经纯化、克隆、测序、比对和拼接分别得到两株菌完整的CDR1c DNA序列;其编码的蛋白序列经比对发现与其它念珠菌的Cdr1蛋白高度同源。结论利用简并PCR联合RACE方法能够有效、准确地克隆出希木龙念珠菌CDR1基因。

关键词：希木龙念珠菌简并PCR 快速cDNA末端扩增法药物外排泵

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希木龙念珠菌对氟康唑耐药的机制研究

希木龙念珠菌对氟康唑耐药的机制研究

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中国菌物学会2015年学术年会

作者：张浩王千万喆李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室

近年来,由希木龙念珠菌感染导致的真菌性疾病的发病率逐渐增高。希木龙念珠菌作为机会性致病菌主要引起免疫低下或受损患者发生感染。由其感染引起的疾病包括甲癣,导管相关的真菌血症等。由于希木龙念珠菌对多种抗菌药物耐药,临床上治... 详细信息

近年来,由希木龙念珠菌感染导致的真菌性疾病的发病率逐渐增高。希木龙念珠菌作为机会性致病菌主要引起免疫低下或受损患者发生感染。由其感染引起的疾病包括甲癣,导管相关的真菌血症等。由于希木龙念珠菌对多种抗菌药物耐药,临床上治疗其引起的侵入性念珠菌病的效果较差。因此,研究希木龙念珠菌的耐药机制具有重要的临床意义。首先,对来自于三名念珠菌病患者血液中分离的4株菌进行鉴定,测定其ITS1/2和D1/D2区域的序列发现,3株菌为Candida haemulonii,分别命名为BMU05228,BMU05529和BMU05535,1株菌为Candida duobushaemulonii,命名为BMU05314。使用微量液基稀释法检测发现,BMU05228对氟康唑（FLC）敏感,其余耐药。接着对这4株菌的ERG11,CDR1,CDR2和UPC2基因进行测序,结果发现这些基因并未发生突变。随后使用q-PCR的方法检测ERG11,CDR1和CDR2的表达量发现,耐药菌的的ERG11的表达水平比敏感菌明显增高,并且BMU05314的CDR1/2的表达水平也明显增高。在酿酒酵母中过表达ERG11发现,转化ERG11表达质粒的酿酒酵母对FLC发生耐药。联合使用Cdr1的抑制剂FK520和FLC后发现,BMU05228,BMU05529和BMU05535的生长受到明显抑制,但是BMU05314的生长抑制不明显。综上,ERG11的过表达可能是导致希木龙念珠菌对FLC耐药的主要机制,CDR1和CDR2的过表达也发挥了一定作用。但是是否还有其它机制导致其对FLC耐药,还需进一步进行研究。

关键词：希木龙念珠菌氟康唑耐药

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希木龙念珠菌的耐药机制研究及全基因组de novo测序检测

希木龙念珠菌的耐药机制研究及全基因组de novo测序检测

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中国菌物学会第七届全国会员代表大会暨2017年学术年会

作者：张浩王千周亚彬李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室

近年来,由希木龙念珠菌（Candida haemulonii）感染导致的真菌性疾病的发病率逐渐增高。希木龙念珠菌作为机会性致病菌主要引起免疫低下或受损患者发生感染。由其感染引起的疾病包括甲癣,导管相关的真菌血症等。希木龙念珠菌是一种多重... 详细信息

近年来,由希木龙念珠菌（Candida haemulonii）感染导致的真菌性疾病的发病率逐渐增高。希木龙念珠菌作为机会性致病菌主要引起免疫低下或受损患者发生感染。由其感染引起的疾病包括甲癣,导管相关的真菌血症等。希木龙念珠菌是一种多重耐药菌,其对两性霉素B耐药,且大部分菌株对唑类药物耐药。临床上治疗希木龙念珠菌的感染常常给予氟康唑和两性霉素B联合用药,但联合用药对治疗其引起的深部真菌感染效果较差。因此,研究希木龙念珠菌的耐药机制具有重要的临床意义。本研究对来自于3名念珠菌病患者血液中分离的4株菌进行鉴定,测定其ITS1/2和D1/D2区域的序列发现,3株菌为Candida haemulonii,分别命名为BMU05228,BMU05529和BMU05535,1株菌为Candida duobushaemulonii,命名为BMU05314。使用微量液基稀释法检测发现,BMU05228对氟康唑（FLC）敏感,其余耐药。接着对这4株菌的ERG11、CDR1、CDR2和UPC2基因进行测序,结果发现这些基因并未发生突变。随后使用q-PCR的方法检测ERG11、CDR1和CDR2的表达量发现,耐药菌的ERG11和CDR1的表达水平比敏感菌明显增高。这一结果提示,ERG11和CDR1的过表达可能是导致希木龙念珠菌对FLC耐药的机制。由于希木龙念珠菌的基因组序列未知,因此为了进一步揭示其耐药性产生的机制,本研究对希木龙念珠菌进行了全基因组de novo测序,并对耐药菌进行了重测序以及转录组测序。结果显示,二代联合三代测序的方法能够得到较完整的希木龙念珠菌全基因组序列;重测序结果显示,耐药菌中132个编码基因发生了错义突变,4个编码基因的翻译提前终止,7个编码基因发生了移码突变;转录组结果显示耐药菌中药物外排泵基因的表达水平明显增高。这些结果提示,外排泵基因的高表达有可能是导致其产生耐药性的原因,并且编码基因的突变可能导致了外排泵基因的高表达或者通过其他机制造成耐药性的产生。

关键词：希木龙念珠菌唑类药物耐药机制全基因组测序

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腹部大手术后希木龙念珠菌血症13例临床分析

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中国感染与化疗杂志 2022年第4期22卷 385-389页

作者：赵理想平顶山市第一人民医院普外三科河南平顶山467000

目的探讨腹部大手术后希木龙念珠菌血症的临床表现、感染特点、危险因素、治疗效果及转归等情况。方法收集2018年3月—2021年8月平顶山市第一人民医院普外三科腹部大手术后13例希木龙念珠菌血症患者的临床特点、血培养结果、药敏结果、... 详细信息

目的探讨腹部大手术后希木龙念珠菌血症的临床表现、感染特点、危险因素、治疗效果及转归等情况。方法收集2018年3月—2021年8月平顶山市第一人民医院普外三科腹部大手术后13例希木龙念珠菌血症患者的临床特点、血培养结果、药敏结果、治疗转归等资料进行回顾性分析。结果13例患者平均年龄66岁,男6例、女7例,11例(84.6%)患恶性肿瘤,平均手术时间187 min,平均住院时间28.9 d。所有患者均有经外周静脉穿刺中心静脉置管(PICC)、肠外营养及腹腔引流管。13例希木龙念珠菌血症患者术后感染前均使用抗生素,其中11例使用3种抗生素,2例使用4种抗生素,使用时间5~17 d,平均8.5 d。12例患者出现低热,11例纳差、乏力,5例腹胀、呕吐。7例患者真菌G试验结果明显升高。希木龙念珠菌体外对5-氟胞嘧啶、氟康唑、伏立康唑、两性霉素B耐药率高达76.9%,对卡泊芬净、米卡芬净的敏感率较高,分别为92.3%、100%。结论腹部大手术后希木龙念珠菌血症临床表现、辅助检查无特异性,发生的危险因素可能为腹腔引流管的置入、手术时间长、PICC的置入、肠外营养、低蛋白血症、恶性肿瘤、抗菌药物使用等,对高危患者应关注希木龙念珠菌感染的可能。

关键词：希木龙念珠菌菌血症腹部大手术真菌

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铁离子在耳念珠菌热抗逆中功能及机制初探研究

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中国真菌学杂志 2025年第1期20卷 45-51页

作者：文欢王也黄雎周浩王棣宋章永四川省泸州市叙永县人民医院检验科泸州646400 西南医科大学基础医学院泸州646000

目的探究铁离子在耳念珠菌热抗逆中的生物学功能及其机制。方法首先,采用液体生长曲线方法测定不同温度和不同浓度铁螯合剂处理对耳念珠菌和希木龙念珠菌菌株生长的影响。其次,采用固体点板试验测定两株菌株在不同温度、不同浓度铁离子... 详细信息

目的探究铁离子在耳念珠菌热抗逆中的生物学功能及其机制。方法首先,采用液体生长曲线方法测定不同温度和不同浓度铁螯合剂处理对耳念珠菌和希木龙念珠菌菌株生长的影响。其次,采用固体点板试验测定两株菌株在不同温度、不同浓度铁离子处理下的生长变化。再次,通过DCFH-DA荧光探针方法测定耳念珠菌菌株在不同温度下、不同浓度铁离子处理下菌体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的变化。最后,采用荧光定量PCR方法测定耳念珠菌菌株的单巯基谷氧化还原蛋白基因(GRX5)在不同温度、不同浓度铁离子和加入H_(2)O_(2)情况下的表达量变化。结果耳念珠菌菌株比希木龙念珠菌株表现出更强的耐热特性。高温条件下,缺铁显著抑制耳念珠菌菌株生长,富集浓度铁显著促进耳念珠菌菌株生长。添加铁螯合剂处理抑制耳念珠菌菌株产生ROS,而富集浓度铁则促进耳念珠菌菌株产生ROS,且不同温度、不同浓度铁离子和H_(2)O_(2)条件下GRX5基因表达量存在差异。结论铁离子是耳念珠菌热抗逆的必需因素,且通过GRX5基因表达上调来抵御热胁迫带来的ROS压力。

关键词：耳念珠菌希木龙念珠菌铁离子热抗逆单巯基谷氧化还原蛋白基因

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耳念珠菌实验室鉴定方法的研究进展

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中国真菌学杂志 2022年第5期17卷 414-420,424页

作者：邹玉陈宗耀鄂建飞郑茂四川省德阳市人民医院输血科德阳618000 四川省德阳市人民医院检验科德阳618000

耳念珠菌(Candida auris)可导致人体严重的侵袭性感染,自2009年日本首次报道以来,全球呈快速流行趋势,甚至暴发多次院内感染[1-3]。按照美国疾病预防控制中心(Centers for Disease Control and Prevention,CDC)暂定的耳念珠菌耐药折点(... 详细信息

耳念珠菌(Candida auris)可导致人体严重的侵袭性感染,自2009年日本首次报道以来,全球呈快速流行趋势,甚至暴发多次院内感染[1-3]。按照美国疾病预防控制中心(Centers for Disease Control and Prevention,CDC)暂定的耳念珠菌耐药折点(氟康唑MIC≥32 mg/L、两性霉素B MIC≥2 mg/L、卡泊芬净MIC≥2 mg/L),临床分离的耳念珠菌对这3类常用抗真菌药物往往表现出耐药,甚至泛耐药,故可选择的治疗方案非常有限[4]。

关键词：耳念珠菌希木龙念珠菌鉴定方法表型 MALDI-TOF MS PCR

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常见病原真菌的药物敏感性监测及耐药机制的研究

常见病原真菌的药物敏感性监测及耐药机制的研究

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中华医学会第十八次全国皮肤性病学术年会

作者：刘伟孙毅谭静文刘伟霞陈伟万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤科

目的对我国常见病原真菌的药物敏感性进行检测,并对其耐药机制进行研究。方法对2008年7月到2011年11月送往我室的曲霉病原菌以及全国范围念珠菌血症病原菌进行标准的分离、鉴定及药物敏感性监测,并对耐药机制进行探讨。结果共分离到213... 详细信息

目的对我国常见病原真菌的药物敏感性进行检测,并对其耐药机制进行研究。方法对2008年7月到2011年11月送往我室的曲霉病原菌以及全国范围念珠菌血症病原菌进行标准的分离、鉴定及药物敏感性监测,并对耐药机制进行探讨。结果共分离到213株曲霉病原菌,烟曲霉130株,黄曲霉58株,土曲霉16株,其它9株;尽管CLSI的M38-A2方案没有对曲霉药物敏感性的判读折点作出规定,但我们在利用该方案测定这些菌株对常用药物的敏感性时发现:烟曲霉中耐伊曲康唑者1株,对伏立康唑和伊曲康唑同时耐药者1

关键词：耐药机制希木龙念珠菌念珠菌血症病原菌热带念珠菌光滑念珠菌病原真菌

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