检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2014年第8期45卷 1381-1386页

作者：王士勇郑军军杨月春刘宗岳于淼杨福合中国农业科学院特产研究所长春130112 延边大学农学院延吉133002 吉林农业科技学院动物科学学院吉林132101

本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies somatic cell nuclear transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和... 详细信息

本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies somatic cell nuclear transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和脱羰秋水仙碱(Demecoline,DEME)化学辅助的方法去核,带下注射(Perivitelline microin—jection,PM)、Pizeo破膜细胞胞质内注射(Break—membrane-cell intracytoplasmic microinjection,BMCIM)和全细胞胞质内注射(Whole-cell intracytoplasmic microinjection,WCIM)的方法注核,带下注核的卵母细胞电融合后化学激活,其余方法注核后直接化学激活,重组胚用CR1aa培养液体外培养。结果表明:(1)DEME辅助法去核率最高,挤压法最低,3种去核方法的去核率差异显著(P<0.05),去核时间差异不显著(P>0.05);(2)PM组和WCIM组注核成功率分别为100.0%和94.8%,注核时间分别为31.0和35.1 s,显著低于BMCIM法(P<0.05),但是注核成功率显著高于BMCIM法(P<0.05),而且两者差异不显著(P>0.05);(3)BMCIM组和WCIM组的激活率均显著高于PM组(P<0.05),其中一步法的BMCIM组最高,一步法和两步法在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显著差异(P>0.05)。结果提示:DEME辅助去核、Pizeo辅助破膜胞质内注射的一步法显微操作可有效用于梅花鹿-牛的异种体细胞核移植的研究。

关键词：异种体细胞核移植盲吸法挤压法 Demecolcine化学辅助去核带下注核胞质内注射

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水牛—猪异种体细胞核移植

水牛—猪异种体细胞核移植

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作者：孙如玉广西大学

学位级别：硕士

水牛-猪异种体细胞核移植(iSCNT)是指将水牛体细胞注射到猪去核卵子中,通过激活、培养等步骤观察其后续发育情况。异种体细胞核移植对于研究核-质互作、细胞核重编程等机制提供很好的理论依据,利用异种体细胞核移植还可以保护濒临灭绝... 详细信息

水牛-猪异种体细胞核移植(iSCNT)是指将水牛体细胞注射到猪去核卵子中,通过激活、培养等步骤观察其后续发育情况。异种体细胞核移植对于研究核-质互作、细胞核重编程等机制提供很好的理论依据,利用异种体细胞核移植还可以保护濒临灭绝的珍稀物种,尤其对于卵母细胞不易获得的物种,近年来异种核移植还用来作为人类器官移植的供体,以猪卵子作为受体结合转基因技术生产与人类器官相似的组织,研究人类疾病发病机理及解决方法。本实验采用不同的融合液组分,研究钙离子浓度对本实验条件下猪同种核移植发育的影响；筛选最适合水牛-猪异种核移植胚胎发育的激活条件,此外,探究了培养滴体积与胚胎个数的比例对于其发育的效果,并坚定了水牛-猪异种核移植。本实验的结果如下： 1.不同激活电压对水牛-猪异种核移植发育的影响：采用1.0mM的融合激活液,分别采用120v/mm,150v/mm,180v/mm的电场强度,30us、2DC的激活参数。结果发现电场强度对胚胎发育的作用没有统计学上的差异。 2.不同融合激活方法对水牛-猪异种核移植发育的影响：采用电融合激活与电融合后化学激活(离子霉素+6--DMAP)的方法,这两种方法对水牛-猪异种体细胞核移植发育没有差异。 3.培养滴体积与胚胎个数的比例对其发育的效果：不同重构胚个数放在20ul大小的PZM-3中培养,对异种核移植发育没有影响。 4.转基因水牛-猪异种核移植发育的鉴定：采用转染了绿色荧光蛋白的转基因水牛体细胞进行核移植结果发现各个时期的胚胎均可观察到绿色荧光,表明水牛-猪异种核移植可以在体外发育到囊胚。综上得出结论：水牛-猪异种核移植胚胎可以在体外培养发育到囊胚阶段,但是本实验未发现融合激活方法、重构胚个数与培养滴体积比例等对胚胎发育存在统计学差异,且转基因异种核移植胚胎可以发育到囊胚。

关键词：异种体细胞核移植水牛猪转基因

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水牛—牛异种体细胞核移植研究

水牛—牛异种体细胞核移植研究

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作者：郭海英西南大学

学位级别：硕士

异种体细胞核移植研究可以揭示不同动物之间细胞核质互作的特征和规律，在实践上可以使珍稀濒危动物的快速繁育变得可行。本研究利用体细胞核移植技术路线，对水牛—牛异种体细胞核移植进行了初步探索。重点从受体卵母细胞胞质成熟时间... 详细信息

异种体细胞核移植研究可以揭示不同动物之间细胞核质互作的特征和规律，在实践上可以使珍稀濒危动物的快速繁育变得可行。本研究利用体细胞核移植技术路线，对水牛—牛异种体细胞核移植进行了初步探索。重点从受体卵母细胞胞质成熟时间、激活方法、供体细胞处理、胚胎培养系统等几个方面做了研究，建立了本实验的体细胞核移植技术平台；通过该平台对水牛—牛异种体细胞核移植胚胎发育的可能性进行了探索性研究；并对水牛—牛异种体细胞核移植早期胚胎发育效率与水牛、牛同种体细胞核移植进行了比较。 1、体细胞核移植技术平台建立 1)首先，本试验利用牛卵母细胞孤雌激活的方法，比较了几种不同的化学激活方法，发现联合激活方法比单一化学试剂激活方法效率高，而在联合激活的方法中，Ionomycin+6-DMAP激活效率最好，其激活后8-细胞～桑椹胚发育率明显高于EH+6-DMAP(22.0％ vs．15.2％，p＜0.05)与A23187+6-DMAP(22.0％ vs．9.8％，p＜0.05)。 2)其次，比较了M199培养液和CR1aa培养液对牛孤雌胚的培养效果，结果表明CR1aa培养液比M199培养液更适合牛胚胎的培养(21.7％ vs．16.7％，P＜0.05)。 3)比较牛卵母细胞不同成熟时间对成熟率和去核率的影响，结果表明，牛卵母细胞体外培养16～18h组的成熟率显著低于体外培养19～21h(45.6％ vs．60.8％，p＜0.05)和22～24h(45.6％vs．64.7％，p＜0.05)组。而卵母细胞体外培养22～24h组的去核率显著低于体外培养16～18h(52.2％ vs．80.6％，p＜0.05)与19～21h(52.2％ vs．73.3％，p＜0.05)组。为了提高盲吸法核移植效率，本试验选择成熟培养20h的牛卵母细胞作为核受体。 4)然后，在供体细胞的处理上，本试验以水牛颗粒细胞作为供体细胞，一部分长满后进行核移植试验，一部分饥饿处理后进行核移植试验，结果发现单独血清饥饿处理供体细胞对核移植效果没有显著影响(9.5％ vs．11.5％，p＞0.05)。 2、水牛颗粒细胞核移入牛去核卵母细胞质的研究在建立了体细胞核移植技术基本平台的基础上，以水牛颗粒细胞作为供核体，牛去核成熟卵母细胞作为受体，通过胞质内直接注射方法进行异种体细胞核移植，重构胚能够发育到

关键词：牛水牛异种体细胞核移植颗粒细胞卵母细胞孤雌激活

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Oxamflatin处理对水牛-猪异种体细胞核移植胚胎早期发育的影响

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广西畜牧兽医 2014年第6期30卷 283-286页

作者：崔静辉刘予娴全守能卢晟盛广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 广西大学生命科学技术学院广西南宁530005

为了探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Oxamflatin)处理对水牛-猪异种体细胞核移植(i SCNT)胚胎早期发育的影响,分别观察了培养在不同浓度Oxamflatin(0.00μM,0.05μM,0.50μM,5.00μM)和不同处理时间(0h,12h,18h,24h)对水牛-猪i SCNT胚胎早... 详细信息

为了探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Oxamflatin)处理对水牛-猪异种体细胞核移植(i SCNT)胚胎早期发育的影响,分别观察了培养在不同浓度Oxamflatin(0.00μM,0.05μM,0.50μM,5.00μM)和不同处理时间(0h,12h,18h,24h)对水牛-猪i SCNT胚胎早期发育的影响。结果显示,在PZM-3中添加不同浓度的Oxamflatin处理12h后,i SCNT胚胎分裂率在各个处理组和对照组之间差异不显著(p>0.05),囊胚率在各个处理组和对照组之间也无显著差异(p>0.05);随后用Oxamflatin处理不同时间后,i SCNT胚胎分裂率和囊胚率分别在各个处理组和对照组之间差异不显著(p>0.05)。结果表明,在本试验条件下Oxamflatin不能显著提高水牛-猪i SCNT胚胎发育的潜能。

关键词：异种体细胞核移植胚胎发育

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共培养对梅花鹿耳皮肤成纤维细胞-牛卵母细胞构建的异种体细胞核移植胚胎体外发育的影响

共培养对梅花鹿耳皮肤成纤维细胞-牛卵母细胞构建的异种体细胞核...

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第八届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：王士勇杨月春郑军军曹新燕李晓霞刁云飞许保增杨福合特种经济动物分子生物学国家重点实验室

引言梅花鹿是我国传统的药用动物,具有极高的经济价值,对其进行保种选育和开发利用能够促进农民增收致富,但是目前其种质资源尚不足以开展大量科学研究,因此,本试验以牛卵母细胞作为核受体,研究其对梅花鹿耳皮肤成纤维细胞的支持发育能... 详细信息

引言梅花鹿是我国传统的药用动物,具有极高的经济价值,对其进行保种选育和开发利用能够促进农民增收致富,但是目前其种质资源尚不足以开展大量科学研究,因此,本试验以牛卵母细胞作为核受体,研究其对梅花鹿耳皮肤成纤维细胞的支持发育能力,探索共培养对梅花鹿耳皮肤成纤维细胞-牛卵母细胞构建的异种体细胞核移植胚胎体外发育的影响,提高其发育效率,为梅花鹿其他胚胎生物技术奠定基础。材料与方法

关键词：梅花鹿牛卵母细胞胚胎体外发育异种体细胞核移植皮肤成纤维细胞

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梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究

梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究

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第七届(2016)中国鹿业发展大会

作者：王士勇郑军军杨月春刘宗岳于淼杨福合中国农业科学院特产研究所长春 130112 吉林农业科技学院动物科学学院吉林 132101

本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies Somatic Cell Nuclear Transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程.以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和脱... 详细信息

本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies Somatic Cell Nuclear Transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程.以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和脱羰秋水仙碱(Demecoline,DEME)化学辅助的方法去核,带下注射(Perivitelline Microinjection,PM)、Pizeo破膜细胞胞质内注射(Break-Membrane-Cell Intracytoplasmic Microinjection,BMCIM)和全细胞胞质内注射(Whole-Cell Intracytoplasmic Microinjection,WCIM)的方法注核,带下注核的卵母细胞电融合后化学激活,其余方法注核后直接化学激活,重组胚用CR1aa培养液体外培养.结果表明:(1)DEME辅助法去核率最高,挤压法最低,三种去核方法的去核率差异显著(P＜0.05),去核时间差异不显著(P>0.05);(2)PM组和WCIM组注核成功率分别为100％和94.8％,注核时间分别为31.0s和35.1s,显著低于BMCIM法(P＜0.05),但是注核成功率显著高于BMCIM法(P<0.05),而且两者差异不显著(P>0.05);(3)BMCIM组和WCIM组的激活率均显著高于PM组(P<0.05),其中一步法的BMCIM组最高,一步法和两步法在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显著差异(P＞0.05).结果提示:DEME辅助去核、Pizeo辅助破膜胞质内注射的一步法显微操作可有效用于梅花鹿-牛的异种体细胞核移植的研究.

关键词：异种体细胞核移植显微操作去核技术注核技术

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梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究

梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究

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作者：王士勇郑军军杨月春刘宗岳于淼杨福合中国农业科学院特产研究所吉林农业科技学院动物科学学院

本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies Somatic Cell Nuclear Transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和... 详细信息

本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies Somatic Cell Nuclear Transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和脱羰秋水仙碱(Demecoline,DEME)化学辅助的方法去核,带下注射(Perivitelline Microinjection,PM)、Pizeo破膜细胞胞质内注射(Break-Menbrane-Cell Intracytoplasmic Microinjection,BMCIM)和全细胞胞质内注射(Whole-Cell Intracytoplasmic Microinjection,WCIM)的方法注核,带下注核的卵母细胞电融合后化学激活,其余方法注核后直接化学激活,重组胚用CR1aa培养液体外培养。结果表明:(1)DEME辅助法去核率最高,挤压法最低,三种去核方法的去核率差异显著(P<0.05),去核时间差异不显著(P>0.05);(2)PM组和WCIM组注核成功率分别为100%和94.8%,注核时间分别为31.0s和35.1 s,显著低于BMCIM法(P<0.05),但是注核成功率显著高于BMCIM法(P<0.05),而且两者差异不显著(P>0.05);(3)BMCIM组和WCIM组的激活率均显著高于PM组(P<0.05),其中一步法的BMCIM组最高,一步法和两步法在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显著差异(P>0.05)。结果提示:DEME辅助去核、Pizeo辅助破膜胞质内注射的一步法显微操作可有效用于梅花鹿-牛的异种体细胞核移植的研究。

关键词：异种体细胞核移植盲吸法挤压法 Demecolcine化学辅助去核带下注核胞质内注射

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食蟹猴-猪异种体细胞核移植的研究

食蟹猴-猪异种体细胞核移植的研究

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作者：卢晟盛卢克焕许常龙梁明明许惠艳杨小淦广西大学

一、课题来源与背景 1.国家自然科学基金项目：食蟹猴体细胞异种核移植构建胚胎干细胞研究(项目批准号：30860039)。2.广西科学研究与技术开发计划项目：建立模式动物食蟹猴体细胞异种核移植技术平台(桂科能0815011-6-3)。二、... 详细信息

标准号: 1400480260

一、课题来源与背景 1.国家自然科学基金项目：食蟹猴体细胞异种核移植构建胚胎干细胞研究(项目批准号：30860039)。2.广西科学研究与技术开发计划项目：建立模式动物食蟹猴体细胞异种核移植技术平台(桂科能0815011-6-3)。二、研究目的与意义利用食蟹猴体细胞为核供体、猪卵胞质为核受体,进行异种体细胞核移植,获得食蟹猴异种体细胞核移植的囊胚,为濒危的食蟹猴和其它非人灵长类物种的进一步保种开辟一条新途径与奠定基本而重要的方法和手段;还可进一步生产遗传上相同的食蟹猴或者大量繁殖具有优良性状的食蟹猴,用于生物医学研究;丰富灵长类动物细胞核移植研究的技术和理论。三、主要论点与论据建立了一整套食蟹猴供体细胞和受体猪卵母细胞有效的异种核移植方法,构建了食蟹猴—猪异种重构胚早期体外发育到囊胚的技术体系,生产出食蟹猴异种核移植囊胚,食蟹猴体细胞和猪去核卵母细胞融合率达83%,形成的重构胚卵裂率达88%,食蟹猴异种核移植囊胚发育率达到15%,定量研究了猪卵胞质重编程的食蟹猴异种胚胎中食蟹猴和猪mtDNA的水平,并利用微卫星标记分析4个食蟹猴群体的遗传多样性。四、创见与创新以猪卵胞质为核受体、食蟹猴体细胞为核供体进行异种体细胞核移植,我们实验室为世界首次。五、研究成果的科学水平、科学价值、论文公开发表情况及被正面引用情况、发展前景、社会经济效益 1.研究成果的科学水平和科学价值、发展前景、社会经济效益建立了一整套食蟹猴供体细胞和受体猪卵母细胞有效的异种核移植方法,构建了食蟹猴—猪异种重构胚早期体外发育到囊胚的技术体系,生产出食蟹猴异种核移植囊胚,食蟹猴体细胞和猪去核卵母细胞融合率达83%,形成的重构胚卵裂率达88%,食蟹猴异种核移植囊胚发育率达到15%,定量研究了猪卵胞质重编程的食蟹猴异种胚胎中食蟹猴和猪mtDNA的水平,并利用微卫星标记分析4个食蟹猴群体的遗传多样性。为濒危的食蟹猴和其它非人灵长类物种的进一步保种开辟一条新途径与奠定基本而重要的方法和手段;还可进一步生产遗传上相同的食蟹猴或者大量繁殖具有优良性状的食蟹猴,用于生物医学研究;丰富灵长类动物细胞核移植研究的技术和理论。 2.论文公开发表情况及被正面引用情况共发表学术论文30篇,其中2篇被SCI收录、28篇是中文核心期刊论文,另外还在国际和国内学术会议上发表论文全文和摘要共13篇。申请专利2项。到目前为止,2篇被SCI收录的论文被引用2次,8篇中文核心期刊论文被引用10次。

关键词：食蟹猴猪异种体细胞核移植

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Scriptaid处理牦牛成纤维细胞对组蛋白乙酰化及重编程的影响

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农业生物技术学报 2013年第1期21卷 62-68页

作者：高川熊显荣符梅王树茂李宇李键西南民族大学生命科学学院动物遗传育种重点实验室

供体细胞的不完全重编程是克隆动物成功率低的主要原因。本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid对牦牛(Bos grunniens)成纤维细胞重编程的影响,以及Scriptaid处理供体细胞对牦牛-黄牛(Bos taurus)异种核移植(interspecies soma... 详细信息

供体细胞的不完全重编程是克隆动物成功率低的主要原因。本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid对牦牛(Bos grunniens)成纤维细胞重编程的影响,以及Scriptaid处理供体细胞对牦牛-黄牛(Bos taurus)异种核移植(interspecies somatic cell nuclear transfer,iSCNT)胚胎体外发育的影响。分别利用0、500、1000、1500和3000nmol/LScriptaid处理牦牛胎儿成纤维细胞,观察细胞形态、统计细胞活率、测定细胞周期、检测组蛋白乙酰化水平,并以处理后的成纤维细胞进行体细胞核移植,检测重构胚体外发育水平。结果显示,经Scriptaid处理24h后,细胞形态发生了改变,细胞增殖受到明显抑制,大量细胞被阻滞在G0/G1期;随着Scriptaid处理浓度的增加,细胞组蛋白H3K9ac乙酰化水平逐渐提高;以1000nmol/L Scriptaid处理的成纤维细胞作为供体细胞后的囊胚率显著高于其他组(P<0.05)。研究结果表明,Scriptaid能显著提高牦牛成纤维细胞的乙酰化水平,以1000nmol/L Scriptaid处理供体细胞显著提高了牦牛-黄牛异种克隆胚胎的体外发育。本研究初步证实Scriptaid是通过提高成纤维细胞的乙酰化水平来促进核的重编程,为研究供体细胞的重编程以及异种克隆牦牛提供理论依据。

关键词： Scriptaid 组蛋白乙酰化重编程异种体细胞核移植

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线粒体损伤对山羊-绵羊异种核移植胚早期发育的影响

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第4期38卷 42-46页

作者：曹俊伟马利兵华松张涌西北农林科技大学生物工程研究所陕西杨凌712100 内蒙古农业大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古科技大学生物与化学工程学院内蒙古包头014010

【目的】研究线粒体损伤对核移植胚早期发育的影响。【方法】用经光敏化染料罗丹明-123损伤的山羊胎儿成纤维细胞和绵羊卵母细胞,构建山羊-绵羊异种体细胞核移植胚,于38.5℃、相对湿度100%、体积分数5%CO2条件下培养,统计其2-细胞期、8... 详细信息

【目的】研究线粒体损伤对核移植胚早期发育的影响。【方法】用经光敏化染料罗丹明-123损伤的山羊胎儿成纤维细胞和绵羊卵母细胞,构建山羊-绵羊异种体细胞核移植胚,于38.5℃、相对湿度100%、体积分数5%CO2条件下培养,统计其2-细胞期、8-细胞期和囊胚期的发育率。【结果】山羊核供体线粒体损伤并不影响囊胚期前核移植胚的发育率(P>0.05);绵羊卵母细胞线粒体损伤,使核移植胚2-细胞期的发育率下降(P<0.05),但不影响8-细胞期和囊胚期的发育率(P>0.05);核供体和卵母细胞线粒体都损伤的核移植胚发育率的变化规律与卵胞质受体线粒体损伤的核移植胚一致。【结论】在异种核移植胚的早期发育中,核供体线粒体损伤不影响核移植胚的发育,但卵母细胞受体线粒体损伤明显影响核移植胚的发育率。

关键词：线粒体异种体细胞核移植山羊绵羊

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