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长链非编码RNA BCYRN1通过激活Wnt信号通路促进卵巢癌增殖和转移的实验研究

临床肿瘤学杂志 2019年第6期24卷 487-493页

作者：魏世平程坤孟冬月陈红霞王松梅邢台医学高等专科学校基础医学部病理教研室河北邢台054000 邢台医专第二附属医院病理科 054000 邢台医学高等专科学校妇儿教研室 054000

目的探讨长链非编码RNA脑细胞质RNA1(lncRNABCYRN1)通过激活Wnt信号通路促进卵巢癌细胞体外及体内增殖和转移的作用。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞和腹水瘤亚系***1细胞(Blank组),采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测BCYRN1表达水平。分... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA脑细胞质RNA1(lncRNABCYRN1)通过激活Wnt信号通路促进卵巢癌细胞体外及体内增殖和转移的作用。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞和腹水瘤亚系***1细胞(Blank组),采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测BCYRN1表达水平。分别向***1细胞转染BCYRN1-siRNA和阴性对照序列作为BCYRN1-siRNA组和NC-siRNA组。采用CCK-8法、Transwell小室法和划痕实验检测各组细胞增殖、侵袭和迁移活性。采用Westernblotting法检测β-catenin、Wnt1、c-myc、CyclinD1、APC蛋白表达水平。将SKOV3细胞或***1细胞接种于裸鼠皮下,观察成瘤情况和肿瘤体积;实验结束,处死裸鼠,称重其肿瘤组织,观察其肝脏。结果 ***1细胞BCYRN1表达水平为1.38±0.20,高于SKOV3细胞(P<0.05)。BCYRN1-siRNA组BCYRN1表达水平为0.43±0.07,低于Blank组和NC-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。转染6、12、24、48和72h后,BCYRN1-siRNA组吸光值(A)分别为0.140±0.027、0.351±0.038、0.548±0.072、0.795±0.103和0.927±0.154,低于Blank组和NC-siRNA组。BCYRN1-siRNA组侵袭细胞数为132±28,迁移细胞数为238±61,48h划痕愈合率为(45.63±7.12)%,均低于Blank组和NC-siRNA组(P<0.05)。BCYRN1-siRNA组β-catenin、Wnt1、c-Myc、CyclinD1和APC蛋白表达水平分别为0.85±0.17、0.92±0.25、1.10±0.21、0.95±0.20和1.04±0.13,低于Blank组和NC-siRNA组(P<0.05)。BCYRN1-siRNA组裸鼠平均瘤体质量为(0.71±0.25)g,低于Blank组(P<0.05),且未见肝转移。结论 BCYRN1在具有高侵袭活性的***1细胞中表达上调,可通过异常激活Wnt/β-catenin信号,增加卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移的活性。

关键词：卵巢癌 lncRNABCYRN1 SKOV3.ip1细胞 Wnt信号通路异种移植瘤裸鼠模型

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米氏海参皂苷和碱菀酯A的抗胶质瘤作用及初步作用机制的研究

米氏海参皂苷和碱菀酯A的抗胶质瘤作用及初步作用机制的研究

引用

作者：柴卫云浙江大学

学位级别：硕士

胶质瘤是最常见和死亡率极高的脑肿瘤。由于胶质瘤呈浸润性生长并多位于重要的脑功能区使得手术切除极为困难,所以药物对胶质瘤的预防和治疗显得尤其重要。然而,替莫唑胺是目前唯一一个被推荐用于胶质瘤治疗的一线药物,因此迫切需要研... 详细信息

胶质瘤是最常见和死亡率极高的脑肿瘤。由于胶质瘤呈浸润性生长并多位于重要的脑功能区使得手术切除极为困难,所以药物对胶质瘤的预防和治疗显得尤其重要。然而,替莫唑胺是目前唯一一个被推荐用于胶质瘤治疗的一线药物,因此迫切需要研发治疗胶质瘤的新药物。天然产物特别是海洋天然产物是新型抗肿瘤先导化合物的重要来源。来源于米氏海参(Holothuria moebii)的米氏海参皂苷和来源于海滩的高盐植物碱菀(Tripolium vulgaare)的碱菀酯A是新近发现的两类不同结构类型的抗胶质瘤活性物质。本论文研究米氏海参皂苷和碱菀酯A的抗胶质瘤作用和初步作用机制,主要的研究内容包括:(1)用磺酰罗丹明B(SRB)方法测定米氏海参总皂苷SPT和其中的四个单体皂苷SP1-SP4以及碱菀酯A对不同胶质瘤细胞增殖的抑制活性;(2)分别通过AnnexinV-FITC/PI双染和PI染色实验,用流式细胞仪分析米氏海参总皂苷SPT和它的主要成分SP3以及碱菀酯A诱导胶质瘤细胞凋亡和对胶质瘤细胞周期的影响;(3)用蛋白质印迹法(Western blot)检测米氏海参皂苷SPT、SP3和碱菀酯A对胶质瘤细胞的凋亡蛋白、周期蛋白、不同代谢途径的关键酶以及与肿瘤代谢密切相关的转录因子的表达水平的影响;(4)使用人胶质瘤U87MG细胞异种移植瘤的裸鼠模型来评估米氏海参总皂苷SPT和碱菀酯A在动物体内的抗胶质瘤作用。实验结果表明:(1)米氏海参皂苷和碱菀酯A对不同胶质瘤细胞的增殖均有显著的抑制作用;(2)米氏海参皂苷和碱菀酯A均可诱导胶质瘤细胞凋亡,其作用可能主要与下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1和survivin的表达有关;(3)米氏海参皂苷和碱菀酯A均可明显降低胶质瘤细胞周期蛋白cyclin A、cyclin D1、CDK4、CDK6和p-Rb的表达水平,分别使胶质瘤的细胞周期阻滞在S期和G2/M期;(4)米氏海参皂苷和碱菀酯A明显下调胶质瘤细胞不同代谢途径关键酶和多个转录因子的蛋白表达水平,具有独特的抗肿瘤作用机制;(5)米氏海参总皂苷和碱菀酯A显著抑制胶质瘤U87MG细胞荷瘤裸鼠的胶质瘤生长。本论文的研究结果为米氏海参皂苷和碱菀酯A抗胶质瘤作用和作用机制的更深入研究以及它们的潜在应用提供了科学依据。

关键词：米氏海参皂苷碱菀酯A 胶质瘤细胞凋亡细胞周期细胞能量代谢转录因子异种移植瘤裸鼠模型

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