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文献类型

1 篇 学位论文

馆藏范围

1 篇 电子文献
0 种 纸本馆藏

日期分布

学科分类号

1 篇 农学
- 1 篇 畜牧学

主题

1 篇 微血管再生
1 篇 卵泡颗粒细胞
1 篇 当归提取物
1 篇 微血管内皮样细胞
1 篇 蛋鸡卵泡

机构

1 篇 东北农业大学

作者

1 篇 陈鑫

语言

1 篇 中文

检索条件"主题词=微血管内皮样细胞"

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详细简洁

排序：

基于原代培养FMECs与GCs探究当归提取物促进蛋鸡卵泡微血管再生机制

基于原代培养FMECs与GCs探究当归提取物促进蛋鸡卵泡微血管再生机...

引用

作者：陈鑫东北农业大学

学位级别：硕士

当归(Angelica sinensis,AS)是一种传统的药物,具有活血补血的功效。蛋鸡等级卵泡需要丰富的血管网络供应营养才能快速地生长和发育,而蛋鸡产蛋率与等级卵泡发育的快慢密切相关。目前对AS促进蛋鸡等级卵泡血管生成的分子机制知之甚少。... 详细信息

当归(Angelica sinensis,AS)是一种传统的药物,具有活血补血的功效。蛋鸡等级卵泡需要丰富的血管网络供应营养才能快速地生长和发育,而蛋鸡产蛋率与等级卵泡发育的快慢密切相关。目前对AS促进蛋鸡等级卵泡血管生成的分子机制知之甚少。因此,本实验探究了在AS促进等级卵泡微血管再生中的作用机制,为AS作为提高蛋鸡产蛋率饲料补充剂提供依据。方法:采用水提醇沉法制备AS水提取物,利用LC-MS分析测定AS提取物的有效成分。通过细胞形态学分析、血管形成试验、Western-blot和免疫荧光检测相关因子表达,鉴定本研究所提取的细胞是否为原代鸡等级卵泡微血管内皮细胞(FMECs)和原代鸡等级卵泡颗粒细胞(GCs)。并使用CCK-8法检测AS提取物对分离的FMECs与GCs的细胞活力影响,并通过Western-blot检测LY294002处理后的FMECs与GCs中p-PI3K和PI3K的蛋白表达。随后通过Western-blot和q RT-PCR等方法检测FMECs与GCs中血管生成的相关调控因子,PI3K/AKT信号通路中相关调控因子的表达水平。同时使用分子对接对有效成分和中枢靶点进行验证。最终通过划痕试验、细胞侵袭试验和血管形成试验进一步验证AS提取物对FMECs血管形成的影响。试验结果表明:(1)LC-MS分析本研究中AS提取物,测得成分包含阿魏酸以及咖啡酸。(2)提取分离的原代FMECs为单层贴壁细胞,形态呈梭形和多边形;提取分离的原代GCs形态呈不规则的梭形或者多角形,平铺板底,部分细胞间有丝状伪足相互连接,两种细胞形态符合其相关特征。免疫荧光检测结果表明,FMECs中CD31和v WF的表达均呈现阳性;GCs中FSHR表达呈现阳性。CCK-8结果表明,AS提取物最佳作用时间为48 h,并确定100μg/m L和200μg/m L为AS提取物的低高剂量。同时确定LY294002的使用剂量为15μM。本研究所提取的FMECs在Matrigel基质培养后可以连接形成血管。表明所提取的原代鸡FMECs与GCs可以用于后续试验。(3)不同浓度的AS提取物处理GCs后,显著上调了HIF1-α和VEGF-A的m RNA水平与蛋白表达。并显著增强了磷酸化PI3K和磷酸化AKT的蛋白表达。酶联免疫吸附试验结果表明,AS提取物能显著促进VEGF-A的表达。单独使用LY294002处理GCs后,显著下调了HIF1-α和VEGF-A的m RNA水平和蛋白表达。同时显著降低了磷酸化PI3K和AKT的蛋白表达,并抑制了VEGF-A的表达。进而使用不同浓度AS提取物与LY294002共同处理GCs,HIF1-α、VEGF-A的m RNA水平和蛋白表达与单独使用LY294002相比无显著差异。结果表明,AS提取物通过PI3K/AKT信号通路促进GCs中VEGF-A的表达。(4)不同浓度的AS提取物处理FMECs后,发现VEGFR2、MMP2和MMP9的m RNA表达显著升高,而磷酸化VEGFR2、磷酸化PI3K、磷酸化AKT、MMP2和MMP9的蛋白表达也显著增强。单独使用LY294002处理FMECs,使VEGFR2的m RNA的表达显著下降,同时VEGFR2、PI3K和AKT的磷酸化蛋白表达也显著降低。与单独使用LY294002相比,使用不同浓度AS提取物与LY294002共同处理FMECs后,VEGFR2 m RNA水平无显著差异,VEGFR2、PI3K和AKT的磷酸化蛋白表达也无显著差异。表明AS提取物可以促进FMECs中血管生成相关因子的表达。(5)不同浓度AS提取物处理后对于FMECs的细胞迁移的百分比,细胞侵袭数量,细胞中形成的主连接、小管、分支、总长度和总小管长度都显著提升。而单独使用LY294002作用于FMECs,其细胞迁移的百分比,细胞侵袭数量,细胞中形成的主连接、小管、分支、总长度和总小管长度被显著抑制。AS提取物与LY294002联合处理FMECs后,与单独使用LY294002相比,其上述指标并无显著变化。表明AS提取物通过PI3K/AKT信号通路促进FMECs血管形成。综上所述,AS提取物可以上调FMECs中血管生成MMP2与MMP9的表达,通过激活PI3K/AKT信号通路促进VEGFR2的磷酸化,增强体外FMECs的侵袭、迁移与血管形成能力。AS提取物可激活PI3K/AKT信号通路,上调GCs中HIF1-α和VEGF-A的表达。AS提取物能促进FMECs生成血管和GCs分泌VEGF-A。表明AS提取物通过调控FMECs与GCs中的相关因子促进等级卵泡的血管再生。

关键词：当归提取物蛋鸡卵泡微血管再生微血管内皮样细胞卵泡颗粒细胞

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