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脂肪干细胞与外源性VEGF载体复合物体内构建血管化组织工程脂肪的实验研究

第二十次中日整形外科学术交流会暨中国康复医学会修复重建外科第十七次学术交流会暨第四届全国颅颌面整形美容外科专业组学术会议暨第一次修复重建外科学会皮瓣学组学术会议

作者：黎洪棉高建华余元龙姜平赵培冉梁双武中山大学附属中山医院博士后科研工作站整形美容外科南方医科大学博士后科研流动站南方医科大学南方医院整形外科中山大学附属中山医院器官移植中心南方医科大学组织工程研究中心

目的:观察外源性VEGF与脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)载体复合物在体内构建血管化组织工程脂肪的可生性。方法取健康成年人吸脂术后的脂肪组织分离ADSCs并行原代及传代培养,待第3代细胞生长至瓶底70%～80%面积时,以BrdU... 详细信息

目的:观察外源性VEGF与脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)载体复合物在体内构建血管化组织工程脂肪的可生性。方法取健康成年人吸脂术后的脂肪组织分离ADSCs并行原代及传代培养,待第3代细胞生长至瓶底70%～80%面积时,以BrdU(10μg/mL)标记细胞48 h,行免疫荧光染色观察;向脂肪细胞诱导2周后行油红O染色观察;向成骨细胞诱导3周后行茜素红染色观察;向软骨细胞诱导2周后行阿利辛蓝染色观察。取第3代经BrdU标记的ADSCs向脂肪细胞定向诱导2周后,制成5×107个细胞/mL细胞悬液,同时将VEGF配成10μg/ml工作液,将0.5mL细胞悬液、100uL的VEGF工作液或DMEM培养基与0.5mL纤维蛋白胶制备成细胞载体复合物。实验分为两组,A组(实验组)移植物由0.5 mL细胞悬液、100uL的VEGF工作液与0.5mL纤维蛋白胶组成,B组(对照组)由0.5 mL细胞悬液、100uL的DMEM培养基与0.5mL纤维蛋白胶组成,分别植入裸鼠背部皮下(n=20),每只动物均采用自体ADSCs移植及自身对照。术后8周取出移植物,经HE染色鉴定新生组织性质,测定两组新生组织的湿重和微血管数,并采用免疫荧光染色鉴定新生组织及微血管内皮的来源。结果 ADSCs经BrdU标记后荧光显微镜下观察示BrdU标记为阳性的ADSCs胞核呈绿色荧光,ADSCs的阳性标记率>90%。第3代ADSCs经成脂诱导2周,可见细胞内有透亮的油红O染色为红色的脂滴形成;成骨诱导3周,可见茜素红染色为红色的钙化结节样改变;成软骨诱导2周后,可见高度聚集生长的细胞团,阿利辛蓝染色呈蓝色。术后8周取材时,A组可见血管增生并长入材料,可见轻度纤维包裹现象;B组有少量血管长入材料中,也有轻度纤维包裹现象。A、B两组新生组织湿重分别为(0.1275±0.0162)g和(0.0873±0.0124)g,两组织比较P<0.01;HE染色均可见移植物中有新生脂肪组织形成和不同程度的微血管长入;A、B两组微血管数分别为(38.5±4.2)和(17.9±2.8),两组织比较P<0.01。新生组织免疫荧光染色示,A、B组新生脂肪细胞的胞核及部分微血管内皮细胞的胞核呈现绿色荧光。结论外源性VEGF与脂肪干细胞载体复合物在体内可构建血管化组织工程脂肪,ADSCs与外源性VEGF共同参与新生脂肪组织的血管化过程。

关键词：组织工程脂肪 ADSCs 细胞诱导纤维蛋白胶微血管数复合物外源性

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外用粒细胞集落刺激因子凝胶对大鼠自体全厚皮片移植存活影响的实验研究

外用粒细胞集落刺激因子凝胶对大鼠自体全厚皮片移植存活影响的实...

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第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会

作者：陈志兴岑瑛四川大学华西医院烧伤整形科

目的探讨外用粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor,,G-CSF）凝胶对大鼠自体全厚皮片移植存活的影响。方法选取健康SD大鼠48只。随机分为实验组24只、对照组24只。大鼠背部取3X3 cm全厚皮片,中央处制作直径1cm的... 详细信息

目的探讨外用粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor,,G-CSF）凝胶对大鼠自体全厚皮片移植存活的影响。方法选取健康SD大鼠48只。随机分为实验组24只、对照组24只。大鼠背部取3X3 cm全厚皮片,中央处制作直径1cm的圆孔。实验组创面及皮片真皮面分别均匀涂抹G-CSF凝胶0.5ml（厚约0.05cm）,对照组则同样方法涂抹凝胶空白基质0.5ml,皮片离体30分钟后旋转90°后回植、反包扎固定。分别于术后第4、7天各处死一半大鼠,拆包观察皮片存活情况,计算缺损面积的缩小情况,并行组织病理切片镜下观察,免疫组化染色以计数微血管数（MVD）,以及统计各组VEGF的阳性表达率。结果术后4天,实验组皮片存活情况、病理切片情况较对照组好;实验组缺损面积修复率（18.75±3.57）%高于对照组（14.42±1.78）%（P=0.001）;实验组VEGF染色示微血管数MVD（9.72±1.69）明显高于对照组（7.22±1.65）,（P=0.001）;实验组VEGF表达阳性率60.41%明显高于对照组37.50%,P=0.025。术后7天,实验组皮片存活情况、病理切片情况较对照组好较对照组好;实验组缺损面积修复率（25.83±4.65）%高于对照组（22.1 7±2.48）%（P=0.025）;实验组VEGF染色示微血管数（1 6.94±2.24）明显高于对照组（13.33±1.82）,（P=0.001）;实验组VEGF表达阳性率91.3%明显高于对照组62.50%,P=0.005。结论外用粒细胞集落刺激因子凝胶在植皮中应用能提高皮片缺损面积修复率,提高皮片上的微血管数,提高VEGF的阳性表达率。说明局部应用G-CSF凝胶制剂能增加移植皮片的血管生长,从而促进皮片存活、缩短皮片存活所需时间,并使皮片存活后上皮向周边增殖、爬行以覆盖创面,显示存活后的皮片具有更好的生理功能。

关键词：全厚皮片移植阳性表达率微血管数实验组修复率粒细胞集落刺激因子

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鼻咽癌的新预后因素

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国际医学放射学杂志 1997年第3期 191-191页

作者：罗汉钰

作者报道旧金山加州大学放射肿瘤科1956～1990年收治的鼻咽癌(NPC)252例。选择一组经免疫组化检查、资料完整的30例,男21例,女9例,中位年龄50岁(10～74岁)。症状和随访中位时间分别为7个月(1～37个月)和44个月(3～288个月),局部区域复... 详细信息

作者报道旧金山加州大学放射肿瘤科1956～1990年收治的鼻咽癌(NPC)252例。选择一组经免疫组化检查、资料完整的30例,男21例,女9例,中位年龄50岁(10～74岁)。症状和随访中位时间分别为7个月(1～37个月)和44个月(3～288个月),局部区域复发和远处转移中位时间分别为11.5个月(0～85个月)和3个月(1～148个月)。根据WHO分类:NPC分为鳞状细胞癌(WHO Ⅰ型)、非角化细胞癌(WHO Ⅱ型)和未分化癌(WHO Ⅲ型)。肿瘤组织切片用苏木精和曙红染色,对第Ⅷ因子相关抗原用标准的免疫过氧化物酶染色技术使血管内皮细胞染色,清楚地显示肿瘤微血管。28例微血管染色满意,2例因微血管染色少不能评价。光镜下以40×和100×测定每个区域最丰富的毛细血管和小静脉密度。这些新生毛细血管“热点”可出现在癌灶的任一区域,常见于癌细胞群周围。一些内皮细胞或其细胞群对第Ⅷ因子相关抗原染色阳性,与邻近细胞群有显著区别呈单一可数的微血管。据研究确定微血管<60/200

关键词：鼻咽癌病人微血管数远处转移总生存期 NPC

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