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饮食保健 2017年第17期4卷 11-11页

作者：宋世辉张汝仙邢台医学高等专科学校第二附属医院急诊科河北邢台054000 邢台市妇幼保健院妇科河北邢台054000

背景红花注射液临床疗效确切,但机制不清.故本课题从红花注射液促进血管新生方面,探讨作用机理.目的建立急性心肌梗死大鼠模型,通过动物实验方式探讨红花注射液对梗死心肌边缘微血管面密度的影响.方法用结扎左冠状动脉前降支的方法制... 详细信息

背景红花注射液临床疗效确切,但机制不清.故本课题从红花注射液促进血管新生方面,探讨作用机理.目的建立急性心肌梗死大鼠模型,通过动物实验方式探讨红花注射液对梗死心肌边缘微血管面密度的影响.方法用结扎左冠状动脉前降支的方法制作急性心肌梗死大鼠模型,给予红花注射液干预,14天后处死大鼠,计算微血管面密度,比较差异.结果红花注射液可增加急性心肌梗死大鼠左心室微血管面密度,有统计学意义(P<0.05).结论红花注射液可以保护急性心肌梗死大鼠的心肌组织,增加新生血管,改善微循环.

关键词：急性心肌梗死微血管面密度红花注射液

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人脐带沃顿胶间充质干细胞移植治疗对大鼠脑损伤区微循环的影响

人脐带沃顿胶间充质干细胞移植治疗对大鼠脑损伤区微循环的影响

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作者：张文进郑州大学

学位级别：硕士

背景创伤性颅脑损伤（traumatic brain injury, TBI）是神经外科最常见的疾病之一，随着社会经济的飞快发展，跌落伤、交通伤、以及暴力伤等引起的TBI患者也同比增加。TBI的幸存者大部分都留下了不同程度的神经心理疾病及肢体运动感觉... 详细信息

背景创伤性颅脑损伤（traumatic brain injury, TBI）是神经外科最常见的疾病之一，随着社会经济的飞快发展，跌落伤、交通伤、以及暴力伤等引起的TBI患者也同比增加。TBI的幸存者大部分都留下了不同程度的神经心理疾病及肢体运动感觉障碍等，影响了他们的工作、生活以及社会活动，他们一般都要进行长时间的康复治疗，并且需要陪护，这就浪费了大量的社会资源。微循环的主要功能是进行物质交换，以及通过微动脉阻力的变化控制组织器官血流量的大小，可是微循环的血管的舒缩活动的控制主要与局部的代谢活动有关，因此局部代谢的变化会造成微循环的障碍，进一步导致器官的生理功能受到影响。创伤性颅脑损伤出现的脑微循环的障碍是该病极为重要的病理生理学变化，是继发性损害的关键环节，也是疾病转归和影响神经功能恢复的关键因素。防治创伤性颅脑外伤后的脑微循环障碍是神经外科重点关注的领域之一。有研究证实骨髓间充质干细胞移植治疗骨缺损时分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)可以促进新生血管生成，但是对于创伤性颅脑损伤损伤区微循环的影响尚未可知，并且骨髓间充质干细胞由于取材不便、细胞数量受年龄限制等原因限制了应用前景。人脐带沃顿胶间充质干细胞（mesenchymal stromal cells derived from Wharton’s jelly cells, WJCs）具有来源广泛，且较其它间充质干细胞易于分离培养、能够大量获取、且增殖分化能力较强等优点。人脐带沃顿胶间充质干细胞可以通过促进各种营养因子的分泌对受损的神经系统起到保护及治疗作用。目前尚没有关于人脐带沃顿胶间充质干细胞移植后对脑损伤区域的脑微循环变化的研究，本研究将致力于人脐带沃顿胶间充质干细胞移植对脑损伤区微循环的影响。近年来，功能磁共振成像技术取得了飞速的发展，除了能显示的形态结构学信息，还可以反映脑损伤后代谢、生理等方面的功能改变的信息。磁共振灌注成像（perfusion-weighted imaging, PWI)，常采用单次激发的平面回波自由感应衰减(echo planar imaging of free induction decay, EPI-FID)序列，注入的造影剂到达脑组织感兴趣区，使局部磁场改变而获得信号。PWI能够检出局部组织的血流灌注情况，并且可以分析血流动力学的改变以及功能的变化，并能根据需要重点反映组织的微血管分布以及血流灌注的情况。目的观察人脐带沃顿胶间充质干细胞移植对SD大鼠脑损伤区域的微循环变化的影响，探讨微循环变化对损伤区脑组织的保护及修复作用。材料与方法 1.实验动物：SPF级雄性SD大鼠72只(8周龄，体重250～300g)由河南省实验动物中心提供。跟据国家发布的《关于善待实验动物的指导性意见》，对实验动物进行适宜的安置。让大鼠自由的摄食与饮水,室温始终控制在(23±2)℃，相对湿度控制在40%-60%。 2.细胞的分离与培养：离体的脐带由健康足月剖宫产产妇志愿捐献，由郑州大学第一附属医院妇产科提供，无菌环境下取脐带一段，剥离脐带外膜，将沃顿胶组织剪碎后放置于含有bFGF（20μg/L）和FBS（10%）的DMEM/F12培养基中，在含有CO2（5%）的37摄氏度的培养箱中进行培养及传代。取传代至P3代的人脐带沃顿胶间充质干细胞进行镜下观察及流式细胞仪检测。 ***模型的制作及分组:模型的建立采用Feeney的自由落体撞击法，根据相关文献建立大鼠中度创伤性颅脑损伤模型。72只SD大鼠被随机分为4组：依次为假手术组（A组），切开头部皮肤，颅骨钻孔后不损伤脑组织不移植细胞；移植对照组（B组），制作中度创伤性颅脑损伤模型成功后经股静脉静脉注射0.3ml生理盐水；WJCs移植组（C组），制作中度创伤性颅脑损伤模型成功后经股静脉静脉注射WJCs混悬液0.3ml；正常组（D组），无任何损伤及干预措施。 4. PWI序列扫描：采用美国GE公司Discovery MR7503.0T高场强磁共振仪和大鼠专用线圈，各组大鼠均进行横轴位T1加权成像（T1-weighted imaging,T1WI）和T2加权成像（T2-weighted imaging, T2WI）、矢状位T2WI、冠状位T2WI及PWI的扫描。根据横轴位T2WI扫描图像为参考，观察大鼠脑外伤后损伤灶周围皮质、丘脑、海马及对侧相应部位在磁共振图像上随时间的变化情况，并记录相应时间点相应部位脑组织的参数包括CBF和CBV。计算上述指标的相对值(伤侧/健侧)，分别得到rCBF和rCBV，尽可能降低个体差异所引起的误差。比较实验组与对照组大鼠感兴趣区rCBF和rCBV值是否

关键词：创伤性颅脑损伤人脐带沃顿胶间充质干细胞细胞移植大鼠微血管面密度 PWI

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人脐带沃顿胶间充质干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠脑损伤区微循环的影响

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中华神经医学杂志 2013年第9期12卷 880-884页

作者：李静杨波刘献志翟广田毅张源渠瑞那 Eileen Shen 张文进郑州大学第一附属医院外科医学部郑州450052 郑州大学第一附属医院神经外科郑州450052 郑州大学生命科学学院郑州450001 美国卡莱尔北方大学迪金森学院生物化学与分子生物学系 17013

目的探讨人脐带沃顿胶间充质干细胞（WJCs）对脑创伤区周围微循环的影响。方法72只健康SD大鼠采用随机数字表法分为4组：（1）假手术组；（2）移植对照组；（3）WJCs移植组；（4）正常组。每组18只。移植对照组和WJCs移植组采用Feeney... 详细信息

目的探讨人脐带沃顿胶间充质干细胞（WJCs）对脑创伤区周围微循环的影响。方法72只健康SD大鼠采用随机数字表法分为4组：（1）假手术组；（2）移植对照组；（3）WJCs移植组；（4）正常组。每组18只。移植对照组和WJCs移植组采用Feeney自由落体硬脑膜外撞击法建立中度创伤性颅脑损伤模型，再分别注射0．3mL的生理盐水和WJCs混悬液；假手术组颅骨钻孔后不损伤脑组织不移植细胞；正常组不做任何处理。分别于移植后3d及7d进行大鼠行为学评分；取移植后1d、3d、7d和2周的脑组织切片行免疫组织化学检测，检测大鼠损伤灶周围血管内皮生长因子（VEGF）及CD34的表达；实时定量PCR（***）检测的VEGFmRNA表达；测定微血管面密度（MVD）；移植后2周和4周行免疫组化观察胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）蛋白表达水平。结果移植后7d，WJCs移植组大鼠mNSS评分明显高于移植对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。WJCs移植组移植后3d、7d和2周损伤灶周围皮层脑组织VEGF和CD34的表达均高于移植对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。移植后2周和4周WJCs移植组损伤区免疫组织化学染色均发现GFAP和NSE阳性细胞，其他3组均未发现．RT—PCR检测到WJCs组VEGFmRNA的表达量高于移植对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论WJCs移植后可增加损伤区脑组织VEGF及CD34阳性表达，参与调控损伤区微血管的变化，改善损伤区的微循环．促进大鼠神经功能的恢复。

关键词：人脐带沃顿胶间充质干细胞细胞移植创伤性脑损伤微血管面密度

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创伤性脑损伤后血管再生调节因子的表达与微血管动态变化的相关性研究

创伤性脑损伤后血管再生调节因子的表达与微血管动态变化的相关性...

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作者：商成明滨州医学院

学位级别：硕士

目的本研究采用改进Feeney's自由落体打击法制作创伤性脑损伤大鼠模型,检测外伤后大鼠脑组织中内皮抑素(ES)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体-2(FLK-1)的表达水平,探讨它们与微血管面密度(MVD)以及脑组织含水量动态改变之间的关系... 详细信息

目的本研究采用改进Feeney's自由落体打击法制作创伤性脑损伤大鼠模型,检测外伤后大鼠脑组织中内皮抑素(ES)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体-2(FLK-1)的表达水平,探讨它们与微血管面密度(MVD)以及脑组织含水量动态改变之间的关系,从而进一步阐明外伤后脑水肿的病理生理机制,并且为有效诱导缺血区血管再生,改善局部血液供应,促进神经血管结构重塑和功能修复提供新的思路和方法。方法 1.创伤性脑损伤动物模型的制备与脑组织含水量的测定将60只Wistar大鼠随机分组为外伤组和对照组,各组分别按照6h、12h、1d、3d、7d、14d不同处死时间点再分为个6亚组,每亚组5只。参照改进的Feeney's自由落体打击法制作创伤性脑损伤的动物模型,应用改良的mNSS神经功能损伤评分系统,依据伤后大鼠的平衡能力、翻身、支头、行走、逃避及四肢反应等方面,对其行为进行神经功能损伤评分,并通过与对照组比较,评价自由落体打击法制作的创伤性脑损伤模型的可靠性。采用干湿称重法检测受损脑组织的含水量变化,观察外伤后脑水肿的进展过程。 2.创伤性脑损伤后血管再生调节因子的表达与微血管动态变化的相关性研究在上述实验的基础上,采用免疫组织化学法检测大鼠损伤灶周围皮层及海马区脑组织中ES、VEGF及FLK-1的表达,用CD34标记损伤灶周围血管内皮细胞以计数MVD,并应用Media Cyberretics Image ProPlus6.0图像分析系统计算微血管面密度,并通过分析各项指标表达的时相规律,探讨它们在创伤性脑损伤过程中的相互关系。 3.统计学处理应用SPSS13.0软件,计量资料以均数士标准差(x±s)表示,组间比较采用独立样本t检验,组内比较采用单向方差分析,相关性分析采用双变量相关性分析,P<0.05为具有统计学意义,所有检验之前均行方差齐性检验。结果 1.成功制备创伤性脑损伤的动物模型脑外伤动物模型采用改进的Feeney's自由落体打击法制作的创伤性脑损伤动物模型,与对照组相比,其行为学发生的改变包括：大鼠呼吸较对照组深长,脑外伤对侧肢体运动障碍,本体感觉及反射能力降低,平衡能力明显下降。6h组各只动物均不能保持平衡,至少有一只爪从横梁上掉下,不能直线行走,逃避及四肢对疼痛反应明显迟钝。根据改良的mNSS神经功能损伤评分,动物的总体评分较对照组升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。12h组动物神经功能损伤继续加重,总体评分较6h组上升。1-3d组动物总体评分达峰,平衡木试验中动物试图平衡但于20-40s之间跌落。7d组动物对疼痛反应较前逐渐敏感,但是仍存在运动功能障碍。14d组动物各项指标基本恢复正常,神经功能损伤评分与对照组相比,差异仍具有统计学意义(P<0.01)。 2.大鼠神经功能损伤评分与脑组织含水量及微血管动态变化的相关性脑组织含水量外伤组动物受损脑组织的含水量在外伤后6h开始升高,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P0.05)。1d为水肿高峰期,持续至3d开始逐渐下降,14d恢复正常,与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。微血管面密度损伤灶周围皮层及海马区脑组织的MVD于伤后6h即刻下降,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。此后差异逐渐增大,3d组MVD开始增加,但仍低于对照组(P<0.01)。升至7d达峰,14d组MVD降至基本正常。统计分析显示,创伤性脑损伤后大鼠神经功能损伤评分与受损脑组织的含水量呈正相关(r=0.741,p<0.01),后者的动态变化与MVD及微血管的功能状态改变密切相关。 3.创伤性脑损伤后血管再生调节因子的表达规律血管再生由内源性血管再生调节因子——血管再生因子和血管再生抑制因子共同参与调控。大鼠损伤灶周围皮层及海马区脑组织中脑外伤后1d内未检测到ES明显的表达变化,伤后3-14d ES的表达水平持续升高(P<0.01)。伤后各时间点VEGF阳性细胞数与对照组相比均升高,1-3d阳性表达最强,7d开始降低(P<0.05)。创伤性脑损伤后1d内VEGF的受体FLK-1的含量无明显变化,伤后3d FLK-1表达明显升高,第7d达最高峰,14d FLK-1虽高于正常水平,但较正常组差异无显著性(P<0.05)。 ***、VEGF、FLK-1表达与微血管动态变化的相关性数据表明：创伤性脑损伤后损伤灶周围脑组织中MVD与ES、VEGF的表达无明显相关性(P>0.05),脑外伤1d后MVD与FLK-1的表达水平同步变化,且呈正相关(r=0.679,P<0.05)。结论 1.自由落体打击法制作的创伤性脑损伤动物模型,能够成功模拟临床上

关键词：创伤性脑损伤内皮抑素血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体-2 微血管面密度

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实验性脑损伤中血管内皮细胞活化状态与微血管动态变化以及脑水肿的相关性研究

实验性脑损伤中血管内皮细胞活化状态与微血管动态变化以及脑水肿...

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作者：李斌滨州医学院

学位级别：硕士

目的本研究采用改进的Feeney自由落体打击法制作大鼠重型颅脑外伤模型并应用丹参素干预,检测大鼠颅脑损伤后vWF、TM、ET-1的表达、微血管动态变化以及脑组织含水量,研究其相关性,旨在揭示脑损伤后血管内皮细胞活化状态对微循环改变及脑... 详细信息

目的本研究采用改进的Feeney自由落体打击法制作大鼠重型颅脑外伤模型并应用丹参素干预,检测大鼠颅脑损伤后vWF、TM、ET-1的表达、微血管动态变化以及脑组织含水量,研究其相关性,旨在揭示脑损伤后血管内皮细胞活化状态对微循环改变及脑水肿发生的影响机制以及丹参素的干预作用。方法 1.创伤性脑损伤动物模型的制备与脑组织含水量的测定 Wistar大鼠90只,随机分为对照组和外伤组,按伤后处理时间不同各组再分为个9亚组,每组5只,分别于30min、1h、3h、6h、12h、1d、3d、7d、14d等不同时间点处死大鼠。参照Feeney自由落体打击法制作创伤性脑损伤的动物模型,并从大鼠的平衡能力、翻身、支头、行走、逃避及四肢反应等方面对其伤后行为进行评价,并通过与对照组比较,来评价自由落体打击法制作的脑外伤模型的可靠性。采用于湿称重法,定时检测脑组织含水量的变化,监测脑水肿的发展过程。 2.创伤性脑水肿中内皮细胞活化状态与微血管动态变化的相关性研究在实验一的基础上,利用免疫组化法检测大鼠损伤灶周围皮层、海马区脑组织中vWF、TM、ET-1的表达,并采用ESLA法检测外周血中vWF、TM、ET-1的水平变化；CD34标记损伤灶周围脑皮层区血管,并进行图像分析计算微血管面密度,所得结果进行统计学处理,通过其表达的时相规律来探讨它们在创伤性脑损伤中的相互关系。 3.丹参素对内皮细胞活化状态、微血管动态变化及脑水肿发生的影响研究在前期实验的基础上,脑外伤大鼠追加治疗,应用丹参素作为干预剂,观察干预后脑含水量、微血管面密度以及vWF、TM、ET-1蛋白表达的差异,探讨丹参素对脑水肿的影响作用及其干预机制。结里 1.成功制备创伤性脑水肿的动物模型脑外伤动物模型自由落体打击法制作脑损伤动物模型的行为学改变：动物呼吸深长,对侧肢体有运动障碍,平衡能力明显下降。6h组各只动物均不能稳定地呆在横梁上,至少有一只爪从横梁上掉下,行走不稳但能走直线,逃避及四肢对疼痛反应明显迟钝,与对照组相应亚组比较,总体评分明显下降(p<0.05)12h到1d组动物总体评分无明显改善,甚至略有下降,但无明显统计学意义。3d组评分明显升高,动物可以抓住横梁边缘,或有抖动,对疼痛反应较前敏捷,7d组对疼痛反应基本正常,但还存在运动功能障碍,总体评分与对照组相比其差异具有统计学意义(p<0.05)。直到14d组,各项指标均恢复正常,较对照组总体评分略有下降,但其差异无明显统计学意义(p>0.05)。脑组织含水量与对照组相比较,外伤组脑组织含水量在伤后3h即开始升高,其差异具有显著性(p<0.05)。1-3d为水肿高峰期,持续至3d开始下降,7d降低明显,14d恢复正常,与对照组比较差异无统计学意义p>0.05)。 2.创伤性脑水肿后vWF、TM、ET-1的表达。伤后各项标志内皮细胞活化状态的相关因子均出现不同程度的升高。血液中vWF的表达于外伤后30mmin检测即刻有升高,脑组织表达vWF时间较血液中相对滞后,此后血液及脑组织vWF表达均于24h达到高峰,7d后逐渐恢复正常水平脑组织中TM表达1h升高,血液中TM浓度升高相对滞后,此后血液及脑组织TM表达均于24h达到高峰,7d恢复正常水平；外周血中ET-1含量伤后30min检测即有升高,组织内表达3h升高,3d组织及血液中ET-1达到高峰,14d恢复正常。 ***、TM、ET-1表达与微血管动态变化及脑水肿发生发展有相关性微血管面密度(MVD)的动态变化：外伤组伤后微血管面密度即刻下降,与对照组相比较差异有统计学意义(p<0.05),此后差异逐渐减少,3d后外伤组MVD增长迅速,至7d与对照组相比无显著性差异。在脑外伤早期,伴随vWF、TM、ET-1的表达升高MVD急剧降低,而脑组织含水量明显增加；1d后随着vWF、TM、ET-1的降低,MVD逐渐升高,脑含水量在1至3d水肿高峰期后也随之下降,14d各项指标均恢复正常。 4.丹参素干预后vWF、TM、ET-1、MVD及脑含水量的变化。治疗组与外伤组相比较,脑组织及血液中vWF含量6h至3d其差异具有统计学意义(p<0.05)；TM免疫组化光密度与外伤组相比12h至1d差异具有统计学意义(p<0.05),血液TM表达12h至3d与外伤组相比,差异具有统计学意义(p<0.05)；治疗组脑组织内ET-1表达与外伤组相比较12h至3d差异具有统计学意义(p<0.05)；外周血中ET-1含量在1h至7d治疗组较外伤组相比两者差异有统计学意义(p<0.05)。外伤后治疗组MVD与外伤组比较12小时无明显差异,1到3天有显著性差异,7天后虽高于外

关键词：脑水肿 TM vWF ET-1 微血管面密度

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大鼠脑外伤后TM、vWF的表达与脑水肿及MVD变化的相关性研究

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滨州医学院学报 2012年第2期35卷 126-130,133页

作者：李斌李建民吴淑华朱玉红商成明李建华滨州医学院附属医院神经外科滨州256603 滨州医学院附属医院病理科滨州市人民医院神经外科

目的观察大鼠脑外伤后脑组织与外周血中血栓调节蛋白(TM)、血管假性血友病因子(vWF)的表达、脑含水量以及微血管面密度(MVD)的动态变化,探讨TM、vWF与MVD及脑含水量的相关性。方法 90只Wistar大鼠随机分为对照组和外伤组,采用自由落体... 详细信息

目的观察大鼠脑外伤后脑组织与外周血中血栓调节蛋白(TM)、血管假性血友病因子(vWF)的表达、脑含水量以及微血管面密度(MVD)的动态变化,探讨TM、vWF与MVD及脑含水量的相关性。方法 90只Wistar大鼠随机分为对照组和外伤组,采用自由落体打击法制做大鼠脑外伤模型。按伤后处理时间各组再分为9个亚组,每组5只,分别于30 min、1 h、3h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d、14 d不同时间点处死大鼠。采用干湿重法检测损伤侧脑组织含水量;免疫组化法测定脑组织中TM、vWF表达,CD34标记损伤灶周围脑皮层区微血管并计算MVD,酶联免疫吸附(ELISA)法检测外周血中TM、vWF的表达。结果大鼠颅脑创伤后外伤组脑组织及外周血中TM、vWF表达水平与对照组比较有明显升高(P<0.05),脑组织TM、vWF表达均与MVD呈负相关(r=-0.378,P<0.05、r=-0.426,P<0.05);血浆TM、vWF表达与MVD呈负相关(r=-0.663,P<0.05、r=-0.884,P<0.05)。结论 TM、vWF的表达水平变化可以反映脑外伤早期微血管内皮细胞活化状态,并且与脑水肿的发生发展密切相关。

关键词：脑水肿血管内皮细胞血栓调节蛋白血管假性性血友病因子微血管面密度

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