检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2020年第5期41卷 520-526页

作者：徐强涂丁元赵仙先海军军医大学(第二军医大学)长海医院心血管内科上海200433

目的建立荧光素酶-mirna海绵腺病毒的构建方法,并验证该腺病毒的表达产物与mirna的结合效率。方法化学合成能与mirna-126部分互补配对的DNA片段;PCR扩增mirna-126海绵片段,将其克隆至pMD-18T载体及psiCheck2质粒hRluc的3’端非编码区;将... 详细信息

目的建立荧光素酶-mirna海绵腺病毒的构建方法,并验证该腺病毒的表达产物与mirna的结合效率。方法化学合成能与mirna-126部分互补配对的DNA片段;PCR扩增mirna-126海绵片段,将其克隆至pMD-18T载体及psiCheck2质粒hRluc的3’端非编码区;将hRluc-mirna-126海绵克隆至Ad-Track质粒,PmeⅠ酶切使Ad-Track-hRluc-mirna-126 sponge质粒线性化,并转化BJ5183感受态细菌,与Ad-Easy质粒同源重组;重组质粒经PacⅠ酶切鉴定后,转染293细胞,7 d后收获腺病毒;用腺病毒感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),通过细胞划痕实验观察mirna-126对细胞迁移能力的影响。结果Mirna-126海绵与mirna-126形成碱基互补配对关系;双荧光素酶实验结果表明mirna-126能够直接作用于hRluc-mirna-126海绵。将hRluc-mirna-126海绵克隆至Ad-Track质粒使得同步检测细胞转染效率和mirna抑制效率成为可能。通过Ad-Track与Ad-Easy同源重组,成功构建Ad-Easy-hRluc-mirna-126 sponge质粒,酶切后可见4.5 kb片段。将其转染293细胞,7 d后获得荧光素酶-mirna海绵腺病毒;mirna-126过表达能够抑制腺病毒表达产物hRluc-mirna-126海绵(P<0.01),感染mirna-126海绵腺病毒可以抑制HUVEC的迁移能力(P<0.05)。结论成功建立了荧光素酶-mirna海绵腺病毒,mirna-126与该腺病毒的表达产物有较高的结合效率。

关键词：荧光素酶微rna海绵腺病毒微rna

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环状rna在皮肤肿瘤中的研究进展

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医学综述 2018年第9期24卷 1729-1733页

作者：司晨琛周炳荣骆丹南京医科大学第一附属医院皮肤科南京210029

环状rna(circrna)是mrna在剪接过程中5'端与3'端剪接到一起而形成的非编码rna。circrna的高度稳定性、高丰度和组织特异性赋予circrna的许多潜在功能,近年来研究发现circrna对基因转录及转录后水平有重要意义,此外已发现circRN... 详细信息

环状rna(circrna)是mrna在剪接过程中5'端与3'端剪接到一起而形成的非编码rna。circrna的高度稳定性、高丰度和组织特异性赋予circrna的许多潜在功能,近年来研究发现circrna对基因转录及转录后水平有重要意义,此外已发现circrna与多种癌症的发生有关。皮肤基底细胞癌中,显著异常表达的circrna潜在靶向与癌症相关的mirna,如hsa-miR-19b-1。皮肤鳞癌中circrna的mirna响应元件已有23个与之对应的且与皮肤鳞癌相关的mirnas。目前发现肿瘤中存在许多异常表达的circrna,对于circrna-mirna的研究,可以为癌症的基因靶向治疗提供新思路。

关键词：环状rna 微rna海绵皮肤肿瘤靶向治疗

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Hsa＿circ＿034367通过has-miR-17-3p/ICER1轴调节SHH型髓母细胞瘤的进展

Hsa＿circ＿034367通过has-miR-17-3p/ICER1轴调节SHH型髓母细胞...

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第十八届中国医师协会神经外科医师年会

作者：王雅菲张晨冉上海交通大学医学院附属新华医院(上海新华医院)

目的髓母细胞瘤是儿童最常见的恶性脑肿瘤,但其发病机制不明,缺乏早期诊断标志物或有效治疗靶点。circrna是一类调节真核生物基因表达的内源性非编码rna。Hsairc34367是新发现的在SHH型髓母细胞瘤中高表达的circrna。Circrna在SHH型髓... 详细信息

目的髓母细胞瘤是儿童最常见的恶性脑肿瘤,但其发病机制不明,缺乏早期诊断标志物或有效治疗靶点。circrna是一类调节真核生物基因表达的内源性非编码rna。Hsairc34367是新发现的在SHH型髓母细胞瘤中高表达的circrna。Circrna在SHH型髓母细胞瘤其中的作用和机制有待进一步阐明。方法经伦理审批后在本院获取髓母细胞瘤标本若干同时获取瘤旁组织,经全转录组测序与生信分析,筛选高表达circrna;采用桑格测序和Northern blots检测髓母细胞瘤中hsairc34367的表达模式;实时荧光定量PCR检测hsairc34367、has-miR-17-3p和DICER1的表达。构建慢病毒感染髓母细胞瘤细胞系daoy、uw228,采用MTT法、集落形成法、transwell法、CellTiter-Glo荧光细胞活力测定实验和流式细胞术检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。此外,采用双荧光素酶报告试验和rna下拉试验验hsairc34367、has-miR-17-3p和DICER1之间的相互作用。Western blot检测DICER1蛋白表达。通过人源肿瘤异种移植（Patient-derived tumor xenograft, PDX）模型探讨hsairc34367在髓母细胞瘤肿瘤体内生长中的作用。结果 Hsairc34367在髓母细胞瘤组织和细胞中过表达,其沉默可抑制髓母细胞瘤的增殖、迁移、侵袭,加速细胞凋亡。Has-miR-17-3p可被hsairc34367海绵擦拭,其过表达可阻碍髓母细胞瘤的进展。进一步的实验表明has-miR-17-3p抑制剂逆转了hsairc34367敲低对髓母细胞瘤细胞进展的负调控。此外,DICER1是has-miR-17-3p的靶点,其下调可抑制髓母细胞瘤细胞的进展。过表达的DICER1逆转了has-miR-17-3p对髓母细胞瘤细胞进展的抑制作用。动物实验表明,hsairc34367基因敲除能有效地抑制细胞凋亡。结论通过调节hsairc34367和DICER1抑制髓母细胞瘤肿瘤生长。这些数据表明,circrna是控制SHH型髓母细胞瘤增殖的潜在靶点。

关键词：表观基因组学微rna海绵环状rna

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