检索结果-内蒙古大学图书馆

四川大学学报（医学版） 2008年第4期39卷 544-546页

作者：汪川张朝武余倩刘衡川裴晓方四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室成都610041

目的在大肠杆菌中非融合表达德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶,为构建能高效表达β-半乳糖苷酶的食品级益生菌株奠定基础。方法选择德氏乳杆菌保加利亚亚种(1.1480和wch9901)β-半乳糖苷酶基因(lacZ)起始密码ATG上游-18bp到ATG下游... 详细信息

目的在大肠杆菌中非融合表达德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶,为构建能高效表达β-半乳糖苷酶的食品级益生菌株奠定基础。方法选择德氏乳杆菌保加利亚亚种(1.1480和wch9901)β-半乳糖苷酶基因(lacZ)起始密码ATG上游-18bp到ATG下游1bp的一段包含SD位点和ATGA位点的序列为上游引物,PCR扩增lacZ,插入表达质粒pMG36e构建重组表达质粒。转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,提取重组质粒进行酶切鉴定和测序,并测定转化菌β-半乳糖苷酶活性。结果重组质粒酶切鉴定合格;其中插入的外源片段序列与德氏乳杆菌保加利亚亚种lacZ标准序列符合率达99%以上;携带重组质粒pMG36e-lacZ1.1480的大肠杆菌DH5α酶活性为3.074U/mL,酶比活性为6.939U/mgpro;携带重组质粒pMG36e-lacZwch9901的大肠杆菌DH5α酶活性为4.755U/mL,酶比活性为8.537U/mgpro。结论成功在大肠杆菌中非融合表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶;本研究选择的SD位点和ATGA位点能在大肠杆菌中有效地引导蛋白的非融合表达。

关键词： β-半乳糖苷酶基因非融合表达重组德氏乳杆菌保加利亚亚种

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德氏乳杆菌保加利亚亚种CH3中HPK1/RR1耐酸调控蛋白鉴定

德氏乳杆菌保加利亚亚种CH3中HPK1/RR1耐酸调控蛋白鉴定

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作者：王超哈尔滨工业大学

学位级别：博士

德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii ***,***)广泛应用于世界食品发酵工业中,具有重要经济价值。菌株自身生长和应用过程中经常遇到酸性环境,低p H值对细胞生理产生不利影响,包括膜损伤、抑制酶表达和生存能力降低等。因... 详细信息

德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii ***,***)广泛应用于世界食品发酵工业中,具有重要经济价值。菌株自身生长和应用过程中经常遇到酸性环境,低p H值对细胞生理产生不利影响,包括膜损伤、抑制酶表达和生存能力降低等。因此,明晰菌株内的耐酸调控机制,建立菌株的耐酸调控网络对于细菌的生存和菌株在工业应用都至关重要。本研究以德氏乳杆菌保加利亚亚种野生型CH3菌株、组氨酸蛋白激酶HPK1突变体CH3-H、应答调节蛋白RR1突变体CH3-R为研究对象,采用双向电泳和实时定量PCR技术,研究了在自然发酵和酸诱导条件下,由双组分信号转导系统HPK1/RR1调控的与菌株耐酸能力相关的基因;以乳酸乳球菌NZ9000为宿主菌,对关键差异基因进行异源表达和功能鉴定;采用酵母双杂交技术初步研究了双组分信号转导系统TCS1中HPK1和RR1与关键差异蛋白之间的互作关系,并初步确定了蛋白间的互作部位。研究内容及结果如下:酸胁迫处理可以有效模拟菌株在生长过程中受到的酸刺激环境。本研究采用双向电泳方法和质谱技术,分离鉴定了正常发酵和酸胁迫条件下*** CH3中差异蛋白,并进行了转录水平分析。在自然发酵条件下,突变体CH3-H和CH3-R与野生型CH3相比,差异表达蛋白分别为22个和24个;在酸诱导条件下,突变体CH3-H和CH3-R相比于野生型CH3,差异表达的蛋白分别为6个和20个。进一步采用实时定量PCR技术研究了差异蛋白在转录水平的表达量变化。研究确定了由双组分信号转导系统中HPK1或RR1调控的4个关键差异蛋白,即Aprt、Ddl、Opp DII和Tsf。综合以上结果表明,双组分信号转导系统HPK1/RR1通过调节多个代谢途径来实现对菌株耐酸能力的调控。本研究以乳酸乳球菌NZ9000为宿主,异源表达关键差异蛋白Aprt、Ddl、Opp DII和Tsf,旨在阐明上述关键差异蛋白在耐酸调控中的功能。四个关键差异蛋白在乳酸乳球菌NZ9000中成功表达。同时评价了异源表达菌株在酸胁迫和其他环境胁迫条件下的耐受性。研究发现,表达蛋白Aprt和Ddl显著提高了菌株的耐酸能力。异源表达蛋白Aprt和Ddl的菌株的耐酸能力,与对照菌株NZCK相比,分别提高了75倍和114倍。Opp DII和Tsf的表达对重组菌株的耐酸能力没有明显影响。此外,携带Aprt的重组菌株的胆盐耐受力增强了5倍,携带Ddl的重组菌株胆盐耐受力和对冷胁迫的耐受力分别增强了12倍和了8倍。由此可见,Aprt和Ddl是提高菌株在酸性环境中耐受性的原因之一。同时,研究表明,菌株中的耐酸调控涉及到多种代谢途径的协同作用。本研究采用酵母双杂交系统,研究了双组分信号转导系统TCS1中HPK1和RR1与菌株耐酸能力调控的关键蛋白Aprt、Ddl之间的相互作用,并确定了互作蛋白之间的互作部位。本研究初步明晰了HPK1和Ddl之间的互作关系,并初步确定HPK1-C是与Ddl发生互作的关键部位,为深入解析*** CH3中双组分信号转导系统HPK1/RR1在菌株耐酸调控网络与调控机制中的作用奠定了理论基础,为进一步研究HPK1、Ddl蛋白的功能提供了一些新的思路和方向。

关键词：德氏乳杆菌保加利亚亚种酸耐受反应差异蛋白异源表达蛋白互作

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德氏乳杆菌保加利亚亚种耐酸机制

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中国乳品工业 2012年第6期40卷 50-52页

作者：曲晓军崔艳华黑龙江省科学院微生物研究所哈尔滨150010 哈尔滨工业大学食品科学与工程学院哈尔滨150090

德氏乳杆菌保加利亚亚种是最具经济价值的乳酸菌之一,其耐酸能力是影响其发酵性能和发挥益生功效的关键因素。本文就该菌的耐酸能力调节进行阐述。

关键词：德氏乳杆菌保加利亚亚种耐酸调节

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德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵对牛乳中β-酪蛋白抗原性的影响

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中国乳品工业 2012年第2期40卷 4-7页

作者：廖萍罗永康李铮刘晓宇中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083

复原脱脂牛乳经德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵至凝乳,然后在4℃下冷藏5d.用间接竞争ELISA法测定了其中β-酪蛋白(β-CN)的抗原残留量,并且对发酵样品的蛋白水解程度与滴定酸度进行了分析.结果表明,复原脱脂乳经90～95℃处理5min后,β-CN... 详细信息

复原脱脂牛乳经德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵至凝乳,然后在4℃下冷藏5d.用间接竞争ELISA法测定了其中β-酪蛋白(β-CN)的抗原残留量,并且对发酵样品的蛋白水解程度与滴定酸度进行了分析.结果表明,复原脱脂乳经90～95℃处理5min后,β-CN的抗原残留量为60.25％,发酵过程中其抗原残留量持续下降,凝乳时下降到55.46％,而冷藏1d后降到了最低值54.03％,随后又缓慢上升,冷藏3d后为55.87％,继续冷藏至5d,β-CN的抗原残留量基本没有变化,维持在55.5％与55.9％之间.因此采用德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵能够在一定程度上降低牛乳中β-CN的抗原性,但是在冷藏5d的过程中其抗原性又有一定程度的升高.

关键词： β-酪蛋白德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵冷藏抗原性

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德氏乳杆菌保加利亚亚种抗噬菌体菌株的选育

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中国乳品工业 2008年第7期36卷 29-31页

作者：朱萍粟桂娇广西大学生命科学与技术学院南宁530004

从酸奶异常发酵液中分离纯化保加利亚乳杆菌Lb2噬菌体LP5。以自然选育方法筛选出其抗噬突变株,再经紫外线诱变,获得3株产酸与出发菌株相当的抗噬株N491,N492,N761。对三抗株进行多次传代和酸奶发酵试验,结果表明,三抗株的抗噬性稳定,其... 详细信息

从酸奶异常发酵液中分离纯化保加利亚乳杆菌Lb2噬菌体LP5。以自然选育方法筛选出其抗噬突变株,再经紫外线诱变,获得3株产酸与出发菌株相当的抗噬株N491,N492,N761。对三抗株进行多次传代和酸奶发酵试验,结果表明,三抗株的抗噬性稳定,其中N761酸奶发酵产酸达94°T,酸奶的组织状态及风味优于Lb2,可应用于酸奶的发酵生产。

关键词：噬菌体抗噬菌体菌株德氏乳杆菌保加利亚亚种酸奶菌种选育

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德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵乳风味成分分析

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食品科学 2009年第4期30卷 257-259页

作者：李延华王伟军张兰威邹宇马微通化师范学院制药与食品科学系吉林通化134002 哈尔滨工业大学食品科学与工程学院黑龙江哈尔滨150090 东宁出入境检验检疫局黑龙江东宁157200

本实验采用同时蒸馏萃取-气谱-质谱(SDE-GC-MS)联用技术对5株德氏乳杆菌保加利亚亚种L.b-01、L.b-3、L.b-MYC、L.b-SP1.1和L.b-M01A发酵乳中风味物质进行了定性和定量测定,经分析分别有13、19、11、9、12种成分为发酵乳的风味物质,共涉... 详细信息

本实验采用同时蒸馏萃取-气谱-质谱(SDE-GC-MS)联用技术对5株德氏乳杆菌保加利亚亚种L.b-01、L.b-3、L.b-MYC、L.b-SP1.1和L.b-M01A发酵乳中风味物质进行了定性和定量测定,经分析分别有13、19、11、9、12种成分为发酵乳的风味物质,共涉及酸类化合物、酯类化合物、醇类化合物、羰基化合物、芳环和杂环化合物6大类、22种物质。除L.b-M01A菌产乙醇、乙酸含量较高外,其他各菌株间未发现存在明显的代谢差异。

关键词：发酵乳风味物质德氏乳杆菌保加利亚亚种 SDE-GC-MS

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德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵乳中挥发性风味物质指纹图谱的构建

德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵乳中挥发性风味物质指纹图谱的构建

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作者：任为一内蒙古农业大学

学位级别：硕士

德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobaciillus delbrtueckii ***)是酸奶发酵剂中的基础菌种之一,广泛的应用于各种乳制品的加工业生产中。本研究以从蒙古国和我国西藏、新疆等少数民族地区传统乳制品中筛选出的17株德氏乳杆菌保加利亚亚种作... 详细信息

德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobaciillus delbrtueckii ***)是酸奶发酵剂中的基础菌种之一,广泛的应用于各种乳制品的加工业生产中。本研究以从蒙古国和我国西藏、新疆等少数民族地区传统乳制品中筛选出的17株德氏乳杆菌保加利亚亚种作为实验菌株,利用SPME-GC-MS技术对发酵终点时发酵乳中的挥发性风味物质进行检测分析,并结合发酵特性筛选出具有优良风味的菌株,在此基础上,分析其挥发性风味物质之间的差异。具体结果如下:1.通过对17株德氏乳杆菌保加利亚亚种在牛乳中的发酵特性进行研究,发现和对照菌株相比,IMAU20402(B1)、IMAU20360(B3)、IMAU20220(B6)、IMAU20234(B9)、IMAU20769(B10)、IMAU20775(B11)、IMAU20421(B13)、IMAU20312(B14)和IMAU62081(B16)凝乳时间较短,特别是IMAU20220菌株,仅用了 8.2 h达到了发酵终点;在发酵和贮藏(12 h)期间,除个别菌株外,大部分菌株的滴定酸度始终小于110°T;在发酵过程中,IMAU20402(BI)、IMAU20403(B2)和 IMAU62081(B16)等发酵样品中活菌数显著增加,在发酵终点时均接近于对照组样品中的活菌数(7.15×108 CFU/mL)。在发酵和贮藏(12 h)期间,所有试验菌株发酵乳样品的粘度有显著差异,其中IMAU20228(B8)发酵乳样品的粘度最高,在发酵终点和贮藏(12 h)时样品的黏度分别达到1207和1805 mPa.s,优于对照菌株。2.在发酵终点时,对照菌株和17株德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵乳中共检测出92种挥发性风味物质,包括酸类(18种)、醛类(14种)、酮类(13种)、醇类(30种)酯类(8种)及烷烃类(10种)化合物等。其中,乙醛、3-甲基丁醛、(E)-2-戊烯醛、己醛、(E)-2-辛烯醛、壬醛、2,3-丁二酮、乙偶姻、2-庚酮、2-壬酮和甲酸乙烯酯等11种风味化合物的OAV值不小于1,对发酵乳总体风味贡献较大。3-甲基丁酸、1-庚醇和正已醇等3种风味化合物的OAV值不小于0.1,对发酵乳的整体风味有重要修饰作用。3.采用GC-MS技术对17株德氏乳杆菌保加利亚亚种和对照菌株发酵乳中风味物质进行分析,发现所有样品的指纹图谱重复性较好,样品平行样的相似度在0.92-0.97之间,说明所建立的指纹图谱准确可靠,可用于不同菌株发酵乳中风味物质指纹图谱的构建和质量评价。对照菌株、IMAU20364(B4)、IMAU20220(B6)、IMAU20227(B7)、IMAU20775(Bll)、IMAU20790(B12)、IMAU20312(B14)和 IMAU62081(B16)样品与参考指纹图谱之间的相似度大于0.8,说明所有样品具有较好的相似性。4.采用GC-MS技术对17株德氏乳杆菌保加利亚亚种和对照菌株发酵乳中风味物质进行检测,并用主成分分析法(PCA)对所有数据进行分析。发现醛类化合物与IMAU20234(B9)、IMAU20775(Bll)、IMAU20790(B12)、IMAU20421(B13)和 IMAU32104 B15)呈现较高的相关性,酮类化合物与对照菌株、IMAU20402(Bl)、IMAU203(B4)、IMAU20220(B6)、IMAU20228(B8)、IMAU20312(B14)、IMAU62081(B16)和IMMAU62115(B17)呈现较高的相关性,酸类化合物与IMAU20790(B12)呈现较高的相关性,醇类化合物与IMAU20396(B5)呈现较高的相关性,烷烃化合物与IMAU20403(B2)、IMAU20360(B3)和 IMAU20769(B10)呈现较高的相关性。5.通过对对照菌株和17株德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵乳的感官评价、发酵性能测定以及在发酵终点时发酵乳中挥发性风味物质的比较分析,发现IMAU20312(B14)和IMAU62081(B16)具有较好的发酵性能和良好的发酵风味,可作为酸奶发酵剂应用于乳制品加工中。

关键词：发酵乳德氏乳杆菌保加利亚亚种 SPME-GC-MS 挥发性风味物质指纹图谱

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德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶研究

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安徽农业科学 2010年第15期38卷 8193-8193,8271页

作者：游庆红尹秀莲淮阴工学院生命科学与化学工程学院江苏淮安223001 南京工业大学食品与轻工学院江苏南京210009

[目的]优化德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵产亚油酸异构酶工艺。[方法]以亚油酸为诱导物,考察不同因素对德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶的影响。[结果]德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶的最佳工艺为:在底物添加量1.5‰、发酵温... 详细信息

[目的]优化德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵产亚油酸异构酶工艺。[方法]以亚油酸为诱导物,考察不同因素对德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶的影响。[结果]德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶的最佳工艺为:在底物添加量1.5‰、发酵温度37℃、发酵时间35h时,亚油酸异构酶酶活可达21.67U/ml。[结论]以亚油酸为诱导物应用德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶,工艺切实可行。

关键词：德氏乳杆菌保加利亚亚种亚油酸异构酶酶活

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德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原的表达及抗体制备

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中国乳品工业 2013年第3期41卷 21-24页

作者：刘飞焦月华郭文奎于微谷春涛霍贵成东北农业大学乳品科学教育部重点实验室食品科学与工程博士后流动站哈尔滨150030 丹尼斯克(中国)有限公司博士后科研工作站江苏昆山215300 黑龙江省中医药大学药物安全性评价中心哈尔滨150040

利用原核表达德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原并进行抗体制备,以便用于Western blot分析。首先利用PCR的方法扩增出atpA蛋白的基因片段,利用大肠杆菌pQE 40原核表达系统表达重组atpA抗原,镍柱亲和层析纯化表达蛋白后,常规免疫两只新西... 详细信息

利用原核表达德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原并进行抗体制备,以便用于Western blot分析。首先利用PCR的方法扩增出atpA蛋白的基因片段,利用大肠杆菌pQE 40原核表达系统表达重组atpA抗原,镍柱亲和层析纯化表达蛋白后,常规免疫两只新西兰长耳白兔。利用ELISA检测兔血清的效价来制备多克隆抗体,然后用Protein A纯化抗体。最后得到的atpA抗体进行Western blot检测验证抗体的特异性。结果表明,两只新西兰长耳白兔的血清效价分别为1∶20 000和1∶80 000;Western blot检测表明,制备的抗体能够与H+-AT-Pase蛋白进行特异性的结合。本研究成功的在大肠杆菌中表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种的atpA蛋白,并利用其制备了效价较高的多克隆抗体,该抗体可作为一抗用于Western blot分析。

关键词：德氏乳杆菌保加利亚亚种 atpA抗原蛋白表达抗体制备

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德氏乳杆菌保加利亚亚种IMAU80319高密度发酵和真空冷冻干燥工艺的研究

德氏乳杆菌保加利亚亚种IMAU80319高密度发酵和真空冷冻干燥工艺...

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作者：高姝冉内蒙古农业大学

学位级别：硕士

德氏乳杆菌保加利亚亚种是酸奶发酵剂中的重要菌种,但国内直投式发酵剂的活菌数和活力均相对较低。筛选优良发酵特性的保加利亚乳杆菌,并研究其高密度发酵和真空冷冻干燥工艺对提高具有自主知识产权的高品质直投式发酵剂并降低乳品企业... 详细信息

德氏乳杆菌保加利亚亚种是酸奶发酵剂中的重要菌种,但国内直投式发酵剂的活菌数和活力均相对较低。筛选优良发酵特性的保加利亚乳杆菌,并研究其高密度发酵和真空冷冻干燥工艺对提高具有自主知识产权的高品质直投式发酵剂并降低乳品企业生产成本有重要意义。本研究以优良菌株ND02为对照,对171株德氏乳杆菌保加利亚亚种的发酵特性极其发酵乳的品质进行研究,筛选出8株具有优良发酵特性及发酵乳感官得分较高的菌株。以ATCC11842为对照菌株,进一步筛选得到对噬菌体phiLdb有抗性的菌株IMAU80319和MAU20422。以MRS为基础培养基,对筛选出的IMAU80319依次进行碳源、氮源、缓冲盐以及无机盐的筛选,通过Box-Behnken Design试验设计得到最优培养基方案为：葡萄糖：1.67%,碳源B：1.67%,乳糖：1.12%,氮源B：1.69%,氮源C：1.69%,牛肉膏：1.13%,KH2PO4:1.33%,NaOH溶液：0.23%,MnSO4:0.05%, CaCl2:0.31%。通过对其静态培养的研究确定其最优工艺为6%的接种量,发酵温度为41℃的,初始的pH值为6.6。以最优培养基与静态培养条件为基础,得到IMAU80319的最佳高密度发酵工艺为：发酵温度41℃,中和剂为25%的氨水,恒pH值为5.0。对IMAU80319的真空冷冻干燥工艺以及保护剂进行优化,得到最佳真空冷冻干燥工艺为-40℃下预冻8h,菌泥与保护剂的最佳比例为1：6。对IMAU80319真空冷冻干燥保护剂配方中添加的糖类、醇类以及盐类进行筛选,得到保护剂最优配方。经过优化后,德氏乳杆菌保加利亚亚种IMAU80319发酵液的活菌数可达到57×108CFU/mL,发酵时间为6-6.5h,与静态培养相比较,发酵时间缩短了3h左右；真空冷冻干燥菌粉中活菌数为11×1010CFU/g,存活率达到83.9%,比优化前提高约30%。

关键词：德氏乳杆菌保加利亚亚种培养基优化高密度发酵冷冻干燥保护剂

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