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1 篇 学位论文

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1 篇 电子文献
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学科分类号

1 篇 医学
- 1 篇 临床医学

主题

1 篇 mi r-709 mimic
1 篇 肾小管上皮细胞损...
1 篇 顺铂
1 篇 mir-709 inhibito...
1 篇 mir-709 mimic
1 篇 mi r-709
1 篇 mi r-709 inhibit...
1 篇 tfam
1 篇 线粒体功能障碍
1 篇 急性肾小管上皮细...

机构

1 篇 南京医科大学

作者

1 篇 倪佳佳

语言

1 篇 中文

检索条件"主题词=急性肾小管上皮细胞损伤"

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排序：

microRNA-709负性调控线粒体功能参与肾小管上皮细胞损伤及其机制研究

microRNA-709负性调控线粒体功能参与肾小管上皮细胞损伤及其机制...

引用

作者：倪佳佳南京医科大学

学位级别：硕士

急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）是临床常见的危重症,是各种原因引起的急性肾脏功能下降、伴或不伴有少尿或无尿的一种临床综合征,病死率较高,AKI也是引起慢性肾功能不全（ESRD）的重要原因,对患者的生命安全造成严重威胁。因此... 详细信息

急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）是临床常见的危重症,是各种原因引起的急性肾脏功能下降、伴或不伴有少尿或无尿的一种临床综合征,病死率较高,AKI也是引起慢性肾功能不全（ESRD）的重要原因,对患者的生命安全造成严重威胁。因此,研究AKI肾脏损伤相关机制,对早期防治AKI及ESRD具有重要意义。在AKI过程中,肾小管上皮细胞是主要受损细胞,主要表现为小管细胞去分化,上皮细胞标志消失,细胞极性消失,细胞凋亡甚至坏死。micro RNA是一类广泛存在于真核生物中长2l25碱基的非编码微小RNA,通过与靶基因3’UTR结合从而抑制其转录,调节蛋白编码基因的表达,涉及包括发育、细胞增殖和分化以及凋亡等广泛的生物学过程。多项研究证实micro RNA与急慢性肾损伤的发生发展有着密切的联系。本课题组前期在醛固酮灌注小鼠模型的肾皮质组织中发现mi R-709较正常对照组明显升高。有研究发现,肝脏中mi R-709随年龄的增长其表达逐渐增加。mi R-709在急性肾损伤中的作用还未见报道。线粒体是合成ATP、电子传递和氧化磷酸化的主要场所。线粒体功能障碍在肾损伤中的作用已得到广泛关注。业已证明,在缺血再灌注及肾毒性药物所致的急性肾损伤模型中,均存在线粒体形态异常、线粒体DNA突变、线粒体DNA拷贝数下降以及细胞凋亡。本课题组前期研究发现线粒体功能障碍是醛固酮小鼠肾损伤模型、顺铂（cisplatin）急性肾损伤模型的早期事件。本实验在前期研究的基础上,通过顺铂诱导急性肾小管上皮细胞损伤,观察mi R-709表达变化;调控mi R-709的表达水平,观察其在肾小管上皮细胞损伤中的作用及其分子机制。研究共分为三部分:mi R-709在顺铂诱导急性肾小管上皮细胞损伤中的表达变化及mi R-709过表达、抑制对肾小管上皮细胞凋亡、上皮细胞标志蛋白、急性肾损伤标志物表达及线粒体功能的影响;肾小管上皮细胞中mi R-709靶基因的筛选与鉴定。研究mi R-709在顺铂诱导急性肾小管上皮细胞损伤中的作用并探讨其可能机制,从而为急性肾损伤的发病机制、治疗靶点提供新的思路。第一部分micro RNA-709在顺铂诱导肾小管上皮细胞损伤中的表达及作用目的:观察mi R-709在顺铂诱导的肾小管上皮细胞损伤中的表达及作用。方法:体外培养小鼠肾小管上皮细胞,应用不同剂量的顺铂（0、1、5、10、20μmol/L）刺激24h或10μmol/L剂量的顺铂刺激不同时间（0、2、6、12、24h）。采用实时荧光定量PCR检测肾小管上皮细胞内mi R-709的表达变化。应用LipofectamineTM 2000转染mi R-709 mimic或mi R-709 inhibitor。mi R-709过表达实验分组为:NC（negative control）过表达对照组、mi R-709 mimic（过表达mi R-709）组;mi R-709表达抑制实验分组为:INNC（inhibitor negative control）下调对照组,mi R-709 inhibitor（下调mi R-709）组,INNC+cisplatin,mi R-709inhibitor+cisplatin。流式细胞仪检测细胞凋亡数目;分光光度法检测凋亡相关分子caspase-3的底物活性;应用实时荧光定量PCR和western blot法分别检测肾小管上皮细胞连接蛋白E-cadherin、急性肾损伤标志物肾损伤分子（KIM-1）和中性粒细胞明胶酶运载蛋白（NGAL）m RNA和蛋白表达。结果:（1）顺铂可呈剂量及时间依赖性诱导肾小管上皮细胞mi R-709的表达。与对照组相比,5μmol/L顺铂刺激肾小管上皮细胞24h后,mi R-709表达开始升高（升高2.15倍）,10、20μmol/L顺铂刺激24h mi R-709分别升高5.35倍、5.7倍,均P<0.05;肾小管上皮细胞经10μmol/L顺铂刺激12h后mi R-709升高1.63倍,24h升高达高峰（升高5.3倍）;（2）过表达mi R-709肾小管上皮细胞凋亡及caspase-3活化显著增加（分别增加0.54倍、0.31倍,均P<0.05）,E-cadherin表达减少（减少59.3%）,急性肾损伤标志物KIM-1、NGAL表达增加（分别增加0.4倍、0.62倍,均P<0.05）;（3）下调mi R-709可减轻顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡、caspase-3活化、E-cadherin表达下降及KIM-1和NGAL表达增加。结论:顺铂呈剂量及时间依赖性地诱导肾小管上皮细胞中mi R-709的表达;过表达mi R-709可诱导肾小管上皮细胞损伤,下调mi R-709对顺铂诱导的急性肾小管上皮细胞损伤具有保护作用。第

关键词： miR-709 mimic miR-709 inhibitor 急性肾小管上皮细胞损伤顺铂 mi R-709 mimic mi R-709 inhibitor 线粒体功能障碍顺铂 mi R-709 TFAM 线粒体功能障碍肾小管上皮细胞损伤

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