检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2010年第11期26卷 1569-1575页

作者：王婷婷王淑娟严景华中国科学院微生物研究所中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 中国科学院研究生院北京100049 中国动物卫生与流行病学中心青岛266032

核糖体前体的形成和核运输需要多种核仁复合物的参与,hNoc4L是酿酒酵母***的核仁复合物相关蛋白4的同源蛋白,并含有保守的Noc结构域,但其功能未知。为了构建hNoc4L基因过表达的慢病毒载体,本实验通过将EF1α启动子替换原shRNA慢病毒载体... 详细信息

核糖体前体的形成和核运输需要多种核仁复合物的参与,hNoc4L是酿酒酵母***的核仁复合物相关蛋白4的同源蛋白,并含有保守的Noc结构域,但其功能未知。为了构建hNoc4L基因过表达的慢病毒载体,本实验通过将EF1α启动子替换原shRNA慢病毒载体pll3.7的U6启动子,成功构建了慢病毒表达载体pll3.7-EF1,并进一步得到了hNoc4L基因过表达的慢病毒载体。利用慢病毒包装系统对不同物种的细胞进行感染,以此检测该重组慢病毒载体的包装效率,并通过构建的hNoc4L过表达的RAW264.7稳定细胞系检测了该载体的免疫原性和稳定转染能力。结果表明成功构建了高效、长期稳定表达和免疫原性低的hNoc4L特异性表达的慢病毒载体,为进一步研究hNoc4L蛋白在哺乳动物核糖体生物发生中的调控作用奠定了基础。

关键词： hNoc4L基因慢病毒表达载体核糖体生物发生

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FOLR1慢病毒表达载体的构建及鉴定

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生物医学工程学杂志 2013年第3期30卷 641-645,650页

作者：黄明钜王琪张玮尹巧云李状李力广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科南宁530021 重庆三峡中心医院妇科重庆404100

本研究通过构建叶酸结合蛋白1(FOLR1)基因的慢病毒表达载体并进行表达鉴定。采用PCR技术扩增出基因全长,克隆至pWPI载体质粒,重组阳性克隆行PCR和测序鉴定,将重组载体质粒与辅助质粒共同转染人肾上皮(293T)细胞包装病毒,病毒颗粒感染人... 详细信息

本研究通过构建叶酸结合蛋白1(FOLR1)基因的慢病毒表达载体并进行表达鉴定。采用PCR技术扩增出基因全长,克隆至pWPI载体质粒,重组阳性克隆行PCR和测序鉴定,将重组载体质粒与辅助质粒共同转染人肾上皮(293T)细胞包装病毒,病毒颗粒感染人卵巢上皮癌(SKOV3)细胞,流式分选,RT-PCR和Western blot检测病毒感染后细胞中的FOLR1基因和蛋白表达。经鉴定结果显示重组载体质粒构建成功,293T细胞高效包装此慢病毒,携带FOLR1基因的慢病毒感染SKOV3细胞后可见大量绿色荧光细胞,流式分选后经两种方法分别检测出FOLR1基因和蛋白稳定表达。这为探讨FOLR1基因在卵巢恶性肿瘤中的生物学功能提供了实验基础。

关键词：叶酸结合蛋白1 慢病毒表达载体卵巢癌

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大鼠Olig2基因慢病毒表达载体的构建及其转染后对少突胶质前体细胞分化的影响

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解剖学报 2012年第6期43卷 726-729页

作者：王凤超葛鑫张伦军郭晖朱安友吕合作胡建国蚌埠医学院第一附属医院检验科安徽蚌埠233004 蚌埠医学院组织移植安徽省重点实验室安徽蚌埠233003

目的构建大鼠少突胶质细胞转录因子2(Olig2)的慢病毒表达载体,并转染少突胶质前体细胞(OPCs),观察Olig2过表达对OPCs向少突胶质细胞(OLs)分化的影响。方法设计合成PCR引物,从大鼠pEGFP-N3-Olig2表达质粒中扩增并克隆大鼠Olig2-EGFP片段... 详细信息

目的构建大鼠少突胶质细胞转录因子2(Olig2)的慢病毒表达载体,并转染少突胶质前体细胞(OPCs),观察Olig2过表达对OPCs向少突胶质细胞(OLs)分化的影响。方法设计合成PCR引物,从大鼠pEGFP-N3-Olig2表达质粒中扩增并克隆大鼠Olig2-EGFP片段,将其插入到pLenti6.3慢病毒表达载体中,形成pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体。将其与包装质粒混合后共转染293T细胞,包装产生慢病毒后感染培养的OPCs,观察Olig2在感染细胞中的表达并鉴定其表达对OPCs向OLs分化的影响。结果成功将大鼠Olig2-EGFP片段克隆入pLenti6.3慢病毒表达载体,构建的pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体能够高效表达。与空质粒转染的OPCs相比,重组质粒转染的OPCs体外诱导分化后产生更多的OLs(n=5,P<0.01)。结论成功建立大鼠pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达系统,慢病毒介导的Olig2过表达促进大鼠OPCs向OLs分化。

关键词：少突胶质细胞转录因子2 少突胶质前体细胞少突胶质细胞慢病毒表达载体转染聚合酶链反应大鼠

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小鼠Islet-1基因慢病毒表达载体的构建及其诱导C_3H_(10)T1/2细胞向心肌样细胞特异性分化

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基础医学与临床 2011年第7期31卷 740-745页

作者：智深深田杰刘官信鲁荣林建萍刘建平朱静重庆医科大学儿童医院儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室重庆400014 重庆医科大学儿童医院心血管内科重庆400014

目的研究Islet-1对干细胞分化的影响。方法用PCR钓取目的基因,将目的基因与pLenO-WPI载体连接,选取阳性质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体。感染C3H10T1/2细胞,实时荧光定量PCR及Western blot检测Islet-1和心肌、肝脏、... 详细信息

目的研究Islet-1对干细胞分化的影响。方法用PCR钓取目的基因,将目的基因与pLenO-WPI载体连接,选取阳性质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体。感染C3H10T1/2细胞,实时荧光定量PCR及Western blot检测Islet-1和心肌、肝脏、骨骼及神经各系统相关标志物的表达,免疫荧光检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达部位。结果 PCR及测序显示目的片段正确插入,实验组有Islet-1表达;心肌早期发育相关基因GATA-4、MEF2C、NKx2.5在检测到荧光蛋白1周后升高,2周到达高峰,3周后可检测到心肌特异性蛋白cTnT(0.582±0.0576),其时序性表达呈随时间增强趋势;cTnT表达于胞质;肝脏系统特异性标志AFP及ALB、骨骼系统特异性标志BGP及BALP、神经系统特异性标志Nestin及GFAP均未表达。结论 Islet-1具有特异性促进干细胞向心肌样细胞分化的作用。

关键词：慢病毒表达载体 Islet-1 干细胞特异性分化心肌样细胞

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PR结构域蛋白1(PRDM1)慢病毒表达载体的构建及其对脐带间充质干细胞(hUC-MSC)向生殖细胞诱导分化的影响

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农业生物技术学报 2014年第9期22卷 1074-1082页

作者：李娜吴江华进联西北农林科技大学动物医学院/陕西省干细胞工程技术研究中心

PR结构域蛋白1基因(PR domain containing 1,with ZNF domain,PRDM1)作为原始生殖细胞(primordial germ cell,PGC)形成过程中的一个重要起始因子,在胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)向PGC的发育分化过程中发挥重要作用。为了研究其在成体干细胞诱导分化中的作用,本研究PCR克隆获得小鼠(Mus musculus)PRDM1基因(GenBank登录号:JX154081.1),构建了PRDM1慢病毒表达载体pCDH-PRDM1,通过293T细胞包装病毒,用携带有PRDM1基因的病毒颗粒转导脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,hUC-MSC)。结果表明,PRDM1基因成功在hUC-MSC中超表达;PRDM1基因能引起生殖相关基因胚胎特定时期抗原-1(stage-specific embryonic antigen-1,SSEA-1)、多能性相关蛋白3(developmental pluripotency associated 3 Dppa3,STELLA)、干细胞生长因子受体(stem cell growth factor receptor,C-KIT)和性别决定基因-同源盒2(sex determining region Y-box 2,SOX2)的上调,为进一步研究该基因的功能和提高干细胞向生殖细胞诱导分化研究奠定了一定的基础,并且为hUCMSC向生殖细胞的诱导分化提供了一个新的思路。

关键词： PR结构域蛋白1(PRDM1) 慢病毒表达载体脐带间充质干细胞(hUC-MSC)

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BIRC5 shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第7期27卷 767-769页

作者：饶国洲李昂朱永进石建峰苟建重张引成西安交通大学口腔医院中心实验室陕西西安710004 西安交通大学口腔医院牙周科陕西西安710004 西安交通大学口腔医院颌面外科陕西西安710004

目的:应用RNA干扰技术,以人BIRC5基因为靶基因,设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列,构建慢病毒干扰载体并鉴定。方法:将设计合成的单链引物退火成双链oligo序列,连接入经AgeI和EcoR I双酶切线性化的pMAGic慢病毒质... 详细信息

目的:应用RNA干扰技术,以人BIRC5基因为靶基因,设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列,构建慢病毒干扰载体并鉴定。方法:将设计合成的单链引物退火成双链oligo序列,连接入经AgeI和EcoR I双酶切线性化的pMAGic慢病毒质粒载体中,经转化DH5α感受态细胞并筛选出阳性克隆,采用PCR扩增和DNA测序鉴定阳性克隆。结果:PCR扩增产物经凝胶电泳阳性克隆得到335 bp条带,阴性克隆得到298 bp条带,DNA测序结果证实其含设计合成序列。结论:4对BIRC5 shRNA重组慢病毒表达载体构建成功,为研究靶向BIRC5 siRNA对肿瘤细胞增殖抑制与诱导凋亡作用及基因治疗研究奠定了实验基础。

关键词： RNA干扰 BIRC5 慢病毒表达载体

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人BclGL基因慢病毒表达载体构建及其对T淋巴细胞凋亡的影响

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免疫学杂志 2009年第3期25卷 252-256,260页

作者：罗娜吴毅费蕾郭晟杨承英吴胜昔陈永文吴玉章郝飞第三军医大学西南医院皮肤科第三军医大学基础部解剖教研室第三军医大学基础部全军免疫学研究所

目的构建针对人BclGL的慢病毒表达载体,检测其对Jurkat T淋巴细胞系凋亡的影响,为进一步研究BclGL在细胞内信号转导及分子功能奠定基础。方法RT-PCR方法扩增人全长BclGL基因,克隆于pGFP-N1质粒中构建BclGL绿色荧光蛋白融合基因(BclGL-GF... 详细信息

目的构建针对人BclGL的慢病毒表达载体,检测其对Jurkat T淋巴细胞系凋亡的影响,为进一步研究BclGL在细胞内信号转导及分子功能奠定基础。方法RT-PCR方法扩增人全长BclGL基因,克隆于pGFP-N1质粒中构建BclGL绿色荧光蛋白融合基因(BclGL-GFP),将融合基因克隆于慢病毒载体FUGW并转染293FT细胞包装浓缩慢病毒颗粒。将浓缩慢病毒感染Jurkat细胞,同时设立PBS对照及FUGW病毒阴性对照组,流式细胞术及荧光定量PCR鉴定BclGL在Jurkat细胞中的表达,Annexin V-APC/PI双染检测细胞凋亡变化。结果酶切及测序证实人BclGL慢病毒表达载体构建成功,转染Jurkat细胞72h后Jurkat细胞凋亡明显增加。结论成功构建了高效稳定表达人BclGL的重组慢病毒转染系统,并证实其对Jurkat淋巴细胞的促凋亡效应,为进一步探讨BclGL的生物学功能奠定了基础。

关键词： BclGL 慢病毒表达载体 Jurkat细胞凋亡

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广西巴马小型猪miR-122慢病毒表达载体的构建及胚胎水平表达

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基因组学与应用生物学 2016年第9期35卷 2306-2310页

作者：司景磊李龙郭晓萍陈秋明夏利申玉建蒋钦杨兰干球梁晶郭亚芬广西大学动物科学技术学院南宁530004

本实验的目的在于构建PLV-miR-122慢病毒载体并在293T细胞和猪胚胎细胞中进行验证。以广西巴马小型猪基因组DNA为模板,克隆miR-122前体及部分侧翼序列,利用T4连接酶将其连入PLV-CMV-MCS-EF1载体,构建PLV-miR-122慢病毒载体。在293T细胞... 详细信息

本实验的目的在于构建PLV-miR-122慢病毒载体并在293T细胞和猪胚胎细胞中进行验证。以广西巴马小型猪基因组DNA为模板,克隆miR-122前体及部分侧翼序列,利用T4连接酶将其连入PLV-CMV-MCS-EF1载体,构建PLV-miR-122慢病毒载体。在293T细胞中过表达PLV-miR-122,通过胞质注射生产转PLV-miR-122的猪胚胎。双酶切和测序结果证明成功构建了PLV-miR-122重组载体,将重组载体转染293T细胞,经胞质注射后观察到其在猪胚胎早期和囊胚期均有绿色荧光表达。本实验成功构建了猪miR-122慢病毒表达载体,在293T细胞中过表达同时生产出转miR-122的阳性胚胎,为后续研究miR-122的功能奠定基础。

关键词：广西巴马小型猪 miR-122基因慢病毒表达载体胞质注射

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产甲酸草酸杆菌FRC基因慢病毒表达载体构建及鉴定

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中华泌尿外科杂志 2011年第2期32卷 141-142页

作者：杨欢陈志强叶章群王博涵 Yussupbayeva Aliya 姚炜敏夏丁余虓刘冠琳孔德波姚林方华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科武汉430030

产甲酸草酸杆菌（Oxalobacter{ormigenes，m．F）是一种寄居于脊椎动物胃肠道、依赖分解肠道草酸生存的革兰阴性菌。我们采用基因克隆重组技术从前期分离培养的中国人肠道Ox．F[3-中克隆了草酸分解关键酶——甲酰辅酶A转移酶（FCoAT）基... 详细信息

产甲酸草酸杆菌（Oxalobacter{ormigenes，m．F）是一种寄居于脊椎动物胃肠道、依赖分解肠道草酸生存的革兰阴性菌。我们采用基因克隆重组技术从前期分离培养的中国人肠道Ox．F[3-中克隆了草酸分解关键酶——甲酰辅酶A转移酶（FCoAT）基因FRC，并成功构建重组慢病毒表达载体pLenti6．3FRC—IRES-EGFP，为高草酸尿症基因治疗提供基础。

关键词：产甲酸草酸杆菌慢病毒表达载体表达载体构建 C基因甲酰辅酶A转移酶鉴定重组技术基因克隆

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免疫检查点TIGIT慢病毒表达载体的构建和稳定表达TIGIT细胞系的建立

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吉林大学学报（医学版） 2022年第5期48卷 1341-1347页

作者：穆业腾郭冲胡楠楠杨馥旭薛晗范宇鑫郭峰霖关新刚北华大学医学技术学院医药生物工程重点实验室吉林吉林132013 台州学院医学院基础医学系浙江台州318000

目的:构建T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域-绿色荧光蛋白(TIGITGFP)慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP的细胞系,探讨TIGIT-GFP融合蛋白在稳定表达细胞系中的表达情况。方法:将TIGIT质粒和慢病毒载体pLenti-GFP分别... 详细信息

目的:构建T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域-绿色荧光蛋白(TIGITGFP)慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP的细胞系,探讨TIGIT-GFP融合蛋白在稳定表达细胞系中的表达情况。方法:将TIGIT质粒和慢病毒载体pLenti-GFP分别采用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,凝胶回收后连接构建重组质粒pLenti-TIGIT-GFP。将测序正确的重组质粒转染人胚胎肾HEK293T细胞作为实验组,转染TIGIT质粒的HEK293T细胞作为对照组,转染48 h后荧光显微镜下观察细胞膜上GFP表达情况。将实验组细胞继续培养,采用嘌呤霉素筛选2周后,挑取单克隆扩大培养,荧光显微镜观察细胞膜上GFP表达情况,Western blotting法检测在转染的人胚胎肾HEK293T细胞中TIGIT-GFP蛋白表达情况。结果:酶切鉴定,TIGIT基因成功插入pLenti-GFP表达载体,DNA测序未检测到突变发生。实验组细胞膜上检测到GFP表达。Western blotting法检测,实验组细胞裂解液中检测到TIGIT-GFP特异性条带。结论:成功构建pLenti-TIGIT-GFP慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP融合蛋白的细胞系,TIGIT-GFP融合蛋白主要在稳定细胞系的细胞膜上表达。

关键词： T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域绿色荧光蛋白慢病毒表达载体稳定转染单克隆细胞

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