目的用慢病毒表达载体研究全长组织因子(flTF)在乳腺癌发生和发展中的作用。方法包装flTF的慢病毒颗粒感染永生化乳腺上皮细胞株MCF-10A实现flTF的过表达,用flTF sh RNA的慢病毒颗粒感染乳腺癌细胞株MDA-MB-231下调flTF的表达,用Transw...
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目的用慢病毒表达载体研究全长组织因子(flTF)在乳腺癌发生和发展中的作用。方法包装flTF的慢病毒颗粒感染永生化乳腺上皮细胞株MCF-10A实现flTF的过表达,用flTF sh RNA的慢病毒颗粒感染乳腺癌细胞株MDA-MB-231下调flTF的表达,用Transwell的方法检测flTF过表达和下调表达之后对细胞迁移的影响,用流式细胞术检测flTF对细胞周期的影响,蛋白印迹法检测flTF过表达和下调表达的效果,结合MTS方法检测flTF对细胞增殖的影响。结果 flTF在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达明显高于永生化的乳腺上皮细胞MCF-10A,正常细胞中flTF过表达促进了细胞的迁移并对其生长速度产生了一定的影响。在肿瘤细胞中下调flTF的表达,能在一定程度上抑制肿瘤细胞的迁移和生长。结论慢病毒表达载体在flTF的表达对乳腺癌细胞的影响中得到成功应用,flTF可作为抑制肿瘤细胞生长和迁移的靶分子,下调flTF的表达或许能为乳腺癌的临床治疗开辟一条新的途径。
背景:腺病毒载体作为脂肪组织工程转基因载体,在应用中存在转导细胞免疫排斥及炎症反应等问题。应用慢病毒作为载体转染干细胞尤其是应用含胰岛素基因的慢病毒载体转染干细胞可避免腺病毒载体的诸多问题。目的:实验拟构建含有人重组胰岛素(insulin)与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因慢病毒表达载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP,并进行病毒颗粒包装。方法:应用聚合酶链反应方法获得目的基因,在目的基因上、下游分别加上BamHⅠ,AscⅠ两个酶切位点,进行T载体克隆,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选获得重组质粒。用限制性内切酶酶切,将目的基因片段和pLenti6.3-IRES-EGFP载体连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选获得慢病毒表达载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP,并进行测序。抽提慢病毒载体,转染293T细胞,包装病毒,测定病毒滴度。结果与结论:通过聚合酶链反应获得长度为347bp带有BamHⅠ和AscⅠ序列的目的基因。pMD18-T载体和慢病毒表达载体pLenti6.3-IRES-EGFP连接,慢病毒表达载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP构建与预期相匹配,成功包装慢病毒颗粒。
为了构建含目的基因的慢病毒表达载体,包装成病毒并检测病毒感染情况,试验采用PCR技术和Multi Site Gateway技术构建含DAZL基因的慢病毒表达载体p Lenti6.4/EF1α/V5/DAZL并制备慢病毒。结果表明：试验成功构建了含目的基因DAZL的慢病...
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为了构建含目的基因的慢病毒表达载体,包装成病毒并检测病毒感染情况,试验采用PCR技术和Multi Site Gateway技术构建含DAZL基因的慢病毒表达载体p Lenti6.4/EF1α/V5/DAZL并制备慢病毒。结果表明：试验成功构建了含目的基因DAZL的慢病毒表达载体,并制备出有感染能力的慢病毒。说明试验构建的慢病毒表达载体适用于含目的基因DAZL的慢病毒生产。
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