检索结果-内蒙古大学图书馆

中外医学研究 2022年第7期20卷 160-164页

作者：余光书林焱斌庄福毅吴春玲厦门大学附属福州第二医院福建福州350007 福建中医药大学厦门大学

目的:观察补骨颗粒含药血清对内皮祖细胞(EPCs)的成管实验及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,从而探讨补骨颗粒对血管生成的影响机制。方法:取成年SD大鼠按照随机对照表分为空白对照组和实验组,空白对照组予生理盐水2 ml/kg灌胃,实验... 详细信息

目的:观察补骨颗粒含药血清对内皮祖细胞(EPCs)的成管实验及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,从而探讨补骨颗粒对血管生成的影响机制。方法:取成年SD大鼠按照随机对照表分为空白对照组和实验组,空白对照组予生理盐水2 ml/kg灌胃,实验组予补骨颗粒水溶液3.08 g/kg灌胃,制备空白血清及补骨颗粒含药血清。取10周龄的雄性SD大鼠四肢股骨,在体外分离培养大鼠EPCs,并进行传代培养,应用流式细胞仪检测鉴定细胞表面抗原。收集传代培养3代的EPCs,分为补骨颗粒含药血清组及空白血清组,分别予以补骨颗粒含药血清及空白血清干预。于体外基质胶中培养EPCs并观察其成管情况。同时应用Elisa检测方法检测VEGF表达情况。采用SPSS 18.0软件进行数据统计分析。结果:骨髓中分离出的细胞培养14 d后使用流式细胞仪检测结果显示CD34^(+)细胞比例为70.03%,CD133^(+)细胞比例为67.99%,血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2^(+))细胞比例为63.96%。成管实验显示补骨颗粒含药血清组于干预72 h后,细胞形态趋于典型,呈毛细血管腔样结构;空白血清组未形成典型的毛细血管腔样结构。Elisa检测结果显示补骨颗粒含药血清组在干预24、48 h时的VEGF表达量明显高于空白血清组(t=3.069、2.939,P=0.037、0.042);但是在干预72 h时补骨颗粒含药血清组与空白血清组VEGF表达量比较,差异无统计学意义(t=2.541,P=0.064)。补骨颗粒含药血清组在干预24、48、72 h时的VEGF表达量无明显变化(F=0.684,P=0.523),而空白血清组在干预24、48、72 h时的VEGF表达量明显升高(F=5.656,P=0.019)。结论:补骨颗粒含药血清可以激活EPCs的活性,促进VEGF表达,从而增强EPCs的血管生成作用。

关键词：补骨颗粒含药血清内皮祖细胞成管实验血管内皮生长因子

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内皮细胞特异性骨形态发生蛋白2对血管新生的影响:生物信息学分析和实验验证

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中国组织工程研究 2025年第1期29卷 103-110页

作者：燕茹王凯茹张飞燕贾绍斌丛广志宁夏医科大学总医院心内科宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院医学研究院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院心血管病研究所宁夏回族自治区银川市750004

背景:血管新生是心血管疾病的主要干预靶点,骨形态发生蛋白2具有调控血管新生作用,但内皮细胞特异性骨形态发生蛋白2对血管新生的调控作用不清楚。目的:探讨内皮细胞特异性骨形态发生蛋白2对血管新生的影响。方法:(1)生物信息学分析:通... 详细信息

背景:血管新生是心血管疾病的主要干预靶点,骨形态发生蛋白2具有调控血管新生作用,但内皮细胞特异性骨形态发生蛋白2对血管新生的调控作用不清楚。目的:探讨内皮细胞特异性骨形态发生蛋白2对血管新生的影响。方法:(1)生物信息学分析:通过Panglao DB公共基因表达数据库单细胞转录组荟萃分析观察骨形态发生蛋白2细胞群表达丰度和定位。血管新生小鼠和内皮(心内膜)过表达骨形态发生蛋白2小鼠转录组测序数据集探索内皮细胞骨形态发生蛋白2对血管新生信号通路的调控作用。(2)体内实验验证:建立小鼠后肢缺血模型,对比模型小鼠患侧与健侧缺血后肢7,14和21 d血流灌注情况,免疫荧光和免疫组织化学染色评估小鼠骨形态发生蛋白2和CD31的表达定位情况。(3)体外实验验证:体外培养人脐静脉内皮细胞,分为对照组、缺氧组和骨形态发生蛋白2抑制剂(Noggin蛋白)干预组,培养24 h,观察各组内皮细胞血管新生情况。结果与结论:(1)内皮细胞是表达骨形态发生蛋白2的重要细胞亚群,在血管新生内皮细胞和骨形态发生蛋白2过表达内皮细胞转录组再分析均发现骨形态发生蛋白2表达明显升高,血管新生通路明显激活。(2)缺血7 d小鼠新生血管周围骨形态发生蛋白2阳性血管明显增加(P<0.05),缺血2周骨形态发生蛋白2阳性血管明显减少(P<0.001)。(3)体外培养人脐静脉内皮细胞,缺氧干预后,内皮细胞迁移能力和血管出芽明显增加,血管新生因子血管内皮生长因子和血小板衍生生长因子的表达明显升高,Noggin明显减少了缺氧诱导的内皮细胞血管新生(P<0.001),并下调血管内皮生长因子和血小板衍生生长因子的表达(P<0.01)。(4)结果证实,内皮细胞特异性骨形态发生蛋白2具有调控血管新生作用,靶向性内皮细胞骨形态发生蛋白2可望改善血管新生。

关键词：内皮细胞骨形态发生蛋白2 血管新生单细胞RNA测序批量RNA测序信号通路后肢缺血模型成管实验

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体外震波对骨微血管内皮细胞生理功能的影响

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中国组织工程研究 2016年第37期20卷 5504-5510页

作者：左伟高福强李配瑶孙伟李子荣时令军中日友好医院骨科北京市100029

背景:体外震波作为一种特殊类型的外源性物理作用信号,通过刺激、激活内皮细胞上机械力学信号感受器,激活细胞内特殊信号传导系统,调控内皮细胞基因表达,对内皮细胞生理功能产生影响。目的:观察不同能流密度及作用次数体外震波对股骨头... 详细信息

背景:体外震波作为一种特殊类型的外源性物理作用信号,通过刺激、激活内皮细胞上机械力学信号感受器,激活细胞内特殊信号传导系统,调控内皮细胞基因表达,对内皮细胞生理功能产生影响。目的:观察不同能流密度及作用次数体外震波对股骨头骨微血管内皮细胞成血管能力、迁移能力及抗凋亡作用的影响。方法:从关节置换患者股骨头获取股骨头骨松质,分离、培养、传代培养股骨头骨微血管内皮细胞。通过血管性血友病因子、CD31血管内皮细胞标记物抗体进行免疫荧光鉴定。根据体外震波不同能流密度(低0.03 m J/mm2,高0.11 mJ/mm2)及不同作用次数(400次,800次)对细胞进行分组。通过细胞3D培养实验观察内皮细胞成血管能力,划痕实验观察内皮迁移能力,流式细胞仪检测内皮细胞凋亡情况。结果与结论:(1)从股骨头松质骨中分离、培养出的细胞均能表达血管性血友病因子、CD31,表明这些细胞具有血管内皮细胞的特征,阳性率接近100%;(2)体外震波作用于股骨头骨微血管内皮细胞提高其体外成血管能力及迁移能力,低能流密度组促进成血管能力和细胞迁移能力显著优于高能流密度组,高能流密度组内随着作用次数的增加促成血管能力下降;(3)对于激素诱导股骨头骨微血管内皮细胞凋亡有保护作用;(4)结果说明,体外震波对股骨头骨微血管内皮细胞生理功能的影响与作用能流密度及作用次数相关。

关键词：物理治疗技术微血管内皮细胞组织工程组织构建血管内皮细胞体外震波骨微血管内皮细胞成管实验划痕实验流式细胞凋亡实验

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小鼠骨髓来源早晚期内皮祖细胞的生物学特性

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第36期14卷 6657-6661页

作者：邓正明孙喜太朱海涛丁义涛南京大学医学院附属鼓楼医院江苏省南京市210008

背景:关于内皮祖细胞统一的定义、相关的生物学特性及在血管发生发展过程中的精准作用等问题存在较大的争议。目的:探索用序列差速贴壁法分离、培养小鼠骨髓血管早、晚期内皮祖细胞的条件并比较早晚期内皮祖细胞的生物学特性差异。方法... 详细信息

背景:关于内皮祖细胞统一的定义、相关的生物学特性及在血管发生发展过程中的精准作用等问题存在较大的争议。目的:探索用序列差速贴壁法分离、培养小鼠骨髓血管早、晚期内皮祖细胞的条件并比较早晚期内皮祖细胞的生物学特性差异。方法:采用Ficoll密度梯度离心法从小鼠骨髓中分离单个核细胞,种植于人纤维粘连蛋白包被的培养瓶中,利用序列差速贴壁法分离、纯化细胞早晚期内皮祖细胞。比较早晚期内皮祖细胞在细胞形态、DiI-LDL及FITC-UEA-1摄取能力、细胞的免疫表型、生长增殖能力及体外形成管腔结构能力的差别。结果与结论:早期内皮祖细胞呈集落样成长,晚期呈铺路石样生长,早、晚期内皮祖细胞都可以吞噬DiI-LDL连接FITC-UEA-1。晚期内皮祖细胞拥有较强增殖潜能,早期在体外基质胶上不形成管腔样结构而晚期内皮祖细胞可形成管腔样结构。提示:骨髓中存在具有不同特性的早晚期内皮祖细胞,晚期内皮祖细胞拥有巨大的增殖潜能并在体外参与血管样结构。

关键词：内皮祖细胞内皮细胞骨髓成管实验血管新生

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黄芪甲苷促进高糖受损的内皮祖细胞向内皮细胞分化的实验研究

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中医药导报 2024年第10期30卷 1-5页

作者：瞿文静贺有缘高入春赵思佳邓佩王凯悦武闻静徐文峰熊武邹晓玲湖南中医药大学第一中医临床学院湖南长沙410007 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南中医药大学中西医结合学院湖南长沙410208

目的:研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)诱导高糖损伤内皮祖细胞(EPCs)向内皮细胞(ECs)分化的作用。方法:体外分离出单个核细胞,通过4,6二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)核染法、FITC-UEA-I联合Dil-ac-LDL双荧光染色法鉴定EPCs,将鉴定成功的EPCs用30 mmol/L... 详细信息

目的:研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)诱导高糖损伤内皮祖细胞(EPCs)向内皮细胞(ECs)分化的作用。方法:体外分离出单个核细胞,通过4,6二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)核染法、FITC-UEA-I联合Dil-ac-LDL双荧光染色法鉴定EPCs,将鉴定成功的EPCs用30 mmol/L的葡萄糖干预120 h制成高糖受损模型,并随机分为高糖对照组及高糖AS-Ⅳ组,同时设置正常组。高糖AS-Ⅳ组加入100 mg/L的AS-Ⅳ干预,高糖对照组及正常组加入同等体积的PBS液培养。3组均培养48 h后采用荧光免疫检测内皮细胞标志物血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)、血管性血友病因子(vWF)的表达情况,并通过Matrigel成管实验研究AS-Ⅳ干预EPCs成管分化的影响。结果:成功培养鉴定出EPCs,EPCs在光镜下形态呈中间圆形、外周梭形的“铺路石”样形态;双荧光染色荧光镜下EPCs呈双染橙黄色改变;免疫荧光检测显示,高糖AS-Ⅳ组CD31和vWF免疫荧光强度高于高糖对照组,差异有统计学意义(P<0.01);Matrigel成管实验显示,高糖AS-Ⅳ组EPCs成管能力高于高糖对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:AS-Ⅳ可诱导高糖受损人内皮祖细胞向内皮细胞分化而发挥体外成管作用。

关键词：黄芪甲苷内皮祖细胞内皮细胞细胞分化成管实验糖尿病血管并发症

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心脏间充质细胞外泌体对缺血性心血管病模型的作用及其意义

心脏间充质细胞外泌体对缺血性心血管病模型的作用及其意义

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作者：鞠成伟东南大学

学位级别：博士

第一部分Sac-1+心脏间充质细胞来源的外泌体的分离和鉴定目的:分离、纯化Sca-1+心脏间充质细胞来源的外泌体,并进行鉴定。方法:取野生型的C57BL/6小鼠的心脏,用两步法获得Sca-1+心脏间充质细胞。先用磁珠分选去除含有造血细胞表面标记... 详细信息

第一部分Sac-1+心脏间充质细胞来源的外泌体的分离和鉴定目的:分离、纯化Sca-1+心脏间充质细胞来源的外泌体,并进行鉴定。方法:取野生型的C57BL/6小鼠的心脏,用两步法获得Sca-1+心脏间充质细胞。先用磁珠分选去除含有造血细胞表面标记的细胞,再用Sca-1标记的磁珠进行二次分选获得Sca-1+心脏间充质细胞(CMCs)。通过流式细胞学分析CMCs的表面抗原如CD105、CD44、CD140和c-kit,同时应用免疫荧光染色分析细胞GATA4和Ki67的表达。使用去除外泌体的含有10%FBS的培养基培养CMCs48小时,收集培养液,经沉淀法获得外泌体。使用免疫电镜和纳米颗粒示踪分析法对所得外泌体进行鉴定,进一步提取外泌体蛋白,通过Western blot检测CD63、CD81和Tsg101等在外泌体蛋白中的表达。结果:经上述方法获得Sca-1+心脏间充质细胞,经流式细胞学分析发现细胞CD105+、CD44+、CD140+、和c-kit+的细胞比例分别为86%,91%、65%、和6.8%;免疫荧光染色证实大多数心脏间充质细胞是GATA4+的,具有持续增殖更新能力。使用沉淀法可获得来源于Sca-1+心脏间充质细胞的外泌体(CMC-Exo),经免疫电镜分析和纳米颗粒示踪分析显示所得的细胞外囊泡平均直径约120nm,符.合外泌体的特点。Western blot实验也进一步证实其含有外泌体特征性蛋白如CD63,CD81和Tsg101。结论:来源于Sca-1+CMCs的细胞外囊泡经分离、纯化,经鉴定符合外泌体的特点。第二部分CMC-Exo对小鼠心肌梗死模型的保护作用目的:通过在体实验评估并证实CMC-Exo对小鼠心肌梗死模型的保护作用。方法:取15只2-3月C57BL/6雌性小鼠建立心肌梗死模型,结扎左前降支近段,在缺血的边缘区经心肌内注射CMC-Exo(30 μl,50μg,n=8)或者等体积PBS(n=7)在术前、术后24h和术后一月行超声心动图检查评估心功能。术后一月安乐死动物,心脏标本被固定、脱水和制作冰冻切片。应用Masson's trichrome染色分析心肌梗死的范围和室壁厚度,组织免疫荧光染色检测EdU、CD31、Ki67和TNI的表达和分布,使用Image J软件计数单位面积心脏组织内CD31+毛细血管数,计算心梗边缘区的血管密度结果:成功建立稳定的心肌梗死模型。行超声心动图检测和分析,结果发现CMC-Exo可明显改善心肌梗死,后一月的左室射血分数;;心脏组织Masson's trichrome染色及免疫荧光染色结果显示与PBS组相比,外泌体治疗一个月后心肌梗死的范围明显减小,梗死区的室壁厚度显著高于PBS组;心肌梗死边缘区CD31染色阳性率明显增加。在梗死区和边缘区EdU+或Ki67+细胞显著增加,免疫荧光染色显示多为内皮细胞的增殖,同时发现外泌体治疗组存在较多的处于增殖期的心肌细胞。结论:研究发现CMC-Exo可明显改善心肌梗死后的左心功能,促进梗死边缘区内皮细胞和少量心肌细胞的增殖,增加血管密度,提示Sca-1+心脏间充质细胞来源的外泌体可促进血管新生第三部分CMC-Exo对小鼠下肢缺血模型的保护作用目的:通过在体实验评估并证实CMC-Exo对小鼠下肢缺血模型的保护作用。方法:取12只2-3月C57BL/6雌性小鼠建立左侧下肢缺血模型,左侧股动脉及分支被结扎后,在下肢缺血肌肉内注射CMC-Exo(30 μl,50 μg,n=7)或者等体积PBS(n=5)。在术前及术后1天,15天和28天行激光多普勒影像检查,评估与对侧相比下肢足掌的血流灌注。术后一月安乐死动物,肌肉标本被固定、脱水和制作石蜡切片。应用组织免疫荧光染色检测lectin的表达和分布,使用Image J软件计数单位面积的肌肉组织内lectin+毛细血管数,计算下肢肌肉的血管密度。结果:成功建立下肢缺血模型。行激光多普勒影像学检查和分析,结果发现CMC-Exo可明显促进术后2周和4周的下肢血流灌注的恢复;lectin免疫荧光染色结果显示CMC-Exo治疗组的下肢肌肉毛细血管密度高于PBS组(535.5 ±133.5/mm2 vs 479.0± 110.9/mm2),但两组无统计学差异。结论:研究发现CMC-Exo可明显改善下肢缺血后2周和4周血流灌注,但未显著增加术后一月下肢肌肉的毛细血管密度。第四部分CMC-Exo对缺血性心血管模型保护作用的体外实验研究目的:通过体外实验进一步探索CMC-Exo发挥保护作用的机制方法:应用CMC-Exo或等体积PBS干预人脐静脉内皮细胞(HUVECs),于37℃、5%CO2孵育20小时,通过成管实验观察微管网络的形成,并使用EVOS显微镜记录影像。使用Image J软件分析血管网络;予不同剂量CMC-Exo干预H

关键词：心脏间充质细胞外泌体鉴定心肌梗死模型超声心动图组织学分析血管密度下肢缺血模型激光多普勒影像血管密度成管实验 miRNA阵列分析泛素化 ATP结合蛋白

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双氢青蒿素对肝癌HepG2细胞VEGF及HUVECs血管新生的影响

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山东中医药大学学报 2022年第4期46卷 524-532,548页

作者：刘妍君刘付红李笑刘炬山东中医药大学山东济南250355 山东第一医科大学第一附属医院山东济南250013

目的:探究双氢青蒿素(DHA)对肝癌HepG2细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达及DHA+肿瘤条件培养基(TCM)对内皮细胞血管生成的影响。方法:将乏氧条件培养的人肝癌细胞系HepG2分为空白组、不同浓度(10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmo... 详细信息

目的:探究双氢青蒿素(DHA)对肝癌HepG2细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达及DHA+肿瘤条件培养基(TCM)对内皮细胞血管生成的影响。方法:将乏氧条件培养的人肝癌细胞系HepG2分为空白组、不同浓度(10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)DHA组,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附测定(ELISA)分别检测DHA对VEGF mRNA、蛋白和分泌水平及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的影响。选取具有有效抑制作用的最低浓度25μmol/L DHA进行后续实验,将细胞分为4组:空白组、DHA+TCM组、PX-478+TCM组和PX-478+DHA+TCM组。收集各组培养肝癌HepG2细胞的TCM,各组TCM用于人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验、划痕实验和成管实验分别检测DHA+TCM对HUVECs增殖、迁移和血管形成的影响,揭示DHA对VEGF作用的机制。结果:DHA呈剂量依赖性地抑制肝癌HepG2细胞VEGF mRNA、蛋白及分泌水平的表达;DHA+TCM可有效抑制HUVECs增殖、迁移及血管生成;此外,DHA对肝癌HepG2细胞中HIF-1α蛋白表达具有抑制作用。DHA+TCM对HUVECs血管生成的抑制作用可通过DHA与PX-478共处理而消除。结论:DHA可以抑制肝癌HepG2细胞VEGF表达及HUVECs血管生成,其机制可能是通过减少肝癌HepG2细胞转录因子HIF-1α的表达。

关键词：双氢青蒿素血管新生肝癌HepG2细胞缺氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子四甲基偶氮唑蓝实验划痕实验成管实验

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miR-150在复发性流产患者绒毛组织中表达及在血管生成中的作用.

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医学分子生物学杂志 2018年第6期15卷 411-416页

作者：尹太郎丁锦丽张怡杨菁武汉大学人民医院生殖医学中心武汉市430060 湖北省辅助生殖与胚胎发育医学临床研究中心武汉市430060

目的探讨miR-150在复发性流产(recurrent miscarriage,RM)患者绒毛组织中表达以及在血管生成中的作用。方法分别用RT-qPCR法及westem印迹检测RM及人工流产患者的绒毛组织中miR-150及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth facto... 详细信息

目的探讨miR-150在复发性流产(recurrent miscarriage,RM)患者绒毛组织中表达以及在血管生成中的作用。方法分别用RT-qPCR法及westem印迹检测RM及人工流产患者的绒毛组织中miR-150及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达情况;人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothhelial cells,HUVECs)予以转染miR-150模拟物和miR-150抑制物,观察成管情况。结果RM患者绒毛组织中miR-150的表达显著高于对照组,而VEGF蛋白水平显著低于对照组。体外予以miR-150模拟物转染HuVEcs后,HuVEcs的miRNA-150水平显著升高,而VEGF蛋白水平显著降低;予以miRNA。150抑制物转染后,miR-150水平显著降低,而vEGF蛋白水平显著升高。成管实验表明,予以miR-150模拟物处理后,HUVECs的成管长度显著降低,而miR-150抑制物转染后HuVEcs的成管长度显著增加。结论miR-150在RM患者绒毛组织中表达上调,其通过靶向调控vEGF的表达,导致绒毛血管发育不良.从而参与RM发病过程。

关键词：复发性流产 miR-150 血管内皮生长因子成管实验

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