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抗HER2单抗报告基因法检测抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性方法的建立及应用

中国药学杂志 2022年第23期57卷 1991-1997页

作者：刘春雨于传飞付志浩崔永霏杨雅岚王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的利用报告基因法建立抗人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。方法以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系为靶细胞,通过荧光素酶检测系统建立抗HER2单抗的ADCP测活方法,并运用实验设计(design of experiment,DOE)方法进行实验优化和方法学验证。结果该方法量效关系符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,方法优化确定量效范围为400~3.959 ng·mL(-1),靶细胞接种密度为每孔1.5×10^(4)个,效靶比为5∶1,诱导时间为7 h。该方法具有良好的专属性;不同稀释组样本百分相对效价分别为(55.04±1.35)%、(78.10±6.33)%、(102.69±5.21)%、(133.32±2.58)%和(152.87±8.11)%;回收率在101%~110%,相对标准偏差(RSD)均小于10%。结论本研究成功建立抗HER2单抗ADCP生物学活性方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCP生物学活性的评价方法。

关键词：抗人类表皮生长因子受体2单抗单克隆抗体抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性报告基因实验设计优化验证

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利用实验设计优化和建立抗CD38单克隆抗体ADCP生物学活性测定方法

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药学学报 2022年第5期57卷 1459-1464页

作者：刘春雨于传飞李欣付志浩崔永霏郭璐韵王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室/国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 广州市药品检验所广州510160

利用实验设计(design of experiment,DoE)方法建立抗CD38单抗(monoclonal antibody,mAb)的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,Daudi细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BrightGlo^(TM)Lucifer‐ase Assay system)检测抗CD38单抗的ADCP生物学活性,并运用DoE方法进行实验参数优化。结果显示,抗CD38单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,方法经统计学实验设计对多个实验参数进行筛选和优化,确定抗体工作浓度为800~20.81 ng·mL^(-1),靶细胞和效应细胞的接种量分别为每孔7.5×10^(4)和2.5×10^(4)个,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性;5个不同组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(59.97±4.74)%、(82.44±5.15)%、(110.69±11.71)%、(129.23±5.22)%和(162.15±3.66)%;回收率在103%~120%,RSD均小于11%,线性检测范围为50%~150%。本研究利用DoE设计成功筛选、优化和建立基于报告基因的抗CD38单抗ADCP生物学活性测定方法,该方法具有良好的专属性、重复性和准确性,可作为抗CD38单抗ADCP生物学活性的评价方法。

关键词：抗CD38单抗抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性实验设计 Plackett-Burman设计优化验证

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基于报告基因的抗CD52单克隆抗体ADCP生物学活性测定方法的建立

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微生物学免疫学进展 2021年第6期49卷 23-28页

作者：付志浩刘春雨杨雅岚段茂芹俞小娟崔永霏于传飞王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室国家卫健委生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的建立基于报告基因的抗CD52单克隆抗体(单抗)的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。方法(1)以Ramos细胞系作为靶细胞,以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,通过荧光素酶检测系统(BrightGlo^(TM) luciferase assay system)建立抗CD52单抗的ADCP生物学活性检测方法。(2)对单抗量效范围、效靶比及诱导时间进行优化和方法学验证。(3)将本研究建立的方法应用于对不同抗CD52单抗的ADCP生物学活性检测。结果建立抗CD52单抗的ADCP生物学活性检测方法,抗CD52单抗在该方法中存在量效关系,符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D;本方法经优化后确定抗体量效范围为起始工作质量浓度720μg/mL,1∶4倍系列稀释10个稀释度;效靶比为1∶2,诱导时间为20 h;本方法经方法学验证,具有良好的专属性;5个不同稀释组回收率样品经3次测定,相对效价分别为(52.81±5.61)%、(83.66±8.48)%、(100.45±2.65)%、(140.89±8.26)%和(155.10±13.23)%;对应的回收率分别为(105.61±11.22)%、(111.54±11.31)%、(100.45±2.65)%、(112.71±6.61)%和(103.40±8.82)%,上述结果的变异系数(coefficient of variation,CV)均<11%;且该方法也适用于不同抗CD52单抗的ADCP效应评价。结论利用转基因细胞法成功建立了抗CD52单抗ADCP生物学活性检测方法,该方法专属性强、准确性高、重复性好,可用于评价抗CD52单抗的ADCP生物学活性。

关键词：单克隆抗体抗CD52单克隆抗体抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性报告基因

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