检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2021年第1期48卷 241-252页

作者：王康泓丁崇正深圳大学生命与海洋科学学院广东深圳518060

疫苗的接种被认为是阻止时下2019冠状病毒病(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)疫情进一步蔓延的最有效手段。目前,国内外多个研究团队采用了不同的技术路线开展严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Cor... 详细信息

疫苗的接种被认为是阻止时下2019冠状病毒病(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)疫情进一步蔓延的最有效手段。目前,国内外多个研究团队采用了不同的技术路线开展严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)相关疫苗的研发。本文就SARS-CoV-2抗原表位分析、相关疫苗的研究进展以及疫苗接种潜在的风险等多个方面的研究进行综述。评价各研发路线疫苗安全性和有效性的同时,对疫苗发展应用所面临的困难进行讨论。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 抗原表位分析 2019冠状病毒病疫苗研发

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CA16 VP1单克隆抗体的制备及其抗原表位分析

CA16 VP1单克隆抗体的制备及其抗原表位分析

引用

作者：饶继红长春理工大学

学位级别：硕士

柯萨奇病毒A组16型（CA16）可引起全球范围内的婴儿和学龄前儿童手足口病的暴发流行,至今还没有十分有效的疫苗或抗病毒药物用于防治CA16相关疾病,同时其基因型多且复杂也给CA16临床诊断和检测带来了挑战。本论文致力于制备抗CA16 VP1... 详细信息

柯萨奇病毒A组16型（CA16）可引起全球范围内的婴儿和学龄前儿童手足口病的暴发流行,至今还没有十分有效的疫苗或抗病毒药物用于防治CA16相关疾病,同时其基因型多且复杂也给CA16临床诊断和检测带来了挑战。本论文致力于制备抗CA16 VP1单克隆抗体,不仅为研发预防性或治疗性抗CA16病毒药物奠定基础,而且为建立CA16特异性检测方法提供重要依据。本文通过优化ELISA实验中每个步骤的反应条件,包括CA16病毒抗原和待测血清稀释浓度、ELISA封闭液的种类及浓度、封闭温度和时间、HRP酶标二抗的反应时间、H2O2底物溶液的反应时间,为CA16 VP1特异性单抗制备建立了有效的ELISA抗体检测方法。利用pGEX-CA16-VP1重组蛋白抗原免疫小鼠及杂交瘤技术制备CA16 VP1单克隆抗体,最终获得3株理想的单克隆细胞株:CA16 VP1-1A4、CA16 VP1-1C8、CA16 VP1-4E3。通过RT-nPCR获得891bp CA16 VP1基因全长并测序成功,同时利用生物信息学软件对其抗原表位及其他生物学特性进行分析,EMBOSS结合Protean预测CA16 VP1 B细胞抗原表位共有11个,SYFPEITHI预测KMTDPPAQV,RVYMRIKHV,NLIETRCVL,MMGTFSIRT,WQTATNPSV,FDAEFTFVV这六条多肽为CA16 VP1 MHC的优选抗原表位。本试验利用凝胶层析法纯化自制的CA16 VP1单克隆抗体并标记荧光素,经ELISA方法测定效价达到1.28×10～4,荧光单抗纯化状态较好。同时按照梯度稀释的方法,确定1:32作为荧光抗体最佳稀释比。通过直接免疫荧光法,验证荧光单克隆抗体不与EV71和CB3发生交叉反应,说明其具有很好的特异性。试验结果显示,本研究建立的间接ELISA方法能够有效地检测CA16 VP1抗体,制备的CA16 VP1单克隆抗体质量良好,效价较高而且具有明显的特异性,可以应用于病毒的快速检测及分离鉴定。

关键词：柯萨奇病毒A组16型单克隆抗体抗原表位分析直接免疫荧光抗体

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苦荞过敏蛋白TBW17基因克隆及其抗原表位分析

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基因组学与应用生物学 2016年第12期35卷 3481-3486页

作者：张润敏刘海宁姚慧鹏王晓丽李成磊四川农业大学生命科学学院雅安625014

基于苦荞转录组数据，采用RT-PCR技术克隆到1条苦荞过敏原蛋白基因的cDNA序列TBW17，并采用生物信息学方法对其编码蛋白进行了结构分析和抗原表位分析。结果表明，TBW17含有1个480bp的开放阅读框，编码159个氨基酸，其氨基酸序列与多种... 详细信息

基于苦荞转录组数据，采用RT-PCR技术克隆到1条苦荞过敏原蛋白基因的cDNA序列TBW17，并采用生物信息学方法对其编码蛋白进行了结构分析和抗原表位分析。结果表明，TBW17含有1个480bp的开放阅读框，编码159个氨基酸，其氨基酸序列与多种植物过敏原蛋白同源性达52．20％～97．48％，蛋白家族分类显示其归为过敏蛋白中常见的Bet v1家族。抗原表位预测分析表明，该编码蛋白的T细胞表位位于91～99位，而B细胞表位位于第9～17、45～53和59～66位。以上结果为进一步对苦荞过敏原蛋白的检测和致敏机制研究提供了一定的理论基础。

关键词：苦荞过敏蛋白基因克隆抗原表位分析

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基于抗原表位分析的人乳头瘤病毒16L1壳蛋白基因克隆及表达纯化

基于抗原表位分析的人乳头瘤病毒16L1壳蛋白基因克隆及表达纯化

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作者：李屹广州医科大学

学位级别：硕士

研究背景：　　人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一种重要的致瘤DNA病毒，HPV致癌性已被证实在妇女泌尿生殖系肿瘤的病因学上起着重要作用，其中与宫颈癌发病密切相关的有HPV16、18等。HPV16基因组为双链环状DNA分子，全长790... 详细信息

研究背景：　　人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一种重要的致瘤DNA病毒，HPV致癌性已被证实在妇女泌尿生殖系肿瘤的病因学上起着重要作用，其中与宫颈癌发病密切相关的有HPV16、18等。HPV16基因组为双链环状DNA分子，全长7905bp，由早期基因区（E区）、晚期基因区（L区）和长控制区（long control region,LCR）组成。E区包含了与转化有关的E6和E7基因，L区包括L1与L2基因，表达产物分别为主要病毒壳体蛋白和次要病毒壳体蛋白。对L1抗原表位的深入研究，奠定了其作为预防性疫苗设计对象的免疫学基础。由于L1蛋白结构保守，含多个抗原表位，在真核以及原核细胞中表达后能自我装配成病毒样颗粒(VLP)，其结构和抗原表位与天然的病毒颗粒十分相似,能刺激机体产生保护性抗体，故L1是预防性疫苗的主要靶抗原。预防性疫苗包含重组HPV16L1衣壳蛋白，形成病毒样颗粒(VLP)，这些小颗粒可以像自然感染一样被机体免疫系统识别，诱发免疫应答。VLP仅含有蛋白，不含DNA，因此没有感染性和致癌性，可以诱发机体产生比自然感染更高水平的抗体滴度。　　目的：　　选择HPV16L1抗原性最强的一段抗原表位编码区，构建原核表达载体并利用大肠杆菌表达抗原蛋白，将为HPV疫苗的研究及宫颈癌的诊断奠定基础。　　方法：　　1.借助于DNAstar软件，分析HPV16L1的CDS区，选择抗原性最强的一段抗原表位编码区。　　2.从HPV16L1阳性组织中提取总DNA，利用设计的引物进行PCR生成HPV16L1编码区的DNA。　　***16L1的目的DNA和pET32a质粒分别进行双酶切,凝胶回收之后连接,转化DH5α大肠杆菌，筛选阳性克隆鉴定正确后，转化BL21大肠杆菌，诱导产生HPV16L1重组蛋白。随后重组蛋白利用镍柱进行纯化。　　4.利用市售抗体对HPV16L1重组蛋白的抗原特异性进行鉴定。　　结果：　　1.利用DNAstar软件，结合对HPV16L1序列信号肽位置的预测，疏水性、二级结构，结果表明碱基序列919-1314bp区段抗原表位较为富集。　　2.成功构建pET32a-16L1质粒。　　3.按照常规的制备重组蛋白的方法，成功表达并纯化HPV16L1重组蛋白。　　4.抗体鉴定表明本研究制备的HPV16L1重组蛋白抗原特异性良好。　　结论：　　本研究有针对性的制备HPV16L1重组蛋白，可以避免其他抗原表位的干扰，使得蛋白抗原特异性增强，并且重组蛋白能够较为容易得到。通过市售相应的抗体鉴定，本研究制备的HPV16L1重组蛋白抗原特异性良好。将为HPV疫苗的研究及宫颈癌的诊断奠定基础。

关键词：宫颈癌原核表达人乳头瘤病毒抗原表位分析基因克隆临床诊断

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淋病奈瑟菌肽基脯氨酰异构酶的原核表达及其作为候选疫苗的初步评价

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微生物学通报 2023年第11期50卷 5058-5067页

作者：胡欣谢晓婷李晓楠赵娟娟李紫玥陈佳琪张莉张雷大理大学病原与媒介生物研究所云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室云南大理671000 大理大学基础医学院病原生物学综合实验室云南大理671000 大理市第一人民医院云南大理671000

【背景】淋病是我国主要的性传播疾病之一,感染淋病奈瑟菌可促进人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)的传播和感染。目前我国淋病发病人数呈上升趋势,随着多重耐药菌株的出现,亟须研发保护性疫苗来防治淋病的传播和感... 详细信息

【背景】淋病是我国主要的性传播疾病之一,感染淋病奈瑟菌可促进人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)的传播和感染。目前我国淋病发病人数呈上升趋势,随着多重耐药菌株的出现,亟须研发保护性疫苗来防治淋病的传播和感染。【目的】分析淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)肽基脯氨酰异构酶(peptidyl-prolyl isomerase,PPIase)蛋白的高级结构和表位,探讨其作为疫苗和分子诊断靶点的潜力。【方法】利用生物信息学软件分析PPIase蛋白的极性、亲水性、柔韧性、表面可及性、二级和三级结构,以及T、B细胞表位等;用pET32a(+)质粒构建PPIase蛋白的原核表达系统并纯化蛋白,用纯化的重组蛋白和超声波破碎的NG全菌抗原分别免疫BALB/c小鼠,收获免疫血清;制备NG全细胞抗原,分别以全细胞抗原酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光试验检测重组PPIase蛋白血清抗体与NG全细胞表面抗原的结合情况。【结果】生物信息学分析结果显示,PPIase蛋白主要以α螺旋(39.34%)、无规则卷曲(30.51%)和延伸链(20.59%)为主;经表位分析筛选出5个B细胞优势表位、9个细胞毒性T淋巴细胞优势表位和18个辅助性T淋巴细胞优势表位;通过原核表达系统实现了PPIase重组蛋白的表达和纯化;纯化的重组蛋白可刺激BALB/c小鼠产生高效价的抗体,全细胞抗原的ELISA试验和间接免疫荧光试验的结果表明该蛋白诱导产生的血清抗体能与NG外膜表面抗原结合。【结论】PPIase蛋白作为一种外膜蛋白,具有良好的免疫原性和免疫反应性,其所诱导产生的特异抗体可以结合到NG表面,PPIase蛋白有作为NG候选疫苗的潜力和价值。

关键词：淋病奈瑟菌肽基脯氨酰异构酶抗原表位分析原核表达候选疫苗

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非洲猪瘟病毒抗原表位、融合蛋白及其应用

非洲猪瘟病毒抗原表位、融合蛋白及其应用

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作者：田克恭逄文强谭菲菲张许科 471000 河南省洛阳市中国(河南)自由贸易试验区洛阳片区高新开发区凌波路

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒抗原表位、融合蛋白及其应用。通过对非洲猪瘟病毒免疫原性蛋白抗原表位分析得到非洲猪瘟病毒抗原表位，即能促进非洲猪瘟病毒抗原特异性细胞免疫应答的多肽，具体选自SEQ ID ... 详细信息

标准号: CN118005747A

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒抗原表位、融合蛋白及其应用。通过对非洲猪瘟病毒免疫原性蛋白抗原表位分析得到非洲猪瘟病毒抗原表位，即能促进非洲猪瘟病毒抗原特异性细胞免疫应答的多肽，具体选自SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5。该多肽或含有该多肽的融合蛋白可产生显著的免疫反应，用于制备预防非洲猪瘟病毒引起的疾病的药物或非洲猪瘟病毒抗体检测产品。

关键词：非洲猪瘟病毒多肽抗原表位融合蛋白抗原特异性细胞抗原表位分析免疫原性蛋白兽用生物制品抗体检测免疫应答制备疾病预防应用

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一种罗非鱼链球菌二联亚单位纳米疫苗及其制备与应用

一种罗非鱼链球菌二联亚单位纳米疫苗及其制备与应用

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作者：王二龙王高学梁月刘佳凌飞刘天强刘韬曹冶 518000 广东省深圳市南山区粤海街道高新南四道19号R4大楼虚拟大学园B406

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种罗非鱼链球菌二联亚单位纳米疫苗及其制备与应用。本发明在保护性抗原Sip和Srr的抗原表位分析的基础上，将两种菌的保护性抗原的基因进行融合表达，得到二联重组蛋白rSS，以细菌纳米纤维素作为载... 详细信息

标准号: CN117018173A

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种罗非鱼链球菌二联亚单位纳米疫苗及其制备与应用。本发明在保护性抗原Sip和Srr的抗原表位分析的基础上，将两种菌的保护性抗原的基因进行融合表达，得到二联重组蛋白rSS，以细菌纳米纤维素作为载体，构建二联亚单位纳米疫苗，最后将制得的疫苗免疫接种罗非鱼，得出二联亚单位纳米疫苗对于无乳链球菌和海豚链球菌的相对保护率。本发明提供的二联亚单位纳米疫苗，对于无乳链球菌感染罗非鱼后的相对保护率为64.29%；对于海豚链球菌感染罗非鱼后的相对保护率为57.14%，效果显著。

关键词：纳米疫苗罗非鱼亚单位保护性抗原海豚链球菌无乳链球菌链球菌细菌纳米纤维素抗原表位分析生物医药技术融合表达疫苗免疫重组蛋白感染构建制备接种基因应用

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一种牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗

一种牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗

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作者：侯竹美 266100 山东省青岛市城阳区长城路700号

本发明的目的是提供一种牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗，即采用生物技术对牙鲆弹状病毒G蛋白进行抗原表位分析、设计，获得一种牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG，并以该融合蛋白作为抗原来制备牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗。本发明中... 详细信息

标准号: CN112679616B

本发明的目的是提供一种牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗，即采用生物技术对牙鲆弹状病毒G蛋白进行抗原表位分析、设计，获得一种牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG，并以该融合蛋白作为抗原来制备牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗。本发明中牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG，其编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:1；其中一种核苷酸序列为SEQ ID NO:2。本发明利用毕赤酵母系统构建了能表达牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG的基因工程菌。将重组表达的蛋白纯化后制备成基因工程亚单位疫苗，可使免疫后牙鲆获得免疫保护。

关键词：牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗新型融合蛋白制备抗原表位分析牙鲆基因工程菌氨基酸序毕赤酵母编码蛋白蛋白纯化核苷酸序免疫保护融合蛋白系统构建重组表达生物技术

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HEV ORF2单克隆抗体的筛选及用于病毒检测的研究

HEV ORF2单克隆抗体的筛选及用于病毒检测的研究

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作者：徐颖河北大学

学位级别：硕士

戊型肝炎是由戊肝病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的一种传染性疾病,目前发病率已超过甲肝,是我国急性肝炎的主要类型。HEV基因组全长序列含有3个开放蛋白编码框(ORF1～3),其中ORF2基因编码HEV的主要结构蛋白。ORF2蛋白免疫原性强且包... 详细信息

戊型肝炎是由戊肝病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的一种传染性疾病,目前发病率已超过甲肝,是我国急性肝炎的主要类型。HEV基因组全长序列含有3个开放蛋白编码框(ORF1～3),其中ORF2基因编码HEV的主要结构蛋白。ORF2蛋白免疫原性强且包含中和表位集中区域。目前已有基于HEV ORF2蛋白研发的HEV抗原检测试剂盒应用于临床诊断及治疗监测中,但对于农村地区和城镇社区基层医疗单位,需要更快速、便捷的HEV抗原检测方法。本研究前期制备出多株抗HEV ORF2单克隆抗体,通过间接ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)实验对单抗进行型别分析,比较单抗间亲和力差异,筛选出与抗原结合能力强、具有广谱性的单克隆抗体;利用免疫印迹法(Western blot,WB)和竞争抑制ELISA实验对单克隆抗体识别ORF2抗原的空间位点及空间位置特征进行分析,在此基础上利用HEV疫苗免疫后兔血清和自然感染者血清分析抗体优势表位,为HEV诊断、疫苗及感染机制的研究提供了理论基础。将上述优势抗体进行组合,采用双抗体夹心法研制HEV尿液抗原检测的免疫荧光试剂,并对该快检试剂进行灵敏度和特异度评价。在制备的26株抗HEV ORF2单克隆抗体中,共筛选出8株与HEV ORF2抗原亲和力高且广谱的单抗。这些单抗重链型别为Ig G,轻链型别为Kappa,其中3株单抗的抗原表位为线性表位,另外5株单抗需进一步分析。将筛选的8株单抗和已公开报道的3株HEV ORF2中和性单抗按照抗原位点的空间位置关系分为四组,利用HEV疫苗免疫后兔血清和自然感染者血清分析抗体优势表位,发现第三组单抗(编号为8#、15#、17#、34#、58#、77#)是疫苗接种后血清和自然感染后血清中的优势抗体,其中17#单抗对自然感染后血清和抗原结合的阻断效果更加明显。将上述优势单抗进行两两组合,选择编号为15#和34#的单抗制作成免疫荧光检测试剂,该试剂能够成功检测出戊型肝炎患者尿液样本中的HEV抗原,灵敏度为76.9%,特异度为96.9%。对免疫荧光快检试剂进行优化后,灵敏度与特异度有所提高。将HEV阳性尿液样本系列稀释,免疫荧光快检试剂能检测到的终点稀释度较低于HEV抗原检测试剂盒,需进一步优化。综上所述,本研究对8株HEV ORF2单抗进行亲和力、型别及抗原表位等方面系统分析,发现了6株在戊肝疫苗接种后兔血清和自然感染HEV患者血清中占据表位优势的HEV ORF2单抗,其中1株单抗在自然感染者血清中的表位优势明显高于疫苗接种后的机体血清,提示疫苗免疫后产生的抗体可能不足以全面保护机体预防HEV病毒的感染。利用优势单抗制备出的免疫荧光快检试剂,能够检测出HEV患者尿液中的戊肝抗原,但灵敏度需进一步提高。该方法操作简单,耗时短,初步显示了其临床应用潜力。

关键词：戊型肝炎病毒单克隆抗体亲和力分析抗原表位分析抗原检测试剂评价

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一种与巴贝虫病患血清特异性结合的多肽片段及其应用

一种与巴贝虫病患血清特异性结合的多肽片段及其应用

引用

作者：程训佳满素勤付永锋 200433 上海市杨浦区邯郸路220号

本发明属生物医学及临床应用技术领域，涉及一种与巴贝虫病患血清特异性结合的多肽片段及其氨基酸序列，本发明通过对巴贝虫裂殖子表面蛋白BMSA的结构与抗原表位分析得到一系列多肽片段，通过多肽合成制备多肽片段，可用于制备巴贝虫病... 详细信息

标准号: CN109021089B

本发明属生物医学及临床应用技术领域，涉及一种与巴贝虫病患血清特异性结合的多肽片段及其氨基酸序列，本发明通过对巴贝虫裂殖子表面蛋白BMSA的结构与抗原表位分析得到一系列多肽片段，通过多肽合成制备多肽片段，可用于制备巴贝虫病的血清学免疫诊断试剂，本发明能克服巴贝虫病诊断中血涂片虫体漏检与误诊，明显有宜于提高巴贝虫病诊断的特异性和敏感性。

关键词：巴贝虫病多肽片段巴贝虫制备特异性和敏感性血清学免疫诊断抗原表位分析临床应用技术氨基酸序列裂殖子表面特异性结合诊断病患血清多肽合成生物医学血涂片虫体可用漏检误诊蛋白

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