检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：贺美广东海洋大学

学位级别：硕士

本文利用米曲霉对黄芩苷进行了生物转化，使黄芩苷转化为其苷元黄芩素，并对黄芩苷的生物转化培养基进行了碳源与氮源的优化，以提高黄芩苷的转化率。同时还从转化培养基中对转化产物黄芩素进行了提取、纯化并鉴定，进一步研究了黄芩素... 详细信息

本文利用米曲霉对黄芩苷进行了生物转化，使黄芩苷转化为其苷元黄芩素，并对黄芩苷的生物转化培养基进行了碳源与氮源的优化，以提高黄芩苷的转化率。同时还从转化培养基中对转化产物黄芩素进行了提取、纯化并鉴定，进一步研究了黄芩素的抑制副溶血弧菌噬菌体与凡纳滨对虾WSSV作用。主要实验工作及结果如下：1、利用米曲霉的两步活化法将黄芩苷转化为黄芩素，并对转化产物进行了提纯与鉴定。转化条件为：液体发酵，pH6，30℃，利用综合马铃薯培养基与玉米芯培养基两步发酵。所得的玉米芯发酵液加甲醇混匀后过滤，通过高效液相色谱检测，结果表明米曲霉已经将黄芩苷转化为黄芩素。同时用乙醚萃取法从玉米芯发酵液中萃取到黄色固体提取物，经过高效液相色谱与标准品对照鉴定，该提取物为黄芩素。2、通过对黄芩苷的转化培养基的碳源与氮源优化，使黄芩苷的转化率由1.09％提高至88.36％，并确定了黄芩苷的生物转化培养基的最适配方为：0.0017％精氨酸+0.0017％缬氨酸+0.0017％谷氨酸+0.0017％丙氨酸+0.0017％组氨酸+0.0017％酪氨酸+0.01％尿素，0.4％KH2PO4，0.04％CACl2，0.04％MGSO4，pH6。3、利用转化产物黄芩素进行抑制副溶血弧菌噬菌体裂解作用的研究，并比较了黄芩素悬浊液与黄芩素环糊精包合物的副溶血弧菌噬菌体裂解作用的抑制效果。结果表明，黄芩素悬浊液及黄芩素环糊精包合物的抑制副溶血弧菌噬菌体裂解作用效果的强弱与其浓度、作用时间呈正相关，黄芩素环糊精包合物的抑制副溶血弧菌噬菌体裂解作用比黄芩素悬浊液稍强。4、以凡纳滨对虾为研究对象，研究了黄芩素环糊精注射液对WSSV的抑制作用。通过死亡率以及NOS、PO、血蓝蛋白、虾青素、血细胞计数等免疫学指标的变化来检测黄芩素对凡纳滨对虾WSSV的抑制效果。结果表明，黄芩素使感染WSSV凡纳滨对虾的死亡率由100％降低至5％，并且在NOS、PO、血蓝蛋白、虾青素、血细胞数量上表现出一定的差异性，注射过黄芩素的药物组与未注射过黄芩素的感染组的凡纳滨对虾不仅各免疫因子的变化趋势不同，而且各免疫因子的变化幅度也不同，前者的变化幅度均小于后者，这说明，黄芩素对WSSV起到了一定的抑制作用，从而使得凡纳滨对虾体内所诱导产生的各种免疫因子较少。

关键词：黄芩苷生物转化抗病毒作用米曲霉

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RNA-Seq技术筛选抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的宿主限制性因子及其抗病毒作用验证

RNA-Seq技术筛选抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的宿主限制性因子及其...

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作者：马改妮中国农业科学院

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种急性、高度传染的病毒性传染病,对世界养猪业造成巨大的经济损失。2006年,我国出现高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenic PRRSV,HP-PRRSV),具有很强的感染力和致病性,给我国养猪业带来更大的危害。猪肺泡巨噬细胞(Porcine pulmonary alveolar macrophages,PAMs)是HP-PRRSV的主要靶细胞。I型干扰素(Interferon,IFN)具有抑制PRRSV复制的能力,而IFN发挥抗病毒作用主要是依靠干扰素刺激基因(Interferon stimulated genes,ISGs)编码的宿主限制性因子。寻找抑制HP-PRRSV复制的宿主限制性因子已经成为近年来研究的热点,但IFN刺激产生的限制性因子数量众多,筛选工作量巨大。RNA-Seq技术是新一代测序技术,具有高通量、效率高、灵敏度好的优势。本试验中,利用RNA-Seq技术对IFN处理的PAMs中抗HPPRRSV限制性因子进行高通量筛选。将抗PRRSV的限制性因子ISG15作为指示因子,根据感染PRRSV的PAMs中ISG15的表达变化,选择接毒后12小时作为收样时间。本实验设置了4个不同处理组,分别为IFN、IFN+PRRSV、PRRSV和C(空白对照组)组。用猪IFN-α处理PAMs诱导细胞产生抗病毒状态,再感染HP-PRRSV,进而用RNA-Seq技术检测IFN预处理的PAMs对HP-PRRSV的应答变化。IFN-α处理细胞共检测到346个上调的差异性表达基因(DEGs),其中有93个DEGs在HPPRRSV感染细胞中表达水平显著下降。富集分析这93个下降表达的DEGs,主要分布在免疫应答相关的通路,如“RIG-I样受体信号通路”、“病毒应答”、“刺激应答”。在表达差异的16个抗病毒DGEs中,包括IRG6(RSAD2)、IFI44、ISG20、PKR、LOC100738990(TRIM5)、BST2、OAS1、IFIT1(ISG56)、IRF7、IFIT2、ISG15、LOC100627004(IFITM1)、ISG12(A)(IFI27)、IFITM3、IFIT5,其中15个的表达可以被HP-PRRSV抑制。为了验证以上16个抗病毒DGEs是否具有抑制HP-PRRSV复制的作用,采用siRNA干扰技术下调其表达,然后感染HP-PRRSV,分析病毒复制水平。结果发现PKR、OAS1、IFIT1(ISG56)、ISG15、IFI44、ISG20、BST2、IRF7、IFIT2、LOC100627004(IFITM1)、IFITM3、IFIT5和GBP1均能显著抑制PRRSV的复制。谷氧还蛋白1(glutaredoxin 1,GLRX1)是一种具有抗氧化、信号转导、抗凋亡等多功能的蛋白。RNA-Seq检测结果显示IFN可以显著上调GLRX1的表达,但HP-PRRSV感染能显著抑制其表达。siRNA干扰下调PAMs中GLRX1的表达,HP-PRRSV复制显著增加,说明GLRX1能够抑制HP-PRRSV的增殖。比较感染PRRSV猪和健康猪的各组织中的GLRX1表达差异,发现感染PRRSV猪腹股沟淋巴结、心脏、肺门淋巴结中的GLRX1表达量显著下降,而小肠、肺脏和肌肉中的GLRX1表达量显著上升。上述结果表明PRRSV能够影响猪不同组织的GLRX1的表达。本研究采用RNA-Seq技术筛选了抑制HP-PRRSV复制的宿主限制性因子,并验证了其抗HP-PRRSV复制的作用,为研究HP-PRRSV免疫应答和免疫逃逸提供了基础数据。

关键词：猪呼吸与繁殖综合征 RNA-Seq 宿主限制性因子抗病毒作用

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喘康平冲剂抗病毒作用的实验研究

喘康平冲剂抗病毒作用的实验研究

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作者：李竹琴黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

该课题采用组织细胞培养技术,应用细胞病变抑制法研究喘康平冲剂病毒(呼吸道合胞病毒、柯萨毒病毒B<,3>、流感病毒A<,1>)作用,选取抑制病毒指数为指标,将实验药物稀释成不同浓度,以中药制剂双黄连口服液作... 详细信息

该课题采用组织细胞培养技术,应用细胞病变抑制法研究喘康平冲剂病毒(呼吸道合胞病毒、柯萨毒病毒B<,3>、流感病毒A<,1>)作用,选取抑制病毒指数为指标,将实验药物稀释成不同浓度,以中药制剂双黄连口服液作为对照药物,并在显微镜下观察了在体外细胞培养中药物抗病毒作用,对其作用机理进行了初步研究与探讨.结果表明:(1)喘康平冲剂对呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒B<,3>、流感病毒A<,1>确有抑制作用,与对照药双黄连口服液一致或接近;(2)其体外抗病毒作用机理主要是直接的灭活作用,其次也可能抑制了病毒复制的某一环节.

关键词：喘康平冲剂抗病毒作用组织细胞培养技术

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猪源抗PEDV益生菌筛选及抗病毒作用研究

猪源抗PEDV益生菌筛选及抗病毒作用研究

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作者：黄宗洋佛山科学技术学院

学位级别：硕士

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起仔猪肠炎和死亡的重要病原之一,给养猪业造成了巨大威胁。益生菌功能强大,具有安全性和实用性等优点,在医药、农业及食品等行业发挥着重要的作用并已受到广泛认可,在畜牧... 详细信息

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起仔猪肠炎和死亡的重要病原之一,给养猪业造成了巨大威胁。益生菌功能强大,具有安全性和实用性等优点,在医药、农业及食品等行业发挥着重要的作用并已受到广泛认可,在畜牧业中早已作为饲料添加剂被广泛应用。益生菌的抗病毒作用逐渐受到人们的关注,本研究拟从猪粪便中筛选具有抗PEDV作用的益生菌。本研究从猪粪便中分离、纯化出21株疑似乳酸菌,通过16S r DNA分子生物学方法从中鉴定出12株益生菌,分别为9株罗伊氏乳杆菌、1株屎肠球菌、1株植物乳杆菌和1株戊糖片球菌。利用Vero细胞模型,通过CCK-8法分别探究了12株益生菌代谢产物对Vero细胞的细胞毒性作用和对PEDV的体外抑制效果。根据病毒抑制试验结果,从12株益生菌中初步筛选出3株对PEDV具有较高抑制率的益生菌(屎肠球菌EFA5、罗伊氏乳杆菌LRC8和戊糖片球菌P173)作为抗PEDV候选菌株,综合评估其作为益生菌所具备的抗PEDV潜力。通过生长试验、产酸试验、耐酸试验、耐胆盐试验和黏附试验,进一步筛选出了2株抗逆性强、黏附率高的益生菌(罗伊氏乳杆菌LRC8和戊糖片球菌P173)用于后续抗病毒试验。在体外抗病毒试验中,首先利用反转录实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法,在Vero细胞模型上探究了罗伊氏乳杆菌LRC8和戊糖片球菌P173代谢物对PEDV的直接灭活效果,及三种不同处理方式(预处理:先加代谢产物后加病毒;共处理组:代谢产物和病毒同时加入;后处理组:先加病毒再加代谢产物)的抗PEDV效果。接着通过病毒空斑试验、间接免疫荧光试验、RT-q PCR及免疫印迹等方法,探究了罗伊氏乳杆菌LRC8和戊糖片球菌P173代谢物对病毒滴度、病毒m RNA和蛋白合成、及对PEDV诱导的炎性因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和MCP-1)的m RNA水平的影响。试验结果表明,罗伊氏乳杆菌LRC8和戊糖片球菌P173代谢物均对PEDV有一定的灭活作用,且代谢物的三种不同处理方式均具有抗PEDV效果。此外,罗伊氏乳杆菌LRC8和戊糖片球菌P173代谢物均能显著降低病毒滴度,抑制病毒m RNA和蛋白质的合成,下调PEDV诱导的炎症因子m RNA的水平。在体外抗病毒试验中,罗伊氏乳杆菌LRC8代谢物对PEDV的抑制效果不如戊糖片球菌P173,因此,最终选择了戊糖片球菌P173用于体内抗病毒作用研究。在体内抗病毒试验中,选取15头健康断奶仔猪随机分为3组(即空白组、攻毒组和治疗组),每组5头。观察仔猪精神状态良好,PEDV抗原抗体检测均为阴性,随后进行攻毒。此后,治疗组每天分两次灌服10m L含3×10～9CFU戊糖片球菌P173的菌液,另外两组灌服等量的PBS,治疗期为7天。试验结束时将所有仔猪安乐死,剖检观察病变,并采集空肠组织和粪便,测定空肠组织的病理变化及空肠组织和粪便中的病毒载量。试验结果表明,戊糖片球菌P173可以降低仔猪感染PEDV后的死亡率,减轻空肠组织的病理变化,抑制病毒对猪肠道的感染,减少粪便中的排毒量。综上所述,本试验从猪粪便中成功分离出12株益生菌,并从中初步筛选出3株具有抗PEDV潜力的益生菌。通过抗逆试验、黏附试验、体外抗病毒效果评估等方法,进一步筛选出了1株戊糖片球菌P173用于体内抗PEDV作用研究。结果表明,罗伊氏乳杆菌LRC8和戊糖片球菌P173代谢物可在体外发挥抗PEDV作用,并能显著下调炎症因子的表达水平。动物试验结果表明,戊糖片球菌P173可以在体内发挥抗PEDV效果,对于感染PEDV的仔猪具有一定的治疗作用。

关键词：益生菌猪流行性腹泻病毒抗病毒作用动物实验

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银鲫H克隆系两个干扰素基因的鉴定及抗病毒作用

银鲫H克隆系两个干扰素基因的鉴定及抗病毒作用

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作者：臧照星中国科学院大学

学位级别：硕士

哺乳类的研究表明，干扰素在机体抗病毒感染过程中发挥重要作用。最近的研究表明，三种银鲫克隆系A+、F和H系在感染鲫疱疹病毒时，A+系抗病毒能力最弱，F系次之，而H系最强，但是干扰素在其中是否发挥功能还不清楚。　　在本研究中，检... 详细信息

哺乳类的研究表明，干扰素在机体抗病毒感染过程中发挥重要作用。最近的研究表明，三种银鲫克隆系A+、F和H系在感染鲫疱疹病毒时，A+系抗病毒能力最弱，F系次之，而H系最强，但是干扰素在其中是否发挥功能还不清楚。　　在本研究中，检测IFN基因在GCRV感染的A+、F和H克隆系胚胎中的表达，发现在H克隆系，IFN基因的组成型表达最高，GCRV诱导的表达倍增也最高，表明IFN基因可能在H系银鲫的抗病毒感染中发挥作用。随后利用RACE-PCR方法在H克隆系中克隆了4个IFN基因的cDNA序列，全长为958bp、695bp、1115bp和702bp，编码由183aa、152aa、183aa和140aa组成的四个蛋白，分别命名为CgeIFNa1、CgiIFNa1、CgeIFNa2和CgiIFNa2。CgeIFNa1/2推导的氨基酸序列的N端有由21个氨基酸组成的信号肽，因此可能编码两个分泌蛋白，即胞外干扰素;而CgiIFNa1/2推导的氨基酸序列中无信号肽，则可能编码两个胞内干扰素。进一步序列分析发现转录本CgeIFNa1和CgiIFNa1由一个基因组IFN1基因通过转录选择剪接而来，而CgeIFNa2和CgiIFNa2转录本是从另外一个基因组IFN2基因转录后通过选择剪接而来。　　组织表达分析表明，这四个转录本在所有组织中都有组成型表达;在CaHV感染的组织中，有信号肽的转录本CgeIFNa1/2被显著诱导表达，而没有信号肽的转录本CgiIFNa1/2在大部分组织中几乎没有被诱导表达。过量表达分析表明，有信号肽的转录本CgeIFNa1/2能显著诱导如Mx、Viperin、ISG15等ISG的表达，显著抑制病毒在细胞中的复制;而无信号肽的转录本CgiIFNa1/2则几乎没有显示抗病毒作用。在EPC细胞中用Western Blot检测过量表达的CgeIFNa1/2和CgiIFNa1/2蛋白时，发现CgeIFNa1/2蛋白有糖基化修饰，其中CgeIFNa1有一个糖基化位点，CgeIFNa2有两个糖基化位点。CgiIFN1/2蛋白的相应位点虽然预测有保守的糖基化位点，但表达蛋白没有发现有糖基化修饰。突变研究表明，CgeIFNa1/2蛋白有无糖基化修饰不影响其抗病毒功能。缺失研究表明信号肽对胞外干扰素的抗病毒作用至关重要，因为CgeIFNa1缺失信号肽导致其抗病毒活性基本丧失，CgeIFNa2抗病毒能力在缺失信号肽后也显著减弱。　　本文研究结果将有助于理解银鲫胞内和胞外IFN在抗病毒感染中的功能机理。

关键词：异育银鲫干扰素基因基因鉴定抗病毒作用

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新型脂质体吸附乙肝疫苗的稳定性及其抗病毒作用

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中国生物制品学杂志 2003年第6期16卷 359-362页

作者：易学瑞祖萍袁有成张宜俊孔祥平曾滢汪恩浩解放军第四五八医院全军传染病中心广州510602 深圳康泰生物制品股份有限公司深圳518057

目的研究新型脂质体及其与乙肝疫苗结合物的稳定性以及结合物抗病毒作用。方法通过外观观察、粒径检测及诱导BALB/c小鼠产生特异性抗体IgG1和IgG2a的水平考察稳定性;免疫HBV转基因小鼠,检测其血清中HBsAg和抗-HBs的滴度。结果 4℃存放... 详细信息

目的研究新型脂质体及其与乙肝疫苗结合物的稳定性以及结合物抗病毒作用。方法通过外观观察、粒径检测及诱导BALB/c小鼠产生特异性抗体IgG1和IgG2a的水平考察稳定性;免疫HBV转基因小鼠,检测其血清中HBsAg和抗-HBs的滴度。结果 4℃存放1年,脂质体有少量沉淀产生,粒径变大;而脂质体与乙肝疫苗结合物全部沉淀,粒径变大,但均易摇匀,无结块;结合物4℃存放1年,诱导BALB/c小鼠产生特异性抗体IgG1和IgG2a的水平没有下降;HBV转基因小鼠于免疫后2、3、4个月,体内的HBsAg的A值较免疫前有显著下降。抗-HBs在初次免疫2个月后的阳转率为100％。结论脂质体吸附乙肝疫苗稳定性好,且有一定的抗病毒作用。

关键词：脂质体乙肝疫苗稳定性抗病毒作用

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I型单纯疱疹病毒通过其皮层蛋白UL41逃逸viperin抗病毒作用的分子机制

I型单纯疱疹病毒通过其皮层蛋白UL41逃逸viperin抗病毒作用的分子...

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作者：申广辉苏州大学

学位级别：硕士

天然免疫系统是抵抗病原微生物入侵的第一道防线，其中 I型干扰素（interferon, IFN-I）介导的抗病毒天然免疫是宿主防御病毒感染的主要形式。病毒感染可诱导大多数类型的细胞分泌IFN-I，后者与位于细胞表面的特异性受体结合，并诱导超... 详细信息

天然免疫系统是抵抗病原微生物入侵的第一道防线，其中 I型干扰素（interferon, IFN-I）介导的抗病毒天然免疫是宿主防御病毒感染的主要形式。病毒感染可诱导大多数类型的细胞分泌IFN-I，后者与位于细胞表面的特异性受体结合，并诱导超过300种干扰素刺激基因（interferon-stimulates gene，ISG）的表达，其中 viperin（virus inhibitory protein, endoplasmic reticulum associated, interferon inducible）已被证明具有直接的抗病毒活性。　　Viperin由Cig5基因编码，最初在感染人巨细胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）的成纤维细胞中被鉴定出来;随后，其mRNA序列被正式命名为viperin。Viperin的组成型表达水平较低。但是，IFN-I、脂多糖和poly(I:C)均能强烈诱导其表达。除HCMV外，许多DNA和RNA病毒均可诱导viperin表达并抑制这些病毒的复制，包括伪狂犬病毒（PRV）、丙型肝炎病毒（HCV）、流感病毒和登革热病毒（DENV）等。因此，viperin也被视作抗病毒蛋白。然而，viperin在人类I型单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus type1, HSV-1）复制中的作用尚未见报道。本研究重点探讨viperin在HSV-1感染中的作用以及病毒逃逸viperin抗病毒作用的分子机制。　　尽管viperin可以拮抗多种DNA或RNA病毒感染，而我们的病毒感染水平实验表明，viperin对野生型（WT）HSV-1的增殖和病毒蛋白的表达均无影响。筛选实验发现，外源超表达的HSV-1皮层蛋白UL41下调viperin的表达。生物化学实验表明，WT HSV-1和外源超表达的UL41可降解viperin的mRNA含量，而UL41缺失（ΔUL41）HSV-1对viperin的mRNA水平没有影响。同时，外源转染的viperin显著抑制ΔUL41 HSV-1的复制，而对WT HSV-1的复制则没有影响。RNA干扰实验表明，干扰HEK293T细胞中viperin表达可使△UL41 HSV-1滴度升高至接近WT HSV-1水平。进一步的实验表明，过表达viperin可抑制ΔUL41 HSV-1的复制，但对ΔUs11 HSV-1的复制没有影响。这些结果均表明，HSV-1逃逸viperin抗病毒作用的分子机制是通过其具有核酸内切酶活性的皮层蛋白UL41降解viperin的mRNA得以实现的。该研究发现了HSV-1逃逸宿主天然免疫的新机制，将为开发预防和治疗HSV-1的新药物和疫苗奠定理论基础。

关键词： I型单纯疱疹病毒 UL41皮层蛋白抗病毒作用 viperin基因天然免疫

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载脂蛋白E的抗病毒作用

载脂蛋白E的抗病毒作用

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作者：季苗中国科学院大学

学位级别：硕士

由于病毒种类众多，传播速度快、社会危害性强，且能通过不断变异逃逸机体免疫监控，常规的疫苗防治不能及时跟上病毒变异的速度，大大降低了现有治疗方法的有效性，因此寻找新的阻碍病毒感染的切入点尤为重要。了解病毒与宿主之间的相... 详细信息

由于病毒种类众多，传播速度快、社会危害性强，且能通过不断变异逃逸机体免疫监控，常规的疫苗防治不能及时跟上病毒变异的速度，大大降低了现有治疗方法的有效性，因此寻找新的阻碍病毒感染的切入点尤为重要。了解病毒与宿主之间的相互作用，从聚焦于靶向病毒的防治方法转为靶向病毒复制所需的宿主因子，提供了抗病毒免疫的新思路，可能为疾病预防和控制提供线索。　　前期工作中，我们使用基于CRISPR/Cas9的全基因组筛选，获得了有抵抗IAV感染潜力的载脂蛋白家族的基因，通过使用IAV感染细胞系和小鼠，发现敲除载脂蛋白ApoE之后，无论是细胞系还是小鼠中IAV的感染都会增强，而且证明了ApoE对IAV感染的影响是通过影响病毒入侵细胞的过程实现的。但是，ApoE对其他病毒的作用仍未可知。本课题使用SARS-CoV-2、ZIKV和VSV等病毒感染细胞系，深入探究了ApoE抵抗多种病毒感染的潜力。通过使用不同病毒感染ApoE敲除的细胞系，证明了ApoE敲除后，包括SARS-CoV-2在内的多种病毒的感染增强，而且也是通过影响病毒的入侵实现的。　　由于ApoE能够影响多种病毒的感染，我们认为这是通过一种非病毒特异性的作用来实现的。ApoE是一种载脂蛋白，ApoE敲除后，细胞中胆固醇含量明显高于WT细胞。洛伐他汀是胆固醇合成限速酶HMGCR的抑制剂，添加洛伐他汀之后SARS-CoV-2的感染减弱。在给ApoE KO的细胞系中加入洛伐他汀之后，由于ApoE敲除而增加的病毒感染又降到了与WT相近的水平。说明细胞内病毒的增加是由于胞内胆固醇累积造成的。　　病毒感染能上调ApoE表达，提示我们病毒感染可以调控ApoE表达。而感染Ⅰ型IFN受体敲除的小鼠的BMDM细胞，或直接感染Ⅰ型IFN受体敲除的小鼠，这种上调就消失了。Reporter assay显示，添加STAT1后，ApoE报告基因表达上调，但是敲除STAT1或STAT2后，调控作用消失。这说明ApoE的表达受到STAT调控。　　综上，本研究基于CRISPR/Cas9系统，筛选出能够抵抗流感病毒感染的载脂蛋白家族基因，并探讨了其对SARS-CoV-2、ZIKV、VSV等多种病毒的抵抗作用;除此之外，我们揭示了ApoE抗病毒作用的机制及其调控，即转录因子STAT调控ApoE表达，ApoE通过调控胞内胆固醇，抑制多种病毒感染。

关键词：病毒感染载脂蛋白抗病毒作用胆固醇

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外泌体介导传递microRNA靶向ICP4蛋白抗病毒作用的研究

外泌体介导传递microRNA靶向ICP4蛋白抗病毒作用的研究

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作者：王蕾广州医科大学

学位级别：硕士

研究背景：　　单纯疱疹病毒1型（HSV-1）是一种人类嗜神经病毒，人群感染率高，且易发生潜伏感染，在一定条件如紧张焦虑等刺激下，处于潜伏状态的病毒被激活引起复发感染，引起一系列严重症状。目前对原发性HSV-1感染和疾病再激活的... 详细信息

研究背景：　　单纯疱疹病毒1型（HSV-1）是一种人类嗜神经病毒，人群感染率高，且易发生潜伏感染，在一定条件如紧张焦虑等刺激下，处于潜伏状态的病毒被激活引起复发感染，引起一系列严重症状。目前对原发性HSV-1感染和疾病再激活的治疗是非选择性的，主要是无环鸟苷等嘌呤核苷类及其类似物，如阿昔洛韦（Acyclovir）、泛昔洛韦（Valaciclovir）等，他们的作用靶点是病毒DNA聚合酶，抑制病毒的复制，对潜伏感染的病毒无效，并且具有很多不良副作用，而且随着抗疱疹病毒药物的广泛使用，关于耐药株的报道也越来越多。因此，开发新的抗病毒治疗策略以应对HSV急性感染和潜伏感染是抗病毒研究的重要方向。　　目的：　　设计miRNA序列，不仅靶向下调HSV-1复制过程中的关键蛋白ICP4的表达，并且该人工设计的miRNA序列还携带外泌体包装分泌的特殊序列，可以使miRNA天然包裹进入外泌体，使外泌体成为miRNA的天然载体。外泌体作为载体，包裹miRNA运输至受体细胞，并将有效的miRNA成分传递给受体细胞，起到明显的抗感染效果。本课题主要探讨外泌体包裹miRNA作为新的抗病毒治疗策略的可行性，研究其抑制病毒感染的效率。　　方法：　　1.设计miRNA序列靶向下调ICP4蛋白的表达，构建miR401表达载体。　　2.构建筛选靶向沉默ICP4的miRNA稳定表达细胞系HEp-miR401。　　3.用聚乙二醇沉淀的方法提取外泌体。　　4.用qNano和Westernblot的方法验证提取的外泌体的特征。　　5.用RealtimePCR方法检测miRNA稳定表达细胞系产生的外泌体中包裹的miR401的量。　　6.用病毒滴定、Westernblot和RealtimePCR方法验证miRNA稳定表达细胞系产生的外泌体的抗病毒作用。　　7.用CD9蛋白滴定HEp-miR401细胞系产生的外泌体中包裹miR401的量。　　***和病毒滴定验证外泌体递呈miR401抑制HSV-1复制是剂量依赖性的。　　结果：　　1.成功构建miR401表达载体，靶向下调ICP4蛋白表达。　　2.构建miR401表达的稳定细胞系HEp-miR401，该稳定表达的细胞系能够抑制HSV-1病毒复制。　　***-miR401稳定细胞系及HEp-2细胞能够产生外泌体。　　***-miR401稳定细胞系产生的外泌体能够将miR401包裹进入外泌体。　　***401表达的稳定细胞系HEp-miR401产生的外泌体介导miR401递送至受体细胞。　　***-miR401稳定细胞系产生的外泌体中的有效成分miR401可以明显抑制HSV-1病毒复制，而且这种抗病毒效应是呈剂量依赖性的。　　结论：　　我们设计miR401靶向HSV-1复制的关键蛋白ICP4，沉默ICP4蛋白，且可以使我们设计的miRNA天然包裹进入外泌体，使外泌体成为miRNA的天然载体，发挥外泌体作为药物载体的各种优势，从而进行抗病毒治疗新方法研究。而且这一策略可以延申至抗肿瘤、治疗肝炎等领域。

关键词： microRNA 抗病毒作用外泌体单纯疱疹病毒 miRNA ICP4蛋白

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香石清解袋泡剂抗病毒作用的实验研究

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中华实验和临床病毒学杂志 1994年第1期8卷 45-47页

作者：刘征利张礼璧赵素兰李洪海彭征屏孙斌辉蒋弘中国中医研究院西苑医院中国预防医学科学院病毒学研究所

香石清解袋泡剂能有效治疗夏季上呼吸道病毒感染高热。为探讨其抗病毒机理，我们进行了几种给药途径下的细胞病变抑制试验和红细胞吸附抑制试验。结果为：①对于Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒，Ａ、Ｂ型流感病毒，呼吸道合胞病毒及人类巨细胞病... 详细信息

香石清解袋泡剂能有效治疗夏季上呼吸道病毒感染高热。为探讨其抗病毒机理，我们进行了几种给药途径下的细胞病变抑制试验和红细胞吸附抑制试验。结果为：①对于Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒，Ａ、Ｂ型流感病毒，呼吸道合胞病毒及人类巨细胞病毒，该药在一定浓度下能直接灭活病毒，也能抑制细胞内病毒的增殖；②对单纯疱疾病毒而言，该药上述两种抗病毒作用均不亚于公认有效药物无环鸟苷，对巨细胞病毒而言则优于无环鸟苷。

关键词：香石清解袋泡剂抗病毒作用临床

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