检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2022年第4期43卷 107-111页

作者：高婷袁芳艳刘泽文刘威周丹娜杨克礼段正赢郭锐梁婉王宁宁周锐田永祥湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北武汉430064 华中农业大学动物医学院生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称,具有强效的抗菌与杀毒作用,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、DNA病毒及RNA病毒都具有抑制活性。由于茶多酚无毒副作用、具有保健功能等特点,对机体无刺激,因此被广泛应用于食品化工、医疗卫生等行业。茶... 详细信息

茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称,具有强效的抗菌与杀毒作用,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、DNA病毒及RNA病毒都具有抑制活性。由于茶多酚无毒副作用、具有保健功能等特点,对机体无刺激,因此被广泛应用于食品化工、医疗卫生等行业。茶多酚抗菌杀毒的作用使其有望成为防治疾病的新型生物活性分子,为感染性疾病防控研究提供新思路。作者通过对国内外有关茶多酚在抗菌杀毒方面文献的搜集整理,综述了茶多酚抗菌杀毒的作用方式,以期为了解茶多酚在微生物领域的应用及其作用机制提供参考。

关键词：茶多酚抗菌作用抗病毒作用

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用鼠艾滋病模型评价虎杖水提液的抗病毒作用

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中国病毒学 1998年第4期13卷 306-311页

作者：蒋岩王红霞鲍作义朱关福军事医学科学院微生物流行病研究所P3实验室

以脾指数、病毒抗原阳性细胞、血清ＩｇＧ和脾细胞对刀豆蛋白Ａ的刺激应答为指标，用ＬＰＢＭ５Ｃ５７ＢＬ／６鼠艾滋病模型评价了虎杖水提液的抗病毒作用。结果显示：虎杖水提液可以部分地抑制ＬＰＢＭ５病毒导致的Ｃ５７ＢＬ／... 详细信息

以脾指数、病毒抗原阳性细胞、血清ＩｇＧ和脾细胞对刀豆蛋白Ａ的刺激应答为指标，用ＬＰＢＭ５Ｃ５７ＢＬ／６鼠艾滋病模型评价了虎杖水提液的抗病毒作用。结果显示：虎杖水提液可以部分地抑制ＬＰＢＭ５病毒导致的Ｃ５７ＢＬ／６鼠的脾肿大，免疫抑制和病毒血症；病毒接种前和接种同时给药效果较好，接种一星期以后开始的治疗对感染鼠的各项异常指标没有明显的改善作用，提示早期用药效果较好；持续给药可以部分地控制感染鼠脾肿大和脾细胞对刀豆蛋白Ａ的刺激应答降低，但对高球蛋白血症的改善作用是非持续性的。

关键词：虎杖小鼠艾滋病模型抗病毒作用

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抗新城疫病毒中药组方的筛选及其抗病毒作用

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畜牧与兽医 2014年第5期46卷 87-91页

作者：刘坤邹海涛李燕荣李云岗刘家国姜平兰邹然南京农业大学动物医学院江苏南京210095 山东省动物疫病预防与控制中心山东济南250022

首先从三七总皂苷、菊花总黄酮、黄芩苷、氧化苦参碱、板蓝根生物碱、黄芪多糖及板蓝根多糖中选取三种中药成分按照一定比例组成10个中药组方,随后将这些组方先在细胞上筛选,选出抗新城疫病毒作用较强的组方,最后应用鸡胚接种试验验证... 详细信息

首先从三七总皂苷、菊花总黄酮、黄芩苷、氧化苦参碱、板蓝根生物碱、黄芪多糖及板蓝根多糖中选取三种中药成分按照一定比例组成10个中药组方,随后将这些组方先在细胞上筛选,选出抗新城疫病毒作用较强的组方,最后应用鸡胚接种试验验证其抗病毒活性。结果表明,通过细胞筛选,组方1、5、6、7、9、10的抗病毒效果最好,通过鸡胚接种试验测定后各组方试验组的血凝价显著低于病毒对照组,说明各组方均有较好的抗病毒作用,并且不同加药方式及药物浓度均对其抗病毒能力有一定的影响。

关键词：中药组方新城疫病毒 DF1 抗病毒作用

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熊胆贝母止咳胶囊体内抗病毒作用研究

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中药药理与临床 2006年第6期22卷 65-67页

作者：杨婷李婉宜杨光包旭张再蓉包定元贺英菊四川大学华西药学院四川大学华西基础医学与法医学院四川大学实验动物中心成都610041

目的:观察熊胆贝母止咳胶囊的抗病毒作用。方法:流感病毒A1型(H1N1)鼠肺适应株FM1滴鼻感染前2天每天熊胆贝母止咳胶囊灌服1次,病毒感染后每天给药2次,连续6天,病毒感染后连续10天观察记录小鼠死亡情况,对存活小鼠处死,测定肺指数,计算... 详细信息

目的:观察熊胆贝母止咳胶囊的抗病毒作用。方法:流感病毒A1型(H1N1)鼠肺适应株FM1滴鼻感染前2天每天熊胆贝母止咳胶囊灌服1次,病毒感染后每天给药2次,连续6天,病毒感染后连续10天观察记录小鼠死亡情况,对存活小鼠处死,测定肺指数,计算肺指数抑制率。结果:FM1鼠流感病毒液的血凝效价1/640,FM1鼠流感病毒液的LD50为10-3.5,熊胆贝母止咳胶囊三个剂量组的小鼠死亡抑制率分别为44.4%、33.3%和33.3%;而肺指数分别为1.57±0.1、1.76±0.23、1.80±0.25,与病毒对照组比较有显著差异。结论:熊胆贝母止咳胶囊能降低感染流感病毒小鼠的死亡率,并能显著降低染毒小鼠的肺指数,表明其具有显著的体内抗病毒作用。

关键词：熊胆贝母止咳胶囊抗病毒作用血凝效价 LD50

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广州地区猫杯状病毒的分离鉴定及木犀草素抗病毒作用试验

广州地区猫杯状病毒的分离鉴定及木犀草素抗病毒作用试验

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作者：白玉美子华南农业大学

学位级别：硕士

猫杯状病毒（Feline Calicivirus,FCV）在猫群中流行性极高,常引起猫口腔及上呼吸道疾病,可通过眼、鼻、分泌物和唾液等向外界持续排毒从而成为传染源。近年来,欧洲和美洲等多个国家陆续出现高致病性FCV流行情况,可导致猫出现致命性系... 详细信息

猫杯状病毒（Feline Calicivirus,FCV）在猫群中流行性极高,常引起猫口腔及上呼吸道疾病,可通过眼、鼻、分泌物和唾液等向外界持续排毒从而成为传染源。近年来,欧洲和美洲等多个国家陆续出现高致病性FCV流行情况,可导致猫出现致命性系统性疾病,病死率极高。国内对FCV的研究仍然处于初步阶段,同时临床上也缺乏高效治疗FCV感染的药物。为了获得更多本地FCV毒株,从2018年6月至2019年6月,对广州市地区疑似感染FCV的患猫采集鼻咽拭子,随后对其过滤并接种于CRFK细胞（猫肾细胞）,连续传代后在镜下观察可见FCV典型细胞病变,成功分离得到的样本毒株命名缩写为FCV-GZ-SCAU1、FCV-GZ-SCAU2、FCV-GZ-SCAU3、FCV-GZ-SCAU4、FCV-GZ-SCAU5、FCV-GZ-SCAU7、FCV-GZ-SCAU8、FCV-GZ-SCAU9、FCV-GZ-SCAU10和FCV-GZ-SCAU11。下一步通过设计猫疱疹病毒（FHV）、猫冠状病毒（FCo V）、猫细小病毒（FPV）和FCV的特异性引物,经过RT-PCR检测、间接免疫荧光试验和透射电镜确定仅有FCV,无其他病毒共感染情况。为了进一步获得纯净的FCV毒株,经过病毒噬斑纯化试验后收获各毒株的纯化毒株。对纯化后的各毒株进行高通量测序,经过拼接后获得病毒全序列。通过与Gen Bank收录的FCV全序列比对后,发现FCV-GZ-SCAU11更接近于韩国地区毒株,其余毒株与国内毒株有更高的相似性。为了评价毒株的病毒体外生长特性,在CRFK细胞上测定了病毒生长曲线,结果显示FCV-GZ-SCAU10毒株在各个时间点的病毒滴度均显著高于其他毒株,结合病例的临床症状,初步判断为疑似高致病性强毒株。为了开发针对FCV感染的抗病毒药物,本研究通过本实验室前期预实验结果,挑选出木犀草素为研究对象。首先前期试验测定了木犀草素的细胞毒性作用,其对CRFK细胞的CC50为197.5μM。随后通过木犀草素治疗感染FCV的CRFK细胞,结果显示对FCV-GZ-SCAU1毒株的IC50为102.4μM,对FCV-GZ-SCAU10毒株的IC50为78.11μM,同时病毒间接免疫荧光结果和细胞上清的病毒拷贝数检测结果也显示木犀草素能抑制FCV的复制,结果均证明木犀草素可成为治疗FCV感染的潜在药物。本研究成功分离、鉴定和纯化获得10株广州市本地的FCV毒株,通过病毒生长曲线的测定发现FCV-GZ-SCAU10具有更高的复制水平,结合病例症状提示FCV-GZ-SCAU10可能是高致病性毒株。本研究通过体外细胞试验证明木犀草素对FCV具有良好的抗病毒作用。综上,本研究为后续临床诊断技术的改进、新型疫苗与天然药物的研发提供了研究基础及理论依据,可为猫杯状病毒预防及防治策略提供新方向。

关键词：猫杯状病毒分离与鉴定木犀草素抗病毒作用

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鸵鸟血液中性粒细胞中抗菌肽的分离纯化及其抗菌抗病毒作用的研究

鸵鸟血液中性粒细胞中抗菌肽的分离纯化及其抗菌抗病毒作用的研究

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作者：樊博河南农业大学

学位级别：硕士

收集鸵鸟新鲜抗凝血,应用0.83%氯化按溶液裂解至染色镜检无红细胞,低温离心,收集白细胞沉淀。将白细胞沉淀超声波破碎至染色镜检无完整细胞,低温高速离心提取细胞颗粒。10%醋酸溶液4℃下搅拌萃取抗菌肽,低温高速离心收集上清液,真空冷... 详细信息

收集鸵鸟新鲜抗凝血,应用0.83%氯化按溶液裂解至染色镜检无红细胞,低温离心,收集白细胞沉淀。将白细胞沉淀超声波破碎至染色镜检无完整细胞,低温高速离心提取细胞颗粒。10%醋酸溶液4℃下搅拌萃取抗菌肽,低温高速离心收集上清液,真空冷冻干燥,用0.01%醋酸溶液溶解即为抗菌肽粗提物。应用离子交换层析法将抗菌肽粗提物初步分离成两部分即阴离子组分和阳离子组分。将阳离子组分用RP-HPLC法进行分离获得有抗菌活性的目的蛋白。应用SDS-PAGE凝胶电泳方法检测目的蛋白的纯度,并初步测定其分子量,结果表明,抗菌活性产物分子量在4,700-4,980Da之间。粗提物抑菌试验结果表明,在鸵鸟中性粒细胞中存在天然抗菌物质,并表现出对金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性菌)、大肠杆菌(革兰氏阴性菌)和真菌(白色念珠菌)较强的抑制作用。离子交换层析产物的抑菌试验结果表明,鸵鸟中性粒细胞中的抗菌物质是阳离子性质;主要作用于细菌,尤其是对金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性菌),白色念珠菌(真菌)的抑制作用较大肠杆菌(革兰氏阴性菌)强。RP-HPLC纯化后抑菌试验结果表明,从得到的鸵鸟中性粒细胞抗菌肽显示出较强的抑菌活性。本试验采用鸡胚接种的方法观察了鸵鸟中性粒细胞抗菌肽对新城疫病毒以及鸡传染性支气管炎病毒的灭活作用。将NDV与IBV与抗菌肽以不同的方法混合作用于10日龄的鸡胚,测定鸡胚尿囊液中NDV血凝效价,并观察鸡胚病变。结果发现,与攻毒组比较,鸵鸟中性粒细胞抗菌肽使鸡胚尿囊液中NDV血凝效价降低,同时还能抑制因上述两种病毒所引起的鸡胚病变。

关键词：鸵鸟中性粒细胞抗菌肽离子交换层析反相高效液相色谱抗病毒作用

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桐粕活性成分的提取、分离纯化及抗病毒作用研究

桐粕活性成分的提取、分离纯化及抗病毒作用研究

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作者：尹佩辉湖南农业大学

学位级别：硕士

桐粕主要是油桐籽经榨取桐油后所剩余的副产品，其蛋白质含量为36.29％—45％（浸出法生产），脱毒桐粕是一种较好的饲料资源。但桐粕毒素的成分仍不清楚，这就在一定程度上妨碍了桐粕在畜牧生产中的广泛应用。为了开发利用桐粕作为植... 详细信息

桐粕主要是油桐籽经榨取桐油后所剩余的副产品，其蛋白质含量为36.29％—45％（浸出法生产），脱毒桐粕是一种较好的饲料资源。但桐粕毒素的成分仍不清楚，这就在一定程度上妨碍了桐粕在畜牧生产中的广泛应用。为了开发利用桐粕作为植物蛋白质饲料资源，同时寻找里面含有的活性物质，本文对桐粕进行了初步分离、提纯，得到一种白色针状晶体，首次通过了对晶体的鉴定，证明它为木脂素类化合物；并对不同提取成分生理活性作用进行了初步探讨。采用NKA大孔吸附树脂法对桐粕粗提物进行富集分离，并对过NKA 30％乙醇收集部分进行聚酰胺柱层析分离纯化。桐粕过40目筛，超临界脱油，选用体积分数95％（V/V）乙醇为溶剂，提取温度80℃，料液比1：10，进行回流提取。粗提物过NKA树脂后分为水洗、30％醇洗、50％醇洗、70％醇洗四个部分；30％醇洗部分过聚酰胺柱，收集的不同馏分进行HPTLC、HPLC检测，将相同组分合并，得到一种白色针状晶体，并通过UV、1H-NMR、13C-NMR、DEPT等光谱解析，证明晶体为（±）3，3′-bisdemethylpinoresinol，即（±）3，3′-双去甲基松脂醇。采用MTT法检测了水提物等不同提取成分对正常鸡胚单层成纤维细胞（CEF）的毒性作用；同时将提取物与鸡新城疫病毒混合，37℃作用2h接种10日龄鸡胚测定其EID50，然后将混合物分别接种10日龄鸡胚和CEF，以了解提取物对鸡新城疫病毒的作用效果。实验结果表明：过NKA70％醇洗部分，对正常CEF的毒性作用最大，水提物毒性作用最小。而对新城疫病毒，水提物（浓度0.125mg/ml）的抗病毒效果最好；其次为过NKA 30％醇洗部分（0.2mg/ml），然后依次是水提物（0.5mg/ml）、水提物（0.25mg/ml）、无水乙醇析出物（0.2mg/ml）。

关键词：桐粕大孔吸附树脂结构鉴定聚酰胺柱层析抗病毒作用

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肠道病毒A71型（EVA71）逃避OAS3/RNase L抗病毒作用通路机制研究

肠道病毒A71型（EVA71）逃避OAS3/RNase L抗病毒作用通路机制研究

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作者：周小磊吉林大学

学位级别：硕士

手足口病每年都会在全球各地爆发,是近年来全球较为关注的公共卫生问题之一。而肠道病毒作为引起手足口病的主要病原体,其与宿主相互作用的机制研究具有重要的意义和实用价值。值得关注的是,引起重症手足口病、诱发致死性神经系统疾病... 详细信息

手足口病每年都会在全球各地爆发,是近年来全球较为关注的公共卫生问题之一。而肠道病毒作为引起手足口病的主要病原体,其与宿主相互作用的机制研究具有重要的意义和实用价值。值得关注的是,引起重症手足口病、诱发致死性神经系统疾病和心肌炎性心脏病等并发症的病原体大多为肠道病毒A71型（Enterovirus A71,EVA71）。重症手足口病及其并发症对全球儿童的健康造成严重威胁,但是到目前为止,仍然缺少针对EVA71感染的特异性药物。所以,急需重视EVA71和其他肠道病毒的复制机制以及与宿主相互作用关系的研究,为手足口病的临床治疗提供更多的数据依据。干扰素反应是病毒感染免疫防御的第一道防线,2',5'寡聚腺苷酸合成酶（2',5'Oligoadenylate Synthetase,OAS）蛋白家族作为最早被发现的干扰素刺激基因（IFN-Stimulated Genes,ISGs）之一,其诱导激活下游RNA酶L（RNase L）可对病毒RNA进行剪切降解,OAS/RNase L耦合的抗病毒通路目前已被验证对多种病毒具有拮抗作用。而OAS3是OASs蛋白家族中激活RNase L活性的主要蛋白,所以本实验选择OAS3蛋白作为靶标蛋白,着重探究OAS3/RNase L通路与EVA71的相互作用机制。本研究首先验证了EVA71感染诱导的上游干扰素（Interferon,IFN）非特异免疫应答机制。EVA71感染HEK293T细胞后,能够广泛上调属于Ⅰ型干扰素的IFN-β、属于Ⅱ型干扰素的IFN-γ和属于Ⅲ型干扰素的IL-29 m RNA水平。分别用这三种IFN预处理HEK293T细胞后再感染EVA71,IFN-β处理组出现的细胞病变效应（Cytopathic Effect,CPE）较少,并且IFN-β能够强烈上调细胞内源性OAS3蛋白的m RNA水平。此外,沉默HEK293T细胞中的OAS3蛋白,显著降低了IFN-β对EVA71复制的抑制效果。这些结果说明EVA71感染诱导了IFN-β/OAS3的非特异性免疫应答,并且OAS3在IFN-β介导的抑制EVA71复制过程中发挥了重要作用。随后验证干扰素诱导OAS3蛋白表达的关键信号因子,用IFN-β或者EVA71分别预处理信号转导和转录激活因子1（Signal Transducer and Activator Of Transcription 1,STAT1）或STAT3 KD（Knock Down）HEK293T细胞,并检测内源性STAT1、p-STAT1、STAT3、p-STAT3和OAS3蛋白的表达,结果表明敲低STAT1之后,IFN-β与EVA71对OAS3蛋白的诱导上调明显减弱,而敲低STAT3不会影响OAS3的表达,这表明STAT1对IFN-β以及EVA71诱导OAS3蛋白合成至关重要。接下来对EVA71与OAS3/RNase L通路的相互作用进行了探讨。结果发现,沉默OAS3蛋白能够促进EVA71复制,过表达OAS3蛋白能够抑制EVA71复制,且OAS3蛋白是以RNase L依赖的方式抑制EVA71复制。RNase L的激活与OAS3蛋白的活性相关,与OAS3蛋白2-5A合成活性相关的四个失活突变体D816A、D818A、D888A以及K950A,不仅失去了对EVA71的拮抗能力,也失去了RNase L酶切活性的激活能力。虽然EVA71能够上调OAS3蛋白的表达从而激活RNase L,但是EVA71不能诱导RNase L的表达。此外,还发现EVA71在感染早期上调OAS3蛋白的表达,但在感染晚期下调OAS3蛋白表达。这个现象表明EVA71可能通过某种未知的机制下调OAS3蛋白的表达,从而逃逸OAS3/RNase L通路的抗病毒作用。为了验证EVA71的逃逸机制,本研究将EVA71的7种非结构蛋白（2A-2C、3A-3D）分别与OAS3蛋白共转染,结果表明EVA71 3Cpro以剂量依赖的方式介导下调OAS3蛋白的表达。并且无论是加入EVA71 3Cpro酶活性的抑制剂Rupintrivir,还是构建EVA71 3Cpro失活突变体（H40G、E71A和C147G）,都可以恢复EVA71 3Cpro对OAS3蛋白的下调作用。此外,在Western blot实验中用抗HA抗体对样品的全蛋白进行检测,发现与单独转染OAS3蛋白的细胞样品的显色条带相比,OAS3、EVA71 3Cpro共转样品在膜下方多出了一个片段约为20k Da的小蛋白条带。这表明EVA71 3Cpro可能以通过蛋白酶活性对OAS3蛋白进行剪切裂解,从而逃逸OAS3/RNase L通路的抗病毒作用。在此基础上,对EVA713Cpro在OAS3序列中的酶切位点进行验证,根据小蛋白剪切带的大小以及序列分析,确定了四个潜在剪切位点（Q

关键词： OAS3/RNase L通路肠道病毒抗病毒作用干扰素反应病毒逃逸机制

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莪术油软胶囊抗病毒作用研究

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中药药理与临床 2005年第3期21卷 20-23页

作者：叶寿山盛晓蓉王萍倪光玉贾德云李心伟安徽省医学科学研究所合肥230061

目的:研究莪术油软胶囊的抗病毒作用。方法:用MDCK和Hela细胞分别测定流感病毒A3及腺病毒7型毒力(TCID50)以及药物对各细胞的毒性;采用细胞病变(CPE)抑制法来测定药物对病毒的抑制作用。结果:莪术油对流行性感冒病毒A3及腺病毒7型半数... 详细信息

目的:研究莪术油软胶囊的抗病毒作用。方法:用MDCK和Hela细胞分别测定流感病毒A3及腺病毒7型毒力(TCID50)以及药物对各细胞的毒性;采用细胞病变(CPE)抑制法来测定药物对病毒的抑制作用。结果:莪术油对流行性感冒病毒A3及腺病毒7型半数有效浓度(IC50)分别为0.0008ml/ml和0.0004ml/ml;治疗指数(TI)分别为15和30。莪术油软胶囊160、80和40mg/kg灌胃,对流感病毒鼠肺适应株(FM1株)和合胞病毒(RSV)引起的小鼠肺炎,能明显降低肺指数,降低死亡率。结论:莪术油对流行性感冒病毒A3及腺病毒7型有一定的抑制作用。

关键词：莪术油抗病毒作用流感病毒A3 腺病毒7型软胶囊作用研究流行性感冒病毒 Hela细胞半数有效浓度抑制作用

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鸡λ干扰素在杆状病毒/昆虫细胞系统中表达及其抗病毒作用研究

鸡λ干扰素在杆状病毒/昆虫细胞系统中表达及其抗病毒作用研究

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作者：马莲扬州大学

学位级别：硕士

干扰素(Interferon, IFN)是脊椎动物病毒防御系统的重要组成部分,主要分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。其中Ⅲ型干扰素又称λ干扰素(IFN-λ),是2003年发现的一种新型干扰素家族。Ⅲ型干扰素不仅具有与Ⅰ型干扰素相似的抗病毒活性,而且具有与Ⅱ型... 详细信息

干扰素(Interferon, IFN)是脊椎动物病毒防御系统的重要组成部分,主要分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。其中Ⅲ型干扰素又称λ干扰素(IFN-λ),是2003年发现的一种新型干扰素家族。Ⅲ型干扰素不仅具有与Ⅰ型干扰素相似的抗病毒活性,而且具有与Ⅱ型干扰素相似的免疫调节功能。IFN-λ受体分布的特异性,表明IFN-Xλ能够在一些上皮细胞及免疫细胞上发挥相对独立和特异的抗病毒作用。本研究以ChIFN-λ为研究对象,利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统表达重组ChIFN-λ,初步开展了其抗病毒活性研究。本研究以鸡肾组织提取的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增ChIFN-λ。序列分析表明ChIFN-λ全长561 bp,共编码186个氨基酸,其中前23个氨基酸构成ChIFN-λ,信号肽。亚克隆其成熟蛋白编码基因492 bp,将其克隆入pET-32a,构建原核表达载体pET-32a-ChIFN-λ,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析证实表达产物为36 KD左右的融合蛋白,并且主要以不溶性包涵体存在。利用高亲和Ni-NTA层析树脂纯化表达产物,将其作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备ChIFN-λ的多克隆抗体,ELISA检测血清抗体效价为1：16000。分别将此血清与抗His单克隆抗体作为-抗,通过Western-blot检测ChIFN-的原核表达产物,结果均在36 KD处出现特异性条带。为了使ChIFN-λ能够以分泌形式表达,利用重叠PCR在ChIFN-λ成熟肽序列前引入昆虫细胞可识别的gp67信号肽序列,将其克隆至载体pFastBacTM1中,构建转移载体pFastBac-gp67SP-ChIFN-λ,转化DH10ac感受态细胞,通过特异性位点转座,将ChIFN-λ整合到]Bacmid穿梭质粒中,经过筛选纯化得到穿梭质粒Bacmid-ChIFN-λ;用脂质体介导穿梭质粒转染Sf9细胞,得到重组杆状病毒AcMNPV-ChIFN-λ。间接免疫荧光和Western-blot试验证明带有gp67信号肽的重组ChIFN-λ在昆虫细胞中呈现分泌表达。在昆虫细胞感染96h后,分别收获细胞上清和细胞裂解液,并通过水泡性口炎病毒(VSV)感染鸡胚肾细胞(CEKC)的细胞病变抑制试验测定细胞上清和细胞裂解液的抗病毒效果,结果表明细胞培养上清中的重组蛋白表现出较高的抗病毒活性,上清的抗病毒效价为1.44×106U/mL,昆虫细胞裂解液的抗病毒效价为4.76×105U/mL。以重组ChIFN-λ进行对新城疫病毒(NDV)和禽流感病毒(AIV)的抗病毒活性试验,发现重组ChIFN-λ对NDV和AIV有明显的抑制其致细胞病变作用,在CEK细胞上的抗病毒效果分别为1.82×106U/mL和1.94×106U/mL。综上所述,本研究成功克隆出ChIFN-λ全基因,利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统表达了具有分泌能力的重组ChIFN-λ,表达产物对VSV、AIV和NDV具有显著的抗病毒效果。本研究说明重组ChIFN-λ具有良好的应用前景,为体外大量制备高效廉价的重组ChIFN-λ奠定了基础。

关键词：鸡λ干扰素杆状病毒表达抗病毒作用

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