检索结果-内蒙古大学图书馆

中成药 2022年第12期44卷 4053-4057页

作者：孙亚磊陶嘉磊赵佩佩朱城璧袁斌南京中医药大学附属医院儿科江苏南京210000

目的以干扰素激活反应元件(ISRE)启动子为靶点,建立受ISRE调控稳定表达荧光素酶活性的细胞模型,用以清肺口服液黄酮类化合物筛选,并对筛选结果予以验证。方法将高纯度ISRE荧光素酶报告基因质粒与海肾荧光质粒共同转染293T工具细胞,进行... 详细信息

目的以干扰素激活反应元件(ISRE)启动子为靶点,建立受ISRE调控稳定表达荧光素酶活性的细胞模型,用以清肺口服液黄酮类化合物筛选,并对筛选结果予以验证。方法将高纯度ISRE荧光素酶报告基因质粒与海肾荧光质粒共同转染293T工具细胞,进行启动子活性检测。将ISRE报告基因质粒与病毒包装辅助质粒Helper 1.0、2.0共同转染工具细胞,收集慢病毒用于侵染A549细胞,经过药物筛选与RT-qPCR检测后得到稳定细胞株。利用稳定细胞株对清肺口服液中32个黄酮类化合物进行筛选,最后验证化合物对受ISRE正向调控的基因表达的影响。结果ISRE启动子活性良好,通过慢病毒转染成功,构建受ISRE调控稳定表达荧光素酶活性的细胞模型,并通过双荧光素酶检测予以功能确认。从32个黄酮类化合物筛选出6个能够促使ISRE表达的化合物。RT-qPCR与Western blot技术从受ISRE正向调控基因的转录水平与蛋白表达层面验证了筛选出的单体化合物能够促使ISRE的表达。结论成功构建能够高效检测ISRE活性的报告基因系统,利用该系统成功筛选出能促使ISRE表达的清肺口服液黄酮类化合物,具有一定的理论与应用价值。

关键词：清肺口服液黄酮类化合物 ISRE 报告基因系统

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基于Luciferase报告基因系统的重组嵌合膜蛋白及其应用

基于Luciferase报告基因系统的重组嵌合膜蛋白及其应用

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作者：刘贤钦钟钰婷陈玲伽黄贤明李胜峰 510530 广东省广州市广州高新技术产业开发区科学城开源大道11号A6栋第五层

本发明涉及一种基于Luciferase报告基因系统的重组嵌合膜蛋白及其应用，该重组嵌合膜蛋白可用于筛选针对CD47或SIRPα的特异性分子药物，检测其阻断CD47‑SIRPα信号通路的活性，具有检测方便、快速，稳定性好，靶点特异性高等特点。

标准号: CN115636881A

关键词：嵌合膜蛋白报告基因系统特异性分子信号通路检测靶点可用筛选应用

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应用于筛选生物被膜抑制剂的报告基因系统

应用于筛选生物被膜抑制剂的报告基因系统

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作者：杨洪江杨肖静黄志伟张茜茜龚梦馨张志强 300222 天津市河西区大沽南路1038号天津科技大学

本发明涉及一种应用于筛选生物被膜抑制剂的新型报告基因系统，本申请证明bsrA基因能够抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成，其编码基因在细菌中过表达，能够显著抑制生物被膜的产量。因此，以该基因为标记，构建一种新型报告基因系统，筛... 详细信息

标准号: CN108300723B

本发明涉及一种应用于筛选生物被膜抑制剂的新型报告基因系统，本申请证明bsrA基因能够抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成，其编码基因在细菌中过表达，能够显著抑制生物被膜的产量。因此，以该基因为标记，构建一种新型报告基因系统，筛选能够激活标记基因表达的小分子化合物，后者能够从基因水平对生物被膜的合成进行抑制，有助于解决由生物被膜引起的持续性感染、抗生素耐药性，同时通过研究该基因抑制生物被膜形成的机制能过更好的解决食品加工行业中微生物生物膜形成机制以及生物被膜的抑制和去除问题。

关键词：生物被膜报告基因系统标记基因表达抗生素耐药性食品加工行业铜绿假单胞菌微生物生物膜小分子化合物筛选持续性感染编码基因基因水平基因抑制抑制剂构建去除细菌合成激活基因申请应用研究

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基于报告基因系统的肝细胞核因子4α活性检测体系的建立

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第二军医大学学报 2017年第9期38卷 1112-1118页

作者：孙冰洁陈示洁邓龙飞丁晨虹陈斐罗成谢渭芬张新华东理工大学生物工程学院上海200237 中国科学院上海药物研究所药物发现与设计中心上海201203 第二军医大学长征医院消化内科上海200003

目的建立一个基于荧光素酶报告基因系统的肝细胞核因子4α(HNF4α)活性检测系统,筛选可调控HNF4α活性的小分子化合物。方法采用亲和层析法纯化HNF4α蛋白,行蛋白热迁移实验检测相关DNA片段及小分子化合物与HNF4α蛋白的直接相互作用。... 详细信息

目的建立一个基于荧光素酶报告基因系统的肝细胞核因子4α(HNF4α)活性检测系统,筛选可调控HNF4α活性的小分子化合物。方法采用亲和层析法纯化HNF4α蛋白,行蛋白热迁移实验检测相关DNA片段及小分子化合物与HNF4α蛋白的直接相互作用。分别构建含有3个拷贝和9个拷贝的Ninjurin1(NINJ1)基因启动子区HNF4α反应元件的荧光素酶报告基因质粒pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p,转染肝癌细胞,采用荧光素酶报告基因法检测肝癌细胞内HNF4α转录活性的改变,qPCR检测小分子化合物木犀草素或阿尔维林处理后肝癌细胞中HNF4α及下游基因的表达情况,荧光素酶报告基因法检测小分子化合物处理后细胞内HNF4α转录活性的改变。结果蛋白热迁移实验证实,NINJ1基因启动子区HNF4α的DNA结合片段可与HNF4α蛋白结合。在过表达HNF4α的肝癌细胞中,pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p均可检测到肝癌细胞中HNF4α活性的改变,且pGL3-NINJ1-9p较pGL3-NINJ1-3p的检测灵敏度更高(P<0.01)。木犀草素和阿尔维林与HNF4α蛋白存在直接相互作用,分别下调和上调HNF4α靶基因;pGL3-NINJ1-9p可检测到木犀草素和阿尔维林对HNF4α转录活性的影响。结论利用报告基因载体pGL3-NINJ1-9p成功建立了HNF4α活性的检测系统,为筛选调控HNF4α活性的小分子化合物等提供了基础工具。

关键词：肝细胞核因子4α Ninjurin 1 报告基因系统小分子化合物

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评估中药和/或天然药物效能的系列转录因子报告基因系统及其应用

评估中药和/或天然药物效能的系列转录因子报告基因系统及其应用

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作者：刘长振郭志兰李晶哲 100700 北京市东城区东直门内南小街16号

本发明公开了评估中药和/或天然药物效能的系列转录因子报告基因系统及其应用。本发明所提供的检测中药和/或天然药物对N种转录因子的影响的成套载体，由N种报告基因表达载体组成，N种报告基因表达载体中每种报告基因表达载体均携带一... 详细信息

标准号: CN106701806B

本发明公开了评估中药和/或天然药物效能的系列转录因子报告基因系统及其应用。本发明所提供的检测中药和/或天然药物对N种转录因子的影响的成套载体，由N种报告基因表达载体组成，N种报告基因表达载体中每种报告基因表达载体均携带一种转录因子的顺式作用元件；N种报告基因表达载体间的区别仅在于所携带的转录因子的顺式作用元件不同；N种报告基因表达载体均为质粒a；N为大于等于2的一个自然数。本发明可用于定量检测中药及其他天然药物对于不同通路中的关键转录因子的影响，进而判断其对不同通路的影响，从分子水平的角度解释中药及其他天然药物的作用机制，为现有中药及其他天然药物的作用机制不明确、靶点多样性的问题提供解决方案。

关键词：报告基因表达载体天然药物转录因子中药顺式作用元件作用机制报告基因系统定量检测分子水平问题提供携带靶点可用质粒多样性检测评估应用

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应用于筛选生物被膜抑制剂的新型报告基因系统

应用于筛选生物被膜抑制剂的新型报告基因系统

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作者：杨洪江杨肖静黄志伟张茜茜龚梦馨张志强 300222 天津市河西区大沽南路1038号天津科技大学

标准号: CN108300723A

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NF-κB荧光素酶报告基因系统的构建及验证

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生物工程学报 2016年第10期32卷 1465-1473页

作者：郭志兰车路阳李晶哲孙震晓刘长振北京中医药大学中药学院北京100102 中国中医科学院医学实验中心北京市重点实验室北京100700 中国人民解放军总医院骨科北京100853

为了定量检测NF-κB的活化效果及筛选与NF-κB活化调控相关的药物,通过去除逆转录病毒载体pQCXIP原有的CMV启动子,并分别插入NF-κB增强子序列及荧光素酶NanoLuc报告基因序列,构建了一种新的含有NF-κB增强子序列和NanoLuc(NLuc)报告基... 详细信息

为了定量检测NF-κB的活化效果及筛选与NF-κB活化调控相关的药物,通过去除逆转录病毒载体pQCXIP原有的CMV启动子,并分别插入NF-κB增强子序列及荧光素酶NanoLuc报告基因序列,构建了一种新的含有NF-κB增强子序列和NanoLuc(NLuc)报告基因序列的表达载体,并进一步建立受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的细胞系。酶切鉴定及测序结果表明成功构建了重组质粒pQCXIP-NF-κB-NLuc;NF-κB信号通路的刺激物肿瘤坏死因子TNF-α作用于构建的稳定表达NLuc的细胞系后出现特异性的荧光素酶反应,且该酶反应与TNF-α的刺激呈良好的时间、剂量依赖性,该结果表明受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的细胞系构建成功。实例验证中,NF-κB抑制剂雷公藤甲素对此细胞系NLuc荧光素酶表达的抑制呈剂量效应。综上,本实验构建的受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的报告基因系统可用于NF-κB的活化效果的定量检测及筛选与NF-κB活化调控相关的药物,具有研究和应用价值。

关键词： NF-κB 荧光素酶NanoLuc 报告基因系统

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Ub‑Nanoluc、Ub‑Ub‑GS‑Nanoluc报告基因系统及其构建和应用

Ub‑Nanoluc、Ub‑Ub‑GS‑Nanoluc报告基因系统及其构建和应用

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作者：陈云飞王路凡程晓牧王平 200062 上海市普陀区中山北路3663号

本发明公开了新的Ub‑Nanoluc报告基因系统和Ub‑Ub‑GS‑Nanoluc报告基因系统，以及其在去泛素化酶活性检测以及通量化筛选去泛素化酶抑制剂中的应用，所述Ub‑Nanoluc报告基因DNA序列如SEQIDNO.1所示，所述Ub‑Ub‑GS‑Nanoluc报告基因DNA序列... 详细信息

标准号: CN104844704B

本发明公开了新的Ub‑Nanoluc报告基因系统和Ub‑Ub‑GS‑Nanoluc报告基因系统，以及其在去泛素化酶活性检测以及通量化筛选去泛素化酶抑制剂中的应用，所述Ub‑Nanoluc报告基因DNA序列如SEQIDNO.1所示，所述Ub‑Ub‑GS‑Nanoluc报告基因DNA序列如SEQIDNO.4所示。本发明利用荧光素酶Nanoluc高灵敏性的特性，提出了利用化学发光报告基因去检测去泛素化酶活性及高通量筛选其抑制剂的方法，为筛选研制新的药物包括抗肿瘤药物提供新的作用靶点和新思路，有广泛应用前景，具有巨大社会经济效益。

关键词：报告基因泛素报告基因系统筛选社会经济效益高通量筛选化酶抑制剂抗肿瘤药物酶活性检测化学发光荧光素酶作用靶点灵敏性酶活性抑制剂应用量化检测

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基于p21启动子报告基因系统的构建及应用

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天津化工 2016年第2期30卷 17-19页

作者：李继友天津渤海职业技术学院天津300400

本研究通过构建p21启动子报告基因系统,进行筛选能够上调p21表达的有效中药制剂,最终阐明其基本抗肿瘤机理。

关键词：启动子报告基因系统构建

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评估中药和/或天然药物效能的系列转录因子报告基因系统及其应用

评估中药和/或天然药物效能的系列转录因子报告基因系统及其应用

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作者：刘长振郭志兰李晶哲 100700 北京市东城区东直门内南小街16号

标准号: CN106701806A

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