检索结果-内蒙古大学图书馆

指数富集的配体系统进化技术筛选大肠杆菌表达的人CD20胞外蛋白特异性适配体

生物工程学报 2025年第4期41卷 1467-1477页

作者：陈凡杨凡高蕾胡月薛云周菁康建华王伟湖北大学生命科学学院河南科技大学医学技术与工程学院武汉市肺科医院东莞市长安医院检验科

CD20是B细胞淋巴瘤表面标志蛋白，其膜外区是特异性抗体和药物的作用靶点。为了获得靶向CD20的特异性适配体，首先根据密码子简并性对CD20胞外区基因进行优化，使之易于在大肠杆菌中表达；然后将优化后的基因克隆到pGEX-4T-1载体中，转... 详细信息

CD20是B细胞淋巴瘤表面标志蛋白，其膜外区是特异性抗体和药物的作用靶点。为了获得靶向CD20的特异性适配体，首先根据密码子简并性对CD20胞外区基因进行优化，使之易于在大肠杆菌中表达；然后将优化后的基因克隆到pGEX-4T-1载体中，转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达；蛋白纯化后用SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定；通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选出与融合蛋白特异性结合的ssDNA适配体，并用流式细胞术检测适配体与CD20的亲和力；再通过细胞毒性试验检测适配体抑制B淋巴瘤细胞的效果。本研究建立了CD20的原核表达方法，获得了特异性结合CD20胞外区蛋白的适配体，为靶向CD20的治疗药物的开发奠定了基础。

关键词： CD20 基因优化原核表达指数富集的配体系统进化技术适配体

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指数富集的配体系统进化技术研究进展及在食品检测中的应用

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食品安全质量检测学报 2016年第1期7卷 80-84页

作者：谭建锡陈盼莫瑾彭梓朱金国湖南出入境检验检疫局国家食品安全检测重点实验室食品安全科学技术湖南省重点实验室长沙410004 湖南师范大学生命科学院长沙410081 长沙县食品安全检测中心长沙410100

核酸适配体是指能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,并均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选得到。近年来,在传统SE... 详细信息

核酸适配体是指能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,并均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选得到。近年来,在传统SELEX技术的基础上,新的SELEX技术不断出现。这些新技术的出现,在不断完善SELEX技术的同时,也极大地推动了适配体技术在各学科领域中的发展及应用。本文对核酸适配体的筛选方法进行了总结,并介绍了其在食品检测领域的应用现状和发展方向,为核酸适配体的筛选与应用提供了参考。

关键词：核酸适配体筛选方法指数富集的配体系统进化技术食品检测

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人CD8α分子特异性核酸适配体的筛选与鉴定

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癌变.畸变.突变 2025年第2期37卷 140-146,152页

作者：李安然孙红光申晨晨阿孜姑丽·阿布都卡迪尔马艳新疆医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生教研室新疆乌鲁木齐830011

目的:筛选并鉴定与人CD8α分子特异性结合的核酸适配体(Apt)。方法:以携带6×组氨酸标签的重组人CD8α蛋白为筛选靶点,设计81 nt的随机文库,利用SELEX技术进行核酸适配体筛选。将富集的文库进行高通量测序及聚类分析,以最高丰度序... 详细信息

目的:筛选并鉴定与人CD8α分子特异性结合的核酸适配体(Apt)。方法:以携带6×组氨酸标签的重组人CD8α蛋白为筛选靶点,设计81 nt的随机文库,利用SELEX技术进行核酸适配体筛选。将富集的文库进行高通量测序及聚类分析,以最高丰度序列为例,通过斑点杂交法和流式细胞术验证其与CD8α蛋白和CD8+细胞的特异结合情况。利用流式细胞术测定候选核酸适配体与CD8α蛋白和CD8+细胞结合的亲和常数(Kds)。最后以正常人外周血淋巴细胞为模型,利用流式细胞术初步评价候选核酸适配体以及现有技术公开的CD8核酸适配体在临床样本中鉴定CD8+淋巴细胞的临床应用能力,并检测Apt 1与人外周血样本中CD8+淋巴细胞的结合位点是否和CD8抗体与CD8α蛋白的结合位点一致。结果:富集文库经高通量测序后,获得了42803个有效序列读数,经Clustal Omega在线软件聚类分析,按丰度排序将前10条序列作为候选核酸适配体,分别命名为Apt 1~Apt 10。10个候选核酸适配体序列中均存在1个高度保守的一致序列(CGTGAGGAGCTTGAAATCC)。其中,Apt 1具有典型的茎环结构(△G=-12.61 kcal/mol),能与CD8α蛋白和CD8+细胞系高特异性结合。10个候选核酸适配体Apt 1~Apt 10均可与CD8α蛋白和CD8+细胞高亲和力结合,亲和常数(Kds)均在纳摩尔水平。与商业化CD8抗体及现有技术公开的CD8核酸适配体相比,候选核酸适配体均能有效鉴定人外周血样本中的CD8+淋巴细胞,Apt 1与人外周血样本中CD8+淋巴细胞的结合位点不同于CD8抗体的结合位点。结论:成功筛选出与人CD8α分子强亲和力和高特异性结合的核酸适配体,可为后续开发针对CD8靶点的临床诊断和治疗方法奠定基础。

关键词：核酸适配体指数富集的配体系统进化技术 CD8 高通量测序人外周血淋巴细胞

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基于微流控芯片的核酸适配体筛选技术研究进展

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分析化学 2020年第5期48卷 590-600页

作者：姜浩吕雪飞赵可心北京理工大学生命学院

适配体(Aptamer)是通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选得到的,可与靶标分子以高亲和力特异性结合的单链DNA或RNA,在生物分离分析、临床诊断和疾病靶向治疗等领域应用广泛。适配体的发展与筛选技术的进步密切相关,以SELEX为基础... 详细信息

适配体(Aptamer)是通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选得到的,可与靶标分子以高亲和力特异性结合的单链DNA或RNA,在生物分离分析、临床诊断和疾病靶向治疗等领域应用广泛。适配体的发展与筛选技术的进步密切相关,以SELEX为基础,研究者开发了磁珠SELEX和毛细管电泳SELEX等多种适配体体外筛选技术,但这些方法存在筛选轮次多、筛选周期长和样品消耗量大、对小分子筛选效率低等缺点。微流控芯片具有体积小、高通量和易集成等特点,基于微流控芯片的SELEX技术在一定程度上可解决上述问题,实现适配体快速、高通量的体外筛选。本文在总结SELEX及其关键技术要点的基础上,重点评述了基于微流控和微阵列芯片SELEX技术的研究进展,并对SELEX技术中未来的发展方向进行了总结和展望。

关键词：适配体筛选指数富集的配体系统进化技术微流控芯片微阵列芯片评述

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黄曲霉毒素B1核酸适配体筛选和检测方法的建立

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食品科学 2020年第24期41卷 295-303页

作者：张敏张先舟李聪高浩刘健慧田益玲马雯李英军檀建新河北农业大学食品科技学院河北省农产品加工工程技术中心河北保定071000

建立一种高灵敏的快速检测黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的方法。基于氧化石墨烯(graphene oxide,GO)通过π-π共轭吸附单链寡核苷酸(single-strand DNA,ssDNA),对已结合靶标的ssDNA吸附能力较弱的特性,设计针对AFB1核酸适配体的筛... 详细信息

建立一种高灵敏的快速检测黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的方法。基于氧化石墨烯(graphene oxide,GO)通过π-π共轭吸附单链寡核苷酸(single-strand DNA,ssDNA),对已结合靶标的ssDNA吸附能力较弱的特性,设计针对AFB1核酸适配体的筛选方案。经过10轮筛选,共获得45条ssDNA序列。挑选具有代表性的6条序列进行亲和力分析实验,其解离常数Kd分别为16.29、27.88、18.54、23.11、47.94、22.31 nmol/L。选用亲和力较高的AFB-5、AFB-8进行特异性实验,结果显示所筛选的适配体能特异性吸附AFB1。最后利用适配体AFB-8作为识别元件建立了基于纳米金比色检测AFB1的方法。在优化的检测条件下,AFB1质量浓度与A520 nm值有良好的线性关系,其回归方程为y=-0.00709x+0.46142(R^2=0.9979),线性范围为0.025~10 ng/mL,检出限为0.025 ng/mL。通过特异性实验和对大米样品加标回收实验,加标回收率为83.36%~105.74%,证明本方法的可行性。

关键词：黄曲霉毒素B1 核酸适配体指数富集的配体系统进化技术比色检测纳米金

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核酸适配体在三阴性乳腺癌诊疗中的研究进展

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中国生物工程杂志 2022年第7期42卷 62-68页

作者：姚芷昕李婉明中国医科大学生命科学学院沈阳110122 中国医科大学生命科学学院卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室分子细胞生物学教研室沈阳110122

乳腺癌是女性高发恶性肿瘤,三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)恶性程度极高,且发病机制复杂,是乳腺癌分型中预后最差的类型,但目前其早期筛查和诊断的敏感度仍处在较低水平。因此,亟须通过应用具有高度特异性的肿瘤标... 详细信息

乳腺癌是女性高发恶性肿瘤,三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)恶性程度极高,且发病机制复杂,是乳腺癌分型中预后最差的类型,但目前其早期筛查和诊断的敏感度仍处在较低水平。因此,亟须通过应用具有高度特异性的肿瘤标志物分子探针,实现其早期诊断和治疗。核酸适配体是在人工合成的随机单链核酸序列文库中,通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选获得的寡核苷酸序列。高效的分子识别能力使其成为最具潜力的生物靶向分子,在肿瘤诊断及治疗中具有广阔的应用前景。目前,通过筛选已获得了多种靶向TNBC细胞的核酸适配体。重点综述基于SELEX及其衍生技术筛选TNBC相关核酸适配体的新进展,以及核酸适配体在TNBC诊断和治疗中的应用,为相关研究提供参考。

关键词：三阴性乳腺癌核酸适配体指数富集的配体系统进化技术肿瘤诊断肿瘤治疗

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全细菌SELEX法筛选粪肠球菌特异性适配体

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中国生物化学与分子生物学报 2019年第7期35卷 730-738页

作者：巫朦朦蔡蓉凤田亚平周楠迪江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室

肠球菌(Enterococcus)是内源性和外源性医院感染的第二大病原菌,检出率仅次于大肠杆菌,从分子水平上发展靶标的高亲和力分子探针对肠球菌的识别和检测具有非常重要的意义。本研究以粪肠球菌为靶标,运用全细菌指数富集的配体系统进化技术... 详细信息

肠球菌(Enterococcus)是内源性和外源性医院感染的第二大病原菌,检出率仅次于大肠杆菌,从分子水平上发展靶标的高亲和力分子探针对肠球菌的识别和检测具有非常重要的意义。本研究以粪肠球菌为靶标,运用全细菌指数富集的配体系统进化技术(whole-bacteria systematic evolution of ligands by exponential enrichment, whole-bacteria SELEX),从全长为79个核苷酸包含35个随机碱基序列的单链DNA文库中筛选与靶标高亲和力、高特异性结合的适配体,利用荧光分析法监控筛选过程中不同轮次所得次级文库与粪肠球菌的结合力,经12轮筛选和克隆测序,获得了39条适配体序列。进一步对筛选得到的适配体进行序列比对、二级结构分析、流式细胞分析、解离常数(Kd)测定及特异性验证,最终获得一条与粪肠球菌能特异性结合的适配体Apt 21,其K_d值为549.2±147.4 nmol/L。该适配体可作为粪肠球菌检测的识别元件,为建立基于适配体的新型粪肠球菌检测方法奠定了基础。

关键词：粪肠球菌适配体指数富集的配体系统进化技术荧光分析法解离常数

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核酸适配体介导脂质体靶向递送抗肿瘤药物的研究现状

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中国实验方剂学杂志 2020年第20期26卷 206-212页

作者：朱坤杨中澜张晓青宁双成周莉莉邹蔓姝夏新华湖南中医药大学长沙410208

肿瘤已成为危害人类健康和生命的第二大疾病,化学药物治疗(简称化疗)是最基本的治疗手段,但大多数化疗药物会对正常组织造成损害。如何更高效地递送抗肿瘤药物,提高药物在肿瘤部位的浓度,增强抗肿瘤作用,同时减少其在正常组织中的分布... 详细信息

肿瘤已成为危害人类健康和生命的第二大疾病,化学药物治疗(简称化疗)是最基本的治疗手段,但大多数化疗药物会对正常组织造成损害。如何更高效地递送抗肿瘤药物,提高药物在肿瘤部位的浓度,增强抗肿瘤作用,同时减少其在正常组织中的分布以减少对正常组织的损伤,是生物医药研究领域的难题。为实现抗肿瘤药物的精准递送并达到增效减毒的目标,研究人员利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX技术)筛选可特异性靶向肿瘤标志物或肿瘤细胞的核酸适配体,设计了以适配体为靶向分子(配体)的新型脂质体靶向递药系统。笔者对核酸适配体技术与常见的肿瘤标志物进行了简要介绍,并对适配体-脂质体递药系统的抗肿瘤研究进展进行了总结与分析,可为选择适宜的肿瘤标志物作为靶标以及应用核酸适配体技术研发高效低毒的抗肿瘤中药脂质体靶向制剂提供参考,同时对于促进核酸适配体技术在靶向递药系统中的应用具有重要意义。

关键词：适配体-脂质体靶向递药系统肿瘤标志物核酸适配体技术脂质体抗肿瘤指数富集的配体系统进化技术

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计算机辅助筛选核酸适配体技术

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生物工程学报 2022年第2期38卷 678-690页

作者：邓博文高思懿肖博懿吴雨龙孙豪王梁华孙铭娟海军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200433

计算机信息技术已经渗透到我们生活的方方面面,不仅可以辅助药物的筛选,也能够模拟药物的作用。目前已有研究使用计算机辅助技术筛选适配体,对筛选效率的提升和筛选高亲和力的适配体有着重要的指导作用。文中将主要对计算机通过序列评... 详细信息

计算机信息技术已经渗透到我们生活的方方面面,不仅可以辅助药物的筛选,也能够模拟药物的作用。目前已有研究使用计算机辅助技术筛选适配体,对筛选效率的提升和筛选高亲和力的适配体有着重要的指导作用。文中将主要对计算机通过序列评估、结构分析、分子对接3个方面辅助适配体筛选的方法进行综述。

关键词：适配体指数富集的配体系统进化技术计算机辅助筛选序列评估结构分析分子对接

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核酸适配体在肿瘤免疫治疗中的应用

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中国生物化学与分子生物学报 2022年第12期38卷 1586-1592页

作者：韩冬梅金昊天津市肿瘤医院空港医院肿瘤精准检测与转化中心天津300308

核酸适配体是指通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术得到的一种可以高特异性、高亲和性识别靶标物质的单链DNA或RNA,可以作为靶向性治疗的分子探针。指数富集的配体... 详细信息

核酸适配体是指通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术得到的一种可以高特异性、高亲和性识别靶标物质的单链DNA或RNA,可以作为靶向性治疗的分子探针。指数富集的配体系统进化技术即SELEX技术是在体外合成一个随机序列的文库,通过4个步骤孵育、分离、回收、扩增即可获得相对应的核酸适配体。通过几十年的发展,如今SELEX技术已成为一种重要的研究手段。核酸适配体具有稳定性强、分子量小、易进行化学合成和修饰、能特异性结合包括从小分子到细胞等靶标,识别范围广等优点,被广泛应用在肿瘤领域。免疫治疗与传统的肿瘤治疗方式不同,它是增强机体自身免疫系统来达到清除体内肿瘤细胞的一种方式,已被临床证明是治疗多种癌症的有效方法,例如针对免疫检查点CTLA4和PD-L1/PD-1的抗体,临床试验取得了成功,这为肿瘤的治疗带来了新的思路方法。目前,相关的免疫治疗药物已经上市应用于临床治疗,但是通过免疫治疗获益的肿瘤患者相对较少且会产生严重的副作用。核酸适配体与免疫相结合,为肿瘤的治疗提供了一种新的研究思路。本文总结了近年来针对免疫系统筛选获得的核酸适配体及其在肿瘤免疫治疗中的应用。

关键词：核酸适配体指数富集的配体系统进化技术免疫治疗

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