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文献类型

2 篇 学位论文

馆藏范围

2 篇 电子文献
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日期分布

学科分类号

2 篇 医学
- 1 篇 中医学
- 1 篇 中西医结合
- 1 篇 中药学(可授医学、...

主题

2 篇 雷公藤多苷
2 篇 颗粒细胞增殖
2 篇 新加归肾丸/补肾活...
2 篇 颗粒细胞凋亡
2 篇 pi3k/akt信号通路
1 篇 卵泡发育障碍
1 篇 颗粒细胞

机构

2 篇 成都中医药大学

作者

1 篇 龙旭
1 篇 蔡竞

语言

2 篇 中文

检索条件"主题词=新加归肾丸/补肾活血"

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详细简洁

排序：

基于PI3K/AKT信号通路研究新加归肾丸促卵泡发育的分子机制

基于PI3K/AKT信号通路研究新加归肾丸促卵泡发育的分子机制

引用

作者：蔡竞成都中医药大学

学位级别：博士

实验一：雷公藤多苷致卵泡发育障碍大鼠模型的构建目的：在前期研究的基础之上,复制雷公藤多苷致卵泡发育障碍大鼠模型,用于本课题的实验研究。方法：参照前期的实验研究,将符合实验条件的SD大鼠行阴道脱落细胞涂片,根据阴道涂片结果选... 详细信息

实验一：雷公藤多苷致卵泡发育障碍大鼠模型的构建目的：在前期研究的基础之上,复制雷公藤多苷致卵泡发育障碍大鼠模型,用于本课题的实验研究。方法：参照前期的实验研究,将符合实验条件的SD大鼠行阴道脱落细胞涂片,根据阴道涂片结果选出动情周期正常的16只为受试对象,随机分为2组,即模型和正常对照组,每组8只。其中模型组以雷公藤多苷40mg/kg·d剂量连续灌胃10周造模,正常对照组每日灌服等量的蒸馏水。造模第8周始行阴道脱落细胞涂片检查以判断动情周期变化,当所有大鼠出现动情周期延长或者紊乱时确定造模成功。股动脉采血检测性激素水平；剖腹取出双侧卵巢称重,并计算卵巢指数：卵巢组织切片HE染色,光学显微镜下观察卵泡的生长情况和闭锁情况,进一步验证模型是否成功。结果：经持续雷公藤多苷40mg/kg·d灌胃10周后,与正常对照组相比较,模型组动物表现为动情周期延长、紊乱,差异具有统计学意义(P<0.01)；血清E2、P降低,差异具有统计学意义(P<0.01),血清FSH、LH差异无统计学意义(P>0.05)；卵巢湿重和指数均降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；生长卵泡数目及黄体数目均减少,闭锁卵泡数目增多,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。这些表现均与人类的卵泡发育障碍性疾病相类似,确定造模成功。结论：雷公藤多苷40mg/kg·d剂量连续灌胃10周,可成功建造卵泡发育障碍大鼠模型。实验二：新加归肾丸对雷公藤多苷致卵泡发育障碍模型大鼠卵巢PI3K/AKT信号通路的影响目的：在实验一基础之上,以与卵泡发育密切相关的PI3K/AKT信号通路为切入点,再次复制雷公藤多苷致卵泡发育障碍大鼠模型,并以此为实验对象,研究雷公藤多苷抑制卵泡发育以及补肾活血中药复方新加归肾丸促卵泡发育与卵巢PI3K/AKT信号通路的关系,从细胞增殖和细胞凋亡两方面深入探讨补肾活血中药复方新加归肾丸促卵泡发育的分子机制。方法：参照实验一的造模方法,建立45只卵泡发育障碍的大鼠模型,随机分为5组,每组9只,分别为：模型对照组、西药对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,加上造模前随机取出的9只(正常对照组),共6组。中药各剂量组分别给予补肾活血中药复方新加归肾丸高、中、低剂量治疗；西药对照组给予戊酸雌二醇和醋酸甲羟孕酮序贯治疗；模型对照组和正常对照组给予等量的蒸馏水灌胃。所有动物均灌胃2周,灌胃期间行阴道脱落细胞涂片检查观察大鼠动情周期变化：灌胃结束后采血,检测血清E2、P、FSH、LH水平；采血后处死大鼠,称取体重,摘取双侧卵巢组织,称取卵巢湿重,计算卵巢指数；卵巢切片HE染色,光学显微镜下计数各级卵泡、闭锁卵泡及黄体的数目,并测量颗粒细胞的厚度；采用western-blot法分别检测卵巢组织中PI3K/AKT信号通路中的主要信号分子p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白含量；采用RT-PCR去检测卵巢组织中cyclinD2mRNA、BaxmRNA的表达水平；采用免疫组化法检p-AKT、 cyclinD2、Caspase-3、PTEN在卵巢颗粒细胞中的表达。分别将cyclinD2、 Caspase-3、BaxmRNA与p-AKT在卵巢颗粒细胞中的表达进行相关性分析。结果：①与正常对照组相比,模型对照组大鼠动情周期延长,体重、卵巢湿重、卵巢指数、血清E2、P水平均降低,各级生长卵泡数、黄体数目减少,闭锁卵泡数目增多,颗粒细胞厚度降低,卵巢p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K、cyclinD2、 cyclinD2mRNA水平均降低,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；Caspase-3表达均升高,差异均具有统计学意义(P<0.01)：血清FSH、LH水平和卵巢颗粒细胞PTEN表达差异均无统计学意义(P>0.05)。②应用不同剂量的补肾活血中药复方新加归肾丸治疗2周后,其中中药高、中剂量组与模型对照组相比较,大鼠动情周期缩短,体重、卵巢湿重、卵巢指数、血清E2、P水平均升高,各级生长卵泡数、黄体数目增多,闭锁卵泡数目减少,颗粒细胞厚度增加,卵巢p-mTOR、p-p70S6K、cyclinD2mRNA水平均升高,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01); BaxmRNA、Caspase-3表达均降低,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；血清FSH、LH和卵巢PTEN差异均无统计学意义(P>0.05)。中药低剂量组大鼠体重和颗粒细胞Caspase-3表达较模型组升高,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其他指标差异均无统计学意义(P>0.05)。③相关性分析结果：颗粒细胞中cyclinD2与p-AK

关键词：雷公藤多苷卵泡发育障碍新加归肾丸/补肾活血 PI3K/AKT信号通路颗粒细胞增殖颗粒细胞凋亡

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基于PI3K/AKT信号通路研究新加归肾丸调节大鼠卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的分子机制

基于PI3K/AKT信号通路研究新加归肾丸调节大鼠卵巢颗粒细胞增殖、...

引用

作者：龙旭成都中医药大学

学位级别：博士

第一部分：雷公藤多苷致体外培养大鼠卵巢颗粒细胞损伤量效关系的研究目的：获取不同剂量雷公藤多苷灌胃大鼠的含药血清,用MTT法研究雷公藤多苷致体外培养大鼠卵巢颗粒细胞损伤的量效关系。方法：160mg/kg·d (A)、0mg/kg·d (B... 详细信息

第一部分：雷公藤多苷致体外培养大鼠卵巢颗粒细胞损伤量效关系的研究目的：获取不同剂量雷公藤多苷灌胃大鼠的含药血清,用MTT法研究雷公藤多苷致体外培养大鼠卵巢颗粒细胞损伤的量效关系。方法：160mg/kg·d (A)、0mg/kg·d (B)、40mg/kg·d (C)三种不同剂量雷公藤多苷(GTW)灌胃大鼠,每天2次,4天后采血,制备大鼠含药血清分为GTW-A、GTW-B、GTW-C三组；将获取的大鼠卵巢颗粒细胞分为4组,以4.9mg/L顺铂为阳性参照组,用MTT法测得顺铂组、GTW-A、GTW-B、GTW-C四组药物作用颗粒细胞48小时后的OD值进行比较；用酶联免疫法(Elisa)测得不同药物作用后颗粒细胞雌二醇(E2)分泌量。结果：80mg/kg.d雷公藤多苷含药血清对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞抑制作用与顺铂比较无统计学差异(P>0.05),雌二醇(E2)分泌量与顺铂组比较无统计学差异(P>0.05)。结论：80mg/kg·d雷公藤多苷含药血清作用于体外培养大鼠卵巢颗粒细胞,能获得与顺铂相同的抑制效果。第二部分：新加归肾丸对受雷公藤多苷抑制体外培养大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/AKT信号通路的影响目的：在第一部分实验的基础之上,选用与颗粒细胞发育密切相关的PI3K/AKT信号通路为切入点,从细胞增殖、凋亡两方面探讨雷公藤多苷抑制体外培养大鼠卵巢颗粒细胞以及补肾活血复方中药促体外培养大鼠颗粒细胞增生与PI3K/AKT信号通路的相关性。方法：将培育成功的大鼠卵巢颗粒细胞分为5组：正常对照组、GTW组、促卵泡生成素(FSH)组、GTW+中药低剂量组、GTW+中药高剂量组。正常对照组给予等量蒸馏水灌胃大鼠获取的血清,其余四组先加入80mg/kg·d雷公藤多苷大鼠含药血清作用48小时后,于FSH组加入含FSH大鼠血清,中药低剂量组和中药高剂量组分别加入相应剂量的大鼠含药血清,48小时后,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测颗粒细胞中PI3K/AKT信号通路中的主要信号分子：p-AKTmRNA、p-mTORmRNA、p-p70S6KmRNA、PTENmRNA相对表达水平；蛋白质免疫印迹实验法(western-blotting)检测颗粒细胞中cyclinD2、PCNA、 caspase-3、survivin蛋白含量；用Elsia法测定颗粒细胞分泌雌二醇(E2)、孕酮(P)量。分别将cyclinD2、caspase-3与p-AKT; cyclinD2与PCNA; caspase-3与survivin在卵巢颗粒细胞中的表达进行相关性分析。结果：①与正常对照组相比,GTW组颗粒细胞上的p-AKTmRNA相对表达、p-mTORmRNA相对表达、p-p70S6KmRNA相对表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01); cyclinD2、PCNA、survivin蛋白含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；caspase-3蛋白含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01); PTENmRNA相对表达量无统计学意义(P>0.05)；颗粒细胞分泌雌二醇(E2)、孕酮(P)水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。②应用不同剂量的补肾活血复方中药新加归肾丸大鼠含药血清作用48小时后,中药高剂量组与GTW组相比,颗粒细胞中p-AKTmRNA相对表达、p-mTORmRNA相对表达、cyclinD2蛋白含量、PCNA蛋白含量、survivin蛋白含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);caspase-3蛋白含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；PTENmRNA相对表达量无统计学意义(P>0.05)；颗粒细胞分泌雌二醇(E2)、孕酮(P)水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。中药低剂量组与GTW组相比,颗粒细胞中p-AKTmRNA升高,颗粒细胞分泌雌二醇(E2)、孕酮(P)水平升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；其他指标均无统计学意义(P>0.05)。③相关性分析结果：颗粒细胞中cyclinD2与p-AKT表达呈显著正相关关系(r=0.770,P<0.01)；颗粒细胞中caspase-3与p-AKT表达呈显著负相关关系(r=-0.779,P<0.01)；颗粒细胞中cyclinD2与PCNA表达呈显著正相关关系(r=0.547,P<0.05)；颗粒细胞中caspase-3与survivin表达呈显著负相关关系(r=-0.732,P<0.01)。结论：雷公藤多苷可能通过抑制卵巢颗粒细胞中PI3K/AKT信号通路信号分子AKT的级联激活反应,抑制其下游信号分子p-mTOR、p-p70S6K的活化,上调PTEN表达,使有丝分裂

关键词：雷公藤多苷颗粒细胞新加归肾丸/补肾活血 PI3K/AKT信号通路颗粒细胞增殖颗粒细胞凋亡

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