检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2023年

作者：支雪纯梁露静张丹丹仇旭升宋翠萍孙英杰廖瑛丁铲谭磊广西大学动物科学技术学院中国农业科学院上海兽医研究所

对实验室前期构建的新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）载体表达鸡传染性支气管炎鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus，IBV）表位疫苗候选株rLa-IBV-epi进行免疫效力评价。为验证该疫苗候选株的免疫效力，本... 详细信息

对实验室前期构建的新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）载体表达鸡传染性支气管炎鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus，IBV）表位疫苗候选株rLa-IBV-epi进行免疫效力评价。为验证该疫苗候选株的免疫效力，本研究通过免疫3日龄SPF雏鸡，对鸡群抗体水平监测发现两周后达到顶峰，三周内维持在一个较高的水平。攻毒保护试验表明rLa-IBV-epi株对试验鸡的IBV攻毒保护率大于90%，NDV攻毒保护率达100%。本研究为rLa-IBV-epi疫苗候选株的进一步生产使用奠定了基础。

关键词：新城疫病毒载体传染性支气管炎病毒表位重组疫苗免疫保护效力

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新城疫病毒载体表达鸡传染性支气管炎表位疫苗候选株保护性评价

新城疫病毒载体表达鸡传染性支气管炎表位疫苗候选株保护性评价

引用

作者：支雪纯广西大学

学位级别：硕士

新城疫（Newcastle Disease,ND）和鸡传染性支气管炎（Infectious Bronchitis,IB）,是我国两种重要的家禽感染性疾病,两种疾病均能够给养殖业带来严重的经济损失,造成蛋鸡生产性能下降以及肉鸡死亡等后果,成为制约我国家禽养殖业发展的... 详细信息

新城疫（Newcastle Disease,ND）和鸡传染性支气管炎（Infectious Bronchitis,IB）,是我国两种重要的家禽感染性疾病,两种疾病均能够给养殖业带来严重的经济损失,造成蛋鸡生产性能下降以及肉鸡死亡等后果,成为制约我国家禽养殖业发展的重要疫病。到现在为止,我国对这两种疫病的主要防治手段依赖疫苗预防,传统的疫苗包括减毒活疫苗和灭活苗。但是对IB这种血清型众多且容易发生突变的疫病,传统灭活疫苗的缺陷就会被放大,交叉免疫保护性效果不佳,而减毒活疫苗与新城疫活疫苗联合使用时,容易产生免疫干扰,造成免疫失败。这促使研究者需要开发新型疫苗研究的进程。能够同时表达多个抗原表位的基因工程苗称为多表位疫苗,最典型的表位组合方式是特异性抗原表位加上辅助性表位（CTL/Th细胞/B细胞表位）,选择特异性抗原表位时要尽可能的选择不同血清型之间较为保守的,以减少基因组突变产生的影响;选择辅助性表位时,要选择激活免疫细胞能力最强的部分,以期达到最好的免疫水平。本研究所用的rLa-IBV-epi候选株由本实验室前期构建完成,选取新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）La Sota株为载体,选取IBV-S1蛋白的T/B淋巴细胞功能性表位插入NDV的P和M基因之间,利用反向遗传技术在体外拯救出重组病毒rLa-IBV-epi作为疫苗候选株。本研究主要是参照中华人民共和国兽药典（2020年版）中的相关规定建立评价免疫保护性相关检测方法对rLa-IBV-epi活疫苗候选株进行免疫保护性评价。首先对疫苗候选株rLa-IBV-epi安全性进行评估;10日龄的SPF雏鸡滴鼻点眼接种rLa-IBV-epi后,观察30 d,疫苗接种组与接种无菌PBS对照组临床症状无明显差别（p>0.05）,剖检观察均无病变反应。随后,针对不同日龄的SPF鸡免疫接种10～3 EID50-10～7EID50不同免疫剂量的rLa-IBV-epi株,结果表明:最低接种量为10～4EID50/羽时的试验鸡免疫后21d采血测定的血凝抑制效价HI滴度大于6.0,NDV强毒攻毒保护率大于100%。为了优化免疫程序,对7龄SPF雏鸡免疫rLa-IBV-epi株后进行为期14周的观察,鸡群在10周内HI滴度>8.0,虽然10周后HI滴度水平有所下降,但是14周观察期内鸡只均能够完全保护NDV攻毒。rLa-IBV-epi株免疫7龄SPF雏鸡,免疫后28 d内每隔7 d对试验鸡群采血,分离制备血清,利用构建好的间接ELISA方法对Ig抗体进行检测,结果表明:免疫后7日后抗体水平即快速上升,并且在14 d到达高峰随后下降并保持较高水平。同时,对试验鸡进行体重监测,发现NDV和IBV攻毒后免疫组的鸡群体重保持上升,对照组在攻毒后体重持续下降。NDV攻毒对照组在攻毒后三天内全部死亡;IBV攻毒对照组在攻毒后8d全部死亡;免疫组均表现良好。剖解观察期内的死亡病例,发现传染性支气管炎病毒攻毒对照组出现“花斑肾”、气管出血、粘液等病变现象,而免疫组在观察期结束后进行剖解,器官无明显异常。定期采集观察期间的试验鸡气管拭子和泄殖腔拭子监测气管和泄殖腔的排毒情况,对照组在死亡前气管和泄殖腔一直处于排毒状态,免疫组鸡只的不排毒。在本研究的试验观察期内,rLa-IBV-epi疫苗候选株免疫SPF雏鸡能够100%保护新城疫病毒强毒攻毒,对IBV攻毒保护率为90%。上述结果表明该疫苗候选株具有较好地应用前景。

关键词：新城疫病毒载体传染性支气管炎病毒表位重组疫苗免疫保护效力

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响

引用

中国兽医科学 2024年第6期54卷 711-717页

作者：傅彦贇石磊杨星竹胡娇胡增垒扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为了评价HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响,本研究向NDV载体携带的H7N9 HA蛋白中引入S227N突变,用反向遗传学技术拯救重组NDV,评价重组病毒的生物学特性与对鸡的免疫原性。结果显示,表达HAS... 详细信息

为了评价HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响,本研究向NDV载体携带的H7N9 HA蛋白中引入S227N突变,用反向遗传学技术拯救重组NDV,评价重组病毒的生物学特性与对鸡的免疫原性。结果显示,表达HAS227N的重组NDV的毒力弱(MDT>120 h),在鸡胚中的病毒效价高(HA效价:512;EID_(50):10^(9.3)/m L),复制性能较强,这些生物学特征与载体病毒及表达野生型HA蛋白的重组NDV相似。S227N突变不影响HA蛋白在重组NDV感染细胞中的表达。此外,表达HAS227N与野生型HA蛋白的重组NDV均能诱导产生较高的抗NDV血凝抑制(HI)抗体;HA蛋白S227N突变能够提高重组NDV免疫鸡的血清转化率,却不能显著提升针对H7N9的HI抗体效价。上述结果表明,HA蛋白S227N突变对基于NDV载体的H7N9亚型禽流感疫苗的免疫原性没有显著的增强作用。本研究对H7N9亚型禽流感疫苗的设计、优化与效力评估有参考意义。

关键词： H7N9亚型禽流感病毒疫苗新城疫病毒载体 HA蛋白 S227N突变免疫原性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重组新城疫病毒载体疫苗研究进展

引用

动物医学进展 2022年第8期43卷 78-83页

作者：王芳楚富茗王秋霞卢浪蔡畅张新李文霞裴大伟刘兴友河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 新乡学院河南新乡453003 厚德食品股份有限公司吉林辽源136200

新城疫病毒(NDV)作为疫苗载体可以在宿主的呼吸道组织细胞中有效复制,诱导产生针对外来抗原的局部和全身免疫反应。NDV的基因组较大,可以很好地容纳外源基因。作为RNA病毒,与宿主细胞发生DNA重组的可能性较小。由于宿主范围的限制,人群... 详细信息

新城疫病毒(NDV)作为疫苗载体可以在宿主的呼吸道组织细胞中有效复制,诱导产生针对外来抗原的局部和全身免疫反应。NDV的基因组较大,可以很好地容纳外源基因。作为RNA病毒,与宿主细胞发生DNA重组的可能性较小。由于宿主范围的限制,人群中没有预先存在的NDV抗体,NDV对人类来说相对安全。因此,NDV作为一种疫苗载体颇受关注。论文简要论述了NDV的生物学特征,外源基因的插入方式,重点阐述了重组新城疫病毒载体疫苗的研究进展,以期为设计其他有效的兽用和人用活载体疫苗提供参考。

关键词：新城疫病毒新城疫病毒载体重组病毒载体疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新城疫病毒载体疫苗研究进展

引用

广东畜牧兽医科技 2023年第2期48卷 18-23页

作者：张国丽徐少珠邝贞结潘成稚肖杰齐冬梅广东永顺生物制药股份有限公司广东广州511356

新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)作为载体已成功地应用于多种人类和动物疫病疫苗的研发中。大量研究表明,重组新城疫病毒(Recombinant NDV,rNDV)载体疫苗相较于传统疫苗无论在体液免疫、黏膜免疫,还是攻毒保护等方面均有较好... 详细信息

新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)作为载体已成功地应用于多种人类和动物疫病疫苗的研发中。大量研究表明,重组新城疫病毒(Recombinant NDV,rNDV)载体疫苗相较于传统疫苗无论在体液免疫、黏膜免疫,还是攻毒保护等方面均有较好的表现。NDV载体已成为研制安全、高效、低毒、免疫原性更佳的载体疫苗的重要工具。该文综述了利用NDV作为疫苗载体的反向遗传学技术在家禽、哺乳动物和人用新型疫苗研制方面的进展,以期为更好地利用NDV载体研制更多的疫苗提供新的思路。

关键词：反向遗传学技术新城疫病毒载体疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

天蚕素AD抗菌肽在新城疫病毒载体系统中的表达及抑菌效果研究

天蚕素AD抗菌肽在新城疫病毒载体系统中的表达及抑菌效果研究

引用

作者：任项霏华中农业大学

学位级别：硕士

人类对抗生素的依赖导致其被滥用,最终导致产生大量的耐药菌甚至超级耐药菌。抗菌肽具有独特的作用机制不易使细菌产生耐药性,因此,抗菌肽有望成为最佳的抗生素替代品。天蚕素抗菌多肽（Cecropin）是最早被发现且杀菌/抑菌效果较好的抗... 详细信息

人类对抗生素的依赖导致其被滥用,最终导致产生大量的耐药菌甚至超级耐药菌。抗菌肽具有独特的作用机制不易使细菌产生耐药性,因此,抗菌肽有望成为最佳的抗生素替代品。天蚕素抗菌多肽（Cecropin）是最早被发现且杀菌/抑菌效果较好的抗菌肽,天蚕素AD（Cecropin AD,CAD）就是其中一种。因人工合成的成本昂贵,所以急需合适的表达系统来表达CAD抗菌多肽,使其可以广泛用于细菌病的治疗。本研究构建并拯救了表达CAD的新城疫载体活病毒疫苗候选株,通过免疫宿主在其体内持续产生CAD抗菌多肽,作用于感染部位并杀死细菌,从而起到治疗细菌病的目的。本课题的主要研究内容和结果如下:1、重组新城疫病毒全长质粒的构建及病毒拯救采用In-Fusion同源重组的方式将CAD和CAD3基因片段分别插入至NDV TS09-C株载体的P和M基因之间的非编码区中,并利用反向遗传操作系统成功拯救出两种重组新城疫病毒r TS-CAD和r TS-CAD3。重组病毒r TS-CAD能在SPF鸡胚中稳定增殖,但重组病毒r TS-CAD3在传至第5代时发生CAD拷贝数缺失现象,不能稳定传代。通过生物学特性分析,在NDV TS09-C株的P和M基因之间插入CAD和CAD3基因并不会改变亲本株的弱毒和增殖特性。间接免疫荧光试验证实重组新城疫病毒能在BHK-21细胞中成功表达抗菌肽CAD和CAD3。2、重组新城疫病毒表达的天蚕素AD对细菌的抑制作用本研究采用生长曲线法、微孔板法和DF-1细胞共培养3种方法来验证重组病毒表达的CAD抗菌肽在体外对细菌的抑制作用。利用生长曲线法测定时发现,重组病毒组均在第2-4 h内抑菌效果最好,分别可将金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,***）的存活率降低至47.0%-57.0%和9.9%-18.8%。微孔板法抑菌试验中,重组病毒组对***的抑制率分别为79.6%-91.7%和79.7%-93.7%;对大肠杆菌（Escherichia coli,***）的抑制率分别为87.5%-89.8%和79.7%-87.5%。与DF-1细胞共培养实验中,重组病毒组对***的抑制率分别可达到74.5%-77.7%和30.0%-68.0%;对***的抑制率分别为35.0%-45.0%和8.0%-45.0%。综上可知,NDV载体系统表达的CAD和CAD3在体外对***（ATCC 29213）(G+)和***（ATCC 25922）(G-)均有一定的抑制作用,且对***的抑制效果更好。另外,利用不同试验方法测得r TS-CAD3和r TS-CAD组的体外抑菌率无显著差异。为了证明重组病毒表达的CAD抗菌肽在体内的抑菌活性,建立小鼠伤口感染***的动物模型,再经皮下注射r TS-CAD和r TS-CAD3两种重组病毒至伤口皮肤周围。接种后第7 d发现伤口处***数量与对照组相比显著减少（P<0.01）,且r TS-CAD3组菌落数显著少于r TS-CAD组（P<0.01）;伤口大小明显缩小;伤口处皮肤病理切片显示r TS-CAD和r TS-CAD3两组的皮肤组织的表皮局部增厚,皮下可见大量结缔组织增生以及大量新生的毛细血管,逐渐进入愈合四期,而对照组的皮肤结构不清,部分皮肤坏死,愈合缓慢。综上证明,重组病毒表达的CAD抗菌多肽可以在小鼠体内对***表现出较强的抑制作用,且r TS-CAD3组抑制效果优于r TS-CAD组,同时也促进了小鼠伤口的快速愈合。3、鸡肺部和肠道菌群多样性分析本研究中,2周龄的SPF雏鸡分别接种r TS-CAD和r TS-CAD3,7d-21d的NDV抗体水平与NDV载体对照组相比并没有显著提高。对鸡肺部菌群进行16S测序后发现,主要是由拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门以及放线菌门四大菌门组成。经样本群落结构分析可知,重组病毒组的鸡肺部菌群丰富度均提高。此外,通过Kruskal Wallis算法分析筛选出几种差异显著的菌群,如肠杆菌、乳酸菌和双歧杆菌等。分析结果发现,重组病毒组能够显著抑制肠杆菌和拟杆菌等致病菌,并且提高乳酸菌和双歧杆菌等益生菌的菌群丰度;表达CAD3的重组病毒对肠杆菌等致病菌的抑制程度显著高于r TS-CAD组（P<0.01）。对鸡盲肠内容物进行测序后发现,不同实验组的肠道菌群在门水平上的菌群丰度存在一定的差异,其中重组病毒组的菌群丰度略高于TS09-C对照组。数据分析发现,重组病毒两组鸡肠道内的拟杆菌、瘤胃球菌等厌氧菌菌群丰度均显著低于TS09-C对照组（P<0.1）,且r TS-CAD3组显著低于r TS-CAD组（P<0.01）,乳酸菌和芽孢杆菌等有益菌均显著高于TS09-C对照组（P<0.05）,

关键词：天蚕素AD 新城疫病毒载体反向遗传操作系统抗菌肽菌群丰度

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基于新城疫病毒载体靶向呼吸道递送H7亚型禽流感病毒广谱性中和抗体的研究

基于新城疫病毒载体靶向呼吸道递送H7亚型禽流感病毒广谱性中和抗...

引用

作者：何晓政扬州大学

学位级别：硕士

H7亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)是威胁我国和欧美许多国家家禽养殖业发展的重要疫病。此外,多种H7亚型AIV都曾引起人的感染发病与死亡,包括H7N3、H7N4、H7N7、H7N9亚型。由于人群中普遍缺少针对H7亚型AIV的免疫力,H7亚型... 详细信息

H7亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)是威胁我国和欧美许多国家家禽养殖业发展的重要疫病。此外,多种H7亚型AIV都曾引起人的感染发病与死亡,包括H7N3、H7N4、H7N7、H7N9亚型。由于人群中普遍缺少针对H7亚型AIV的免疫力,H7亚型病毒对公共卫生具有较大的威胁。因此,研究对于H7亚型AIV有广谱保护力的抗病毒制剂具有重要意义。目前,临床上使用的抗流感病毒药物普遍存在耐药性的问题,抗体制剂作为病毒性传染病防治的有效手段受到高度关注。值得指出的是,现有的抗体药物主要通过静脉途径给药,而包括H7亚型AIV在内的流感病毒主要感染并侵害人的呼吸系统。通过传统静脉给药方式,抗体在呼吸道的浓度与生物利用度较低,对流感病毒的抑制作用有限。因此,研制靶向呼吸道的抗体制剂对H7亚型AIV的防治具有较大的意义。新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是一种高效的病毒载体,在构建人与动物新型疫苗方面得到了广泛应用。此外,NDV也被用于抗体、细胞因子、蛋白等生物大分子的靶向递送。NDV可引起哺乳动物或人的一过性感染,且病毒复制局限于呼吸系统中。因此,NDV是靶向呼吸道递送抗体制剂的潜在载体。为了研制能够靶向呼吸系统的抗体制剂,本研究首先在小鼠模型中评价了一株对H7N9亚型AIV具有较强中和活性的单克隆抗体(单抗:4B7)经鼻腔接种的保护效力;构建了表达4B7单链抗体(sc Fv)和全长抗体(IgG)的重组NDV,并评价了重组病毒的生物学特性、抗体表达、对不同H7亚型AIV的保护效力。本研究为H7亚型AIV广谱性抗体制剂的靶向、高效投放提供了新的技术手段,对重要人兽共患病与病毒性传染病的防控有较大的参考意义。 1.针对H7N9亚型AIV的中和性单抗鼻腔接种的保护效力评价前期研究中获得一株对H7N9亚型AIV具有较强中和活性的单抗4B7,本研究在小鼠模型中评价了单抗4B7经全身(腹腔)与局部途径(鼻腔)接种对H7N9亚型AIV的保护效力。预防性保护试验结果显示,在剂量为1、3、10 mg/kg时,抗体经腹腔与鼻腔两种途径接种均能提供完全保护,并且能够显著改善肺脏病变;当抗体剂量降低至0.3 mg/kg时,经鼻腔接种抗体的小鼠能够获得完全保护,而经腹腔接种抗体的小鼠仅有20%得到保护;0.1 mg/kg的抗体经鼻腔接种后仍然能够提供60%的保护,而经腹腔接种不能提供保护。此外,与腹腔途径相比,单抗4B7(0.3 mg/kg)经鼻腔接种可以显著抑制病毒在肺脏中的复制与肺损伤。治疗性保护试验显示,在H7N9亚型AIV攻毒后的48 h,经鼻腔接种抗体(10 mg/kg)的小鼠获得了100%的保护,而经腹腔接种抗体的小鼠保护率为40%;在H7N9亚型AIV攻毒后72 h,经两种途径接种抗体提供的保护率均较低。研究结果说明,中和性单抗4B7经鼻腔接种对H7N9亚型AIV的完全保护剂量是经腹腔接种保护剂量的1/10,提示将抗体直接递送至小鼠呼吸道所需的抗体剂量更低、对H7N9病毒的保护效力更强。 2.基于NDV载体递送H7N9亚型AIV单链抗体的研究由抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)构成的单链抗体(sc Fv)具有与完整IgG相似的抗原结合性,但是分子量更小、组织渗透性更强。因此,本研究首先对单抗4B7进行测序,并将抗体的sc Fv片段插入NDV载体;用反向遗传学技术拯救了重组NDV,鉴定了重组病毒的生物学特性,并评价了重组NDV表达的sc Fv对H7N9亚型AIV的体外中和活性与在小鼠模型中的保护效力。结果显示,成功扩增了4B7的VH和VL基因;将sc Fv基因片段(VH-GS linker-VL)插入NDV的P和M基因之间,成功拯救了一株重组NDV(rNDV-4B7scFV)。重组病毒在鸡胚与细胞中均具有较高的滴度,病毒对鸡胚的平均致死时间(MDT)大于120 h,这些特性与母本病毒La Sota相似。rNDV-4B7scFV在哺乳动物及禽源细胞中均能表达scFV,且抗体在禽源细胞中能够分泌表达。此外,在细胞模型中,重组NDV表达的scFV对H7N9亚型AIV具有中和活性。但是,重组NDV与H7N9病毒同时感染鸡胚,发现NDV对H7N9病毒的复制存在干扰。小鼠的预防性保护试验显示,提前72 h经鼻腔接种重组NDV的小鼠在H7N9病毒感染后,仅能获得25%的保护力。结果说明,经鼻腔接种rNDV-4B7scFV可对H7N9亚型AIV的感染起到一定的保护,但是保护力较弱。 3.基于NDV载体递送H7N9亚型AIV全长抗体的研究由于利用NDV载体表达递送4B7 sc Fv对小鼠的保护水平较低,本研究进一步在NDV载体中表达完整的4B7 IgG分子。将4B7的重链基

关键词： H7亚型禽流感病毒新城疫病毒载体抗体递送单链抗体靶向递送中和活性呼吸系统保护效力广谱性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新型重组新城疫病毒(NDV)表达系统的建立及最佳外源基因表达位置的确定

新型重组新城疫病毒(NDV)表达系统的建立及最佳外源基因表达位置...

引用

作者：张振宇东北农业大学

学位级别：博士

新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染所引起的一种急性并有高度接触性的禽类传染病。ND自从被发现以来,已经多次在世界范围内大型爆发过,对世界范围内的养禽业构成了十分严重威胁,目前是世界... 详细信息

新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染所引起的一种急性并有高度接触性的禽类传染病。ND自从被发现以来,已经多次在世界范围内大型爆发过,对世界范围内的养禽业构成了十分严重威胁,目前是世界上最严重的禽类传染病之一。城疫病毒NDV按照致病型的不同一般分为三类,即速发型、中发型和缓发型。这其中,速发型NDV又可分为嗜内脏型和嗜肺脑型。消化道出血性病变是速发性嗜内脏型NDV的主要特征,其致死率高达90%以上。自从NDV的反向遗传系统被建立以来,已经成功拯救多个NDV毒株。众所周知,在表达载体相同的情况下,疫苗的免疫效果通常与所插入的具有免疫原性的外源基因的表达量息息相关。即外源基因表达量越高,免疫效果通常越好。但是,一般情况下,外源基因插入载体的位置不同,其表达量也会不同。NDV病毒载体传统的外源基因携带方式是将目的基因插入到两个病毒基因组基因之间,形成一个独立的基因框架,增加了病毒基因的数量。影响病毒的生长和复制。为了进一步确定外源基因的最佳表达位置,我们先后将内部核糖体进入位点-红色荧光蛋白IRES-RFP插入到NDV r La Sota载体的NP基因内部、P基因内部、M基因内部、F基因内部、HN基因内部以及L基因内部,成功的构建并拯救了一系列的外源基因(IRES-RFP)插入位置不同的重组NDV。通过分析TCID50、EID50、MDT、ICPI等多项生物学特性指标得出,拯救病毒r LS-NP-IRES-RFP,rLS-P-IRES-RFP,r LS-M-IRES-RFP,rLS-F-IRES-RFP,rLS-HN-IRES-RFP和r LS-L-IRES-RFP很好的保持了其亲本病毒rLa Sota弱毒株的生物学特性,并未发现任何毒力增强的现象。同时,病毒的生长曲线结果显示,所有拯救病毒均表现出了与rLa Sota病毒相似的复制特性及生长动力学特性。说明用IRES携带外源基因,插入在NDV基因组基因的尾部这一新的外源基因的携带方法对病毒的复制和生长几乎没有任何影响,很好的解决了传统方法将外源基因插入到基因组基因之间所带来的影响病毒生长复制的弊端。之后,我们又采用多功能酶标仪和Real-time PCR等检测手段,在蛋白水平和转录水平分别对重组病毒RFP基因的表达进行了鉴定,实验结果不仅首次系统直接的证实了新城疫病毒m RNA转录量是按照基因组3`至5`的顺序逐次递减的理论,更为重要的是,根据实验结果,与其他外源基因插入位点相比较,当IRES-RFP位于NDV rLa Sota载体NP基因内部作为第二个阅读框时,外源蛋白的表达量最高。这说明,在不影响病毒自身生长和复制的同时,通过IRES作为第二阅读框,NDV rLa Sota基因组NP基因内部为外源基因表达的最佳位置。

关键词：新城疫病毒载体外源基因表达内部核糖体进入位点红色荧光蛋白反向遗传系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新城疫载体系统表达天蚕素AD抗菌肽及其抑菌效果

引用

中国兽医学报 2023年第9期43卷 1820-1827页

作者：任项霏冯贺龙徐英英李丽杨宏春王鑫商雨阳柳君周祖涛李自力刘梅罗青平胡思顺温国元华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院湖北武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430064 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室湖北武汉430064 畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北武汉430064 湖北洪山实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

为探究天蚕素AD抗菌肽是否能在新城疫病毒(NDV)载体系统中表达,且通过该种表达系统得到的CAD是否有生物活性。采用同源重组的方式将CAD插入至NDV载体pTS09-C中,并利用反向遗传操作系统成功拯救出重组病毒rTS-CAD,该重组病毒能在SPF鸡胚... 详细信息

为探究天蚕素AD抗菌肽是否能在新城疫病毒(NDV)载体系统中表达,且通过该种表达系统得到的CAD是否有生物活性。采用同源重组的方式将CAD插入至NDV载体pTS09-C中,并利用反向遗传操作系统成功拯救出重组病毒rTS-CAD,该重组病毒能在SPF鸡胚中稳定增殖。通过生物学特性分析,在NDV TS09-C株的P和M基因之间插入CAD基因并未改变其的弱毒和增殖特性。间接免疫荧光试验证实重组病毒能在BHK-21细胞中稳定表达CAD抗菌肽。抑菌试验结果显示,NDV载体系统表达的CAD对金黄色葡萄球菌(G+)和大肠杆菌(G-)均有一定的抑制作用:在微孔板法抑菌试验中,重组病毒表达的CAD抗菌肽对金黄色葡萄球菌的抑制率为79.6%~91.7%,对大肠杆菌的抑制率为87.5%~89.8%;在与DF-1细胞共培养试验中,重组病毒表达的CAD抗菌肽对金黄色葡萄球菌的抑制率可以达到74.5%~77.7%,对大肠杆菌的抑制率为35.0%~45.0%。本研究表明,NDV载体系统能够成功表达出有活性的CAD抗菌肽,且有良好的抑菌效果。这一研究为探索NDV载体表达抗菌肽和进一步研究CAD的局部效应奠定了一定的理论基础。

关键词：天蚕素AD 新城疫病毒载体反向遗传操作系统抗菌肽

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达鸡传染性喉气管炎病毒gB蛋白重组新城疫病毒的构建及其免疫效力的评估

表达鸡传染性喉气管炎病毒gB蛋白重组新城疫病毒的构建及其免疫效...

引用

作者：贺言武汉轻工大学

学位级别：硕士

鸡传染性喉气管炎(Infectious laryngotracheitis,ILT)是由传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis Virus,ILTV)引起的一种禽类急性呼吸道疾病,典型的临床症状为精神沉郁、呼吸困难、眼睑肿胀、咯出带血粘液等。当前防控该病... 详细信息

鸡传染性喉气管炎(Infectious laryngotracheitis,ILT)是由传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis Virus,ILTV)引起的一种禽类急性呼吸道疾病,典型的临床症状为精神沉郁、呼吸困难、眼睑肿胀、咯出带血粘液等。当前防控该病的主要方式是疫苗接种,以弱毒疫苗为主,然而其存在毒力返强的风险,所以新型ILTV疫苗的研制极为重要。gB蛋白是ILTV的主要保护性抗原。本研究利用反向遗传操作技术将ILTV gB基因插入到新城疫病毒耐热株(TS09-C株)中,获得重组新城疫病毒r TS-gB,测定了其生物学特性和评估了其免疫效力;同时建立了配套的ILTV抗体间接ELISA检测方法。具体研究内容和结果如下:1.表达鸡传染性喉气管炎gB基因的重组新城疫病毒的构建及其免疫保护实验通过PCR方法扩增获得ILTV WG株的gB基因,并将其插入到NDV TS09-C株基因组P和M基因之间,拯救获得重组病毒r TS-gB。间接免疫荧光和Western-Blot结果显示gB蛋白可以在重组病毒感染的细胞内表达。重组病毒的最小致死剂量的平均致死时间(MDT)大于168小时;1日龄SPF雏鸡的脑内致病指数(ICPI)为0;56℃热稳定性实验表明r TS-gB与TS09-C株的热稳定性相近;表明重组病毒r TS-gB保持了亲本TS09-C株的弱毒、耐热的生物学特性。为了评价重组病毒r TS-gB的免疫效果,进行1月龄SPF鸡免疫实验。免疫后14天,r TS-gB免疫的鸡的NDV抗体血凝抑制效价大于4 log,且间接ELISA方法检测的ILTV抗体阳性率达100%(与商品苗免疫效果一致)。免疫14天后用ILTV WG强毒株进行攻毒试验,观察临床发病症状,结果显示,r TS-gB试验组保护率与商品化弱毒疫苗对照一样均达到100%,未免疫组全部发病且有两只鸡死亡。以上结果表明表达鸡传染性喉气管炎gB基因的重组新城疫病毒r TS-gB可作为防控ILT和ND的二联疫苗候选株。2.间接ELISA检测传染性喉气管炎病毒抗体方法的建立利用大肠杆菌表达系统,表达和纯化ILTV gB截短片段gB2(aa327-665)。以纯化的ILTV gB2蛋白为包被抗原,对反应条件进行优化,建立了间接ELISA检测ILTV抗体的方法。该方法对禽流感病毒、禽白血病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽大肠杆菌和沙门氏菌阳性血清均无交叉反应,表明该方法的特异性好。用该方法和商品化的ILTV抗体ELISA检测试剂盒进行了临床样品检测,两种方法的符合率达94%。以上结果表明ILTV抗体的间接ELISA方法建立成功,其可以作为本研究中和临床上检测ILTV抗体的方法。综上所述,本研究构建了鸡传染性喉气管炎gB基因重组新城疫病毒r TS-gB,该重组病毒具亲本株相似的特性,并能诱导鸡产生较高水平的NDV和ILTV抗体,ILTV攻毒保护率为100%,保护效果与商品疫苗相近;此外建立了ILTV gB蛋白的间接ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,与商品化的ELISA试剂盒有较高检测符合率,为ILTV防控提供技术支撑。

关键词：鸡传染性喉气管炎新城疫病毒载体重组疫苗间接ELISA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：