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2 篇 无标记阻抗型免疫...
1 篇 电化学阻抗谱
1 篇 聚邻苯二胺修饰电...
1 篇 鸡白介素-4
1 篇 黄曲霉素b1
1 篇 检测

机构

1 篇 中国药科大学
1 篇 哈尔滨工业大学

作者

1 篇 吴宁宁
1 篇 姚舒愉
1 篇 杨功俊
1 篇 李雪

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2 篇 中文

检索条件"主题词=无标记阻抗型免疫传感器"

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详细简洁

排序：

基于PDDA功能化石墨烯纳米金复合材料制备的阻抗型免疫传感器检测鸡白介素-4

基于PDDA功能化石墨烯纳米金复合材料制备的阻抗型免疫传感器检测...

引用

2016全国生命分析化学学术大会

作者：姚舒愉李雪杨功俊中国药科大学药学院药物分析系药物质量与安全预警教育部重点实验室江苏南京

白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)是20 世纪80 年代初发现的,具有多种生物学活性的一种细胞因子.IL-4 主要由Th2 细胞分泌,肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞也具有分泌IL-4 的功能.IL-4 在免疫反应中是一重要的细胞因子,对B 细胞... 详细信息

白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)是20 世纪80 年代初发现的,具有多种生物学活性的一种细胞因子.IL-4 主要由Th2 细胞分泌,肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞也具有分泌IL-4 的功能.IL-4 在免疫反应中是一重要的细胞因子,对B 细胞、T 细胞、单核细胞、树突状细胞等免疫细胞均有免疫调节效应,对内皮细胞和成纤维细胞等非免疫细胞也发挥着不同的作用,是Th2 细胞分化的最主要决定因素,对Th2 细胞增值、基因转录、抗凋亡和抗肿瘤方面起着十分重要的作用,是机体体液免疫应答的重要调节因子.日本学者Kubota 等从外周血和胸腺中提取mRNA 反转录成cDNA 后插入pFastBac1,通过昆虫表达系统转入AcNPV 杆状病毒表达,获取成熟的鸡白介素-4(ChIL-4)蛋白分子量大约在12.4 kDa.目前,国内外学者对ChIL-4 的研究越来越多,然而在学术研究和临床疾病分析中主要还是以RT-PCR 技术来检测ChIL-4 的相对含量.由于RT-PCR 需要将RNA 逆转录,并且实时荧光RT-PCR 方法受多个因素影响,在免疫分析受限较多,RT-PCR 操作程序繁琐,因此发展快速灵敏且低成本的可直接检测ChIL-4 的电化学免疫传感器具有实用意义.本文首次通过自行人工研制合成的ChIL-4 的特异性抗体,以PDDA 功能化的石墨烯和纳米金复合材料固定抗体而构建了新型无标记阻抗型电化学免疫传感器,实现快速灵敏地检测ChIL-4.在最佳条件下,阻抗的相对变化值与ChIL-4 浓度的对数成正比,其线性范围为0.50～5.0 ×103ng/mL,相关系数R 为0.9991,检测限为 0.50 ng/mL,比已报道关于ChIL-4 的RT-PCR方法检出限约低1～2 个数量级,具有灵敏度高、线性范围宽、检测迅速,以及稳定性好等诸多优点,该电化学阻抗型免疫传感器用来于鸡白介素-4 的检测,获得满意实验结果.

关键词：无标记阻抗型免疫传感器鸡白介素-4 检测

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无标记阻抗型AFB1免疫传感器的研究

无标记阻抗型AFB1免疫传感器的研究

引用

作者：吴宁宁哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

本文概述了免疫传感器和修饰电极的研究进展及其应用,分析了AFB1的检测方法的优缺点,主要是研究了“链状”聚邻苯二胺（PoPD）修饰电极和AFB1免疫传感器的制备条件,并采用电化学阻抗谱（EIS）法对AFB1进行了定量检测,取得了良好的检测... 详细信息

本文概述了免疫传感器和修饰电极的研究进展及其应用,分析了AFB1的检测方法的优缺点,主要是研究了“链状”聚邻苯二胺（PoPD）修饰电极和AFB1免疫传感器的制备条件,并采用电化学阻抗谱（EIS）法对AFB1进行了定量检测,取得了良好的检测效果。首先,采用循环伏安法制备PoPD修饰电极,研究表明在0.05 mol /L o-PD + 1 mol /L H2SO4电聚合溶液中,-600 mV ~ 1000 mV的电位范围下,以50 mV/s扫描速率,循环30周可以得到含有大量氨基-NH2的“链状”结构的PoPD膜。该膜不仅具有良好的渗透选择性能,可以使H+选择渗透进入膜内,而且对H+/H的氧化还原反应具有催化作用。然后,基于PoPD修饰电极,研究了AFB1免疫传感器的制备条件和AFB1抗原的固定条件。结果表明在25℃下,戊二醛的交联、anti-AFB1纯化抗体的固定和小牛血清的封闭,三者的操作时间应为45 min;80%PBS + 20%甲醇作为反应溶液,pH=7.40,结合温度为30℃可以获得最大的AFB1抗原固定量。其次,对AFB1免疫传感器的组装过程中发生的反应进行了研究。戊二醛与PoPD/Au电极进行交联和抗体固定时,戊二醛的两个醛基-CHO分别与PoPD的氨基-NH2以及抗体免疫球蛋白的残余氨基-NH2发生了席夫碱反应,形成了稳定的Ar-N=C（CH2）3C=N-R结构,从而将抗体固定在了电极表面,形成了具有分子识别功能的AFB1免疫传感器。再次,采用EIS法,对AFB1免疫传感器的组装过程进行了电化学表征并构建了分子识别膜的界面模型。PoPD/Au电极表面随着戊二醛交联、anti-AFB1抗体固定及小牛血清封闭的进行,电子传递电阻逐层增大;在进行AFB1抗原的特异性免疫反应时,电子传递电阻随着AFB1的免疫结合量的增加而增大;由于H+的非特异性吸附以及电极表面的不均匀的影响,AFB1免疫传感器的EIS谱图具有明显的“弥散效应”。最后,利用AFB1免疫传感器,采用EIS法对AFB1进行了检测。结果显示,在0.03μg/mL ~ 0.7μg/mL范围内具有两段线性关系。当浓度范围为0.03μg/mL ~ 0.1μg/mL时,线性方程为ΔRP = -5960Ω+ 2.75×1011×cAFB1,R2=0.9946;当浓度范围为0.1μg/mL ~ 0.7μg/mL时,线性方程为ΔRP = 19410Ω+ 2.49×1010×cAFB1,R2 = 0.9807;最低检测限LOD为2.75×10-8 g/mL。另外,对AFB1免疫传感器免疫传感器的解离液和保存方法进行了优化。研究表明在0.2 mol/L甘氨酸-0.2 mol/L HCl（pH=2.60）中解离,可重复使用10次。AFB1免疫传感器暂时保存时采用湿法保存,采用干法最长保存期限为11天。与同种类型的无标记阻抗型AFB1免疫传感器相比,该方法具有较好的线性度,其最低检测限LOD小于文献报道1×10-7 g/mL。该免疫传感器可重复使用、制备时间短、成本低,具有很大的商业潜力和市场价值。

关键词：黄曲霉素B1 无标记阻抗型免疫传感器聚邻苯二胺修饰电极电化学阻抗谱

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