检索结果-内蒙古大学图书馆

遗传 2009年第10期31卷 969-976页

作者：梁佼刘欣吴芬芳李庆伟辽宁师范大学海洋生物功能基因及蛋白质组学研究所大连116029

在以七鳃鳗和盲鳗为代表的无颌类脊椎动物中,虽然发现了与有颌类脊椎动物T细胞受体(T-cell receptors,TLRs)、B细胞受体(B-cell receptors,BCRs)可变区具有相似结构的先天性免疫受体,却从未发现有颌类脊椎动物适应性免疫系统的核心组分:... 详细信息

在以七鳃鳗和盲鳗为代表的无颌类脊椎动物中,虽然发现了与有颌类脊椎动物T细胞受体(T-cell receptors,TLRs)、B细胞受体(B-cell receptors,BCRs)可变区具有相似结构的先天性免疫受体,却从未发现有颌类脊椎动物适应性免疫系统的核心组分:TCRs、BCRs、组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)。因此,长期以来,人们一直认为适应性免疫系统只存在于有颌类脊椎动物中。但最近的一项发现彻底改变了这一传统观念,即在无颌类脊椎动物中,存在一种新型可变淋巴细胞受体VLRs(Variable lymphocyte receptors),VLRs通过改变亮氨酸富集序列LRRs(Leucine-rich repeats)的插入情况,实现对特异性抗原的高效识别。晶体衍射分析发现,盲鳗的VLRs呈现一种"马蹄"型结构,抗原结合位点则位于"马蹄"的凹面区。分泌型的VLRs以四聚体或五聚体的形式识别、结合特异性抗原。综上所述,无颌类和有颌类脊椎动物应用不同的抗原识别系统完成适应性免疫反应。文章对近年来无颌类脊椎动物适应性免疫系统相关分子的研究进展加以概述,为揭示适应性免疫系统起源与进化问题提供有益参考。

关键词：适应性免疫无颌类脊椎动物基因加倍可变淋巴受体亮氨酸重复序列

来源：评论

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新的适应性免疫系统——可变淋巴受体研究进展

引用

免疫学杂志 2011年第6期27卷 527-531页

作者：李默吴芬芳刘欣李庆伟辽宁师范大学生命科学学院 116029

七鳃鳗是一种古老的脊椎动物,是脊椎动物进化的祖先。近年来,在其体内发现了一种新的适应性免疫形式受体——可变淋巴受体(variable lymphocyte receptor,VLR)。它类似于有颌类脊椎动物中的免疫球蛋白型抗原受体,是无颌类脊椎动物中重... 详细信息

七鳃鳗是一种古老的脊椎动物,是脊椎动物进化的祖先。近年来,在其体内发现了一种新的适应性免疫形式受体——可变淋巴受体(variable lymphocyte receptor,VLR)。它类似于有颌类脊椎动物中的免疫球蛋白型抗原受体,是无颌类脊椎动物中重要的免疫受体分子。与免疫球蛋白型抗原受体相似,它不仅可以形成多种多样的VLR来识别大量抗原,还具有与T/B淋巴细胞受体相似的功能。这种特殊受体的发现,对揭示免疫系统的起源与进化具有重要意义。研究表明,这种新型的可变淋巴受体具有其特殊的形成机制、结构和功能特性,现阶段通过大量的研究已经对其形成机制、结构和功能有了更进一步的了解,并证明了VLR与T/B淋巴细胞受体具有一定的相似性。本文就近年来对可变淋巴受体的研究进展进行概述,为进一步深入研究适应性免疫系统的起源与进化提供相关资料。

关键词：七鳃鳗无颌类脊椎动物适应性免疫可变淋巴受体胚系基因

来源：评论

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日本七鳃鳗髓细胞来源外泌体中TGF--β对细胞增殖的调控功能研究

日本七鳃鳗髓细胞来源外泌体中TGF--β对细胞增殖的调控功能研究

引用

作者：程显达辽宁师范大学

学位级别：硕士

七鳃鳗作为最原始的无颌类脊椎动物的代表，是一种重要的海洋模式动物。其独特的以可变淋巴受体（VLR）为核心的适应性免疫系统被认为对于揭示适应性免疫的起源与进化具有重要意义。免疫细胞间的通讯是协调有效免疫应答的核心特征，然... 详细信息

七鳃鳗作为最原始的无颌类脊椎动物的代表，是一种重要的海洋模式动物。其独特的以可变淋巴受体（VLR）为核心的适应性免疫系统被认为对于揭示适应性免疫的起源与进化具有重要意义。免疫细胞间的通讯是协调有效免疫应答的核心特征，然而七鳃鳗是否具备这一机制尚不明确。大量研究表明，细胞可通过释放细胞外囊泡（extracellμlar vesicles，EVs），尤其是外泌体（exosomes）进行细胞间信息传递。此前发现，七鳃鳗神经轴上髓小体细胞（SMB细胞）能够释放携带细胞因子TGF-β同源蛋白的外泌体。转化生长因子β（transforming growth factorβ,TGF-β)是转化生长因子超家族的成员之一，以同源二聚体或异源二聚体的形式分泌至细胞外。TGF-β在细胞增殖和分化，伤口愈合和免疫应答等过程中发挥关键的调控作用。目前对于TGF-β的研究主要集中于高等脊椎动物，对于TGF-β在七鳃鳗免疫调控中功能的探究仍为空白。　　本研究以日本七鳃鳗L-TGF-β分子为切入点，首先通过实时定量PCR分析了其在免疫刺激前后七鳃鳗各组织中的差异表达规律。发现在七鳃鳗的心、鳃、口腔腺等组织中L-TGF-β转录水平较高。而通过注射脂多糖激活适应性免疫应答后，L-TGF-β基因在肠组织中的表达显著上调，在髓组织及白细胞中的表达有上调趋势，在其他组织中显著下调。利用ELISA实验进一步发现脂多糖刺激髓细胞后，其分泌至细胞上清中的L-TGF-β总含量与对照相比显著降低。其次，原核表达了L-TGF-β成熟肽，并进一步通过BrdU掺入实验，分析了rL-TGF-β对脂多糖激活前后髓细胞增殖的影响，发现L-TGF-β对髓细胞增殖发挥双向性调控作用，即促进静息状态下髓细胞的增殖，但抑制免疫激活后的髓细胞增殖。重要的是，进一步发现髓细胞释放的外泌体能够被其自身所摄取，并同样双向性的调控髓细胞增殖，进而验证了外泌体对髓细胞增殖的调控功能依赖于其携带的L-TGF-β分子。　　总之，我们的研究结果对于揭示外泌体在七鳃鳗免疫细胞互作中发挥的信息载体功能具有重要意义，并有助于阐明外泌体以及细胞因子TGF-β功能的演化，为进一步阐明七鳃鳗适应性免疫系统中的调控机制奠定理论基础。

关键词：无颌类脊椎动物外泌体神经轴上髓小体细胞转化生长因子β 细胞增殖免疫应答

来源：评论

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七鳃鳗中含LRR基序分子的生物信息学分析及VLR分子进化起源分析

七鳃鳗中含LRR基序分子的生物信息学分析及VLR分子进化起源分析

引用

作者：梁佼辽宁师范大学

学位级别：硕士

适应性免疫系统是机体为了快速而有效的抵抗外源病原体入侵的极为有效的方式,是有颌类脊椎动物中普遍存在的免疫方式,也是有颌类脊椎动物在复杂的环境变化中得以生存繁衍的保障。目前普遍认为,有颌类脊椎动物具有Ig结构域的免疫球蛋白分... 详细信息

适应性免疫系统是机体为了快速而有效的抵抗外源病原体入侵的极为有效的方式,是有颌类脊椎动物中普遍存在的免疫方式,也是有颌类脊椎动物在复杂的环境变化中得以生存繁衍的保障。目前普遍认为,有颌类脊椎动物具有Ig结构域的免疫球蛋白分子,这些分子在其适应性免疫反应中发挥决定性作用。从生物进化的角度来看,无颌类脊椎动物作为有颌类脊椎动物的祖先而存在。而七鳃鳗是现存最为古老的无颌类脊椎动物之一,也可以将其理解为有颌类脊椎动物的共同祖先。对七鳃鳗适应性免疫反应特征、免疫反应中重要的执行分子、免疫反应机制的研究,将丰富人们对适应性免疫的认识。因此,本文报道了无颌类脊椎动物七鳃鳗中发现的一种新型可变淋巴受体VLRs(variable lymphocyte receptors)。通过生物信息学的方法对七鳃鳗中发现的三类VLRs分子进行了一级氨基酸序列比对,发现它们的LRR-NT端,LRR-CT端存在较高的保守性,而VLRs分子的多样性是由中间插入的LRRV数量及种类不同而决定的,并预测了VLR分子的空间结构、柔曲度和疏水性特征。依据文献中获得的VLR胚系基因与成熟基因的比较,结合在七鳃鳗数据库中检索到的胞嘧啶脱氨酶基因,推测VLR胚系基因的成熟过程是由胞嘧啶脱氨酶所介导的。在VLR分子的LRR序列末端发现了保守的四个氨基酸残基GVFD,编码这一保守序列的核苷酸序列可能作为胞嘧啶脱氨酶的作用位点,通过某种特定的机制将分散于胚系基因两侧的LRRV连接起来,形成成熟的VLR基因。在对七鳃鳗中含有LRR结构分子的搜索过程中,发现了两类含有LRR结构域的分子:LaTLRA/B和血小板糖蛋白GPI,通过序列比对分析及进化树的构建确定了在无颌类脊椎动物中发现的这两类分子与高等脊椎动物中相应分子存在同源性并具有该家族分子的保守域。对七鳃鳗中含LRR结构域的氨基酸序列系统发育树的构建发现,VLRs家族可能由GPIBA进化而来。

关键词：无颌类脊椎动物可变淋巴受体生物信息学 TOLL样受体血小板糖蛋白

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日本七鳃鳗VLRB基因的克隆、原核表达及单克隆抗体制备的研究

日本七鳃鳗VLRB基因的克隆、原核表达及单克隆抗体制备的研究

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作者：李默辽宁师范大学

学位级别：硕士

七鳃鳗作为无颌类脊椎动物的代表是脊椎动物的祖先,从进化地位上看它是联系无脊椎动物和脊椎动物的重要物种,它势必在研究脊椎动物的进化过程中起到十分重要的作用。可变淋巴受体VLR作为重要的免疫分子,它的发现为适应性免疫系统的进化... 详细信息

七鳃鳗作为无颌类脊椎动物的代表是脊椎动物的祖先,从进化地位上看它是联系无脊椎动物和脊椎动物的重要物种,它势必在研究脊椎动物的进化过程中起到十分重要的作用。可变淋巴受体VLR作为重要的免疫分子,它的发现为适应性免疫系统的进化提供了重要线索,说明早在无颌类生物体内,便存在着一种类似于人类Ig分子的免疫分子,它作为适应性免疫中的主要免疫受体,能够识别多种异源蛋白并起始免疫应答反应。为了进一步了解七鳃鳗免疫系统的特点及功能,本文将进行VLRB基因克隆、蛋白表达及单克隆抗体的制备,最终获得了VLRB单克隆抗体,为进一步研究七鳃鳗适应性免疫系统做准备。本文的主要研究内容如下: 本实验根据Genbank公布的序列,设计两对引物(全长引物和保守区引物),应用反转录—聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR),从经免疫刺激的七鳃鳗肝脏中扩增出VLRB完整开放阅读框基因序列(1036bp)和保守区片段序列(252bp),然后连接到pMD-18T载体中,转化大肠杆菌DH5α菌株,最后双酶切鉴定阳性克隆菌。测序结果表明日本七鳃鳗体内的确存在着VLRB基因。通过各类七鳃鳗和盲鳗VLR序列之间的比对分析,可以看出他们不仅具有一定的相似性,还具有一段稳定的保守区。将克隆得到的VLRB基因连接到表达载体pET-32a中,经测序鉴定得到阳性克隆,然后经IPTG诱导在大肠杆菌BL12菌株中表达,最后提取可溶性蛋白并进行纯化。SDS-PAGE检测表明,VLRB基因在大肠杆菌中实现融合表达,获得具有一定生物学活性的蛋白。将得到的纯化蛋白与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂混合免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞,用PEG4000进行细胞融合。用相应抗原包被,进行间接Elisa筛选得到阳性杂交瘤细胞。用有限稀释法进行3次亚克隆,直至单克隆细胞阳性孔率为100%,挑取单克隆进行扩大培养后液氮冻存。经小鼠腹水制备大量单克隆抗体,采用亲和纯化的方法纯化单克隆。最后进行Western-blotting检测,结果表明得到特异性VLRB抗体。综上所述,本研究获得了大量的七鳃鳗单克隆抗体,抗体的制备为进一步研究七鳃鳗适应性免疫系统提供了关键的实验材料。

关键词：日本七鳃鳗无颌类脊椎动物适应性免疫可变淋巴受体(VLR)

来源：评论

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可变淋巴受体起源与功能演化研究

可变淋巴受体起源与功能演化研究

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遗传学进步促进粮食安全与人口健康高峰论坛

作者：韩英伦刘欣李庆伟辽宁师范大学海洋生物功能基因及蛋白质组学研究所

在生命漫长的进化过程中,先天免疫系统作为一套古老的防御武器较早的出现在生物体内。随着物种进化的延续,可变淋巴受体(VLRs)的出现预示着生命物质进入了拥有适应性免疫系统的新纪元。VLRs存在于以盲鳗和七鳃鳗为代表的无颌类脊椎动物... 详细信息

在生命漫长的进化过程中,先天免疫系统作为一套古老的防御武器较早的出现在生物体内。随着物种进化的延续,可变淋巴受体(VLRs)的出现预示着生命物质进入了拥有适应性免疫系统的新纪元。VLRs存在于以盲鳗和七鳃鳗为代表的无颌类脊椎动物体内,它的基本结构为存在于其N末端的一个LRR-NT,可变数目的LRRs和一个C末端的LRR-CT。VLRs多样性的产生主要是由于在其抗原的结合位点随机的装配高度可变的富含亮氨酸的模块。然而这样一个预示着无颌类脊椎动物具有适应性免疫系统的重要标志性分子却在进化的过程中消失的无影无踪。本文主要利用LJniprot在线软件,根据VLRs的基本结构,在已知所有物种基因组数据库中寻找VLRS的踪迹。同时,将这些由不同物种基因组数据库中找到的,与VLRs具有相同结构的分子命名为VLRs-like分子,并且对不同VLRs-like分子所发挥的功能进行分析,进而通过对VLRs-like分子的结构与功能的分析能够找到一条VLRs分子在不同物种中演化的主线。所以,通过对本文的研究我们就可以很好的揭示VLRs从那里来,到哪里去,功能发生变化的情况。

关键词：适应性免疫无颌类脊椎动物七鳃鳗可变淋巴受体(VLRs)

来源：评论

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日本七鳃鳗中可变淋巴受体VLR的抗体制备

日本七鳃鳗中可变淋巴受体VLR的抗体制备

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：李默吴芬芳刘欣苏鹏宋德利李庆伟辽宁师范大学生命科学学院

以七鳃鳗为代表的无颌类脊椎动物,被普遍认为处在进化出适应性免疫系统的边缘。近年来,有证据表明在其体内发现了一种新型的可变受体,代替了有颌类脊椎动物中的免疫球蛋白型抗原受体,它是由基因组亮氨酸富集重复(leucine-rich repeat,L... 详细信息

以七鳃鳗为代表的无颌类脊椎动物,被普遍认为处在进化出适应性免疫系统的边缘。近年来,有证据表明在其体内发现了一种新型的可变受体,代替了有颌类脊椎动物中的免疫球蛋白型抗原受体,它是由基因组亮氨酸富集重复(leucine-rich repeat,LRR)单元组成不同的抗原受体编码的可变淋巴受体,称为可变淋巴受体(variable lymphocyte receptor,VLR)。因此,研究无颌类脊椎动物适应性免疫的机制,对揭示适应性免疫系统的起源与进化具有重要意义。在对七腮鳗研究过程中,我们为了得到VLR抗体以进行进一步确认VLR定位与起源以及其功能的检测,本实验进行了以下步骤:通过对VLR的序列分析,在七腮鳗的cDNA文库中搜索得到VLR的EST序列,经过比对和分析得到一段VLR的保守序列。然后进行VLR基因的克隆,得到VLR全长序列和保守序列,该基因含有900多个碱基编码300多个氨基酸;保守区含有约250个碱基,编码82个氨基酸。通过已知的VLR序列进行蛋白表达和纯化。最后,将纯化的VLR蛋白注入新西兰兔体内,进行免疫学实验,从而最终得到抗七腮鳗VLR兔的多克隆抗体。

关键词：无颌类脊椎动物日本七腮鳗可变淋巴受体VLR

来源：评论

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