检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：张金中国医科大学

学位级别：硕士

目的:　　探讨Bmp7在正常及肛门直肠畸形(anorectal malformation，ARM)大鼠胚胎肛门直肠发育过程中的表达模式，并分析其在大鼠ARM的发病机制中可能发挥的作用。　　方法:　　将确认已受孕大鼠随机分成两组:乙烯硫脲（ethylenethiourea... 详细信息

目的:　　探讨Bmp7在正常及肛门直肠畸形(anorectal malformation，ARM)大鼠胚胎肛门直肠发育过程中的表达模式，并分析其在大鼠ARM的发病机制中可能发挥的作用。　　方法:　　将确认已受孕大鼠随机分成两组:乙烯硫脲（ethylenethiourea，ETU）处理组及对照组。在ETU处理组中，在孕龄（gestational day，GD）10天时按125mg/Kg给予大鼠1％ ETU，对照组给予相同剂量的生理盐水。分别在大鼠GD13-GD16天时剖宫取胎，约二分之一胎鼠经4％多聚甲醛固定12-24小时，常规脱水，石蜡包埋，行4μm矢状面连续切片，进行免疫组化染色。剩余约二分之一胎鼠在液氮中冷冻保存，于冰冻切片机上连续矢状位切片，准备提取组织蛋白，进行WesternBlot检测。　　结果:　　免疫组化染色结果显示，正常组中，GD13天，Bmp7在尿直肠膈上皮和后肠上皮大量表达，GD14天， Bmp7阳性细胞广泛分布在尿直肠膈、后肠和泄殖腔膜。GD15天，尿直肠膈的融合部分以及菲薄的肛膜处Bmp7阳性表达明显增强。GD16天， Bmp7阳性细胞分布在肛门直肠上皮。畸形组中，泄殖腔上皮，尿直肠膈上皮和肛门直肠上皮仅有少量Bmp7阳性细胞表达。Western blot结果显示，Bmp7蛋白表达在后肠发育过程中呈现时间变化，在肛门形成即GD15天时达到高峰。GD13-GD16天时ARM组Bmp7蛋白的表达水平要明显低于同时期正常组(GD13，0.450±0.007(正常组)vs.0.352±0.008（畸形组）;GD14，0.796±0.006（正常组）vs.0.334±0.007（畸形组）;GD15，0.903±0.011（正常组）vs.0.620±0.010（畸形组）;GD16，0.755±0.006（正常组）vs.0.656±0.002（畸形组）;P＜0.05)，差异有统计学意义。　　结论:　　1、ETU致畸的ARM大鼠胚胎肛门直肠发育过程中Bmp7的表达存在着时间-空间不均衡性的特点。　　2、大鼠胚胎肛门直肠的发育过程中，Bmp7可能发挥了重要的作用。　　3、ETU致畸的大鼠胚胎期泄殖腔/后肠Bmp7表达模式的改变可能引起ARM的发生，Bmp7表达下调可能与ARM的发生有关。

关键词：肛门直肠畸形骨形态发生蛋白7 发病机制胚胎发育时空性表达

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FGF10在人类胚胎后肠及肛门直肠发育过程中时空性表达的研究

FGF10在人类胚胎后肠及肛门直肠发育过程中时空性表达的研究

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作者：尹水晶中国医科大学

学位级别：硕士

成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGFs)是由众多成员组成的一个超家族。目前在哺乳动物中被鉴定的FGFs已有22种,它们广泛参与了细胞增殖、细胞迁移及细胞分化过程。其中,成纤维细胞生长因子10(fibroblast growth factor10... 详细信息

成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGFs)是由众多成员组成的一个超家族。目前在哺乳动物中被鉴定的FGFs已有22种,它们广泛参与了细胞增殖、细胞迁移及细胞分化过程。其中,成纤维细胞生长因子10(fibroblast growth factor10,FGF10)为成纤维细胞生长因子家族的重要一员。 　　动物实验研究显示,在胚胎发育过程中,FGF10对肠上皮细胞的存活和增殖起到了至关重要的作用。此外,在尿路上皮的生长、分化和再生中,FGF10也起了重要调节作用。KrügerV等认为FGF10可作为肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)和泄殖腔外翻(exstrophy of the cloaca,CE)的候选基因。FairbanksTJ等研究发现FGF10基因敲除小鼠表现出严重的肛门直肠畸形,证实了FGF10在正常肛门直肠发育过程中发挥了至关重要的作用。 　　综上所述,FGF10在动物后肠及肛门直肠形态发生中起到重要的作用,然而,目前尚无关于FGF10在人类泄殖腔,后肠及肛门直肠形态发生过程中表达模式的研究。FGF10是否参与人类泄殖腔的发育;FGF10在人类胚胎后肠及肛门直肠的发育过程中是否发挥作用尚不清楚。因此,为了明确FGF10在人类后肠及肛门直肠形态发生过程中的表达方式及可能的作用,我们应用免疫组化的方法系统的研究FGF10在人类肛门直肠发育的关键期即胎龄3～8周的时空表达方式。 　　实验方法： 　　一、标本 　　 1、本研究遵守赫尔辛基宣言,并得到中国医科大学附属盛京医院伦理委员会批准(NO.200(7)PS14)。收集因意外妊娠而人工流产,发育正常的人胚胎标本85例(每例标本均取得产妇本人同意)。根据产妇末次月经时间、超声所测胎儿双顶径和人胚胎形态学特征等确定胎龄为3～8周。标本经0.01MPBS液冲洗后立即置于4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液中4℃固定12小时～24小时,常规脱水,石蜡包埋,进行矢状面连续切片,厚度4μm。 　　 2、标本立即经PBS(phosphate-bufferedsaline;pH7.4)冲洗后,4%多聚甲醛固定,常规方法脱水,制备蜡块,行矢状面连续切片。 　　二、试剂 　　 (1)FGF-10多克隆抗体购自美国SantaCruz公司; 　　 (2)免疫组化UltrasensitiveTMSP超敏试剂盒(产品编号kit-9701,kit-9709),多聚赖氨酸、DAB显色剂等购自博士德生物技术开发有限公司。 　　三、方法 　　通过免疫组化染色试验方法连续观察FGF10在人类胚胎泄殖腔、尿生殖窦以及肛门直肠时空性表达模式。 　　结果： 　　第3周时,尚未出现典型的泄殖腔(cloaca,CL)形态,免疫组化显示未见明显FGF10表达。 　　第4周时,典型的泄殖腔形态已出现,U型的尿直肠隔(urorectal septum,URS)将泄殖腔分隔为腹侧的尿生殖窦(urogenital sinus,UGS)和背侧的原始直肠/后肠(hindgut,H)。免疫组化显示FGF10大量表达于URS顶端及背侧上皮,星星点点表达在泄殖腔膜(cloacal membrane,CM)。而URS腹侧上皮及后肠处免疫反应几乎阴性。 　　第5周时,URS继续下降,其顶端与CM的距离逐渐减小。此时FGF10仍大量表达于URS顶端、背侧上皮及泄殖腔膜,但FGF10免疫组化反应强度较第四周弱。同时,后肠开始出现大量表达。而URS腹侧上皮处免疫反应几乎阴性。 　　第6周时,泄殖腔LIRS背侧顶端上皮FGF10免疫反应仍然持续强阳性,但CM及后肠FGF10表达明显减弱,且FGF10阳性细胞数量明显减小。同时,URS腹侧上皮FGF10免疫组化反应仍为阴性。 　　第7周时,CM破裂后,肛门直肠及UGS与羊膜腔相通,FGF10阳性细胞在肛管上皮消失,但尿道上皮出现FGFl0阳性细胞。 　　第8周时,肛管上皮FGF10表达仍为阴性,但尿道上皮FGF10阳性细胞较第7周弱,散在分布于尿道上皮。 　　结论： 　　在人类肛门直肠发育过程中(胎龄4～7周),FGF10在泄殖腔膜、背侧尿直肠隔表达阳性;当肛门直肠形成后,FGF10在肛门区域不再表达,提示FGF

关键词：成纤维细胞生长因子10 胚胎发育过程肛门直肠形态时空性表达免疫组化

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WNT5A在人类胚胎后肠及肛门直肠发育过程中时空性表达的研究

WNT5A在人类胚胎后肠及肛门直肠发育过程中时空性表达的研究

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作者：李飞飞中国医科大学

学位级别：硕士

Wnt蛋白家族是一系列富含半胱氨酸的分泌蛋白,调控多种生命活动:包括胚胎发育、细胞迁移及细胞分化。Wnt配体在哺乳动物体内通过以下两种机制发挥作用:Wnt/β-连环蛋白通路及非经典信号通路。Wnt5a通过上述两种作用机制参与发育、增殖... 详细信息

Wnt蛋白家族是一系列富含半胱氨酸的分泌蛋白,调控多种生命活动:包括胚胎发育、细胞迁移及细胞分化。Wnt配体在哺乳动物体内通过以下两种机制发挥作用:Wnt/β-连环蛋白通路及非经典信号通路。Wnt5a通过上述两种作用机制参与发育、增殖及细胞分化。 　　动物实验研究显示,Wnt5a在泄殖腔膜周围间质中表达,而且Wnt5a表达下调导致大量与泄殖腔或后肠发育密切相关的信号分子表达或分布异常,这些信号分子包括Shh(sonichedgehog),Hoxa13,Fgf8(fibroblastgrowthfactor8)。此外,Wnt5a基因敲除小鼠表现出严重的肛门直肠畸形,如:直肠尿道瘘及肛门闭锁等。上述研究证明了Wnt5a在后肠及肛门直肠形态发生中起一定的作用,并为我们进一步研究Wnt5a在肛门直肠发育过程中的潜在作用机制及分子理论奠定了基础。 　　然而,目前尚无关于WNT5A在人类泄殖腔、后肠及肛门直肠形态发生过程中表达模式的研究。WNT5A是否参与人类泄殖腔的发育;WNT5A在人类胚胎后肠及肛门直肠的发育过程中是否发挥作用尚不清楚。因此,为了明确WNT5A在人类后肠及肛门直肠形态发生过程中的表达方式及可能发挥的作用,我们应用免疫组化的方法系统的研究WNT5A在人类肛门直肠发育的关键期即胎龄4～9周的时空表达模式。 　　实验方法： 　　一、标本 　　 1、本研究遵守赫尔辛基宣言,并且经过中国医科大学盛京医院伦理委员会批准后进行。收集因意外妊娠而人工流产,发育正常的人胚胎标本107例(每例标本均取得产妇本人同意)。根据产妇末次月经时间、超声所测胎儿双顶径和人胚胎形态学特征等确定胎龄为4～9周。标本经0.01MPBS液冲洗后立即置于4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液中4℃固定12小时～24小时,常规脱水,石蜡包埋,进行矢状面连续切片,厚度4μm。 　　 2、标本立即经PBS(phosphate-bufferedsaline;pH7.4)冲洗后,4％多聚甲醛固定,常规方法脱水,制各蜡块,行矢状面连续切片。 　　二、试剂 　　 1、WNT5A单克隆抗体购自美国SantaCruz公司; 　　 2、免疫组化UltraSensitiveTMSP超敏试剂盒(产品编号kit-9701,kit-9709),多聚赖氨酸、DAB显色剂等购自福州迈新生物技术开发有限公司。 　　三、方法 　　通过免疫组化染色试验方法连续观察WNT5A在人类胚胎泄殖腔、尿生殖窦以及肛门直肠时空性表达模式。 　　结果： 　　第4周时,典型的泄殖腔形态已出现,U型的尿直肠隔将泄殖腔分隔为腹侧的尿生殖窦和背侧的原始直肠(后肠)。免疫组化显示WNT5A大量表达于尿直肠隔顶端上皮、后肠及泄殖腔膜。尿生殖窦及尿直肠隔腹侧上皮免疫反应几乎阴性。 　　第5周时,尿直肠隔继续下降,其顶端与泄殖腔膜的距离逐渐减小。此时WNT5A的表达方式与第4周时相似。 　　第6周时,泄殖腔管极为狭窄,但未观察到尿直肠隔与泄殖腔膜融合。尿直肠隔顶端上皮及后肠WNT5A表达持续强阳性。此时,直肠粘膜出现WNT5A弱阳性表达。尿生殖窦及尿直肠隔腹侧上皮免疫组化反应仍为阴性。泄殖腔膜逐渐延伸变薄,但WNT5A阳性细胞数量明显减小。 　　第7周时,泄殖腔膜继续延伸,变得极薄。在尿直肠隔顶端上皮、后肠及泄殖腔膜WNT5A表达减弱。尿生殖窦及尿直肠隔腹侧上皮免疫组化反应仍为阴性。泄殖腔膜破裂后,肛门直肠及尿生殖窦与羊膜腔相通,WNT5A阳性细胞立即在肛管上皮消失。相反,此时,在尿道上皮、腹侧泄殖腔膜及腹侧尿直肠隔出现WNT5A强阳性反应。 　　第8周时,尿道上皮、腹侧泄殖腔膜及腹侧尿直肠隔WNT5A表达仍然强阳性。肛管上皮阴性。 　　第9周时,肛门直肠继续发育,肛管部位WNT5A表达阴性。 　　结论： 　　在人类肛门直肠发育过程中(胎龄4～7周),WNT5A在泄殖腔膜、背侧尿直肠隔以及后肠上皮表达阳性;当肛门直肠形成后,WNT5A在肛门区域不再表达,提示WNT5A在人类肛门直肠发育过程中可能发挥重要作用。

关键词：肛门直肠发育过程时空性表达单克隆抗体

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内质网分子伴侣GRP78在小鼠脑发育过程中的时空表达

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实验生物学报 2003年第2期36卷 137-144页

作者：李波陈誉华中国医科大学发育生物学研究室沈阳110001 卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

多细胞生物体发育的实质是基因的选择性表达,表达蛋白的成熟有赖于分子伴侣的协助,但迄今分子伴侣特别是内质网分子伴侣在脑发育过程中的作用尚不清楚。本文应用RT-PCR、蛋白质免疫印迹和免疫组织化学的方法研究了小鼠发育不同阶段的脑... 详细信息

多细胞生物体发育的实质是基因的选择性表达,表达蛋白的成熟有赖于分子伴侣的协助,但迄今分子伴侣特别是内质网分子伴侣在脑发育过程中的作用尚不清楚。本文应用RT-PCR、蛋白质免疫印迹和免疫组织化学的方法研究了小鼠发育不同阶段的脑组织中GRP78的表达和定位分布随时间变化的情况。结果发现GRP78在小鼠脑发育过程中呈时空性表达:胚胎早期表达较高,胚胎发育末期逐渐下降,出生后逐渐升高,至生后一周时达到成年鼠的水平;在胚胎期GRP78蛋白在脑组织的表达呈现从端脑到后脑逐渐降低的趋势。研究结果还表明GRP78蛋白的免疫染色阳性产物在神经细胞中出现的时间早于神经胶质细胞。这些首次观察到的结果提示GRP78与脑的早期发生和形态建成有一定的关系。

关键词：内质网分子伴侣GRP78 脑发育过程时空性表达葡萄糖调节蛋白形态建成

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Bt蛋白试剂盒的制备及抗虫棉Bt蛋白时空表达的研究

Bt蛋白试剂盒的制备及抗虫棉Bt蛋白时空表达的研究

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作者：孙锋安徽农业大学

学位级别：硕士

转Bt基因抗虫棉在我国应用最广，它对鳞翅目害虫具有较强的抗性。利用基因工程技术转入棉花中的Bt基因可以在棉花各组织器官中高效表达，合成对鳞翅目害虫具有高效毒杀作用的Bt蛋白。但若在生产上仍用常规栽培管理法，品种的产量潜力就... 详细信息

转Bt基因抗虫棉在我国应用最广，它对鳞翅目害虫具有较强的抗性。利用基因工程技术转入棉花中的Bt基因可以在棉花各组织器官中高效表达，合成对鳞翅目害虫具有高效毒杀作用的Bt蛋白。但若在生产上仍用常规栽培管理法，品种的产量潜力就不能正常发挥，甚至在不同的生态棉区造成产量显著降低。本文以市售Bt杀虫粉剂为原料，纯化、结晶出高纯度的Bt晶体蛋白，依此得到Bt蛋白抗体，制备出Bt蛋白试剂盒，并对转Bt基因抗虫棉与常规非抗虫棉进行了棉花在不同时空的抗虫性研究，旨在为抗虫棉的检测提供快速、有效的检测方法，并为抗虫棉的田间管理提供理论基础。其研究结果如下： 1．以市售的Bt蛋白粉剂为原料，采用碱解、层析和乙醇沉淀的生物化学的方法提取纯化Bt晶体蛋白。结果表明，在pH10.5时，碱解程度最高，采用60％饱和度的硫酸铵沉淀可以去除大多数的多糖，G-50层析柱将Bt蛋白（130KD）与其他蛋白分开，上清用1.2-1.5倍的95％乙醇沉淀，即可得到晶体状Bt蛋白，冻干称重，得率为1.338g／KgBt蛋白粉剂。考马斯亮蓝法测定蛋白纯度为91％，SDS-PAGE测定晶体蛋白的分子量为130KD。 2．采用实验室饲养棉铃虫的方法，棉铃虫的初孵虫、一铃虫、二铃虫48小时的死亡率为100％，三铃虫48小时的死亡率为88％，四铃虫48小时的死亡率为76％，生物活性达18000IU／mg。 3．实验用2Kg重的新西兰大白兔，采用免疫学制备抗体的方法，由兔血清以饱和硫酸铵沉淀提取蛋白，再以A—50层析后，加冷的95％乙醇沉淀制备抗体，所得抗体的滴度为32（琼脂凝胶扩散法），完全可作为试剂盒使用（要求滴度不低于16）。 4．所制备的Bt蛋白试剂盒与进口的Agdia试剂盒做实验对比，结果表明：自制试剂盒Bt蛋白浓度线性范围为1750～28000 ng·ml-1，而Agdia试剂盒Bt蛋白浓度线性范围为2250～36000 ng·ml-1，可见自制试剂盒检测灵敏度比Agdia试剂盒的检测灵敏度稍高，但检测范围比Agdia试剂盒稍窄。自制试剂盒的精确度稍差，稳定性不是很好，有待进一步实验探索。 5．对转Bt基因抗虫棉与非抗虫棉在不同时间和不同的器官进行取样，用自制的Bt蛋白试剂盒检测（棉花叶取主干茎叶），结果显示，同一时期，同一棉株上，倒1叶Bt毒蛋白含量较低，倒2叶较高，倒3叶最高，而倒5叶较倒3、4叶又有所下降，表明Bt基因在叶片中的表达产物随叶龄的变化而变化。在不同的生长时期，随着幼苗的生长，Bt蛋白的表达量也随之增加，均可达到抗虫的最低限度，特别是蕾期和结铃期，棉花叶中的Bt蛋白含量最高，但到吐絮期以后，Bt蛋白的表达量逐渐降低，棉花叶中的Bt蛋白含量最低，已经低于抗虫所要求的最低限度，不同生长时期棉花叶Bt蛋白表达趋势为：初花期＞蕾期＞花铃期＞苗期＞吐絮期。9种组织对棉铃虫初孵幼虫的抗性顺序为：功能叶＞嫩叶＞幼蕾＞幼铃＞幼叶＞花瓣＞花蕊＞苞叶＞老叶。 6．同一位置不同时期的棉花叶子（倒2叶，完全展开功能叶），经ELISA检测结果显示：抗虫棉在生长初期，棉花叶子中Bt蛋白的表达就开始活跃，随着棉株的不断生长，抗虫棉的表达能力也逐步加强，到棉花的蕾期、花期达到最高点。但到了絮期以后，抗虫棉的表达量又开始快速下降，后期对Bt蛋白的表达水平远远低于抗虫棉生长初期的该蛋白表达平均水平。

关键词： Bt蛋白转基因棉花 ELISA 时空性表达

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TGF-βⅡ型受体与Fn在小鼠肾泌尿小管发育中的表达

TGF-βⅡ型受体与Fn在小鼠肾泌尿小管发育中的表达

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第七届全国生物医学体视学学术会议、第十届全军军事病理学学术会议、第六届全军定量病理学学术会议

作者：郭敏田鹤辽宁医学院组胚教研室锦州 121001

目的：观察转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)及纤维连接蛋白(Fn)在小鼠肾泌尿小管发育中的时空性表达，探讨TGF-βRⅡ和Fn与泌尿小管发育的关系。方法：取成年健康昆明小白鼠，按雌雄比例1：1同窝饲养，每日早晚8时各观察一次雌... 详细信息

目的：观察转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)及纤维连接蛋白(Fn)在小鼠肾泌尿小管发育中的时空性表达，探讨TGF-βRⅡ和Fn与泌尿小管发育的关系。方法：取成年健康昆明小白鼠，按雌雄比例1：1同窝饲养，每日早晚8时各观察一次雌鼠怀孕情况，以观察到阴道栓脱落的最早时间计为胚龄0 d(E0 d)。孕鼠分笼饲养2周始每日早晚8时各观察一次仔鼠出生情况，以观察到仔鼠出生的最早时间计为生后0 d(P0 d)。孕鼠分为11组，每组4只，每只孕鼠最多取2只胎鼠或仔鼠。结论：推测TGF-β和Fn可能对小鼠肾泌尿小管的发育以及成熟泌尿小管结构的维持起重要作用。

关键词：肾泌尿小管生长发育转化生长因子βⅡ型受体纤维连接蛋白时空性表达体视学测量

来源：评论

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