检索结果-内蒙古大学图书馆

中华男科学杂志 2014年第11期20卷 978-983页

作者：卢慧刁华肖玉芳于合国李铮施惠娟上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科上海市人类精子库上海200135 上海市计划生育科学研究所国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海200032

目的：探讨利用重组表达系统制备重组人类ZP3（hZP3）蛋白的方法和技术难点,为hZP3蛋白的制备和应用打下技术基础。方法：构建hZP3的载体质粒pFASTBAC HTa-hZP3,在大肠杆菌宿主细胞中利用杆状病毒Bac-to-Bac系统同源重组构建重组的杆状... 详细信息

目的：探讨利用重组表达系统制备重组人类ZP3（hZP3）蛋白的方法和技术难点,为hZP3蛋白的制备和应用打下技术基础。方法：构建hZP3的载体质粒pFASTBAC HTa-hZP3,在大肠杆菌宿主细胞中利用杆状病毒Bac-to-Bac系统同源重组构建重组的杆状病毒穿梭载体Bacmid,用重组的Bacmid转染Sf9细胞制备重组杆状病毒,分别表达带HIS标签的h ZP3全长蛋白（氨基酸1-424）和截短的hZP3蛋白（氨基酸23-348）。摸索重组hZP3蛋白的表达时间和纯化制备方法。结果：成功制备了表达重组人hZP3全长蛋白和截短体蛋白的Bacmid和杆状病毒颗粒,Western印迹检测表明,在Sf9细胞中较好的表达时间段为感染后72-96 h。重组表达的hZP3蛋白可以部分被钴柱亲和纯化,大量的重组hZP3蛋白不能结合到亲和介质而流穿,但确切的原因还未知。纯化得到的hZP3经荧光素Dylight Dye488标记,能与人精子结合。结论：利用昆虫细胞杆状病毒表达系统表达hZP3蛋白是可行的,可以进一步优化,但hZP3蛋白的有效富集和纯化方法是最大的瓶颈,还需要进一步摸索。

关键词：人ZP3 精子重组蛋白昆虫细胞杆状病毒表达系统

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昆虫细胞--杆状病毒表达系统表达人生长激素的纯化和性质研究

昆虫细胞--杆状病毒表达系统表达人生长激素的纯化和性质研究

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作者：林启良南开大学

学位级别：硕士

该实验运用离子交换色谱,疏水相互作用色谱和免疫亲和色谱对昆虫细胞杆状病毒表达系统(Sf9-AcNPV)表达的重组人生长激素(recombinant human Growth Hormine,rhGH)进行了纯化.含有rhGH的昆虫细胞培养液经离心后,以离子交换色谱(GM-52)和... 详细信息

该实验运用离子交换色谱,疏水相互作用色谱和免疫亲和色谱对昆虫细胞杆状病毒表达系统(Sf9-AcNPV)表达的重组人生长激素(recombinant human Growth Hormine,rhGH)进行了纯化.含有rhGH的昆虫细胞培养液经离心后,以离子交换色谱(GM-52)和疏水相用色谱(Phenyl SepharoseCL-4B)浓缩,有效地去除了杂蛋白,得到rhGH精提品:再经过免疫亲和色谱纯化,得到了高浓度的rhGH.经酶免疫分析,放射免疫分析和Western杂交法分析,证明纯化的rhGH与天然的人生长激素有相同的免疫活力;经SDS凝胶电泳测定其分子量为:22,000道尔顿;等电点聚焦法测定其等电点为:4.9.经丹磺酰氯法测定其N-末端为:苯丙氨酸(Phe),这些性质均与天然的人生长激素相符合.

关键词：重组人生长激素昆虫细胞杆状病毒表达系统离子交换色谱疏水相互作用色谱放射免疫分析酶免疫分析

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HIV包膜蛋白在昆虫细胞杆状病毒表达载体中的表达研究及一种新型转移载体的构建

HIV包膜蛋白在昆虫细胞杆状病毒表达载体中的表达研究及一种新型...

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作者：郭庆厦门大学

学位级别：硕士

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H5N1亚型禽流感病毒血凝素在昆虫杆状病毒系统中表达与活性鉴定

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农业生物技术学报 2007年第4期15卷 547-551页

作者：顿继凤周迎春蒲娟刘金华中国农业大学动物医学院预防兽医系北京100094 中国农业大学动物医学院预防兽医系

从质粒pGEM-HA中扩增H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)基因,构建转移载体pFastBacHT-HA并与大肠杆菌(Escherichia coli)DH10Bac中的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-HA。在脂质体介导下将rBacmid-HA转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。在sf9昆虫细胞中表达HA蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和血细胞吸附试验鉴定重组蛋白。结果显示,重组HA蛋白分子量约为66kD,该蛋白与AIVH5亚型鸡血清发生特异性反应,与H7和H9亚型鸡血清不反应,转染重组杆状病毒后的细胞能吸附鸡的红血球,证明HA基因在sf9昆虫细胞中获得了正确表达,不仅具有亚型特异性,而且有良好的生物反应性。

关键词：禽流感 H5N1 血凝素昆虫细胞杆状病毒表达系统表达

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柯萨奇病毒A6病毒样颗粒的制备及免疫原性初步研究

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病毒学报 2020年第6期36卷 1067-1074页

作者：陈静李波李鹏飞陈易吴杰王泽鋆孟胜利申硕三峡大学医学院宜昌443002 三峡大学附属仁和医院宜昌443003 武汉生物制品研究所病毒性疫苗研究一室武汉430207

手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)是一种常见传染病,以婴幼儿发病为主,柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)是引起HFMD暴发的主要病原体,其疫苗开发有待深入的研究,而病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是潜在安全的候选疫苗。为制备CV-A6 VLPs,并研究其免疫原性,本研究利用Bac-toBac昆虫细胞杆状病毒表达系统共表达P1和3CD蛋白,制备并纯化CV-A6 VLPs,应用间接免疫荧光试验(Indirect immunofluscent assay,IFA)、SDS-PAGE、Western Blot、透射电镜法等方法鉴定。以Al(OH)3为佐剂,三种不同剂量CV-A6 VLPs免疫BALB/c小鼠,采用微量中和试验法检测小鼠血清中和抗体滴度。结果显示,重组有P1和3CD的杆状病毒质粒转染Sf9细胞,可形成CV-A6类病毒颗粒,直径约为26nm。SDS-PAGE和Western Blot结果说明P1前体蛋白被3CD作用切割产生了VP0、VP1和VP3,CV-A6 VLPs由这三个病毒结构蛋白构成。小鼠免疫实验结果显示,CV-A6 VLPs可以刺激产生较高水平抗CV-A6的特异性中和抗体,维持至少12周,并且抗体中和效价与免疫剂量和免疫次数呈正相关。本研究获得重组杆状病毒rBac-CV-A6-P1-3CD,并在Sf9细胞内成功表达CV-A6 VLPs,可以刺激小鼠产生较高水平和持久的体液免疫反应。

关键词：柯萨奇病毒A组6型(CV-A6) 病毒样颗粒(VLPs) 昆虫细胞杆状病毒表达系统

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H3亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2010年第3期40卷 252-257页

作者：万春和刘明刘春国张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

根据GenBank上登录的H3亚型猪流感病毒HA基因序列设计了1对引物,经PCR扩增出HA基因目的片段,并将其克隆到pFastBacGP67C杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67C-H3,转化至含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,... 详细信息

根据GenBank上登录的H3亚型猪流感病毒HA基因序列设计了1对引物,经PCR扩增出HA基因目的片段,并将其克隆到pFastBacGP67C杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67C-H3,转化至含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体,获得重组转座子rBacmid-H3,在脂质体介导下转染处于对数生长期的sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBv-H3,将其感染sf9昆虫细胞,收获目的蛋白。经血凝试验、SDS-PAGE、Western-blot、免疫组织化学分析,结果表明,HA蛋白得到表达,且具有良好的免疫学活性。用表达的HA蛋白作为包被抗原,初步建立了H3亚型猪流感病毒的间接ELISA检测方法,通过对93份送检的疑似猪流感血清进行检测,结果显示,检出阳性率为46.24%。上述结果为建立快速、准确、简便的H3亚型猪流感鉴别诊断试剂盒奠定了基础。

关键词： H3亚型猪流感病毒血凝素基因昆虫细胞杆状病毒表达系统间接酶联免疫吸附试验

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亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因在昆虫细胞中的共表达

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中国人兽共患病学报 2008年第6期24卷 500-504页

作者：信爱国李华春廖德芳李乐高林杨永钦张念祖陈保善云南省畜牧兽医科学院农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室昆明650224 广西大学生命科学与技术学院南宁530004

目的在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和疫苗奠定基础。方法从质粒pTOP-P1-2A和pTOP-3C中分别扩增出编码亚洲1型口蹄疫病毒衣壳... 详细信息

目的在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和疫苗奠定基础。方法从质粒pTOP-P1-2A和pTOP-3C中分别扩增出编码亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和3C蛋白酶基因,构建转移载体pDual-P1-2A-3C并与大肠杆菌(Escherichia coli)DH10Bac中的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-P1-3C。在脂质体介导下将rBacmid-P1-3C转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。在Sf9昆虫细胞中共表达P1-2A和3C蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和Dot-ELISA试验鉴定重组蛋白。结果目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达蛋白与抗亚洲1型FMDV血清发生特异性反应,有良好的抗原性。结论成功在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因。

关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白昆虫细胞杆状病毒表达系统表达

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昆虫细胞基因工程人生长激素的纯化和性质研究

昆虫细胞基因工程人生长激素的纯化和性质研究

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作者：陈勇南开大学

学位级别：硕士

真核细胞基因工程合成的重组人生长激素(recombinant human Growth Hormone,thGH)在医学和农业领域具有很大的应用价值 .该实验运用疏水相互色谱和免疫亲和色谱对昆虫细胞杆状病毒表达系统(Sf9-AcNPV)表达的重组人生长激素进行了纯化.... 详细信息

真核细胞基因工程合成的重组人生长激素(recombinant human Growth Hormone,thGH)在医学和农业领域具有很大的应用价值 .该实验运用疏水相互色谱和免疫亲和色谱对昆虫细胞杆状病毒表达系统(Sf9-AcNPV)表达的重组人生长激素进行了纯化.含有rhGH的昆虫细胞培养液经离心后,以疏水相互作用色谱(Phenyl Sepharose CL-4B)浓缩,有效地去除了杂蛋白,得到thGH粗提品;再经过免疫亲和色谱纯化,得到了高纯度的rhGH.经放射免疫法和Western杂交法分析,证明纯化的rhGH与天然的人生长加邢嗤拿庖呋盍Γ 经SDS凝胶电泳测定其分子量为:22,000道尔顿;等电点聚焦法测定其等电点力:4.9.这些性质均与天然的人生长激素相符合.

关键词：重组人生长激素纯化昆虫细胞杆状病毒表达系统疏水相互作用色谱放射免疫分析 Western杂交

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以人乳头瘤病毒16 L1为载体的流感通用疫苗初步研究

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国际呼吸杂志 2008年第14期28卷 841-844页

作者：刘蕊李志奎王希良罗德炎颜艳陈中伟花艳红第四军医大学西京医髋呼吸科西安710032 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫实验室北京100071

目的构建以人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）16 L1为载体的甲型流感病毒M2基因胞外区（M2e）通用疫苗杆粒，利用昆虫细胞杆状病毒表达系统，进行初步的蛋白表达。方法利用PCR技术将甲型流感病毒M2e基因序列与HPV16 L1相连。... 详细信息

目的构建以人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）16 L1为载体的甲型流感病毒M2基因胞外区（M2e）通用疫苗杆粒，利用昆虫细胞杆状病毒表达系统，进行初步的蛋白表达。方法利用PCR技术将甲型流感病毒M2e基因序列与HPV16 L1相连。经酶切、酶联将融合基因插入pFastBac HTA载体，在DH10Bac细胞中进行同源重组，经测序鉴定后构建M2e-HPV16 L1杆粒，脂质体转染sf9昆虫细胞，收获并扩增含有M2e-HPV16 L1的杆状病毒，经扩增后获得高效价的重组杆状病毒，用SDS-PAGE、免疫荧光法和电镜检测目的蛋白的表达。结果构建了以HPV16 L1为载体的M2e通用疫苗杆粒，通过转染sf9昆虫细胞得到初步M2e-HPV16 L1融合蛋白表达。结论成功构建了HPV16 L1与甲型流感病毒M2e融合蛋白的病毒样颗粒，为流感通用疫苗的研制奠定了基础。

关键词：甲型流感病毒M2基因胞外区病毒样颗粒昆虫细胞杆状病毒表达系统

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