检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：宋毅浙江师范大学

学位级别：硕士

兔瘟是对养兔业造成最大危害的一种重要病毒性传染病,具有高度接触性致死性。其病原体是兔出血症病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus,RHDV),属于杯状病毒科(Caliciviridae)兔病毒属(Lagovirus)。杯状病毒科病毒具有较广的宿主范围,... 详细信息

兔瘟是对养兔业造成最大危害的一种重要病毒性传染病,具有高度接触性致死性。其病原体是兔出血症病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus,RHDV),属于杯状病毒科(Caliciviridae)兔病毒属(Lagovirus)。杯状病毒科病毒具有较广的宿主范围,能引起多种动物和人类疾病。杯状病毒侵入宿主细胞是病毒进行感染的首要环节,杯状病毒首先需要与受体结合,之后通过细胞内吞作用进入细胞。关于杯状病毒的细胞受体,目前只在少数几个种属中获得了一定的进展,但关于RHDV的细胞受体仍是一片空白。为了筛选和鉴定RHDV的细胞受体,我们利用杆状病毒表达系统表达了RHDV的衣壳蛋白(VP60),纯化获得了病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)以及利用SMART方法构建了RHDV的宿主细胞-RK13细胞的cDNA真核表达文库。\n *** JX/97分离株VLPs的制备\n 以实验室保存的JX/97分离株全长cDNA分子克隆质粒pBIRHDV为模板,设计并合成了覆盖JX/97分离株基因组中vp60的含酶切位点的引物对,通过PCR扩增获得vp60基因,将基因片段双酶切后分别克隆到杆状病毒表达载体pFastBacl上。重组质粒转化DH10Bac后发生转座,通过“三抗”板和蓝白斑法筛选到阳性克隆后,提取重组Bacmid DNA,转染Sf9细胞,6天后收集上清,用上清重新感染新的Sf9细胞,依次感染细胞2次。待Sf9细胞发生明显病变时,收集上清即为重组杆状病毒,取部分用于检测或扩大培养。间接免疫荧光和Western Blot检测结果表明重组蛋白在Sf9细胞中正确表达,进一步的电镜观察显示重组病毒感染的Sf9细胞内以及纯化的重组蛋白都能自我组装形成VLPs。\n *** JX/97分离株宿主细胞RK13 cDNA真核表达文库的构建\n 以兔肾细胞系RK13为材料提取细胞总RNA,然后用链霉亲和素磁珠(SA-PMP)分离纯化获得mRNA。利用SMART技术,即以SMART IV Oligonucleotid作为接头,在3ˊ末端加上一段序列,再利用CDSⅢ/3ˊPCR Primer尽量将mRNA全部反转录成cDNA,从而获得了全长cDNA的第1链,用LD-PCR方法扩增双链cDNA。经SfiⅠ酶切后过柱分级收集ds cDNA,选取大片段ds cDNA(>500 bp),核酸沉淀后克隆到SfiⅠ酶切的真核表达载体pEXP-Lib中。最后,利用电转仪1.8 KV200 Q25μF,电转化至宿主菌电转感受态细胞(DH5α)获得了cDNA文库,通过计算文库的库容量达到2.55×105CFU,随机挑取16个克隆,用合成的载体上的测序引物PCR扩增,发现插入的cDNA片段大小在400-2250 bp之间,插入片段的平均长度约1.0 Kb。以上结果表明,利用RHDV宿主细胞RK13为材料,构建了一个较高质量的全长cDNA真核表达文库,库容量达2.55×105CFU,可以满足后续工作的需要。\n 表达获得的RHDV空衣壳蛋白及其宿主细胞RK13全长cDNA真核表达文库的构建,为进一步利用空衣壳蛋白代替RHDV粒子,通过蛋白互作从全长cDNA真核表达库中筛选出受体蛋白奠定基础。

关键词：兔出血症病毒昆虫-杆状病毒表达系统病毒样颗粒 RK13 cDNA文库

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兔病毒性出血症病毒病毒样颗粒的制备及RK13细胞cDNA表达型文库的构建

兔病毒性出血症病毒病毒样颗粒的制备及RK13细胞cDNA表达型文库的...

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作者：宋毅浙江师范大学

学位级别：硕士

兔瘟是对养兔业造成最大危害的一种重要病毒性传染病,具有高度接触性致死性。其病原体是兔出血症病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus, RHDV),属于杯状病毒科(Caliciviridae)兔病毒属(Lagovirus)。杯状病毒科病毒具有较广的宿主范围... 详细信息

兔瘟是对养兔业造成最大危害的一种重要病毒性传染病,具有高度接触性致死性。其病原体是兔出血症病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus, RHDV),属于杯状病毒科(Caliciviridae)兔病毒属(Lagovirus)。杯状病毒科病毒具有较广的宿主范围,能引起多种动物和人类疾病。杯状病毒侵入宿主细胞是病毒进行感染的首要环节,杯状病毒首先需要与受体结合,之后通过细胞内吞作用进入细胞。关于杯状病毒的细胞受体,目前只在少数几个种属中获得了一定的进展,但关于RHDV的细胞受体仍是一片空白。为了筛选和鉴定RHDV的细胞受体,我们利用杆状病毒表达系统表达了RHDV的衣壳蛋白(VP60),纯化获得了病毒样颗粒(Virus-like particles, VLPs)以及利用SMART方法构建了RHDV的宿主细胞-RK13细胞的cDNA真核表达文库。 *** JX/97分离株VLPs的制备以实验室保存的JX/97分离株全长cDNA分子克隆质粒pB1RHDV为模板,设计并合成了覆盖JX/97分离株基因组中vp60的含酶切位点的引物对,通过PCR扩增获得vp60基因,将基因片段双酶切后分别克隆到杆状病毒表达载体pFastBac1上。重组质粒转化DH10Bac后发生转座,通过“三抗”板和蓝白斑法筛选到阳性克隆后,提取重组Bacmid DNA,转染Sf9细胞,6天后收集上清,用上清重新感染新的Sf9细胞,依次感染细胞2次。待Sf9细胞发生明显病变时,收集上清即为重组杆状病毒,取部分用于检测或扩大培养。间接免疫荧光和Western Blot检测结果表明重组蛋白在Sf9细胞中正确表达,进一步的电镜观察显示重组病毒感染的Sf9细胞内以及纯化的重组蛋白都能自我组装形成VLPs。 2. RHDV JX/97分离株宿主细胞RK13 cDNA真核表达文库的构建以兔肾细胞系RK13为材料提取细胞总RNA,然后用链霉亲和素磁珠(SA-PMP)分离纯化获得mRNA。利用SMART技术,即以SMART IV Oligonucleotid作为接头,在3末端加上一段序列,再利用CDSIII/3'PCR Primer尽量将mRNA全部反转录成cDNA,从而获得了全长cDNA的第1链,用LD-PCR方法扩增双链cDNA。经SfiⅠ酶切后过柱分级收集ds cDNA,选取大片段ds cDNA(>500bp),核酸沉淀后克隆到SfiⅠ酶切的真核表达载体pEXP-Lib中。最后,利用电转仪1.8KV 200Ω25μF,电转化至宿主菌电转感受态细胞(DH5α)获得了cDNA文库,通过计算文库的库容量达到2.55×105CFU,随机挑取16个克隆,用合成的载体上的测序引物PCR扩增,发现插入的cDNA片段大小在400-2250 bp之间,插入片段的平均长度约1.0 Kb。以上结果表明,利用RHDV宿主细胞RK13为材料,构建了一个较高质量的全长cDNA真核表达文库,库容量达2.55×105 CFU,可以满足后续工作的需要。表达获得的RHDV空衣壳蛋白及其宿主细胞RK13全长cDNA真核表达文库的构建,为进一步利用空衣壳蛋白代替RHDV粒子,通过蛋白互作从全长cDNA真核表达库中筛选出受体蛋白奠定基础。

关键词： Rabbit Hemorrhagic Disease Virus 昆虫-杆状病毒表达系统病毒样颗粒 RK13 cDNA文库

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流式细胞仪识别检测苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒(AcMNPV)感染Sf9细胞

流式细胞仪识别检测苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒(AcMNPV)感染Sf...

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第六届全国化学工程与生物化工年会

作者：危威张佑红徐鹏杨文刚典成绿色化工过程省部共建教育部重点实验室武汉工程大学化工与制药学院湖北武汉 430073

昆虫-杆状病毒表达系统(Baculovirus-insect cell expression vector system，BEVS)由于其独特的性质现已被广泛应用于药物研发、疫苗生产、重组病毒杀虫剂等众多领域中.但很少报道涉及病毒对细胞前期感染过程的研究。我们用流式细胞仪... 详细信息

昆虫-杆状病毒表达系统(Baculovirus-insect cell expression vector system，BEVS)由于其独特的性质现已被广泛应用于药物研发、疫苗生产、重组病毒杀虫剂等众多领域中.但很少报道涉及病毒对细胞前期感染过程的研究。我们用流式细胞仪对苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒(Autographa californica multicapsidnucleopolyhedrovirus，AcMNPV)感染Sf9 细胞的前期感染过程进行了跟踪检测,并设计了一种新的方法分析感染细胞与未感染细胞的百分率,得到了如下结论:细胞被病毒感染不是瞬间完成而是一个过程,3 h 后细胞吸附病毒速率小于病毒进入细胞内速率;细胞感染过程持续了6 h,6 h 后细胞感染百分率接近100％.设计的新方法准确性高,稳定性好.

关键词：流式细胞术细胞感染多核型多角体病毒昆虫-杆状病毒表达系统跟踪检测

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H5N1禽流感病毒HA蛋白的免疫损伤致病机制研究

H5N1禽流感病毒HA蛋白的免疫损伤致病机制研究

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作者：胥韦广州医学院

学位级别：博士

目的:人禽流行性感冒(以下称人禽流感)是由禽甲型流感病毒某些亚型中的一些毒株引起的急性呼吸道传染病,人感染禽流感病毒(Avian influenza viruse,AIV)的病死率高达60%以上,对人类健康造成了巨大的威胁。近来研究认为体内高的病毒载量... 详细信息

目的: 人禽流行性感冒(以下称人禽流感)是由禽甲型流感病毒某些亚型中的一些毒株引起的急性呼吸道传染病,人感染禽流感病毒(Avian influenza viruse,AIV)的病死率高达60%以上,对人类健康造成了巨大的威胁。近来研究认为体内高的病毒载量及过度的炎症反应造成免疫病理损伤是AIV主要的致病机制。AIV通过其表面膜蛋白-血凝素(Hemagglutinin protein,HA)与靶细胞如II型肺泡上皮细胞的相应受体结合而感染侵入细胞,这一过程诱导了细胞因子及趋化因子的大量释放,进而活化并募集巨噬细胞、中性粒细胞等炎症细胞至感染部位,导致严重的弥漫性肺泡损伤,引起一个类似急性呼吸窘迫综合症的病理生理改变以及继发的全身多器官免疫炎症性反应。然而迄今为止,缺乏针对这种免疫损伤的特效治疗药物。我们前期在SARS-CoV (severe acute respiratory syndrome - coronavirus)致病机制的研究中发现:SARS-CoV Spike蛋白能够激活宿主固有免疫应答的信号通路,诱导了细胞因子/趋化因子炎症瀑布,并且鉴定了一个关键的信号分子靶点-JAK3(Janus Kinase 3)。由于AIV与SARS-CoV在病理生理过程、临床表现等方面具有众多相似之处,我们推测禽流感病毒通过其表面膜蛋白HA,可能激活了共同的信号分子靶标介导了宿主固有免疫的病理性应答,引起急性免疫损伤。本课题因而试图通过揭示HA蛋白引起急性免疫损伤的信号转导分子机制及关键分子靶点,探讨AIV入侵始动的免疫炎症应答,阐明AIV及SARS-CoV可能的共同分子靶标,发现与鉴定能够有效对抗病毒介导的肺脏等器官的免疫损伤,有效保护免疫系统的药物靶点,为创新药物的开发奠定基础。研究内容和方法: 1、制备重组禽流感病毒(H5N1)HA蛋白应用昆虫-杆状病毒真核表达系统表达重组的H5N1 HA蛋白,并经镍亲和磁珠法纯化及Western blot鉴定 2、H5N1 HA蛋白诱导人肺腺癌上皮细胞株(A549)免疫损伤的可能机制不同浓度的重组HA蛋白刺激A549细胞1h后,提取总RNA; HA蛋白(40μg/ ml)刺激A549细胞不同时间(15min、30min、1h、2h、4h)后提取总RNA,RT-PCR检测IRF-1及IP-10基因表达。重组HA蛋白刺激A549细胞12h,观察其形态学变化。利用液相芯片技术检测细胞上清中细胞因子及趋化因子的变化,观察其变化的量效关系。通过Western blot方法检测JAK-STAT和NF-κB信号转导通路的活化。观察JAK3抑制剂对HA蛋白诱导的IRF-1和IP-10基因表达、细胞因子及趋化因子变化的影响。 3、应用JAK3基因敲除小鼠,评价靶向JAK3对免疫损伤的保护作用 JAK3基因敲除的B6129S4-Jak3tm1Ljb小鼠(JAK3-/-)及以野生型B6129SF2/J小鼠(JAK+/+),随机分为PBS空白对照组、HA蛋白组,经气管滴注途径注入HA蛋白,72h后分离小鼠肺脏及脾脏观察病理学改变。结果: 1、应用昆虫杆状病毒系统成功表达重组的H5N1 HA蛋白测序鉴定pFastbacHT-HA质粒中插入的HA基因来源于A/chicken/ Guangdong/191/04(H5N1)(GenBank;AY737289),同源重组为Bacmid-HA质粒的PCR产物为4.1Kb,与预期相符。转染Bacmid-HA质粒的sf9细胞总蛋白经纯化后,Western blot鉴定证实为H5N1禽流感病毒HA蛋白。 2、H5N1 HA蛋白诱导人肺腺癌上皮细胞株(A549)免疫损伤的可能机制 HA蛋白作用于A549细胞后,细胞体积变大,细胞内颗粒增多,并出现空泡,细胞变圆有脱落,随时间延长可见细胞破碎溶解;空白对照组则无明显异常。RT-PCR检测发现HA蛋白诱导IRF-1及IP-10基因表达明显增加,呈量效及时效关系;液相芯片检测出细胞培养上清中IL-6、IL-8、MCP-1、MIP-1alpha、MIP-1beta及RANTES表达明显升高,并呈显著量效关系。Western blot检测发现HA蛋白作用于A549细胞后,诱导了STAT1、JAK2、JAK3及NF-κB磷酸化。选择性JAK3抑制剂能下调HA蛋白诱导IRF-1及IP-10基因的表达、细胞因子/炎症因子的升高及抑制JAK3及NF-κB的磷酸化。 3、靶向JAK3对HA介导的免疫损伤具有保护作用 JAK3+/+小鼠气管滴注HA蛋白后肺组织病理表现为弥漫性肺泡损伤,而JAK3-/-小鼠

关键词： H5N1禽流感病毒 HA蛋白昆虫-杆状病毒表达系统 JAK-STAT信号转导通路 NF-κB信号转导通路 SARS-CoV

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α-synuclein生物学功能的初步研究和PrP特异性基因工程抗体的制备

α-synuclein生物学功能的初步研究和PrP特异性基因工程抗体的制备

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作者：黄银霞中国疾病预防控制中心

学位级别：博士

第一部分：帕金森氏病相关蛋白α-synuclein的表达纯化及生物学功能的初步研究 α-synuclein蛋白（SNCP）广泛存在于大脑内，是一种脂结合的突触前蛋白。最近发现α-synuclein基因（SNCA）的突变与家族性帕金森病（Parkinson’s dise... 详细信息

第一部分：帕金森氏病相关蛋白α-synuclein的表达纯化及生物学功能的初步研究 α-synuclein蛋白（SNCP）广泛存在于大脑内，是一种脂结合的突触前蛋白。最近发现α-synuclein基因（SNCA）的突变与家族性帕金森病（Parkinson’s disease，PD）相关，提示它可能为此类疾病发生的分子桥梁而成为研究的热点。因此，进一步研究该蛋白的结构和功能对理解SNCP在神经系统疾病中的作用有着重要的意义。14-3—3蛋白是高度保守的、所有真核生物细胞中都普遍存在的一类蛋白调控家族，它在细胞的信号转导中起着至关重要的作用。由于14-3-3蛋白也与PD密切相关，SNCP与14-3-3蛋白的在结构和功能上存在着高度的一致性，探讨SNCP与14-3-3蛋白可能的分子间作用对进一步了解PD以及相关的神经退行性疾病的致病机理有着重要意义。本研究从人神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞中提取总RNA，逆转录成cDNA，利用PCR技术扩增获得SNCA，测序正确后亚克隆至原核表达载体pQE-30-GST，在大肠杆菌中表达GST-SNCP融合蛋白，融合蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和层析柱进行纯化。用纯化的SNCP蛋白免疫新西兰大白兔，制备了SNCP多克隆抗体，抗血清的ELISA效价达到1:32000。产生的抗体具有良好的免疫反应性，能够识别基因工程表达的SNCP，并且也能识别动物脑组织中天然的SNCP。通过免疫共沉淀、GST pull down和ELISA等技术证明SNCP能够在体外与14-3-3蛋白发生分子间相互作用;为了进一步证明SNCP也与在脑组织中天然的14-3-3蛋白发生作用，本研究利用GST pull down以及His pull down方法进行实验，结果证明SNCP能够和脑组织中的14-3-3蛋白发生相互作用。这些结果从分子水平提供了SNCP与14-3-3蛋白相互作用的实验证据，为进一步了解SCNP的结构和功能及其在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础。第二部分：PrP特异性基因工程Fab抗体和IgG全抗体的制备可传播性海绵状脑病（Transmissible spongiform encephalopathies，TSE）是一类累及多种动物和人类中枢神经系统的致死性退行性疾病，潜伏期长，100％死亡。在人类主要表现为克一雅氏病（Creutzfeldt-Jakob disease，CJD），包括有散发性、家族遗传性和获得性。共同的病理改变为中枢神经系统神经元退行性变性、脑实质中淀粉样变性形成斑块和空洞、呈海绵状，胶质细胞增生，并且存在正常朊蛋白的异构体PrP<'Sc >。目前认为是由一种新型的由蛋白质组成而缺乏核酸的感染因子-PrP<'Sc >引起，其前体为存在于神经元细胞的正常膜蛋白PrP<'C >。对于该病目前还没有特异性的诊断和治疗方法，抗体在Prion的研究中起着极为重要的作用。本研究利用噬菌体抗体库技术，以获得鼠源抗PrP抗体，并进行了全基因的表达。首先用纯化的HaPrP23-231，GST-HuPrP23-65，HuPrP23-231，以及HuPrPl06-126（人工合成）免疫BALB／c小鼠，由于HuPrPl06-126分子量小于2000 Dalton，属于半抗原，采用化学偶联法将短肽与血蓝蛋白（KLH）偶联。每种蛋白免疫5只BALB／c小鼠，共免疫4次，每只小鼠腹部皮下多点注射100μg抗原（溶于200μ生理盐水中）。免疫3次取尾血检测抗体效价，发现用HaPrP23-231免疫的小鼠可产生较高效价的抗体，可以用于下一步实验。取脾后提取细胞总RNA，逆转录成cDNA，以其为模板进行免疫球蛋白Fab区基因的特异性PCR扩增，将轻链和重链Fd段基因分别构建到pCom3质粒中，电转化XL1-Blue菌，构建噬菌体抗体库。通过对轻重链插入率的鉴定，和噬菌体浓度的滴定确定库中的有效克隆数约为10<'5>-10<'6>。用纯化的HaPrP23-231作为固相抗原对原始抗体库进行筛选，经过四轮“吸附-洗脱-富集”的过程后获得了12株阳性克隆。我们将获得的克隆在大肠杆菌中对它们进行了可溶性表达。我们挑取5株进行序列分析，并将结果与GenBank中已知序列库中的IgG序列进行比较，证明它们是新的抗体序列，得到了两株不同的抗体，分别命名为IV-66和IV-78。我们用亲和层析法对Fab抗体进行了纯化，通过免疫印迹实验发现纯化后的抗体免疫反应性及特异性都得到了提高。免疫印迹分析时发现，两株单抗都能与重组的PrP蛋白反应，而且可以和真核表达的PrP以及天然状态的PrP<'Sc>反应。为了获得抗HaPr

关键词：帕金森氏病相关蛋白神经退行性变原核表达噬菌体展示技术基因工程抗体昆虫-杆状病毒表达系统可传播性海绵状脑病

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截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白的表达及其体外生物活性研究

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生物工程学报 2004年第4期20卷 536-539页

作者：李文生郑瑾刘红莉陈宏伟杨军王一理司履生西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所环境与疾病相关基因教育部重点实验室西安710061 西安交通大学陕西临床学院

利用PCR技术克隆截短型HPV5 8L1基因并重组入杆状病毒表达系统穿梭质粒pFastBac Htb ,通过转座反应 ,将目的基因片段重组入杆状病毒基因组 ,分离重组的BacmidDNA ,并转染Sf 9昆虫细胞 ,收集被转染的Sf 9细胞 ,提取细胞蛋白 ,SDS PAGE检... 详细信息

利用PCR技术克隆截短型HPV5 8L1基因并重组入杆状病毒表达系统穿梭质粒pFastBac Htb ,通过转座反应 ,将目的基因片段重组入杆状病毒基因组 ,分离重组的BacmidDNA ,并转染Sf 9昆虫细胞 ,收集被转染的Sf 9细胞 ,提取细胞蛋白 ,SDS PAGE检测可见在大约 5 8Kda处出现一新生蛋白条带 ,Westernblot证实为HPV5 8L1蛋白。用ProBondTM 纯化系统纯化所表达的蛋白。小鼠红细胞凝集试验证实纯化的蛋白可介导小鼠红细胞凝集 ,透射电镜观察证实纯化蛋白可自组装成VLP。结果表明昆虫杆状病毒表达系统可高效表达截短型HPV5 8L1蛋白 ,纯化后的截短型HPV5 8L1蛋白在体外可自组装VLP 。

关键词：截短型HPV58 L1蛋白昆虫-杆状病毒表达系统蛋白纯化病毒样颗粒

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人源抗SARS冠状病毒基因工程抗体研究

人源抗SARS冠状病毒基因工程抗体研究

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作者：杜润蕾中国疾病预防控制中心

学位级别：博士

作为一种严重急性易传播的传染病,SARS对全球公共卫生造成了严重威胁.虽然SARS被有效的控制住,但引人注意的是SARS的控制仅仅是通过隔离来完成的,如果SARS卷土重来怎么办?因此,人类并没有放弃对SARS的研究,在病毒的起源、病毒蛋白质的... 详细信息

作为一种严重急性易传播的传染病,SARS对全球公共卫生造成了严重威胁.虽然SARS被有效的控制住,但引人注意的是SARS的控制仅仅是通过隔离来完成的,如果SARS卷土重来怎么办?因此,人类并没有放弃对SARS的研究,在病毒的起源、病毒蛋白质的结构分析、病毒在宿主细胞上的受体、病毒入侵宿主的机制和疫苗的制备等方面都取得了很大的进步.SARS冠状病毒(SARS-CoV)属于冠状病毒科,其病毒基因组为无节段的单链(+)链RNA,30Kb左右,基因组主要编码病毒多聚酶,包膜突起蛋白(S),包膜蛋白(E),膜蛋白(M)和核蛋白(N)以及一些非结构蛋白<'1,2,3>.根据冠状病毒的研究背景,一般认为SARS-CoV的S和M蛋白为SARS病毒的主要病毒表面蛋白,与病毒吸附和细胞膜融合有关,可能为主要中和位点所在,能激发产生抗SARS病毒的中和抗体.中和性抗体在抗感染治疗及紧急被动免疫预防方面一直扮演着重要的角色<'4,5>,在SARS治疗过程中,北京一家医院将恢复期病人血清成功的用于SARS患者的治疗.由此可见,研制特异性针对SARS-CoV的中和性抗体以用于紧急预防和治疗是十分必要和可行的.

关键词： SARS冠状病毒人源基因工程抗体噬菌体展示技术昆虫-杆状病毒表达系统中和抗体

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人源抗乙肝病毒基因工程抗体的研究

人源抗乙肝病毒基因工程抗体的研究

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作者：郭瑜中国疾病预防控制中心

学位级别：博士

该研究利用噬菌体抗体闸技术,以获得人源化抗乙肝表面抗原的抗体.采集乙肝疫苗加强免疫后产生高滴度表面抗体的健康人的外周血,分离淋巴细胞,提取细胞总mRNA,反转录cDNA以人源抗体IgG1Fab段基因的引物扩增抗体轻重链基因.将轻重链基因... 详细信息

该研究利用噬菌体抗体闸技术,以获得人源化抗乙肝表面抗原的抗体.采集乙肝疫苗加强免疫后产生高滴度表面抗体的健康人的外周血,分离淋巴细胞,提取细胞总mRNA,反转录cDNA以人源抗体IgG1Fab段基因的引物扩增抗体轻重链基因.将轻重链基因构建到pCOM3质粒中,电转化XL-1菌,构建噬菌体抗体库.用纯化的HBsAg对原始抗体库进行了筛查,经过三到四轮"吸附-洗脱-富集"的过程后,将获得的克隆进行原核表达.表达产物进行ELISA检测,结果获得50个抗乙肝表面抗原的Fab抗体克隆,进一步对这50个克隆测序比较,证实它们序列相同,轻链类型为k型.

关键词：乙肝病毒人源基因工程抗体噬菌体展示技术昆虫-杆状病毒表达系统中和抗体

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利用昆虫-杆状病毒表达系统表达HPV16 L1蛋白及病毒样颗粒的组装和应用的初步研究

利用昆虫-杆状病毒表达系统表达HPV16 L1蛋白及病毒样颗粒的组装...

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作者：郑滨西安医科大学

学位级别：硕士

目的:获得人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒,并对其在预防性疫苗的研制及感染的检测方面的应用前景作尝试性探索.结论:该文在国内首次利用昆虫-杆状病毒表达系统成功表达了HPV 16 L1蛋白,并获得了HPV 16病毒样颗粒.根据ELISA检测结果推测其... 详细信息

目的:获得人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒,并对其在预防性疫苗的研制及感染的检测方面的应用前景作尝试性探索.结论:该文在国内首次利用昆虫-杆状病毒表达系统成功表达了HPV 16 L1蛋白,并获得了HPV 16病毒样颗粒.根据ELISA检测结果推测其可能具有天然的抗原表位,为病毒样品粒在乳头瘤病毒预防性疫苗的研制和感染的检测方面的应用打下了一定基础.

关键词：人乳头瘤病毒16型 L1蛋白病毒样颗粒昆虫-杆状病毒表达系统

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