检索结果-内蒙古大学图书馆

中国老年学杂志 2009年第12期29卷 1493-1495页

作者：刘辉尹芳秋许崇亮刘杰徐冬梅中国人民解放军白求恩军医学院卫勤教研室河北石家庄050081

目的观察星形胶质细胞条件培养液(ACM)对鱼藤酮染毒嗜铬细胞瘤细胞(PC12)的神经保护作用。方法将新生SD大鼠中脑星形胶质细胞分离、纯化并培养至第三代后,收集星形胶质细胞条件培养液加入到鱼藤酮染毒PC12细胞中,观察其对染毒神经元形... 详细信息

目的观察星形胶质细胞条件培养液(ACM)对鱼藤酮染毒嗜铬细胞瘤细胞(PC12)的神经保护作用。方法将新生SD大鼠中脑星形胶质细胞分离、纯化并培养至第三代后,收集星形胶质细胞条件培养液加入到鱼藤酮染毒PC12细胞中,观察其对染毒神经元形态、活力及其合成与释放一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)和胞膜ATP酶(ATPase)的影响。结果20%ACM可明显改善染毒神经元的形态和活力;与对照组比较,20%ACM还有效减少了染毒神经元NO、LDH的合成和释放,保护和提高了ATPase活性。结论ACM明显促进鱼藤酮染毒PC12细胞的活力,其机制可能与减少NO、LDH合成释放及保护细胞膜ATPase的活性有关。

关键词：星形胶质细胞条件培养液鱼藤酮 PC12细胞保护

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星形胶质细胞条件培养液对缺氧/复氧损伤神经元的保护作用及其机制探讨

星形胶质细胞条件培养液对缺氧/复氧损伤神经元的保护作用及其机...

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作者：谭军郑州大学

学位级别：博士

背景随着人们物质生活的改善，老年人口逐年增加，神经系统疾病的发病率逐年上升，其中脑血管疾病是现在神经内科最常见的一种疾病，它已成为我国致残和致死性疾病病因的第一位，而且呈逐年上升趋势，在脑血管疾病中缺血性卒中又占全部... 详细信息

背景随着人们物质生活的改善，老年人口逐年增加，神经系统疾病的发病率逐年上升，其中脑血管疾病是现在神经内科最常见的一种疾病，它已成为我国致残和致死性疾病病因的第一位，而且呈逐年上升趋势，在脑血管疾病中缺血性卒中又占全部脑血管疾病的80%85%。由于成年人中罹患缺血性卒中人数迅速增加，由此不仅降低了人们的生活质量，同时也给患者家庭和社会带来了巨大的负担，因此，寻找治疗缺血性卒中的新方法势在必行。目前，尚无一种对所有缺血性卒中有确切疗效的治疗方法。在短暂性脑缺血发作的研究过程中，发现了脑组织存在着缺血预处理；但是缺血预处理在临床中无法被复制，然而它又是目前发现的一种对缺血缺氧性脑病有确切疗效的治疗方法；学者们为了解决缺血对脑组织造成的严重损伤，提出使用药物进行预处理设想，利用药物代替或激发体内的内源性物质，如腺苷（adenosine，Ado）、缓激肽和一氧化氮（nitric oxide，NO）等的作用，而起到缺血预处理的效能，对中枢神经系统发挥保护作用。 Ado及其受体在多种脏器缺血再灌注的损伤方面有重要的保护作用。一般情况下，30～300nmol/L是脑细胞外液Ado的正常水平，脑缺血缺氧等病理状态下Ado在细胞外液的水平可达到5～40umol/L，甚至可达正常的200多倍。通过此结论得出，内源性的神经保护因子的应激反应可能是通过急剧增加Ado水平实现的。星形胶质细胞（astrocyte，AS）主要存在于中枢神经系统中，它支持及对神经元起着营养作用。当星形胶质细胞激活后产生了数量大、种类多的神经递质，细胞因子（L-6），神经营养因子（BDNF）等；当机体遇到组织缺血等病理状态下时，AS会分泌大量的神经营养因子，如：脑源性BDNF、神经生长因子（NGF）、血管内皮生长因子（VEGF）及L-6等；这些BDNF大量地出现，能对受损的神经元起到一定的保护作用并能够加速病损神经元的功能恢复。大量的体外细胞培养实验已经证实了星形胶质细胞条件培养液（astrocyte-conditioned medium, ACM）中具有很多神经元需要的物质，起到对神经元的保护作用，出现这种共存的现象说明ACM确实存在着能够加快受损神经元功能的恢复及对受损神经元起到营养支持的作用。虽然星形胶质细胞对神经元的保护作用已被研究者认可，但其对神经元的保护作用机制依然不清，因为机制不清，也为我们进一步研究ACM对受损神经元的营养支持作用的机制提供了机遇。本实验利用培养原代细胞的方法及技术，从而得到星形胶质细胞、神经元，给予特殊处理及干预细胞从而建立模拟脑缺血再灌注损伤模型，如：ACM、ACMa及ACM+a等方法来预处理因缺血缺氧状态受到损伤的神经元；利用倒置显微镜观察镜星形胶质细胞及神经元的形态学变化，流式细胞术检测细胞凋亡结果，XTT法测定细胞活性，利用免疫细胞化学技术及免疫荧光技术分别测定神经元特异性稀醇化酶（neuron–specificenolase，NSE）强阳性细胞的表达量，各组神经元细胞中caspase-3蛋白表达及活性检测，应用Western blot分析各组神经元caspase-3的活性。从而了解经缺氧/复氧损伤的神经元在星形胶质细胞和Ado的作用下，对它们起到的修复、支持、保护的作用，从而揭示Ado在中枢神经系统受到损害后是发挥作用的途径以及特异的保护机制产生的机理，为Ado应用于临床治疗缺血缺氧性脑血管疾病提供理论支持。目的分析星形胶质细胞与Ado对缺氧/复氧神经元损伤的保护作用，Ado对神经系统的作用方法及特异的保护机制，并进一步探讨Ado预处理后ACM的对受损神经元的营养支持作用，从而为Ado应用在临床缺血缺氧性脑血管疾病的治疗上提供理论依据。材料与方法通过提取SD大鼠大脑皮层的星形胶质细胞、海马区以及大脑皮层的神经元在体外进行培养，进一步纯化后，经处理建立一种类似于脑缺血再灌注损伤的模型，并收集再灌注18h后的ACM和经Ado预处理的再灌注18h的ACMa（ACM+含100μmol/LAdo的DMEM液），然后用ACM、ACMa及ACM+a按1:5的浓度配制培养液，将缺氧/复氧的损伤神经元放置于配置好的培养液中进行培养；然后观察星形胶质细胞、神经元的形态学变化运用倒置显微镜，使用XTT法测法测定星形胶质细胞、神经元活性变化，使用免疫细胞化学技术和免疫荧光技术分别测定胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillaryacidic protein，GFAP）、NSE强阳性细胞的表达量，利用ELISA试剂盒进行星形胶质细胞乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）酶联免疫分析，运用流式细胞术检测细胞凋亡，按Promega公司的CaspACETM Assay

关键词：腺苷缺氧复氧星形胶质细胞条件培养液星形胶质细胞神经元

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星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的保护作用

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神经解剖学杂志 2007年第3期23卷 277-282页

作者：严稽文黄其林第三军医大学新桥医院神经外科重庆400037

为了探讨星形胶质细胞条件培养液(ACM)对缺氧损伤神经元的保护作用,本实验将新生的KM小鼠的皮层星形胶质细胞分离、纯化并传代培养第三代第5d后,将星形胶质细胞(Ast)条件培养液,加入到缺氧损伤的神经元细胞培养液中,观测其对缺氧神经元... 详细信息

为了探讨星形胶质细胞条件培养液(ACM)对缺氧损伤神经元的保护作用,本实验将新生的KM小鼠的皮层星形胶质细胞分离、纯化并传代培养第三代第5d后,将星形胶质细胞(Ast)条件培养液,加入到缺氧损伤的神经元细胞培养液中,观测其对缺氧神经元的存活及其合成和释放一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)和胞膜ATP酶(ATPase)的影响。结果显示:10%和20%ACM对神经元存活有明显促进作用;与对照组相比,20%ACM还有效地减少了缺氧神经元NO、LDH的生成和分泌,保护和提高了ATPase的活性。以上结果提示ACM促进缺氧神经元的存活,其机制可能与减少NO、LDH合成释放及保护细胞膜上ATPase的活性有关。

关键词：星形胶质细胞条件培养液神经元神经营养因子细胞缺氧

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星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的影响

星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的影响

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作者：徐建可新乡医学院

学位级别：硕士

目的分析星形胶质细胞与腺苷(adenosine, Ado)对缺氧/复氧神经元损伤的保护作用,探讨腺苷预处理后的星形胶质细胞条件培养液的营养性作用,从而揭示腺苷对神经系统的保护机制,为腺苷应用于临床治疗脑血管疾病奠定理论基础。方法体外培养S... 详细信息

目的分析星形胶质细胞与腺苷(adenosine, Ado)对缺氧/复氧神经元损伤的保护作用,探讨腺苷预处理后的星形胶质细胞条件培养液的营养性作用,从而揭示腺苷对神经系统的保护机制,为腺苷应用于临床治疗脑血管疾病奠定理论基础。方法体外培养SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞和海马神经元及大脑皮层神经元,纯化后建立模拟脑缺血再灌注损伤模型,收集再灌注18h的星形胶质细胞条件培养液(Astrocyte conditioned medium, ACM)和经腺苷预处理的再灌注18h的星形胶质细胞条件培养液(ACMa),然后用ACM、ACMa及ACM+a(ACM+含100μmol/L腺苷的DMEM液)以1：5的浓度培养缺氧/复氧损伤神经元；倒置显微镜下观察神经元形态学变化,XTT法测定神经元活性,利用免疫荧光技术和免疫细胞化学技术分别测定NSE、Bcl-2强阳性细胞的表达量。结果光镜观察：正常组神经元生长良好,形态规则,胞体椭圆,折光性好,突触连接紧密呈网状：模型组神经元胞体变大不规则,折光性差,突触明显减少或消失；ACMa组、ACM+a组及ACM组细胞状态介于两者之间,总体肉眼观察,其作用：ACMa>ACM+a>ACM。 XTT法细胞活性检测：模型组神经元活力下降,OD值明显低于正常对照组。ACMa组、ACM+a组及ACM组细胞活力均高于模型组,根据OD值,其作用：ACMa>ACM+a>ACM。 NSE、Bcl-2的测定：ACMa组、ACM+a组及ACM组神经元表达NSE和Bcl-2的能力均较模型组提高,对染色结果阳性的细胞培养片进行图像分析,其作用：ACMa> ACM+a>ACM。结论 1、通过细胞活性检测及受损神经元NSE的表达量反映出ACM对缺氧/复氧损伤的神经元有重要的保护和修复作用：2、.通过受损神经元表达bcl-2的变化表明ACM具有抗凋亡作用；3、星形胶质细胞在脑缺血再灌注损伤中起着重要作用,腺苷可通过星形胶质细胞间接地保护和修复受损神经元。

关键词：腺苷缺氧复氧神经元星形胶质细胞条件培养液

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星形胶质细胞条件培养液对机械损伤神经元的保护

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四川医学 2007年第3期28卷 244-246页

作者：严稽文黄其林第三军医大学新桥医院神经外科重庆400037

目的研究体外培养的小鼠星形胶质细胞(Ast)条件培养液(ACM)对机械损伤神经元的保护作用。方法用微量移液器塑料滴头机械性划割培养之神经细胞建立神经元机械损伤模型,神经元培养液加入ACM。用台盼蓝染色计数法测定存活细胞数,测定损伤... 详细信息

目的研究体外培养的小鼠星形胶质细胞(Ast)条件培养液(ACM)对机械损伤神经元的保护作用。方法用微量移液器塑料滴头机械性划割培养之神经细胞建立神经元机械损伤模型,神经元培养液加入ACM。用台盼蓝染色计数法测定存活细胞数,测定损伤神经元释放一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)的变化,并与常规培养基组进行对比。结果20%ACM可对机械损伤神经元存活增殖起明显促进作用,并减少机械损伤神经元NO、LDH的生成和分泌。结论ACM对机械损伤神经元的存活有促进作用,可减少其NO、LDH的生成和释放,保护机械损伤神经元。

关键词：星形胶质细胞条件培养液神经元神经营养因子脑损伤

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星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的影响

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新乡医学院学报 2012年第10期29卷 750-753页

作者：徐建可栗延伟韩新生谭军新乡医学院第三临床学院河南新乡453003 新乡医学院第三附属医院神经内科河南新乡453003 开封市第一人民医院神经内科河南开封475000

目的分析星形胶质细胞(Ast)与腺苷对缺氧/复氧损伤神经元的保护作用,揭示腺苷对神经系统的保护机制。方法体外培养SD大鼠大脑皮层Ast和海马神经元及大脑皮层神经元,纯化后给予神经元缺氧/复氧处理,收集复氧18 h后的Ast条件培养液(ACM)... 详细信息

目的分析星形胶质细胞(Ast)与腺苷对缺氧/复氧损伤神经元的保护作用,揭示腺苷对神经系统的保护机制。方法体外培养SD大鼠大脑皮层Ast和海马神经元及大脑皮层神经元,纯化后给予神经元缺氧/复氧处理,收集复氧18 h后的Ast条件培养液(ACM)和腺苷预处理的Ast条件培养液(ACMa),然后用ACM、ACMa及ACM+腺苷(ACM+含100μmol·L-1腺苷的DMEM液)以15的浓度培养缺氧损伤神经元;光镜观察神经元形态学变化,二甲氧唑黄比色法测定细胞活性。结果 ACMa组、ACM+腺苷组及ACM组的神经元缺氧损伤后的细胞形态较模型组得到明显改善,细胞活性较模型组也得到显著提高。不同条件培养液对缺氧/复氧后神经元活性的作用:ACMa>ACM+腺苷>ACM。结论 Ast条件培养液对缺氧/复氧损伤的神经元有重要的保护、修复作用,腺苷可通过Ast间接地保护和修复受损神经元。

关键词：腺苷缺氧复氧神经元星形胶质细胞条件培养液

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星形胶质细胞条件培养液促进新生大鼠海马神经干细胞分化

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解剖科学进展 2009年第3期15卷 265-268页

作者：王立芹赵久红唐源远季丽莉王振宇中国医科大学基础医学院人体解剖学教研室辽宁沈阳110001 山东聊城职业技术学院人体解剖学教研室山东聊城252000

目的探讨星形胶质细胞条件培养液(ACM)对神经干细胞(NSCs)体外分化的影响。方法行新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞的纯化培养后收集ACM,将新生大鼠海马NSCs单克隆培养后行nestin免疫细胞荧光染色,诱导分化5d后行神经元特异性烯醇化酶(NSE... 详细信息

目的探讨星形胶质细胞条件培养液(ACM)对神经干细胞(NSCs)体外分化的影响。方法行新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞的纯化培养后收集ACM,将新生大鼠海马NSCs单克隆培养后行nestin免疫细胞荧光染色,诱导分化5d后行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(GALC)免疫细胞荧光染色;将单克隆培养的NSCs分为对照组和实验组,对照组为单纯NSCs培养液,实验组根据NSCs培养液与ACM比的不同分3组:A组(2:1),B组(1:1),C组(1:2)。各组培养1周,采用NSE免疫细胞荧光检测方法标记神经元并计数和统计学分析。结果纯化的星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白抗体标记阳性率为96.5%;单克隆培养的海马NSCs呈nestin阳性,诱导后呈NSE、GFAP和GALC阳性表达。ACM培养的海马NSCs各组分化为神经元的比例明显高于对照组(<0.01),其中A组的比例最高。结论ACM可以促进新生大鼠海马NSCs向神经元分化。

关键词：星形胶质细胞条件培养液神经干细胞海马新生大鼠

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AD细胞模型星形胶质细胞条件培养液对神经前体细胞分化、突触形成的影响与机制

AD细胞模型星形胶质细胞条件培养液对神经前体细胞分化、突触形成...

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作者：闫荣中国医科大学

学位级别：博士

第一部分 Alzheimer’s Disease细胞模型的建立目的 β-淀粉样蛋白1-40(Aβ)诱导PC12细胞凋亡,建立Alzheimer’s Disease(AD)细胞模型。方法以不同浓度Aβ作用PC12细胞,随机分为四组:对照组,5ug/ml Aβ组,10ug/ml Aβ组,20ug/ml ... 详细信息

第一部分 Alzheimer’s Disease细胞模型的建立目的 β-淀粉样蛋白1-40(Aβ)诱导PC12细胞凋亡,建立Alzheimer’s Disease(AD)细胞模型。方法以不同浓度Aβ作用PC12细胞,随机分为四组:对照组,5ug/ml Aβ组,10ug/ml Aβ组,20ug/ml Aβ组,每组分别作用不用时间段。用MTT法检测细胞生存率,吖啶橙免疫荧光技术观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞超微结构。结果三种浓度Aβ均可诱导PC12细胞出现典型凋亡形态学改变,在4h,细胞生存率和细胞凋亡率随着Aβ浓度增加而相应地下降和升高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);在同一浓度Aβ组内,三种浓度Aβ分别在4h、6h和12h,细胞生存率下降最明显和细胞凋亡率达高峰,分别与对照组和其他时间点相比,差异有统计学意义(P<0.05);6h,10ug/ml Aβ组细胞凋亡率较高,细胞死亡碎片率较少。结论 Aβ诱导PC12细胞出现了典型凋亡特征性改变,从凋亡率高峰的时间和细胞死亡情况,10ug/ml Aβ浓度诱导PC12细胞凋亡可作为AD较为理想细胞模型。

关键词： Aβ1-40 凋亡 Alzheimer’s Disease(AD) 细胞模型星形胶质细胞(Astrocyte,AS) 脑源性神经营养因子(BDNF) 神经生长因子(NGF) 神经营养素(NT-3) 星形胶质细胞条件培养液 AD细胞模型星形胶质细胞条件培养液[ACM(Aβ-PC12)] 神经前体细胞(NPC) 神经元分化比例突触素生长相关蛋白-43(GAP-43) 成熟突触结构数目 TrkB受体 ERK p-ERK

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不同状态的大鼠星形胶质细胞条件培养液对脑微血管内皮细胞血脑屏障特征性酶的影响

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世界科学技术-中医药现代化 2012年第2期14卷 1393-1398页

作者：朱元李澎涛李卫红贾静盖聪刘洋北京中医药大学基础医学院北京100029

目的:探讨不同状态下大鼠星形胶质细胞(AS)条件培养液对脑微血管内皮细胞(BMEC)活性和血脑屏障特征性酶的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法:收集正常、激活、激活合并通络救脑注射液处理、损伤、损伤合并通络救脑注射... 详细信息

目的:探讨不同状态下大鼠星形胶质细胞(AS)条件培养液对脑微血管内皮细胞(BMEC)活性和血脑屏障特征性酶的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法:收集正常、激活、激活合并通络救脑注射液处理、损伤、损伤合并通络救脑注射液处理5种不同状态的星形胶质细胞条件培养液,分别作用于拟缺血损伤的脑微血管内皮细胞,采用MTT法检测细胞活性,微量酶标仪法和上机比色法检测碱性磷酸酶(AKP)、γ-谷氨酰胺转肽酶(γ-GT)的活性。结果:正常星形胶质细胞条件培养液能明显提高受损内皮细胞活性,诱导AKP、γ-GT活性增强,激活的星形胶质细胞条件培养液上述作用下降,而损伤后的星胶条件培养液对受损内皮细胞几乎无作用。通络救脑注射液作用于激活和损伤星形胶质细胞后,其条件培养液提高内皮细胞活性和AKP、γ-GT活性的作用显著增强。结论:正常AS的分泌产物对提高BMEC的活性和维持血脑屏障特性具有重要意义,AS受损后,该作用减弱或消失,通络救脑注射液可显著提高AS对受损BMEC活性和功能的保护作用,这可能是该药物发挥脑缺血性损伤后血脑屏障稳定作用的内在机制之一。

关键词：星形胶质细胞条件培养液脑微血管内皮细胞 AKP γ-GT 通络救脑注射液

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马桑内酯激活的星形胶质细胞条件培养液对大鼠脑内钙调蛋白激酶Ⅱ表达的影响

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中国组织化学与细胞化学杂志 2007年第2期16卷 180-185页

作者：张树华朱长庚刘庆莹魏瑛王伟滨州医学院病理学教研室山东256603 华中科技大学同济医学院神经科学研究所武汉430030 华中科技大学同济医学院神经内科武汉430030

目的揭示马桑内酯(coriaria lactone,CL)激活的星形胶质细胞条件培养液(astrocyte contined medium,ACM)对大鼠脑内钙调蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)表达的影响。方法按照McCarthy和DeVellis的方法作海马星形胶质细胞的纯化培养,然后收集对照组ACM和CL激活的ACM。取成年健康雄性SD大鼠40只,随机分为对照组(8只)和CL组(32只),对照组侧脑室注射未加任何刺激物的ACM 10μl,CL组侧脑室注射CL激活的ACM 10μl(按注射后的时间分为2h、4h、8h和12h,每个时间点8只)。观察两组大鼠的行为表现,用免疫组化检测脑内CaMKⅡ表达的变化,Western blot检测脑内CaMKⅡ含量的变化。结果CL组大鼠有痫样发作,而对照组无痫样发作;免疫组化检测结果显示,CaMKⅡ在CL组的皮质和海马表达与对照组比较无显著性差异(P>0.05);Western blot检测皮质和海马CaMKⅡ亚基含量的结果显示,α和β亚基在CL各时间组与对照组的比较,表达均无显著性差异(P>0.05)。结论CL激活的ACM对致痫大鼠脑内CaMKⅡ亚基α和β的表达水平无明显影响。

关键词：星形胶质细胞条件培养液马桑内酯钙调蛋白激酶Ⅱ 癫痫大鼠

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