检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2012年第5期32卷 425-429页

作者：刘雪瑶吴迪许杰汪洋南开大学医学院分子病毒与病毒免疫学实验室天津300071 陕西出入境检验检疫局

目的去除B8R对外源抗原免疫原性的影响，为降低载体的免疫优势从而提高疫苗的有效性提供参考。方法利用针对痘苗病毒的pSCll质粒，构建插入OVA的质粒pSC11－OVA，在CV－1细胞中与去除B8R的痘苗病毒重组，筛选纯化获得重组病毒。利用体... 详细信息

目的去除B8R对外源抗原免疫原性的影响，为降低载体的免疫优势从而提高疫苗的有效性提供参考。方法利用针对痘苗病毒的pSCll质粒，构建插入OVA的质粒pSC11－OVA，在CV－1细胞中与去除B8R的痘苗病毒重组，筛选纯化获得重组病毒。利用体外培养细胞，检测B8R缺失和外源抗原插入对病毒感染复制特性的影响；利用感染小鼠模型，检测重组病毒诱发的针对OVA的细胞免疫应答和免疫记忆效应；采用体征及神经行为学评分系统，检测重组病毒的毒力。结果B8R缺失和OVA导入对痘苗病毒的生物学特性无明显影响；去除B8R后，外源性OVA成为显性表位，针对OVA的细胞免疫应答和免疫记忆效应明显增强；去除B8R还可显著降低痘苗病毒的毒力。结论去除B8R可有效降低痘苗病毒的免疫优势效应，增加外源性抗原的免疫原性。去除痘苗病毒本身的显性表位，可为疫苗和基因治疗提供更为有效的载体。

关键词：痘苗病毒免疫优势显性表位细胞免疫疫苗载体

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人自身抗原CYP2D6 285 bp基因片段克隆、真核表达及免疫性鉴定

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世界华人消化杂志 2006年第14期14卷 1357-1361页

作者：王文凯李永哲刘国振中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科北京市100730 中国科学院北京华大基因研究中心北京市101300

目的:真核表达人自身抗原细胞色素P450 2D6(CYP2D6)显性表位285 bp基因片段,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,为自身免疫性肝炎抗体的检测提供特异性抗原．方法:以肝脏的cDNA混合文库为模板作 PCR,将PCR产物与真核表达载体pEGH共同转化... 详细信息

目的:真核表达人自身抗原细胞色素P450 2D6(CYP2D6)显性表位285 bp基因片段,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,为自身免疫性肝炎抗体的检测提供特异性抗原．方法:以肝脏的cDNA混合文库为模板作 PCR,将PCR产物与真核表达载体pEGH共同转化酿酒酵母Y258,碱裂解法进行质粒制备, PCR扩增鉴定．表达载体构建成功后,在半乳糖的诱导下表达产生重组融合蛋白,利用 GST亲和层析法进行纯化．然后对其产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)和蛋白质印迹法(WB)及蛋白质质谱学 (MALDI-TOF)检测．结果:PCR产物约290 bp,与预期285 bp接近． pEGH-CYP2D6重组阳性克隆PCR鉴定与预期大小接近,SDS-PAGE和WB结果显示,融合蛋白Mr37 000,具有天然人自身抗原CYP2D6 的免疫原性．质谱蛋白肽指纹数据通过Mascot 在人类蛋白质数据库中分析比对,与CYP2D6 蛋白同源性最高．结论:成功克隆表达人自身抗原CYP2D6的显性表位,为建立新的自身免疫性肝炎抗体检测方法奠定了基础．

关键词：自身抗原融合基因细胞色素P450 2D6 显性表位

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人自身抗原CYP2D6 285bp基因片段克隆、真核表达及免疫性鉴定

人自身抗原CYP2D6 285bp基因片段克隆、真核表达及免疫性鉴定

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第五次全国中青年检验医学学术会议

作者：王文凯李永哲刘国振中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科

目的真核表达人自身抗原细胞色素P450 2D6(CYP2D6)显性表位285bp基因片段,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,旨在为自身免疫性肝炎抗体的检测提供特异性抗原。方法以肝脏的cDNA混合文库为模板作PCR,将PCR产物与真核表达载体pEGH共同转化... 详细信息

目的真核表达人自身抗原细胞色素P450 2D6(CYP2D6)显性表位285bp基因片段,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,旨在为自身免疫性肝炎抗体的检测提供特异性抗原。方法以肝脏的cDNA混合文库为模板作PCR,将PCR产物与真核表达载体pEGH共同转化酿酒酵母Y258,碱裂解法进行质粒制备,PCR扩增鉴定。表达载体构建成功后,在半乳糖的诱导下表达产生重组融合蛋白,利用GST亲和层析法进行纯化。然后对其产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(WB)及蛋白质质谱学(MALDI-TOF)检测。结果 PCR产物约290bp,与预期285bp接近。pEGH- CYP2D6重组阳性克隆PCR鉴定与预期大小接近,SDS-PAGE和 WB结果显示,融合蛋白分子量37000,具有天然人自身抗原 CYP2D6的免疫原性。质谱蛋白肽指纹数据通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对,与CYP2D6蛋白同源性最高。结论成功克隆表达人自身抗原CYP2D6的显性表位,为建立新的自身免疫性肝炎抗体检测方法奠定了基础。

关键词：自身抗原融合基因细胞色素P450 2D6 显性表位

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